一種直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物、製備方法及其應用的製作方法

2023-10-09 02:55:24 1

一種直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物、製備方法及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種重組聚乙二醇-豬ɑ幹擾素偶聯物及其製備方法，製備方法是在弱鹼性條件下將聚乙二醇與重組豬ɑ幹擾素上的氨基偶聯，經純化得到目標產物。本發明的聚乙二醇修飾的重組豬ɑ幹擾素的修飾率約為50％左右，純度約為97％以上，在體內保留時間長，血漿半衰期達到16-38小時。可以應用於製備獸用抗病毒藥。
【專利說明】—種直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物、製備方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物醫藥與化工領域，具體涉及一種攜帶標記蛋白的重組豬α幹擾素聚乙二醇偶聯物的製備方法，以及其在製備用於獸用抗病毒藥物中的用途。
【背景技術】
[0002]PEG (聚乙二醇)是一種中性、水溶性、無毒性的聚合物。它是少數幾個被FDA批准的可用於體表和體內的聚合物，在食品、化妝品、個人保健和醫藥行業廣泛應用。PEG的特性是由其溶於水中的行為所揭示，在水溶液中長鏈的PEG分子，具有高水合性(即水分子結合到它表面XPEG的重要特性是可以附著到其他分子和表面上，提供了一個生物相溶的、保護性外殼。這種保護性外殼降低了生物系統中(如人體)這些材料的清除，極大的降低了蛋白質、細胞和細菌的吸附，降低了腎臟的清除率。PEG在水和許多有機溶劑中可溶，在水溶液中它和其他聚合物如葡聚糖一起可形成雙相系統。在乙醚和碳水化合物如己烷中不溶。雙功能PEG的水溶性、無毒性、高柔性和特徵明確的化學特性，使它成為理想的修飾蛋白類產品的交聯材料。PEG與幹擾素的偶聯已廣泛應用於用於臨床。如先靈葆雅公司開發的聚乙二醇化人幹擾素α_2β (商品名，佩樂能，PegIntron);羅氏公司開發的聚乙二醇化人幹擾素α-2α (商品名，派羅先，PegasyS)等。已經證實被偶聯後的幹擾素，生物學活性大部分得以保留，同時免疫應答極大地降低，血清半衰期也極大地得到了延長。
[0003]動物α型幹擾素對畜禽病毒性疾病具有較好的防治效果。安徽醫科大學微生物學教研室王明麗教授課題 組採用基因工程技術克隆並表達了豬α型幹擾素，並將實驗室合格產品製成凍乾粉針劑發送至安徽省多家養豬場進行臨床試驗。結果證明，該室研製的重組豬α幹擾素能有效治療豬犬病毒性疾病。對治療豬病毒性腹瀉有效率為83.5%，治癒率為63.9% (中國發明專利CN101289666 A )。這一項目在產業化進程中。在該項目的基礎上，對重組豬α幹擾素進行聚乙二醇化修飾，以獲得長效製劑，從而延長藥物在體內循環半衰期、減少體內清除率，減少給藥次數、降低動物的應激性、增強療效、降低用藥成本。作為新型獸藥的開發這一項目有重要的學術價值和應用前景，同時具有較高的社會效益和經濟效益。

【發明內容】

[0004]本發明目的就是為提供一種一種直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物、製備方法及其應用。
[0005]本發明是通過以下技術方案實現的:
[0006]一種直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物，它具有如下結構式:
[0007]
【權利要求】
1.一種直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物，其特徵在於它具有如下結構式:
2.根據權利要求1所述的一種直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物，其特徵在於所述的幹擾素是N端攜帶標記蛋白重組豬α幹擾素(TRX-HIS-1nterferon, Mw=39KD)。
3.根據權利要求1所述的一種直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物，其特徵在於所述的聚乙二醇部分是分子量為2-30KD的直鏈聚乙二醇。
4.一種如權利要求1所述的直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物的製備方法，其特徵在於包括以下步驟: (1)將幹擾素用5mMpH3.0-5.0的磷酸二氫鉀緩衝液稀釋到0.lmg/ml ； (2)加入計算量的幹擾素，用NaOH溶液調節pH值到8.0，冰浴保存，按幹擾素:mPEG為I: 20的物質的量加入1/4量的mPEG-SC，在0_4°C條件下反應，隨後每間隔2h加入1/4量的mPEG-SC,加入完畢後繼續反應4-8h，所述的mPEG_SC有如下結構:
5.根據權利要求1所述的直鏈聚乙二醇-重組豬α幹擾素偶聯物，其特徵在於該藥物可以用在製備獸用抗病毒藥物中。
【文檔編號】A61P31/12GK103751796SQ201310526045
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年10月29日 優先權日:2013年10月29日
【發明者】王明麗, 李增, 趙俊, 王彩玲 申請人:王明麗, 李增