一種提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法
2023-10-17 00:01:09
專利名稱：一種提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法
技術領域：
本發明涉及一種提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，屬於疾病免疫技術領 域。
背景技術：
雞傳染性法氏囊病是養雞業中常見的疾病，容易大面積爆發從而造成嚴重的經濟 損失。目前主要的防止方法包括抗生素、中西藥及其製劑、卵黃抗體及其生物製劑等，其中 卵黃抗體是採用雞傳染性法氏囊病抗原免疫健康雞，從免疫雞蛋的卵黃中提取雞傳染性法 氏囊病抗體，這種通過雞免疫後卵黃抗體對雞傳染性法氏囊病見效快、療效顯著，而且針對 性強，對雞傳染性法氏囊病具有很好的預防效果。目前卵黃抗體的製備及生產工藝在現在 生產中已經成熟，主要採用的是離心沉澱法提取抗體，這樣效率比較高，但是在高速離心的 情況下會造成抗體的損失，從而影響卵黃抗體生產率。
發明內容
本發明的目的是提供一種快速提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，以提高 提取的效率，降低提取的成本。為了實現以上目的，本發明所採用的技術方案是一種提取雞傳染性法氏囊病雞 卵黃抗體的方法，具體步驟如下
1)將免疫雞蛋進行清理、消毒，晾乾備用；
2)從免疫雞蛋中取得卵黃，打碎，加入等體積的無菌蒸餾水，然後放入62-65°C的水浴 中，不斷攪拌使其混合均勻，得到卵黃液；
3)取pH為4.0-5. 0的鹽酸酸化的無菌注射用水加入到步驟2)得到的卵黃液中稀釋， 加入量為卵黃液體積的6-8倍，再加入抗生素青黴素和鏈黴素，4-6°C靜置6-8小時，取上清 液；
4)將步驟3)得到的上清液用400目濾布進行初步過濾，再用0.22 μ m濾膜過濾得到初 提液；
5)按照步驟4)得到初提液體積0.7-0. 9%加入氯化鈉，充分攪拌，用100KD濾膜進行抽 濾，得到沉澱，用0. 8-1. 0%PBS重懸沉澱得到卵黃抗體。步驟3)所述酸化的無菌注射用水在加入前進行4_6°C預冷。將得到的卵黃抗體按照其體積0. 1%加入甲醛進行滅活，防止其它病毒或細菌的存活。步驟3)所述抗生素青黴素和鏈黴素的加入量分別為每毫升稀釋液2000-4000U。本發明的提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，分別採用低溫酸化處理和氯 化鈉處理，使卵黃抗體在自然狀態下沉澱，而且氯化鈉對機體的刺激性小，降低了卵黃抗體 的生產成本和生產步驟，提高了生產效率。
具體實施例方式實施例1
本實施例的提取雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的方法，步驟如下
1)將收集的高免雞蛋先進行初步的清理，無菌生理鹽水清洗，晾乾，接著用消毒液進行 42°C浸泡20min，晾乾，用95%的酒精噴灑消毒，晾乾備用；
2)採用手工分離蛋黃，先將蛋黃打碎，用打蛋器充分攪拌，加入等體積的無菌蒸餾水， 然後放入62°C的水浴中，不斷攪拌使其混合均勻，得到卵黃液；
3)採用鹽酸酸化無菌注射用水至pH為4. 0，放入4°C預冷，然後加入到步驟2)得到的 卵黃液中稀釋，加入量為卵黃液體積的6倍，再加入抗生素青黴素和鏈黴素，加入量為每毫 升稀釋液2000U，然後於4°C靜置6小時，取上清液；
4)將步驟3)得到的上清液用400目濾布進行初步過濾，再用0.22 μ m濾膜過濾得到初 提液；
5)按照步驟4)得到初提液體積0.0. 7%加入氯化鈉，可以使初提液澄清，透明度增加， 充分攪拌，用100KD (型號MWC0)濾膜進行抽濾，得到沉澱，用0. 8%PBS重懸沉澱得到卵黃抗 體；
6)將得到的卵黃抗體按照其體積0.1%加入甲醛進行滅活，防止其它病毒或細菌的存活。實施例2
本實施例的提取雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的方法，步驟如下
1)將收集的高免雞蛋先進行初步的清理，無菌生理鹽水清洗，晾乾，接著用消毒液進行 42°C浸泡20min，晾乾，用95%的酒精噴灑消毒，晾乾備用；
2)採用手工分離蛋黃，先將蛋黃打碎，用打蛋器充分攪拌，加入等體積的無菌蒸餾水， 然後放入64°C的水浴中，不斷攪拌使其混合均勻，得到卵黃液；
3)採用鹽酸酸化無菌注射用水至pH為4. 5，放入5°C預冷，然後加入到步驟2)得到的 卵黃液中稀釋，加入量為卵黃液體積的7倍，再加入抗生素青黴素和鏈黴素，加入量為每毫 升稀釋液3000U，然後於5°C靜置7小時，取上清液；
4)將步驟3)得到的上清液用400目濾布進行初步過濾，再用0.22 μ m濾膜過濾得到初 提液；
5)按照步驟4)得到初提液體積0.8%加入氯化鈉，可以使初提液澄清，透明度增加，充 分攪拌，用100KD (型號MWC0)濾膜進行抽濾，得到沉澱，用0.9%PBS重懸沉澱得到卵黃抗 體。6)將得到的卵黃抗體按照其體積0. 1%加入甲醛進行滅活，防止其它病毒或細菌 的存活。實施例3
本實施例的提取雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的方法，步驟如下
1)將收集的高免雞蛋先進行初步的清理，無菌生理鹽水清洗，晾乾，接著用消毒液進行 42°C浸泡20min，晾乾，用95%的酒精噴灑消毒，晾乾備用；
2)採用手工分離蛋黃，先將蛋黃打碎，用打蛋器充分攪拌，加入等體積的無菌蒸餾水， 然後放入65°C的水浴中，不斷攪拌使其混合均勻，得到卵黃液；3)採用鹽酸酸化無菌注射用水至pH為5. 0，放入6°C預冷，然後加入到步驟2)得到的 卵黃液中稀釋，加入量為卵黃液體積的8倍，再加入抗生素青黴素和鏈黴素，加入量為每毫 升稀釋液4000U，然後於6°C靜置8小時，取上清液；
4)將步驟3)得到的上清液用400目濾布進行初步過濾，再用0.22 μ m濾膜過濾得到初 提液；
5)按照步驟4)得到初提液體積0.9%加入氯化鈉，可以使初提液澄清，透明度增加，充 分攪拌，用100KD (型號MWC0)濾膜進行抽濾，得到沉澱，用1.0%PBS重懸沉澱得到卵黃抗 體。6)將得到的卵黃抗體按照其體積0. 1%加入甲醛進行滅活，防止其它病毒或細菌 的存活。實驗例
1、效價的測定利用瓊脂擴散凝膠法對實施例1-3的卵黃抗體和常規提取方法進行試 驗，瓊脂為1%，氯化鈉為8%，配製成平板，要求平板厚度為5mm，孔距為4 mm，孔徑為5mm，加 入量約35μ 1，37°C培養過夜，觀察結果。結果見表1。表1各實施例效價試驗結果
權利要求
一種提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，其特徵在於具體步驟如下1)將免疫雞蛋進行清理、消毒，晾乾備用；2)從免疫雞蛋中取得卵黃，打碎，加入等體積的無菌蒸餾水，然後放入62 65℃的水浴中，不斷攪拌使其混合均勻，得到卵黃液；3)取pH為4.0 5.0的鹽酸酸化的無菌注射用水加入到步驟2)得到的卵黃液中稀釋，加入量為卵黃液體積的6 8倍，再加入抗生素青黴素和鏈黴素，4 6℃靜置6 8小時，取上清液；4)將步驟3)得到的上清液用400目濾布進行初步過濾，再用0.22μm濾膜過濾得到初提液；5)按照步驟4)得到初提液體積0.7 0.9%加入氯化鈉，充分攪拌，用100KD濾膜進行抽濾，得到沉澱，用0.8 1.0%PBS重懸沉澱得到卵黃抗體。
2.根據權利要求1所述的提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，其特徵在於步 驟3)所述酸化的無菌注射用水在加入前進行4-6°C預冷。
3.根據權利要求1所述的提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，其特徵在於將 得到的卵黃抗體按照其體積0. 1%加入甲醛進行滅活，防止其它病毒或細菌的存活。
4.根據權利要求1所述的提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，其特徵在於步 驟3)所述抗生素青黴素和鏈黴素的加入量分別為每毫升稀釋液2000-4000U。
全文摘要
本發明公開了一種提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，採用低溫酸化處理和氯化鈉處理，結合三次過濾，得到雞卵黃抗體。本發明的提取雞傳染性法氏囊病雞卵黃抗體的方法，分別採用低溫酸化處理和氯化鈉處理，使卵黃抗體在自然狀態下沉澱，而且氯化鈉對機體的刺激性小，降低了卵黃抗體的生產成本和生產步驟，提高了生產效率。
文檔編號C07K16/02GK101948537SQ20101051334
公開日2011年1月19日 申請日期2010年10月21日 優先權日2010年10月21日
發明者吳紅雲, 李建正, 郭俊清 申請人:鄭州后羿製藥有限公司