一種抗腫瘤聯合用藥物及其在製備抗癌藥物中的用途的製作方法

2023-12-11 22:37:32 1

本發明涉生物醫藥領域，具體為一種抗腫瘤聯合用藥物及其在製備抗癌藥物中的用途。

背景技術：

綠原酸是植物在進行有氧呼吸的過程，經磷酸戊糖途徑中間產物合成的一種苯丙素類物質。其提取、合成技術成熟，綠原酸已經被開發應用於食品，保健品，化妝品和藥品等多個領域。目前研究結果表明，綠原酸有保護心血管、抗氧化、抗紫外以及抗輻射、抗癌、抗菌、抗病毒以及免疫調節等作用。

her-2基因(humanepidermalgrowthreceptor2gene)，又被稱作erbb2或her2/neu基因。her-2原癌基因或c-erbb2編碼一個單一的受體樣跨膜蛋白，分子量185kda，其結構上與表皮生長因子受體相關。在原發性乳腺癌患者中觀察到有25％-30％的患者her-2過度表達。her-2基因擴增的結果是這些腫瘤細胞表面her-2蛋白表達增加，導致her-2受體活化。her-2基因是1981年shih等首先發現的原癌基因，通常在人類胎兒期表達，僅在成人部分組織中低水平表達。細胞內her-2基因大量擴增會引起其蛋白產物p185的過表達，使得her-2受體異源二聚體數量增加，通過這些信號傳遞途徑，作用於特定的信號蛋白，引起細胞增殖、分化和抗凋亡，從而誘發腫瘤的發生。

her-2過度表達，不僅存在於乳腺癌，也存在於胃癌。大約有16％的胃癌患者her-2檢測呈陽性。胃癌很難被發現，一般早期胃癌多無症狀或者僅僅是輕微症狀，而當臨床症狀明顯時，病變已屬晚期。因此，進展期的胃癌患者很難治療，預後很差。

目前以her-2為靶點的藥物分為兩大類，一類為單抗藥物，另一類為小分子抑制劑。

曲妥珠單抗是一種重組dna衍生的人源化單克隆抗體，選擇性地作用於人表皮生長因子受體-2(her2)的細胞外部位。此抗體屬iggl型，含人的框架區，適用於治療her-2過度表達的轉移性乳腺癌。帕妥珠單抗是一種人源化單克隆抗體，該藥還能阻斷其他的her家族成員，包括egfr、her3和her4，臨床試驗研究結果表明，單獨使用帕妥珠單抗僅產生較弱的抗腫瘤作用。小分子抑制劑主要有拉帕替尼，拉帕替尼是小分子4-苯胺基喹唑啉類受體酪氨酸激酶抑制劑，抑制表皮生長因子受體(erbb1)和人表皮因子受體2(erbb2)。

近10年的隨機臨床試驗研究發現，在轉移性乳腺癌及早期乳腺癌中，單用小分子抑制劑或者抗體都能提高生存率方面效果。但單藥的有效率有限，並且具有毒副作用的缺陷，而且大部分治療有效者常在1年內產生耐藥性，影響臨床應用。

技術實現要素：

有鑑於此，本發明提供一種抗腫瘤聯合用藥物及其在製備抗癌藥物中的用途，以及綠原酸在製備抗癌藥物毒副作用抑制劑中的用途，所述抗癌藥物為her-2抑制劑。本發明所述技術方案可提高her-2抑制劑在乳腺癌、胃癌中的靶向性，降低其毒副作用，並逆轉her-2抑制劑的耐藥性。

為解決以上技術問題，本發明技術方案為採用一種抗腫瘤聯合用藥物，包括綠原酸和藥學上可接收的載體形成的第一製劑，及her-2抑制劑和藥學上可接收的載體形成的第二製劑。

優選的，所述第一製劑10-40份，所述第二製劑30-100份。

優選的，所述her-2抑制劑包括her-2小分子抑制劑、抗her-2抗體中的一種或多種。

優選的，所述抗her-2抗體包括曲妥珠單抗、帕妥珠單抗。

更為優選的，根據上述聯合用藥物，所述製劑的劑型為注射劑或口服製劑。

本發明還提供一種上述聯合用藥物在製備抗癌藥物中的用途。

優選的，所述癌症包括乳腺癌、胃癌。

本發明還提供一種綠原酸在製備抗癌藥物毒副作用抑制劑中的用途。

優選的，所述抗癌藥物為her-2抑制劑。

目前，大量的實驗均證明綠原酸具有抗誘變及抗癌的作用。綠原酸作為g6pt(葡萄糖-6-磷酸轉移酶)的抑制劑，可以啟動中性粒細胞及前髓細胞hl-60的程序性細胞死亡,抑制人hep3b肝癌細胞的金屬硫蛋白(mmp)分泌，抑制神經膠質瘤的遷移。。綠原酸對her-2抑制劑的增敏作用可能與上述機理有關。其次綠原酸分子中含有一定量的活性羥基,能形成具有抗氧化作用的氫自由基,可以消除羥基自由基和超氧陰離子等自由基的活性,保護組織免受氧化作用的損傷。此外，綠原酸對上皮內淋巴細胞(iel)上清液以及腸道固有層淋巴細胞(lpl)上清液中nf-γ和tnf-α水平影響均較大。體外研究顯示綠原酸能誘導人淋巴細胞及人外周血白細胞生成ifn-γ和ifn-α，這些作用也可能與綠原酸在本申請中能降低her-2抑制劑毒副作用有關。

曲妥珠單抗的耐藥分為原發性耐藥和繼發性耐藥，曲妥珠單抗發揮抗her-2療效的根本機制是其能夠正確地與腫瘤細胞膜上的her-2受體結合。阻止抗體與受體有效結合的細胞產物或her-2跨膜蛋白結構的改變均可導致曲妥珠單抗不能與her-2受體結合，從而不能發揮有效作用，產生原發性耐藥。此外her-2蛋白下遊信號通路的改變，也可導致耐藥。包括her-2蛋白與her家族其他成員形成異源二聚體活化下遊信號通路或者pi3k/akt信號通路的改變，pi3k/akt信號通路因與腫瘤的發展具有相關性而備受矚目，pi3k/akt信號通路基本作用機制為生長因子受體形成二聚體後，激活酪氨酸激酶活性，進而激活pi3k活性，pi3k能夠催化磷脂醯肌醇二磷酸(phosphatidylinositolbisphosphate，pip2)磷酸化形成第二信使pip3，pip3活化下遊akt信號通路，從而調節細胞增殖、存活和遷移等。pi3k突變會使其磷酸化活性增強，持續將pip2磷酸化成為具有信號轉導功能的pip3，從而持續活化下遊akt信號通路，繼而導致曲妥珠單抗耐藥性的產生。本發明中，綠原酸逆轉了her-2抑制劑包括her-2小分子抑制劑及單抗的耐藥性，其機理可能與上述機制相關，但her-2耐藥性的機理較為複雜，綠原酸具體的抗耐藥機制還需要進一步的研究證實。

具體實施方式

為了使本領域的技術人員更好地理解發明的技術方案，下面結合具體實施方式對本發明作進一步的詳細說明。

人類表皮生長因子受體2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2,her2)屬於跨膜酪氨酸激酶受體家族的成員,在腫瘤細胞中存在過表達。自從her2在腫瘤形成過程中的作用機制被發現,her2就成為了癌症研究的熱點之一。研究顯示,在乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肺癌、前列腺癌中均存在不同程度的her2過表達。her2這種在腫瘤中過表達以及具有細胞外結構域的特點,使之成為抗體藥物研發的一個理想靶點。

曲妥珠單抗是人工合成的重組單克隆抗體，與her2的胞外結構域結合後，選擇性地阻斷配體依賴的her2-her3結合，進而抑制her2相關信號通路。通過上述曲妥珠單抗對her2的作用，阻斷pi3k信號通路並下調下遊細胞周期蛋白，如cyclind1。除此之外，曲妥珠單抗還可通過抗體依賴的細胞毒性作用來激活her2過表達細胞的免疫反應。然而，該抗體雖然對her2過表達的乳腺癌患者產生選擇性抗腫瘤作用，對her2表達正常的腫瘤卻沒有作用。儘管曲妥珠單抗及其與其他化學療法的聯合應用對治療her2陽性乳腺癌具有很好的治療效果，但曲妥珠單抗治療的抵抗卻成為治療中的缺陷。有數據顯示，曲妥珠單抗單一療法治療her2陽性轉移性乳腺癌的臨床有效率只有48％。

在治療乳腺癌中，曲妥珠單抗臨床上最常見的不良反應包括發熱、噁心、嘔吐、輸注反應、腹瀉、感染、咳嗽加重、頭痛、乏力、呼吸困難、皮疹、中性粒細胞減少症、貧血和肌痛。在用於胃癌治療中，最常見的不良反應是中性粒細胞減少症、腹瀉、乏力、貧血、口腔炎、體重減輕、發熱、血小板減少等。其中感染、腹瀉和發熱性中性粒細胞減少症可導致治療停止。接受帕妥珠單抗聯合曲妥珠單抗和多烯紫杉醇治療者最常見的副作用是腹瀉、脫髮、對抗感染的白細胞減少、噁心、乏力、皮疹和神經損傷(周圍感覺神經病變)。拉帕替尼常見副作用主要有腹瀉、噁心、嘔吐、皮疹、疲勞和手一足症候群等。

介於上述抗her-2抗體藥物出現的抵抗與耐藥性，以及此類藥物包括her-2小分子抑制劑的毒副作用，結合綠原酸在人體多個系統表現出的有益效果，本申請創造性的將二者結合起來，產生了意料不到的技術效果。

本發明公開了一種抗腫瘤聯合用藥物及其在製備抗癌藥物中的用途，所述聯合用藥物包括第一製劑和第二製劑，所述抗腫瘤聯合用藥物按重量份數計為第一製劑10-40份，優選10-30份，更為優選10-20份，第二製劑30-100份，優選40-80份，更為優選50-60份。本發明還公開了綠原酸在製備抗癌藥物毒副作用抑制劑中的用途，所述抗癌藥物為her-2抑制劑。

在本發明實驗中，mtt實驗表明實驗結果顯示，在人正常乳腺細胞mcf10a、人正常胃上皮細胞ges-1抑制試驗中，綠原酸分別與曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼聯合用藥可降低曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼對人正常乳腺細胞及胃上皮細胞的毒性，一定程度上提高該兩種藥物的靶向性。對乳腺癌細胞株bt474及胃癌細胞株nci-n87抑制作用實驗中，綠原酸分別與曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼聯合用藥達到了協同增效的作用。

此外，本發明體外細胞實驗表明無細胞增殖抑制的綠原酸劑量能夠逆轉曲妥珠單抗耐藥乳腺癌細胞株bt474及胃癌細胞株nkn45的耐藥性，體外動物實驗進一步證實了該結果。

最後，在體外動物實驗中證實，綠原酸與曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼聯合用藥對bt474移植瘤及nci-n87移植瘤小鼠達到了增敏的效果，同時還減輕了上述藥物的毒副作用。

綜上所述，本發明所述技術方案可提高her-2抑制劑在乳腺癌、胃癌中的靶向性，降低其毒副作用，並逆轉her-2抑制劑的耐藥性。

以上是對發明內容的詳細分析，下面為該發明的實施例。

實施例1mtt測定聯合用藥的增殖抑制

1.1材料

受試藥品：綠原酸、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼

細胞株：乳腺癌細胞株bt474細胞、胃癌細胞株nci-n87、人正常乳腺細胞mcf10a、人正常胃上皮細胞ges-1。

1.2方法

對數生長期細胞一瓶，pbs洗滌2次，0.25％胰蛋白酶消化，用含10％小牛血清的rpmi-1640培養液配成單細胞懸液計數。無菌條件下接種於96孔培養板，接種細胞數均為5×l03/孔。細胞於37℃、5％co2孵箱中分別孵育24h後更換培養基。細胞分為，陰性對照組、her-2抑制劑藥物單獨用藥組、綠原酸組以及聯合用藥組，空白對照組不接種細胞。每個孔培養液和藥物總量為200μl,每個濃度設3個復孔，並以等體積培養液代替藥物作為空白對照。繼續置5％co2飽和溼度37℃溫箱中繼續培養。48h後，每孔加入濃度為5mg/mlmtt20μl繼續培養4h後，小心吸棄孔內液體，加150μl二甲基亞楓溶解沉澱，充分振蕩10min，溶解結晶物。選擇570nm波長，在酶聯免疫檢測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，計算抑制率及聯合指數。以上實驗至少重複3次。

1.3數據處理

(1)抑制率＝(1-od570(實驗組-空白組)/od570(對照組-空白組))*100％。

(2)聯合用藥以公式q＝e(a+b)/(ea+eb-ea×eb)計算有無協同作用。其中e(a+b)為兩藥合用的抑制率，即實測合併效應，ea和eb為兩藥單用時的抑制率，分母(ea+eb-ea×eb)為期望合併效應，q為兩者比值。q值在0.85～1.15時，兩藥合併效應為相加(+)，q值在1.15～20時為協同(++)，q值＞20為明顯協同(+++)，q值在0.05～0.85時為拮抗，q值＜0.05為明顯拮抗

1.4實驗結果

1.4.1單獨用藥及聯合用藥對不同正常細胞株的影響

表1單獨用藥對不同正常細胞株的影響

表2聯合用藥對不同正常細胞株的影響

實驗結果顯示，在人正常乳腺細胞mcf10a、人正常胃上皮細胞ges-1抑制試驗中，綠原酸(20μg/ml)單獨應用時，ic50值分別為1365.6ug/ml、1118.4ug/ml，說明綠原酸本身對正常細胞株無毒性。在人正常乳腺細胞mcf10a抑制試驗中，綠原酸(20μg/ml)分別與曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼聯合用藥ic50值均高於單獨使用時的ic50值，說明綠原酸可降低曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼對人正常乳腺細胞mcf10ab的毒性，一定程度上提高此類藥物的靶向性。在人正常胃上皮細胞ges-1抑制試驗中，綠原酸(20μg/ml)分別與曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼聯合用藥ic50值均高於單獨使用時的ic50值，說明綠原酸可降低曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼對人正常乳腺細胞mcf10ab的毒性，一定程度上提高該兩種藥物的靶向性。上述實驗數據說明綠原酸可降低her-2抑制劑的毒副作用，一定程度上提高其靶向性。

1.4.2單獨用藥及聯合用藥對不同腫瘤細胞株的影響

表3單獨用藥對不同腫瘤細胞株的影響

表4her-2抑制劑藥物與綠原酸聯合用藥對乳腺癌細胞株bt474細胞抑制作用

結果顯示，在her-2抑制劑與綠原酸聯合用藥對乳腺癌細胞株bt474抑制作用實驗中，50ug/ml曲妥珠單抗與10-50μg/ml綠原酸聯合用藥的q值在1.15～20，兩藥合併效應為協同(++)；100ug/ml帕妥珠單抗與10-50μg/ml綠原酸聯合用藥的q值在1.15～20，兩藥合併效應為協同(++)；6ug/ml拉帕替尼與10-50μg/ml綠原酸聯合用藥的q值在1.15～20，兩藥合併效應為協同(++)。

表5以her-2抑制劑藥物與綠原酸聯合用藥對胃癌細胞株nci-n87抑制作用

結果顯示，在her-2抑制劑藥物與綠原酸聯合用藥對胃癌細胞株nci-n87抑制作用實驗中，50ug/ml曲妥珠單抗與10-50μg/ml綠原酸聯合用藥的q值在1.15～20，兩藥合併效應為協同(++)；100ug/ml帕妥珠單抗與10-50μg/ml綠原酸聯合用藥的q值在1.15～20，兩藥合併效應為協同(++)；6ug/ml拉帕替尼與10-50μg/ml綠原酸聯合用藥的q值在1.15～20，兩藥合併效應為協同(++)。

實施例2綠原酸體外逆轉人乳腺癌及胃癌細胞對曲妥珠單抗和拉帕替尼的耐藥性

2.1材料

受試藥品：綠原酸、曲妥珠單抗、拉帕替尼。

細胞株：乳腺癌細胞株bt474細胞及胃癌細胞株nci-n87為實驗室常規培養細株，臨用前傳代，取生長狀態良好，處於對數期生長的細胞備用。

2.2試驗方法

2.2.1耐藥細胞株的培育

乳腺癌細胞株bt474與胃癌細胞株nci-n87分別暴露於曲妥珠單抗50ug/ml長達3個月，離心，培養出曲妥珠單抗耐藥的bt474/ny細胞與nci-n87/ny細胞，每天觀察細胞，3天左右1傳3傳代，保證細胞活力。

2.2.2檢測曲妥珠單抗對細胞株與耐藥株的ic50，計算耐藥倍數

取對數生長期的上述的細胞株及耐藥細胞株，調整細胞濃度為8×103個/孔接種於96孔板。實驗分別分成3組：空白組、對照組及實驗組。空白組只加入培養基，無需接種細胞；對照組加培養基並接種細胞；實驗組在上述基礎上再加入不同濃度的曲妥珠單抗工作液，置於培養箱孵育48h後每孔加入5mg/mlmtt20μl，繼續孵育4h，吸去上液，每孔加入dmso150μl，靜置30min，待結晶完全溶解。用酶標儀檢測570nm處各孔吸光值od值，計算腫瘤細胞生長抑制率。抑制率＝(1-od570(實驗組-空白組)/od570(對照組-空白組))×100％。計算ic50。耐藥倍數＝耐藥細胞ic50值/敏感細胞ic50值。

2.2.3mtt法測定無細胞毒的綠原酸濃度

細胞及耐藥細胞培養及處理方法同上。實驗分別分成3組：空白組、對照組及實驗組。空白組只加入培養基，無需接種細胞；對照組加培養基並接種細胞；實驗組在上述基礎上再加入不同濃度的綠原酸工作液，使其最終濃度分別為1、2、4、8、16、32、64、128μg/ml，置於培養箱孵育48h後每孔加入5mg/mlmtt20μl，繼續孵育4h，吸去上液，每孔加入dmso150μl，靜置30min，待結晶完全溶解。用酶標儀檢測570nm處各孔吸光值od值，計算腫瘤細胞生長抑制率。抑制率＝(1-od570(實驗組-空白組)/od570(對照組-空白組))×100％，取抑制率10％以下濃度的綠原酸濃度作為無毒劑量的逆轉濃度。

2.2.4綠原酸逆轉耐藥細胞株的作用

細胞培養以及實驗方法同上。實驗分組如下：耐藥細胞陰性組、耐藥細胞+綠原酸10ug/ml組、耐藥細胞+綠原酸20ug/ml組，實驗組分別加入不同濃度的曲妥珠單抗，每個濃度3復孔，測定各孔的od值，觀察無細胞毒性綠原酸(10μg/ml、20μg/ml)聯合曲妥珠單抗作用於耐藥細胞與曲妥珠單抗單用於對耐藥細胞的效果做比較,計算曲妥珠單抗對耐藥細胞株的ic50以及用10ug/ml，20ug/ml逆轉耐藥細胞株後的ic50。逆轉倍數＝逆轉前ic50值/逆轉後ic50值。

2.3試驗結果

2.3.1耐藥倍數

2.3.1.1曲妥珠對乳腺癌細胞株bt474及bt474/ny的ic50分別為51.5ug/ml和162ug/mll。按公式計算出耐藥倍數為3.17。

2.3.1.2曲妥珠對胃癌細胞株nci-n87及nci-n87/ny的ic50分別為78.3ug/ml和491ug/ml。按公式計算出耐藥倍數為6.27。

2.3.2mtt法測定對耐藥細胞無細胞毒的綠原酸濃度結果

2.3.2.1綠原酸對乳腺癌耐藥細胞bt474/ny均有抑制增殖作用，ic50為3577ug/ml。當綠原酸濃度低於357.7μg/ml時，對bt474/ny耐藥細胞的抑制率均<10％,無顯著細胞毒性。

2.3.2.2綠原酸對胃癌耐藥細胞nci-n87/ny均有抑制增殖作用，ic50為3210ug/ml。當綠原酸濃度低於321μg/ml時，對nci-n87/ny耐藥細胞的抑制率均<10％,無顯著細胞毒性。

2.3.3綠原酸對乳腺癌及胃癌耐藥細胞的逆轉作用

綠原酸無細胞毒濃度(10μg/ml、20μg/ml)作用於乳腺癌耐藥細胞bt474/ny之後，曲妥珠單抗對耐藥細胞株bt474/ny的ic50降低。10μg/ml綠原酸作為逆轉劑時，曲妥珠單抗對bt474/ny的ic50為71.4ug/ml，逆轉倍數為2.67，以20μg/ml綠原酸作為逆轉劑時，曲妥珠單抗對bt474/ny的ic50為60.4ug/ml，逆轉倍數為2.68。如表6所示

綠原酸無細胞毒濃度(10μg/ml、20μg/ml)作用於胃癌耐藥細胞nci-n87/ny之後，曲妥珠單抗對耐藥細胞株nci-n87/ny的ic50降低。10μg/ml綠原酸作為逆轉劑時，曲妥珠單抗對nci-n87/ny的ic50為71.4ug/ml，逆轉倍數為2.67，以20μg/ml綠原酸作為逆轉劑時，曲妥珠單抗對nci-n87/ny的ic50為80.7ug/ml，逆轉倍數為6.08。如表7所示

表6綠原酸對bt474/ny耐藥細胞的逆轉作用

表7綠原酸對nci-n87/ny耐藥細胞的逆轉作用

2.4小結

無細胞增殖抑制的綠原酸劑量能夠逆轉曲妥珠單抗耐藥乳腺癌細胞株bt474及胃癌細胞株nkn45的耐藥性，其逆轉倍數與劑量有一定相關性。

實施例3綠原酸與以her-2靶向抑制劑的藥物聯合體內抑瘤的增效減毒作用

3.1材料與儀器

受試藥品：綠原酸、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、拉帕替尼。

細胞株：乳腺癌細胞株bt474細胞、胃癌細胞株nci-n87為實驗室常規培養細株，臨用前傳代，取生長狀態良好，處於對數期生長的細胞備用。

受試動物：babl/c-nu小鼠，18-22g，雌

3.2試驗方法

3.2.1實驗動物腫瘤模型的建立

收集對數生長期細胞，1000rpm離心5min，細胞沉用pbs洗滌2次，計數後用無血清培養液調整細胞濃度為1×107/m1，無菌條件下送到動物室。在無菌實驗條件下，小鼠右側腋窩皮下注射1×107/m1的細胞，每隻0.1ml，注射局部出現明顯皮丘，1周後裸鼠左側腋窩處出現米粒大結節，說明移植模型成功建立，此時按照隨機分組法分成12組。

待腫瘤平均直徑達100mm3後開始治療，每天腹腔注射一次，生理鹽水對照組給0.2ml無菌生理鹽水。

3.2.3抗腫瘤作用評價

觀察給藥後每天測動物體重；待陰性組瘤體積約為0.5cm3時停止實驗，眼球摘除取血測定wbc、hbc及hgb含量，脫頸椎處死小鼠並稱重，剝取腫瘤並稱重。

抑瘤率＝(對照組瘤重-實驗組瘤重)/對照組瘤重×100％。

兩藥合併q＝e(a+b)/(ea+eb-ea×eb)，其中e(a+b)為兩藥合用的抑制率，即實測合併效應，ea和eb為兩藥單用時的抑制率，分母(ea+eb-ea×eb)為期望合併效應，q為兩者比值。q值在0.85～1.15時，兩藥合併效應為相加(+)，q值在1.15～20時為協同(++)，q值＞20為明顯協同(+++)，q值在0.05～0.85時為拮抗，q值＜0.05為明顯拮抗。

3.2.4統計學分析

實驗數據用spss17.0統計軟體進行處理，所有數據均以均數士標準差(mean±sd)表示。組間比較採用單因素方差分析進行統計學處理，p<0.05認為有差異，p<0.01認為有顯著性差異。

3.3試驗結果

3.3.1聯合用藥對抑瘤率的影響

表8綠原酸對乳腺癌bt474移植瘤的抑瘤率

與陰性組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與陽性組比較△p＜0.05，△△p＜0.01

表9綠原酸對胃癌nci-n87移植瘤的抑瘤率

與模型組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與陽性組比較△p＜0.05，△△p＜0.01

如表8、表9所示，綠原酸，曲妥珠單抗，帕妥珠單抗，拉帕替尼使用較低劑量，對乳腺癌、胃癌移植瘤有較弱的抑制作用，與模型空白組比較無顯著性差異。但綠原酸與抑制劑聯合使用有較好的抑瘤作用，與單用相比有顯著性差異。聯合用藥q值計算結果表明，綠原酸與曲妥珠單抗、帕妥珠單抗以及拉帕替尼聯用有協同效應。

3.3.2聯合用藥對小鼠體重的影響

表10綠原酸對bt474移植瘤小鼠體重的影響

與陰性組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與陽性組比較△p＜0.05，△△p＜0.01

表11綠原酸對nci-n87移植瘤小鼠體重的影響

與陰性組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與陽性組比較△p＜0.05，△△p＜0.01

結果顯示，第15天綠原酸聯合用藥組的體重大於her-2抑制劑單獨用藥組，結果有差異，表明綠原酸聯合用藥組可提高小鼠體重，改善小鼠機能狀態。

3.3.3聯合用藥的對小鼠血常規的影響

表12聯合用藥對bt474移植瘤小鼠血常規的影響

與陰性組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與陽性組比較△p＜0.05，△△p＜0.01

表13聯合用藥對nci-n87移植瘤小鼠血常規的影響

與陰性組比較*p＜0.05，**p＜0.01；與陽性組比較△p＜0.05，△△p＜0.01。