五種十字花科蔬菜提取物複合製劑製備及其應用的製作方法
2023-09-13 09:15:35 1
專利名稱：五種十字花科蔬菜提取物複合製劑製備及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及植物提取物，具體地說，本發明是一種五種十字花科 蔬菜提取製劑，該提取製劑的製備方法及該製劑的多種應用。
背景技術：
目前，隨著社會進步和經濟發展，人類對自身的健康日益關注。 全球居民的健康消費逐年攀升，對營養保健品的需求十分旺盛。在按
國際標準劃分的15類國際化產業中，醫藥保健是世界貿易增長最快 的五個行業之一保健食品的銷售額每年以13%的速度增長。據國內貿 易局公布的全國食品日用品監測最新結果，保健滋補品的銷量在連鎖 超市中已名列第二位。這表明，隨著生活水平的日益提高，為健康、 為長壽而"食"已成為人們生活中的重要內容。
隨著經濟的發展以及人民生活水平的提高，百姓對食物的需求基 本上已由"吃得飽"轉變為"吃得好"。國內貿易局所屬的中華全國 商業信息中心在對全國連鎖店經營的全部商品銷售額的調查中發現， 30種居民日常消費的主要品種銷售額佔總銷售額的34.9 7%，排在 前5位的品種依次為速凍食品、保健滋補品、休閒食品、餅乾和食 用油，而且與上次調整結果相比，在連鎖店銷售總額增加的產品中， 保健滋補品名列第一。
據國內貿易局公布的全國食品日用品監測最新結果，保健滋補品 的銷量在連鎖超市中已名列第二位。這表明，隨著生活水平的日益提 高，為健康、為長壽而"食"已成為人們生活中的重要內容。
據國外資料顯示，全球保健食品己佔整個食品銷售的5%，達上
千億美元，而且每年都以相當速度增長。美國目前的保健食品銷售額 達750億美元，佔食品銷售額的1/3;日本近兩年的保健品銷售額為
15000億日元，年產保健品3000多種；歐洲的保健食品也有2000餘 種，銷售額以每年17%的速度遞增。據調査，歐美國家的消費者平均 用於保健品方面的花費佔其總支出的2%以上，而中國只佔0.07%， 具有極大的發展空間。
目前市場上已經出現以蔬菜為主要原料，具有一定基礎理論研究 的產品，如番茄紅素、大蒜提取物。
大蒜提取物的有效成分是大蒜素；產品規格1% 2% 4%;檢 測方法HPLC;大蒜素具有免疫調節、抗氧化、調解血脂等作用。4 %含量的大蒜提取物市場價格為1200元/公斤，國內年產量超過100 噸，大部分出口，產地集中在山東等地。原料主要用於保健食品，保 健功能集中在調節免疫、調節血脂、抗氧化等功能。
番茄紅素是一種類胡蘿蔔素，番茄紅素具有很強的抗氧化作用， 是目前廣受國內外市場歡迎的抗氧化防衰老保健品。番茄紅素含量 為5% 40%的粉狀天然番茄紅素。4-6%的番茄紅素原料價格在 2500-3000元/kg左右。而高純度的蕃茄紅素更是難以滿足市場的需 求。番茄紅素的生產工藝方法是提取法，該法在世界上目前使用最廣 泛，但其耗費成本大，產量低，難以生產高純度番茄紅素，每公斤含 量5%的番茄紅素其生產成本就達1000 1500元。而且還受到季節和 地域資源的限制。目前具有中型生產能力的廠家年生產量僅為2噸， 廠家也都集中在新疆一帶。全世界番茄及番茄製品的主要產地集中在 美國、義大利、西班牙、希臘、智利和中國這幾個國家之中。而中國 番茄加工總裝備能力和產量90%都在新疆，新疆番茄日處理能力達
到5.5萬噸以上。年產量約70噸左右。做為蔬菜提取物，番茄紅素 是最為成功的一個產品。原料主要用於生產保健食品，截至目前國家
食品藥品監督管理局批准以番茄紅素的產共計有175個品種，其只要
功能集中在抗氧化和免疫調節。
大蒜提取物和番茄紅素都是單一成分，作為以單一成為原料的產 品要實現效果必須添加量增加，勢必導致成本上升，副作用增大。
發明內容
本發明為了解決上述問題，提出了一種多種十字花科蔬菜複合提 取製劑，並提出了該提取製劑的製備方法和多種應用。
本發明所採用的具體技術方案是
一種由異硫氰酸酯類、吲哚類、硫酮類化合物組成的組合物，由 多種十字花科蔬菜的組合物中提取。所述的十字花科蔬菜的組合物是 花椰菜、花莖菜、甘蘭、大白菜和球莖甘蘭的組合。
十字花科蔬菜的組合物中，各十字花科蔬菜優選採用相等的重 量。S卩花椰菜、花莖菜、甘蘭、大白菜和球莖甘蘭的重量比是
1:1:1:2:1。
上述的組合物的製備方法，其特徵在於
A. 將各十字花科蔬菜清洗後以壓榨機打漿，獲得葉蛋白漿液； 將葉蛋白漿液過濾後再進行打漿；
B. 離心步驟A所得的液體混合放置真空離心機，調製4000 轉/分鐘，溫度為20度，時間為20分鐘，收集沉澱物；
C. 真空乾燥將收集沉澱物放置乾燥箱，溫度35'C，乾燥時間 15 16小時後即得。本發明是利用"多種十字花科蔬菜"進行有效成分提取，十字花 科蔬菜包括花椰菜、花莖甘藍、球莖甘藍、大白菜、結球甘藍。這些 蔬菜中含有多種微量元素、膳食纖維、胡蘿蔔素、植物類黃酮等多種 化合物。利用現代萃取技術分離濃縮方式，發明人從多種十字花科蔬 菜中萃取、分離、提取異硫氰酸酯類、吲哚類、硫酮類化合物。發明
人為了說明的方便，把這三種物質的英文縮寫簡稱"提取物"。經現 代科學研究這些物質具有明顯的抗氧化、調節免疫和預防腫瘤的作 用。本發明根據植物化學，從植物中提取有效成分，明確有效成分作 用機理，經過試驗驗證並進行了臨床前期所需的藥物代謝動力學試 驗、毒理學試驗、功能學試驗，穩定性良好、無毒副作用、功能明顯， 具有安全性、可靠性、有效性、質量可控性，並且符合保健食品管理 辦法，作為一種新型植物化學功效原料，可作為保健食原料，也可以 作為藥物進行深度開發，具有良好的市場發展前景和技術擴展空間。 十字花科內的蔬菜包括花椰菜、花莖甘藍、大白菜、甘藍和球莖 甘藍的球莖或湯菜高含很多化合物包括異硫氰酸鹽、吲哚類、二硫代 硫醇類化合物、黃酮類化合物、酚類及蛋白酶抑制物等，發明人分別 對這些化合物進行了細胞和動物實驗。結果表明，這些化合物都有增 強細胞免疫功能、增強巨噬細胞的吞噬能力、增強體液免疫能力、促
進淋巴細胞因子增強淋巴細胞DNA和DNA多聚酶的活力。據統計， 在飲食中多食十字花蔬菜的人疾病的發生率比沒有食用或少食用者 要少的多，這一現象在試驗動物中更加明確。
提取物能明顯增強調節能力，促進胸腺、脾臟等免疫器官的生長 和血清蛋白的合成。試驗證明，異硫氰酸鹽所致小鼠遲發性超敏反應 增強；小鼠血清半數溶血值顯著增高；小鼠廓清試驗和小鼠單核-巨
噬細胞吞噬指數顯著高於對照組。
提取物中富含許多種抗氧化物和提高免疫調節能力。採用生物技 術分離和濃縮方式，從五種十字花科蔬菜品種中通過分離、萃取、提 純、分析分離和濃縮過程製取高含二硫代硫酮類，吲哚類，異硫氰酸 鹽類化合物的提取製劑，其中代硫酮類，吲哚類，異硫氰酸鹽類化合 物具有良好的抑制腫瘤的作用，除此之外提取物進行了動物抗氧化酶 活力試驗、動物生存試驗、細胞免疫功能試驗、體液免疫功能試驗、 巨噬細胞功能試驗。結果試驗表明，過氧化脂質和抗氧化酶均為陽性， 可以證明受試物具有抗氧化作用，並提示具有延緩衰老的功能；在細 胞免疫功能試驗、體液免疫功能試驗、巨噬細胞功能試驗結果中，功 能試驗結果均為陽性，即可判定該試驗具有免疫調節作用。
5. 1.提取物的生物活性測定
試驗檢驗及檢驗試劑和設備要求均按照國家藥品管理檢驗規 定實施並制定。
5. 1. 1.谷光苷肽活性測定
谷光苷肽(GSH，巰基)含量是根據分光光度計測定法測定。細 胞被均漿大碎後懸浮在0.1M磷酸緩衝液包含0.005M EDTA中 (PH8.0)，離心10000轉30分鐘(4C)。上清夜用來測定谷光苷肽 含量。蛋白質含量標準測定是根據(BRADFORD)方法(BIO RAD)。 5. 1. 2.谷光苷肽轉移酶的活性測定
谷光苷肽轉移酶的活性測定是根據分光光度計法。以lMml-氯 甲烷-2， 4-二硝基苯(CDNB)作為低物，lmM穀胱苷肽作為反應物， 測定形成穀胱苷肽與CDNB軛合物的比率(結果見表一)。 表一 穀胱甘肽，穀胱甘肽還原酶和穀胱甘肽-S-轉移酶的活性測定
種 還原狀穀胱甘肽穀胱甘肽還原酶穀胱甘肽-S-轉移酶
(nmol/mg)(umol. min/mg)(umol/min/mg)
對照 花椰菜 花莖甘蘭 甘蘭(圓白菜) 大白菜 球莖甘蘭 五種混合物1: l 24. 98+-0. 47 8. 54+-0.61 9. 82+-0. 59 8. 05+-0. 37 7. 98+-0. 42 9. 35+-0. 73 10.35+-0.3952. 8+-6. 4 103. 2+-7. 5 110.2+-8.3 101. 9+-5. 9 98. 3+-6. 4 107. 4+-8. 7 111. 3+-9. 422. 9+-3. 7 48. 4+-4. 4 50. 4+-4. 2 49. 3+-3.9 44. 7+-5. 3 47. 2+-6. 1 49. 8十-5. 3
5. 1. 3.苯還原酶的測定(根據二種生物和生化方法測定酶的 活性)
生化測定苯還原酶的活性測定是根據ERNSTER方法，在電子 受體2， 6-二氯靛酚(DCPIP)和牛血清蛋白條件下，用分光光度計 測定NADPH的氧化量。或者NADH還原2， 6 二氯靛酚的量。活性 單位以nmol/min/mg蛋白為單位，減去抑制物雙香豆素的讀數，結
果見表一。
細胞方法測定。利用小鼠肝瘤細胞作為誘導對象。根據其植物提 取物對誘導生長在培養板中的細胞的苯還原酶的能力來測定。根據 LONG等人的方法。誘導活性單位定義 一定數量的細胞(10000) 在150微升培養基內可提高二期減毒酶(苯還原酶)活性一倍的誘導 物量稱為一活性單位。
表二 提取物誘導苯還原酶活性的測定
對照*
1. 23
740
樣品
誘導苯還原酶單位
菜)
球莖甘蘭 五種混合物(1:1 2)
細胞學方法(單位/克) *105 2. 37 3.95 2. 15
2. 82
3. 10
4. 32
生物化學方法(nmol/min/mg 蛋白) 1350 4200 1210 1900 2100 3460
菜菜白菜
椰莖圓白
花花c大
蘭
甘
*對照採用非十字花科蔬菜的混合物* 綜上所述實驗表明
1) 、生物活性測定結果表明(見表一和表二)，十字花科蔬菜具 有比對照(非十字花科蔬菜)高得多穀胱苷肽，穀胱苷肽還原酶和轉 移酶量。穀胱苷肽是細胞內最重要的非蛋白硫醇，其擔當了保護細胞 免受自由基、氧化劑、藥物及外來化學物質的電中間體侵犯。所以提 高穀胱苷肽含量就可以提高細胞防癌能力。
2) 、與對照相比每種十字花科蔬菜可提高誘導苯還原酶的活性
3.5-6.5倍。如果把五種十字花科蔬菜按照l:l比例混合後使用，誘導 活性可提高6.8倍因為各種蔬菜中之化合物種類和含量均不同。在按 照科學的比例混合後製成提取物後誘導活性提高近10倍，顯然是增 加了化合物之間的協同作用，同時可以大大減少使用的量，減少副作用。
5. 2.提取物防癌效應測試
主要技術與性能指標
項目的主要技術指標
提取物中谷光苷肽含量
提取物中所含谷光苷肽-S-轉移酶的活性
提取物中所含谷光苷肽還原酶活性
提取物中所含苯還原酶的活性
提取物安全性(Ic50)
提取物防癌細胞水平效應
提取物防癌動物水平效應
5. 2. 1.提取物防癌效應的細胞水平測試
利用人體及動物細胞作為防癌的效應實驗，結果(見表三)。結果表明提取物在低濃度時(50毫克/毫升)可以部分抑制癌變，當高
於500毫克/毫升以上，其抑制性大大提高，可以達到85%-100%，提
取物對菸草濃縮物所引起的癌變有明顯的抑制作用。
表三提取物對菸草濃縮物NNK所引起的大鼠細胞癌變的抑制
_處理及使用濃度_細胞癌變數
鹽水aoo微升/毫升) 5
提取物(100毫克/毫升) 0 NNK (5毫克/毫升) 21 提取物(50毫克/毫升)+NNK (5毫克/毫升) 11 提取物(500毫克/毫升)+NNK (5毫克/毫升) 5
提取物(1000毫克/毫升)+NNK (5毫克/毫升)_1
^U勿(5000毫克/毫升)+NNK (5毫克/毫升) 5
5. 2. 2.提取物動物體內安全性測試
提取物毒性測試用MTT測試方法確定提取物對人體HT29細胞 的Ic50是8.4克/107的，動物口服一次毒性測試結果表明小鼠大約在 35克/公斤，大鼠在57克/公斤，家兔在20克/公斤，狗在28克/公斤 範圍見表四。實驗表明，在有效防癌作用的計量範圍(動物實驗在l 克/公斤)並沒有任何細胞殺傷和其他副作用。提取物是一種非常安 全的自然半合成防癌製劑。
提取物對細胞和動物體的毒性測定
品種數量半死濃度 (LD50)
人體HT29細胞1078. 4克/107
小鼠2335. 1克/公斤
大鼠1956. 7克/公斤
家兔519. 4克/公斤
狗328. 3克/公斤
綜上所述實驗表明
1)、生物活性測定結果表明(見表一和表二)，十字花科蔬菜具 有比對照(非十字花科蔬菜)高得多穀胱苷肽，穀胱苷肽還原酶和轉 移酶量。穀胱苷肽是細胞內最重要的非蛋白硫醇，其擔當了保護細胞 免受自由基、氧化劑、藥物及外來化學物質的電中間體侵犯。所以提 高穀胱苷肽含量就可以提高細胞防癌能力。
2)、與對照相比每種十字花科蔬菜可提高誘導苯還原酶的活性
3.5-6.5倍。如果把五種十字花科蔬菜按照1:1比例混合後使用，誘導 活性可提高6.8倍因為各種蔬菜中之化合物種類和含量均不同。在按 照科學的比例混合後製成提取物後誘導活性提高近10倍，顯然是增 加了化合物之間的協同作用，同時可以大大減少使用的量，減少副作 用。
具體實施方式
實施例1
1. 選料選擇無腐爛、無擠壓破損，去除根葉。
2. 清洗清洗、瀝水，稱重(3200g)，花椰菜、花莖菜、甘蘭、 大白菜和球莖甘蘭各640克。
3. 打漿加水(蒸餾水或純淨水)4500ml，粉碎，打漿(時間
根據顆粒大小程度掌握，使其完全溶解於水中)。葉蛋白主要由青綠 植物莖、葉中的細胞內呈溶解狀態的細胞質蛋白和葉綠體內的基質蛋 白組成，存在於細胞壁內。因此，要獲得葉蛋白，必須採取粉碎或打 漿的辦法破壞細胞壁。試驗證明，粉碎得越細，葉蛋白的提取率越高。 一般用錘式打漿機或粉碎機來進行打漿。通過壓榨機擠壓出綠色汁 液，生產中有時將粉碎與壓搾在一機內完成。為把汁液從草渣中充分 榨取出來，壓榨前可加入5% 10%的水分進行稀釋後擠壓，或先直接 壓榨，然後加入適當水分攪拌後，再進行第二次壓榨。目前小型加工 機具是甘蔗壓榨機，大量生產則採用螺旋壓榨機進行。
4. 過濾兩層紗布過濾脫水，液體殘渣分離。液體5500ml， PH7.0，
呈綠色，濃烈蔬菜汁味道。液體待用。
5. 打漿將分離殘渣加水4500ml，重複攪拌打漿，時間酌情。 用4層紗布瀝出液體，液體量4500ml。
6. 離心兩次液體混合放置真空離心機，調製4000轉/分鐘， 溫度為20度，時間為20分鐘。收集沉澱物(80ml，水分約30%) 待用。保留上清液進行檢測。
7. 真空乾燥將收集沉澱物放置乾燥箱，溫度35t:。觀察幹 燥程度，致完全乾燥，時間約15小時。物品為墨綠色。粉碎(0.1 lmm)，過篩(100 120目)。
以上對本發明所提供的五種十字花科蔬菜複合提取製劑製備及 其應用進行了詳細介紹，本文中應用了具體個例對本發明的原理及實 施方式進行了闡述，以上實施例的說明只是用於幫助理解本發明的方 法及其核心思想；同時，對於本領域的一般技術人員，依據本發明的 思想，在具體實施方式
及應用範圍上均會有改變之處，綜上所述，本 說明書內容不應理解為對本發明的限制。
權利要求
1.一種由異硫氰酸酯類、吲哚類、硫酮類化合物組成的組合物，其特徵在於由五種十字花科蔬菜中提取。
2. 根據權利要求1所述的由異硫氰酸酯類、吲哚類、硫酮類化 合物組成的組合物，其特徵在於所述的十字花科蔬菜的組合物是花 椰菜、花莖菜、甘蘭、大白菜和球莖甘蘭的組合。
3. 根據權利要求1或2所述的由異硫氰酸酯類、吲哚類、硫酮類化合物組成的組合物，其特徵在於所述的十字花科蔬菜的組合物 中，各十字花科蔬菜採用相等的重量。
4. 權利要求1所述的組合物的製備方法，其特徵在於A. 將清洗後以壓榨機打漿，溫水浴由3(TC加熱至5(TC，獲得葉 蛋白漿液；將葉蛋白漿液過濾後再進行打漿；B. 離心步驟A所得的液體混合放置真空離心機，調製4000 轉/分鐘，溫度為20度，時間為20分鐘，收集沉澱物；C. 低溫真空濃縮乾燥將收集沉澱物放置低溫真空濃縮乾燥箱， 溫度0 4。C，乾燥時間15 16小時後即得。
5. 權利要求1所述的組合物在製備抑制癌變的藥物中的用途。
6. 權利要求1所述的組合物在製備免疫調節的藥物中的用途。
全文摘要
本發明公開了一種五種十字花科蔬菜提取物複合製劑製備方法和應用。該複合提取製劑由多種十字花科蔬菜的組合物中提取，這些十字花科蔬菜的組合物是花椰菜、花莖菜、甘蘭、大白菜和球莖甘蘭的組合。本發明還公開了組合物的提取方法。本發明所獲得的製劑組合物能明顯增強免疫調節能力，延緩衰老、抑制癌變，並且降低每種有效成份單獨使用所帶來的毒性作用，使提取物複合製劑更安全。
文檔編號A23L1/28GK101181053SQ200710179769
公開日2008年5月21日 申請日期2007年12月18日 優先權日2007年12月18日
發明者豔 朱, 鑫 金 申請人:北京信志同創科技有限公司