刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法
2023-09-15 00:31:30
刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法
【專利摘要】本發明公開了一種刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，屬於中藥鑑別【技術領域】。本發明涉及一種中藥材有效部位中的主要成分的薄層鑑別方法及最佳薄層鑑別條件。主要
【發明內容】
：取刺玫果黃酮有效部位的供試品溶液、蘆丁、金絲桃苷或槲皮素對照品溶液，用微量注射器點樣於層析矽膠(G)-薄板（鋁箔片基）上，蘆丁和金絲桃苷薄層鑑別採用醋酸乙酯-甲酸-水展開體系，槲皮素薄層鑑別採用苯-醋酸乙酯-甲酸展開體系展開，採用AlCl3乙醇溶液為顯色劑，根據供試品溶液、對照品溶液出現斑點的位置與顏色定性地判斷供試品溶液中所含主成分的種類，為刺玫果黃酮有效部位的質量控制提供了一種專屬性較強、操作方便、簡單的薄層鑑別方法。
【專利說明】刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，屬於中藥鑑別【技術領域】。
【背景技術】
[0002]山刺玫(愈似davurica Pall.)為薔薇科薔薇屬落葉灌木植物，其果實為刺玫果。現代醫學研究發現，刺玫果具有抗衰老、抗疲勞、耐缺氧，增強人體免疫功能作用，長期服用能顯著提高人體中SOD含量。刺玫果為藥食同源的寶貴資源，富含有機酸，黃酮、香豆素、甾醇、三萜、烯烴、皂苷、揮髮油、礦物質、微量元素等多種活性成分，其中的黃酮類化合物具有抗氧化、降低脂質過氧化反應、降低心肌耗氧量、防治血管硬化、降壓、抗衰老、抗自由基和抗癌、防癌等作用。是一種不可多得的極具開發價值與潛力的綠色資源。
[0003]目前，許多研究人員已對刺玫果展開了基礎研究，對其活性成分的提取、純化工藝及生物活性進行了研究，鍾方麗等對山玫片中刺玫果粗提物的薄層鑑別條件下進行了研究，比較了苯-醋酸乙酯-冰醋酸(5:2:0.1)及氯仿-甲醇-水(28:10:1)兩個系統的展開效果，結果確定苯-醋酸乙酯-冰醋酸系統略好。郭淑華等人也開展了刺玫果成分鑑別及定量分析，但有關刺玫果粗提物的薄層鑑別研究並不深入。
[0004]有效部位是指當一味中藥或複方中藥提取物中的一類或幾類化學成分的含量達到總提取物的50%以上，而且這一類或幾類已知化學成分被認為是有效成分，該一類或幾類成分的混合體即被認為是有效部位。與傳統的中藥製劑相比，有效部位中藥的藥物物質基礎或藥效基礎基本得到明確，藥效比傳統中藥有所提高，療效確切，服用安全可靠，毒副作用低。目前，有效部位中藥的研究與開發日漸得到人們的重視。
[0005]目前，鍾方麗等已對刺玫果總黃酮的提取、純化方法及醫藥用途進行了研究並申請了專利(專利名稱:刺玫果總黃酮提取物及其提取方法和其醫藥用途，專利號:ZL201110091577.4)。為了在刺玫果有效部位綜合利用與開發中，能夠較好地控制其質量，對刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法進行了研究。薄層鑑別具有操作簡便、迅速，專屬性較強，目前未見有關薄層法鑑別刺玫果黃酮有效部位的研究報導。
【發明內容】
[0006]本發明的目的之一是提供一種簡單、方便、快捷的刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法。
[0007]本發明的目的之二是提供可鑑別刺玫果黃酮有效部位中三種主成分的薄層鑑別方法。
[0008]本發明的目的之三是提供了可鑑別刺玫果黃酮有效部位中三種主成分的最佳條件。
[0009]刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別具體研究內容如下:
1.刺玫果黃酮有效部位供試品溶液的製備精密稱取乾燥至恆重的刺玫果黃酮有效部位浸膏適量於容量瓶中，加乙醇溶解，定容備用。
[0010]2.對照品溶液的製備
精密稱取乾燥至恆重的蘆丁、槲皮素、金絲桃苷對照品各適量，分別置於容量瓶中，用甲醇溶解定容，備用。
[0011]3.薄層板的製備
稱取一定量矽膠G，加入蒸餾水適量，溶脹一段時間後，在研缽中研磨後，將其均勻鋪在預先清洗乾淨並乾燥的玻璃板上，自然晾乾，使用前，置105°C活化30min-lh。
[0012]4.去除總黃酮的陰性對照液的製備
稱取刺玫果黃酮有效部位提取物適量，用水溶解，得到的溶液過D-101樹脂柱，流出液重複上柱，至流出液無黃酮反應(用鹽酸鎂粉法做顏色鑑別試驗至不發生反應)，收集流出液，在水浴上揮幹用適量60%乙醇溶解，即得除去總黃酮的陰性對照液，備用。
[0013]5.展開劑的配置
分別配置展開劑1:醋酸乙酯-甲酸-水(8:1:1);展開劑2:醋酸乙酯-甲酸-水(9:1:1);展開劑3:醋酸乙酯-甲酸-水(7:1:1);展開劑4:醋酸乙酯-甲酸-水(10:1:1)；展開劑5:醋酸乙酯-甲酸-水(12:1:1);展開劑6:醋酸乙酯-甲酸-水(20:1:1);展開劑7:甲醇-冰醋酸-水(4:1:5);展開劑8:苯-醋酸乙酯-甲酸(5:4:1);展開劑9:苯-醋酸乙酯-甲酸(6:4:1);展開劑10:氯仿-甲醇-水(28:10:1)，並對展開系統進行比較。
[0014]6.顯色劑的配置
顯色劑1: FeCl3溶液的配置:稱取FeCl3.6H20適量，用蒸餾水溶解，並於容量瓶中定各，備用。
[0015]顯色劑2 =AlCl3乙醇溶液的配置:稱取無水AlCl3適量，緩慢少量多次溶於無水乙醇，並用無水乙醇於容量瓶中定容，備用。
[0016]7.薄層層析
(O點樣點樣前，將距板1_2_的吸附劑去掉，露出玻璃板，以防止邊緣效應，兩個邊點距兩板邊緣為1.5cm，用微量注射器點樣，樣點直徑為3-5_。
[0017](2)展開將點好樣的薄層板放入已事先配置好並達到飽和的層析缸中，浸入展開劑的深度為距原點2-2.5mm，待展開劑在板上邊緣至頂端為1-1.5cm時，將板取出，自然晾乾。
[0018](3)顯色將晾乾的薄層板均勻噴灑上顯色劑，至於105°C烘箱或用電吹風加熱顯色，顯色後於暗箱式紫外分析儀(365nm)中觀察並計算Rf值。
[0019]8.刺玫果黃酮有效部位薄層鑑別條件的優化
(O展開劑的選擇刺玫果總黃酮提取物經過大孔樹脂純化後，其總黃酮含量> 50%,其主要成分分別為蘆丁、金絲桃苷和槲皮素。金絲桃苷，又名槲皮素-3-0-/?-D-吡喃半乳糖苷。屬於黃酮醇苷類化合物。苷元為槲皮素，糖基為吡喃半乳糖。蘆丁，又稱芸香苷，也屬於黃酮醇苷類化合物，苷元為槲皮素，糖基為I分子葡萄糖和I分子鼠李糖，金絲桃苷和蘆丁的極性相近，槲皮素與兩者相比極性稍小，在展開劑選擇時三者的分子結構和極性都對展開劑系統的選擇產生較大的影響。對10種展開劑的展開效果進行了評價、選擇與優化。如附圖1、附圖2、附圖3。
(2)矽膠板的選擇評價自製矽膠G板(玻璃片基)、自製矽膠H板(玻璃片基)、購置層析矽膠(G)--薄板(鋁箔片基)、購置層析矽膠(G)-薄板(玻璃片基)的刺玫果黃酮有效部位薄層層析效果。如附圖4、附圖5。
[0020](3)顯色劑的選擇
分別用5%A1C13和9%FeCl3溶液顯色劑顯色，對比顯色效果，確定最佳顯色劑。
[0021](4)供試品薄層鑑別濃度的選擇
分別對供試品原液濃度、原液稀釋2倍、5倍、10倍進行薄層層析鑑別，確定較適宜的供試品薄層鑑別濃度。
[0022](5)點樣體積的選擇
分別用微量注射器吸取2 μ L、3 μ L、5 μ L供試品和對照品點樣於矽膠板上，對比薄層層析效果，確定最佳點樣體積。
[0023](6)確定最佳薄層層析條件
根據以上各因素的優化結果，確定刺玫葉果黃酮有效部位的最佳的薄層鑑別條件，如附圖6、附圖7。
[0024]【專利附圖】
【附圖說明】:
附圖1是以醋酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)為展開劑。
[0025]附圖2是以甲醇-冰醋酸-水(4:1:5)為展開劑。
[0026]附圖3是蘆丁、金絲桃苷對照品在醋酸乙酯甲酸水8:1:1中展開，槲皮素對照品在苯-醋酸甲酸6:4:1中展開。
[0027]附圖4是使用自製矽膠G板(玻璃片基)薄層層析效果。
[0028]附圖5是使用市售層析矽膠(G)-薄板(鋁箔片基)薄層層析效果。
[0029]附圖6是最佳條件下薄層層析效果。
[0030]附圖7是最佳條件下薄層層析效果。
[0031]本發明的有益效果是:
(O目前未見有關刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，本發明提供了一種刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，為其應用開發過程中的質量監控提供了簡便快捷的方法；
(2)本發明提供了一種可鑑別刺玫果黃酮有效部位中三種主成分的薄層鑑別方法，使其薄層鑑別更準確、專一性更強；
(3)本發明提供了一種可鑑別刺玫果黃酮有效部位中三種主成分的最佳薄層鑑別條件。
[0032]
【具體實施方式】
實施例1
1.刺玫果黃酮有效部位供試品溶液的製備
精密稱取乾燥至恆重的刺玫果浸膏0.1607g於25mL容量瓶中，加60%乙醇溶解，定容；將此溶液過濾，取續濾液5mL於1mL容量瓶中加60%乙醇定容；取續濾液2mL於1mL容量瓶中加60%乙醇定容，取續濾液ImL於1mL容量瓶中加60%乙醇，定容，備用。
[0033]2.對照品溶液的製備
精密稱取乾燥至恆重的蘆丁對照品5.02mg，槲皮素對照品5.0Omg，金絲桃苷對照品5.05mg,分別置於1mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，備用。
[0034]3.去除總黃酮的陰性對照液的製備稱取刺玫果黃酮有效部位提取物適量，用水溶解，得到的溶液過D-1Ol樹脂柱，流出液重複上柱，至流出液無黃酮反應(用鹽酸鎂粉法做顏色鑑別試驗至不發生反應)，收集流出液，在水浴上揮幹用適量60%乙醇溶解，即得除去總黃酮的陰性對照液，備用。
[0035]4.展開劑的配置
配置蘆丁和金絲桃苷的最佳展開劑:醋酸乙酯-甲酸-水(8:1:1);配置槲皮素的最佳展開劑:苯-醋酸乙酯-甲酸(6:4:1)。
[0036]5.顯色劑的配置
配置較佳顯色劑AlCl3乙醇溶液:稱取無水AlCl3 4.1705g，緩慢少量多次溶於無水乙醇，並用無水乙醇定容於10mL容量瓶中即得，備用。
[0037]6.薄層層析 (O點樣
選用層析矽膠(G)-薄板(鋁箔片基)，用微量注射器點樣，樣點直徑為3-5mm，供試品溶液的點樣量為5μ L ;金絲桃苷對照品溶液的點樣量為3 μ L，蘆丁對照品溶液的點樣量為5μ L ;槲皮素對照品溶液的點樣量為2μ L時，螢光效果明顯且清晰。
[0038](2)展開
將點好樣的薄層板放入已事先配置好並達到飽和的層析缸中，浸入展開劑的深度為距原點2-2.5_，待展開劑在板上邊緣至頂端為1-1.5cm時，將板取出，自然晾乾。
[0039](3)顯色
將晾乾的薄層板均勻噴灑上AlCl3乙醇溶液顯色劑，至於105°C烘箱或用電吹風加熱顯色，顯色後於暗箱式紫外分析儀(365nm)中觀察並計算Rf值，見附圖6、附圖7。
【權利要求】
1.一種刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，其特徵在於包括如下步驟: (1)配製刺玫果黃酮有效部位供試品溶液； (2)製備不同濃度的蘆丁、槲皮素、金絲桃苷對照品溶液； (3)製備去除總黃酮的陰性對照液； (4)取刺玫果黃酮有效部位供試品溶液、蘆丁、槲皮素、金絲桃苷對照品溶液、去除總黃酮的陰性對照液做薄層鑑別分析，其主要特徵在於供試品溶液與對照品溶液在相同的位置顯示相同顏色的斑點，陰性對照液未顯示斑點，則表明供試品溶液中含有此成分，且不存在其他因素的幹擾。
2.根據權利要求1所述的刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，其特徵在於，可同時鑑別刺玫果黃酮有效部位中的1-2種主要成分。
3.根據權利要求1所述的刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，其特徵在於，其具體操作步驟為:取供試品溶液、蘆丁、金絲桃苷或槲皮素對照品溶液，用微量注射器於層析矽膠(G)-薄板(招箔片基)上點樣，以展開劑展開後，晾乾，顯色，烘乾，供試品溶液與對照品溶液在相同的位置顯示相同顏色的斑點。
4.權利要求3中所述的刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，其特徵在於，所用的展開劑體系分別為:蘆丁和金絲桃苷薄層鑑別採用醋酸乙酯-甲酸-水展開體系；槲皮素薄層鑑別採用苯-醋酸乙酯-甲酸展開體系。
5.權利要求3中所述的刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，其特徵在於，所用的展開劑體系的具體體積比為:醋酸乙酯-甲酸-水=8:1:1 ;苯-醋酸乙酯-甲酸=6:4:1。
6.權利要求3中所述的刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，其特徵在於，所用的顯色劑為AlCl3乙醇溶液。
7.權利要求3中所述的刺玫果黃酮有效部位的薄層鑑別方法，其特徵在於，所用的顯色劑為AlCl3乙醇溶液濃度約為0.04g/mL。
【文檔編號】G01N30/90GK104459012SQ201410823341
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月26日 優先權日:2014年12月26日
【發明者】鍾方麗, 王曉林, 楊英傑, 薛健飛, 陳帥, 梁力文, 劉豔文 申請人:吉林化工學院