一種提高彩色馬蹄蓮組織培養叢生芽增殖率的方法

2023-09-13 08:11:40 2

專利名稱：一種提高彩色馬蹄蓮組織培養叢生芽增殖率的方法
技術領域：
本發明涉及提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法，屬植物的人工繁殖技術領域。
背景技術：
彩色馬蹄蓮(Zantedesehia hybrida)屬天南星科(Araceae)馬蹄蓮屬(Zantedeschia Spreng)植物,原產自非洲東南部，其佛焰荀有橘紅、玫紅、紫紅、鮮黃等顏色，與傳統的白色馬蹄蓮相比，具有花色品種多、花色豔麗、觀賞性強等優點，既可作為切花，又可作為盆花。多數彩色馬蹄蓮葉片帶月白色斑點或條紋，是具有較高觀賞價值的配葉材料。由於彩色馬蹄蓮花、葉俱佳，其市場潛力較大，近年來在國內外花卉市場佔有越來越重要的地位。彩色馬蹄蓮多採用組織培養的方法進行快速繁殖，既可以加快種苗繁育進程，又可以起到提純復壯的作用，是實現產業化生產和栽培的有效途徑。

發明內容
本發明的目的在於提供一種提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率的方法，以滿足對彩色馬蹄蓮規模化生產以 及育種為基礎的其他方面的研究工作的需要。本發明的技術方案如下，該種提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的主要特點是:A外植體消毒:選取直徑約2cm的健康的彩色馬蹄蓮小種球，用2g/L多菌靈水溶液浸泡15min後，淺埋於經高壓滅菌處理的溼潤的細沙基質中，在光照30001x、12h/d、(25 ± I) °C的條件下進行預培養，令種球萌發；7 IOd後，選取芽長約Icm的種球，經表面消毒後接種。具體消毒方法為:用軟毛刷將塊莖刷洗乾淨，避免損傷頂芽，削去塊莖表皮，在安利洗滌劑溶液中振蕩洗滌20min，再用2g/L多菌靈溶液浸泡lh，自來水衝洗40min，轉入超淨臺，切除塊莖表層，保留直徑約1.5cm的帶芽塊莖，75%酒精浸泡15s，無菌水衝洗I次，再用0.2%的升萊進行15 20min的消毒,無菌水衝洗6 8次,無菌吸水紙吸乾水分。B芽誘導培養:將消毒好的彩色馬蹄蓮種球切成直徑約Icm的帶芽小塊，接種至下列培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，生長激素0.1 0.2mg/L,細胞分裂素0.4
0.5mg/L，pH5.8 ;在培養溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h下進行光照培養20 30天至分化出芽。C 60Co Y射線輻射處理:將分化出芽的組培苗分切繼代後，連瓶於6tlCo Y射線下進行40Gy，0.5h輻射照射，然後接種到以下培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L，細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培養溫度25±1°C，光照強度為1000 30001X，光照時間為12 16h，進行光照培養25 30天。D叢生芽的培養:將生長至6 8cm左右的叢生芽分切，在以下培養基中進行繼代培養:MS基本培養基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L,細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培養溫度25土 1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h，進行光照
培養20 30天。
E生根培養:選取健壯的試管苗，經過修剪後，接種到如下培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，植物生長激素1.0 2.0mg/L，細胞分裂素0.15 0.2mg/L，pH5.8 ;培養溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為10 16h，進行光照培養20 30天至成苗。F煉苗移栽:將組培瓶從培養室取出，在緩衝間將瓶蓋打開，進行有菌條件馴化3 5d ;後用鑷子將組培苗從瓶中取出，用500 800倍多菌靈浸泡20m左右，洗淨後移栽到基質(泥炭土:珍珠巖:沙=2: 2:1)中進行栽培。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術方案包括:步驟A中的消毒試劑和時間、步驟B中的培養基和培養條件、步驟C中的輻射條件以及步驟B、C、D、E中彩色馬蹄蓮快速繁殖所述的培養基中涉及的植物生長激素和細胞分裂素，包括6-卞基腺嘌呤出-BA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)其中的一種或幾種。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術方案包括:步驟A中的種球消毒用2g/L多菌靈水溶液浸泡15min後，淺埋於經高壓滅菌處理的溼潤的細沙基質中，在光照30001x、12h/d、(25± I) °C的條件下進行預培養，令種球萌發，然後採用0.1%的安利洗滌液在搖床上震蕩洗滌20min、2g/L多菌靈溶液浸泡Ih和0.2%升汞滅菌10 20min。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術方案包括:步驟B中所涉及到的植物生長激素包括萘乙酸(NAA)0.1 0.2mg/L,吲哚丁酸(IBA)0.1 0.2mg/L，6_卞基腺嘌呤(6-BA) 0.4 0.5mg/L。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術方案包括:步驟C中所涉及到的6°Co y射線下進行40Gy，0.5h輻射照射。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術方案包括:步驟D中所涉及到的植物生長激素包括萘乙酸(NAA) 1.0 2.0mg/L,吲哚丁酸(IBA) 1.0 2.0mg/L, 6-卞基腺嘌呤(6-BA) 0.15 0 .2mg/L。所述的提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率方法的延伸技術方案包括:步驟F中所涉及到的進行有菌條件馴化3 5d ;用500 800倍多菌靈浸泡20min左右；基質配比(泥炭土:珍珠巖:沙=2:2:1)。採用輻射誘變的方法提高彩色馬蹄蓮叢生芽的增殖率，較之傳統組培的叢生芽誘導率(每籽球5 6個叢生芽，經輻射誘變後籽球叢生芽達到10 14個左右)提高了將近1.5倍。組培苗移栽後的觀測結果表明，40Gy 0.5h60Co y射線輻射幾乎沒有導致彩色馬蹄蓮外部形態形狀產生變異，並一定程度上提高了其對高溫高溼的抗性，這一點對於易感染軟腐病的長江中下遊地區來說，非常重要；而且此方法周期短，效率高。這種方法為提高植物組培繁殖係數提供了全新的思路。


圖1是取材用的健康彩色馬蹄蓮種球圖；圖2是彩色馬蹄蓮不定芽圖；圖3是輻射誘變與正常對比圖(左邊為正常，右邊為輻射誘變)；圖4是輻射誘變後彩色馬蹄蓮的生根情況圖；圖5是完整的植株圖；圖6是經煉苗馴化的移栽組培苗圖
具體實施方式
下面結合提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率的實例說明本發明的具體實施方式
。實施例1彩色馬蹄蓮初代培養及叢生芽誘導1、選取直徑約2cm的健康的彩色馬蹄蓮小種球，用2g/L多菌靈水溶液浸泡15min後，淺埋於經高壓滅菌處理的溼潤的細沙基質中，在光照30001x、12h/d、(25±1)°C的條件下進行預培養，令種球萌發；7 IOd後，選取芽長約Icm的種球，經表面消毒後接種。具體消毒方法為:用軟毛刷將塊莖刷洗乾淨，避免損傷頂芽，削去塊莖表皮，在安利洗滌劑溶液中振蕩20min，再用2g/L多菌靈溶液浸泡lh，自來水衝洗40min，轉入超淨臺，切除塊莖表層，保留直徑約1.5cm的帶芽塊莖，75%酒精浸泡15s，無菌水衝洗I次，而後以0.2%的升汞進行15 20min的消毒。處理完畢後，無菌水衝洗6 8次，無菌吸水紙吸乾水分。2、將消毒好的彩色馬蹄蓮種球切成直徑約Icm的帶芽小塊，接種到無激素MS培養基(含30g/L蔗糖，6.0g/L瓊脂，pH值為5.8)上，每瓶接I個芽塊。在培養溫度為25± 1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h，進行光照培養15 20天，至長出叢生芽。3、將培養20天左右叢生芽，接種至下列培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L，細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;在培養溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h下進行光照培養20 30天至分化出芽。實施例2叢生芽的輻射誘變及壯苗生根1、將分化出芽的組培苗分切繼代後，連瓶於6tlCo Y射線下進行40Gy，0.5h輻射照射，2、將輻射誘變後的彩色馬蹄蓮接種到以下培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L，細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培養溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照 時間為12 16h，進行光照培養25 30天。3、選取健壯的試管苗，經過修剪後，接種到如下培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，植物生長激素1.0 2.0mg/L,細胞分裂素0.15 0.2mg/L, pH5.8 ;培養溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為10 16h，進行光照培養20 30天至生根成苗。實施例3煉苗移栽1、將組培瓶從培養室取出，在緩衝間將瓶蓋打開，進行有菌條件馴化3 5d ;2、用鑷子將組培苗從瓶中取出，用500 800倍多菌靈浸泡20m左右，洗淨後移栽到基質(泥炭土:珍珠巖:沙=2: 2:1)中進行栽培。以上6tlCo Y射線輻射誘變提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率的實例見附圖。
權利要求
1.一種提高彩色馬蹄蓮組織培養叢生芽增殖率的方法，其特徵在於: A外植體消毒:選取直徑約2cm的健康的彩色馬蹄蓮小種球，用2g/L多菌靈水溶液浸泡15min後，淺埋於經高壓滅菌處理的溼潤的細沙基質中，在光照30001X、12h/d、(25 ± I) °C的條件下進行預培養，令種球萌發；7 IOd後，選取芽長約Icm的種球，經表面消毒後接種。具體消毒方法為:用軟毛刷將塊莖刷洗乾淨，避免損傷頂芽，削去塊莖表皮，在安利洗滌劑溶液中振蕩20min，再用2g/L多菌靈溶液浸泡lh，自來水衝洗40min，轉入超淨臺，切除塊莖表層，保留直徑約1.5cm的帶芽塊莖，75 %酒精浸泡15s，無菌水衝洗I次，而後以0.2%的升汞消毒15 20min。處理完畢後，無菌水衝洗6 8次，無菌吸水紙吸乾水分； B芽誘導培養:將消毒好的彩色馬蹄蓮種球切成直徑約Icm的帶芽小塊，接種至下列培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，生長激素0.1 0.2mg/L,細胞分裂素0.4 0.5mg/L,pH5.8 ;在培養溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為12 16h下進行光照培養20 30天至分化出芽； C 6qCoy射線輻射處理:將繼代生長20d的叢生芽(連瓶)於6ciCoy射線下進行40Gy，0.5h輻射照射，生長恢復IOd後接種到以下培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，植物生長激素0.1 0.2mg/L，細胞分裂素0.4 0.5mg/L，pH5.8 ;培養溫度25±1°C，光照強度為2000 30001x，光照時間為12 16h，進行光照培養25 30天。30d後繼續繼代培養，使叢生芽增殖； D生根培養:選取健壯的試管苗，經過修剪後，接種到如下培養基中:MS基本培養基，蔗糖30g/L，植物生長激素1.0 2.0mg/L，細胞分裂素0.15 0.2mg/L, pH5.8 ;培養溫度25±1°C，光照強度為1000 30001x，光照時間為10 16h，進行光照培養20 30天至成苗； E煉苗移栽:將組培瓶從培養室取出，在緩衝間將瓶蓋打開，進行有菌條件馴化3 5d ；後用鑷子將組培苗從瓶中取出，用500 800倍多菌靈浸泡20min左右，洗淨後移栽到基質(泥炭土:珍珠巖:沙=2: 2:1)中進行栽培。
2.根據權利要求1所述的提高彩色馬蹄蓮增殖率的方法，其特徵在於步驟C中所涉及到的6°Co y射線下進行40Gy，0.5h輻射照射。
全文摘要
本發明提供一種提高彩色馬蹄蓮組織培養叢生芽增殖率的方法，對彩色馬蹄蓮的規模化生產和繁殖以滿足市場需要具有一定的技術指導作用，提高彩色馬蹄蓮叢生芽增殖率的培養步驟包括A.外植體消毒；B叢生芽誘導；C.60Co γ射線輻射處理；D.叢生芽培養；E.生根培養；F.煉苗移栽。採用植物組織培養的方法結合輻射處理繁殖彩色馬蹄蓮，不僅不受外界條件的影響，四季皆可進行，降低生產成本，而且可以在短時間內形成大量的優良試管苗，進行規模化、工廠化生產，為彩色馬蹄蓮產業提供大量的植物材料。
文檔編號A01G31/00GK103229717SQ20121052807
公開日2013年8月7日 申請日期2012年12月11日 優先權日2012年12月11日
發明者鄭玉紅, 陸波, 束曉春, 王 忠, 彭峰 申請人:江蘇省中國科學院植物研究所