一種替曲膦季鏻鹽及其製法和二步法替由膦藥盒及其應用的製作方法

2023-09-13 13:55:10 2

專利名稱：一種替曲膦季鏻鹽及其製法和二步法替由膦藥盒及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種99mTc標記的放射性藥物，特別是雙齒有機膦化合物即替曲膦季鏻鹽及其製備方法；本發明還涉及將替曲膦原料藥製成替曲膦季鏻鹽的二步法替曲膦藥盒及其製備方法；另外，本發明進一步涉及用所述的二步法替曲膦藥盒所製備的放射性鎝-99m替曲膦注射液及其製備方法；同時，本發明還涉及將所述的替曲膦藥盒在製備放射性鎝-99m替曲膦注射液而用於在人或動物的器官或組織中作為顯像劑的用途，特別是在心肌或腫瘤中作為顯像劑的用途。
目前、心血管疾病是嚴重危害我國公民生命健康的主要疾病之一。心血管疾病的早期診斷對疾病的預防和治療有著重要的意義。核心臟病學利用放射性核素進行心肌灌注顯像可實現對心血管疾病的早期診斷，目前該項診斷已經成為心臟病學診斷檢查的重要內容。
80年代以來，由於Mo-Tc發生器的使用和無菌、無熱原凍幹藥盒的出現，使得99mTc標記的心肌灌注顯像劑得以迅速發展。其中，99mTc-MIBI，結構見式a(Wackers FJT，Berman DS，Maddahi J et a1.Technetium-99mhexakis-2-methoxy-isobutyl-isonitrilehuman biodistribution，dosimetry，safety and preliminary comparison to thallium-201 formyocardial perfusion imaging.J NuclMed，1989，30301)99mTc-teboroxime，結構見式b(Nunn AD等人，J Nucl Med 1986，27893)和99mTc-tetrofosmin(結構見式c)三種心肌顯像劑的發展較為成熟，已獲美國FDA批准並廣泛應用於臨床。 幾種99mTc標記的心肌灌注顯像劑在以上三種99mTc標記的心肌灌注顯像劑中，99mTc-tetrofosmin(tetrofosmin＝替曲膦)是英國Amersham公司90年代初推出的一種最新型的有機膦類心肌灌注顯像劑。其原料藥替曲膦(tetrofosmin、P53)為Amersham公司1991年由James D.Kelly等人首次研製合成的(J DKelly等人U.S.P.5045302)，其標記化合物[TcO2(tetrofosmin)2]+顯示出良好的心肌攝取率和血、肝清除性能，被認為是一種較為理想的心肌灌注顯像劑。
隨後，J.D.Kelly等人對該標記化合物進行了進一步研究，除通過液體配方製備外，Kelly等人還研製了該化合物的無菌凍幹品製備藥盒(MyoviewTM)，並對該標記化合物進行了結構確定和生物性能的進一步研究。(J.D.Kelly等人，Technetium-99m-tetrofosmin as NewRadiopharmaceutical for Myocardial Perfusion Imaging J Nucl Med1993，34222-227).無菌無熱源凍幹品藥盒MyoviewTM於1996年2月獲美國FDA批准，並上市出售(MyoviewTMkit for the preperation of Tc-99m-tetrofosmin)，該藥盒可在室溫下直接標記得到放化純大於90％的99mTc-tetrofosmin注射液，使之在國外迅速廣泛應用於臨床。
99mTc-tetrofosmin除了用於心肌灌注顯像劑外，大量臨床研究表明它也可用於乳腺癌、甲狀旁腺癌等惡性腫瘤的診斷及腫瘤多藥耐藥性(MDR)的研究。([1]Jain D，et al.，J Nucl Med 1993，341354；[2]TarkBasoglu，et al.，Eur J Nucl Med 1995，22687；[3]Talahashi Norio，Reinhardt，Christopher P，et al.，Circulation 1996，942605；[4]Tjeld Jan G，Erichsen Kunt，et al.，J Nucl Med 1997，38831；[5]Batista J F，Solano M E，et al.，Nucl Med Commun 1997，18338)在國內，自有文獻報導以來，北京、上海等地相繼開始了替曲膦原料藥(tetrofosmin)的合成、凍幹品藥盒的研製及標記化合物99mTc-tetrofosmin的製備及其生物特性的研究。如北京江中藥物研究所(張國豐等，Tetrofosmin的合成及藥盒的研製，第六屆全國放射性藥物與標記化合物學術會議摘要彙編，P17，1996)、上海醫科大學藥學院(朱根根等，新型心肌灌注顯像劑99mTc-P53的研究，第六屆全國放射性藥物與標記化合物學術會議摘要彙編，P24，1996)、中國協和醫科大學北京協和醫院核醫學科(陳方，王世真，心肌灌注顯像劑99mTc-tetrofosmin製備和實驗研究，中華核醫學17(1)13，1997；陳方、周前等，心肌灌注顯像劑99mTc-tetrofosmin的臨床前研究，中華核醫學17(1)16，1997)、北京師宏藥物研製中心等，其中北京江中藥物研究所和北京師1997)、北京師宏藥物研製中心等，其中北京江中藥物研究所和北京師宏藥物研製中心已進行了該藥的新藥臨床研究申報。
由於原料藥替曲膦本身是一個三價的有機膦化合物，該類物質在空氣存在下極易氧化，因而造成原料藥替曲膦和注射用亞錫替曲膦藥盒在保存和運輸過程(尤其是夏季高溫高溼條件下)出現質量問題，而藥盒的質量問題又會直接影響到鎝-99m替曲膦注射液的製備和心肌顯像的圖象效果。為了解決上述問題，延長原料藥和藥盒的保質時間，為臨床提供質量可靠的鎝-99m替曲膦注射液，我們將替曲膦原料藥製成了鏻鹽，進一步研製了二步法替曲膦藥盒並得到了生物性能改進的鎝-99m替曲膦注射液。
因此，本發明的目的在於提供一種新的替曲膦季鏻鹽及其製備方法；本發明的另一目的在於提供一種將替曲膦原藥製成替曲膦季鏻鹽的替曲膦藥盒及其製備方法；本發明的再一目的是將所述的替曲膦藥盒用於製備放射性鎝-99m替曲膦注射液和其製備方法；本發明的進一步的目的在於將所述的替曲膦藥盒在製備放射性鎝-99m替曲膦注射液而用於在人或動物的器官或組織中作為顯像劑的用途，特別是在心肌或腫瘤中作為顯像劑的用途。
替曲膦為已知化合物，其化學式為(C2H5OC2H4)2PC2H4P(C2H4OC2H5)2，它為雙齒有機膦化合物，由其為原藥而製得的下式(I)所示的替曲膦季鏻鹽為新穎的系列化合物[(C2H5OC2H4)2P+(H)C2H4P+(H)(C2H4OC2H5)2]·2X-……(I)其中X為滷素，如Cl或Br，或下式(II)的磺酸根離子
R2為-H、-OH或-COOH。
這種鏻鹽降低了P(III)與氧反應的活性，可以長期存放，而且在中性或鹼性下所述的鏻鹽可很容易地轉化為原游離態的替曲膦。
本發明涉及一種替曲膦季鏻鹽，其特徵在於，它具有下述式(I)，[(C2H5OC2H4)2P+(H)C2H4P+(H)(C2H4OC2H5)2]·2X-……(I)式中X可為滷素，如氯或溴；或下式(II)的磺酸根， 式中R1為-H或-COOH，優選為-COOH；R2為-H、-OH或-COOH，優選為-OH。
本發明還涉及具有下述式(I)的替曲膦季鏻鹽的製備方法，[(C2H5OC2H4)2P+(H)C2H4P+(H)(C2H4OC2H5)2]·2X-……(I)式中X為滷素，或下式(II)的磺酸根， 式中R1為-H、-COOH，R2為-H、-OH或-COOH，該方法包括將替曲膦(C2H5OC2H4)2PC2H4P(C2H4OC2H5)2與式HX反應物式中X的定義與式(I)的定義相同，在惰性氣體保護下，在非極性介質中於-10℃-25℃下形成易溶於水的式(I)的替曲膦季鏻鹽。
在上述的製備方法中，所述的惰性氣體可為氮氣；所述的非極性介質可為苯、甲苯、乙醚或石油醚等。
用上述的替曲膦季鏻鹽製備的二步法替曲膦藥盒A和B的組成目前尚不能準確地表達，所以只能用其製備方法來表徵。
另外，本發明涉及一種將替曲膦原料藥製成替曲膦季鏻鹽的替曲膦藥盒，它是按下述的二步法分別製備A瓶和B瓶而得到的A瓶的製備將還原劑∶中間體配體∶輔料∶賦形劑∶充氮二次水＝(0.01-0.1)∶(1-5)∶(0.2-2.5)∶(1-10)∶(0.6-1)的重量比混合均勻，使前述四種物資充分溶於所述量的充氮二次水中，用pH調節劑調節pH至5.0-8.5，經無菌過濾後分裝於容器中，再經冷凍乾燥，充氮氣密封得凍幹的藥盒A瓶；其中所述的還原劑為Sn(II)滷素鹽；中間體配體為D-葡萄糖酸或其鹼金屬或鹼土金屬鹽；所述的輔料為二水合磺基水楊酸、二水合磺基水楊酸鈉或磺基水楊酸鈉，檸檬酸或其鈉鹽，酒石酸或其鉀或鈉鹽；所述的賦形劑為氯化鈉或甘露醇；所述的pH調節劑為氫氧化鈉、碳酸氫鈉或磷酸氫二鈉；B瓶的製備將所述的作為主原料藥的替曲膦季鏻鹽∶輔料∶溶劑＝(1-5)∶(1-10)∶(0.2-1.0)的重量比，使所述的替曲膦季鏻鹽和輔料溶於所述溶劑中，經充分溶解後分裝於容器中，製得藥盒B瓶；其中所述的輔料為吐溫類乳化劑或環糊精；所述的溶劑為水、乙醇水溶液或無水乙醇。
對於上述的替曲膦藥盒，在A瓶製備中，所述的Sn(II)滷素鹽為SnCL2·2H2O或SnF2；在B瓶製備中，所述的吐溫類乳化劑為吐溫20、吐溫40或吐溫80，所述的環糊精為Υ-環糊精或β-環糊精。
同時，本發明還涉及上述的替曲膦藥盒的製備方法，它是按上述的二步法分別製備A瓶和B瓶而製得的。
此外，本發明涉及一種用所述的二步法替曲膦藥盒所製備的放射性鎝-99m替曲膦注射液，它是按下述的步驟製得的1)A瓶的製備將還原劑∶中間體配體∶輔料∶賦形劑∶充氮二次水＝(0.01-0.1)∶(1-5)∶(0.2-2.5)∶(1-10)∶(0.6-1)的重量比混合均勻，使前述四種物質充分溶於所述量的充氮二次水中，用PH調節劑調節PH至5.0-8.5，經無菌過濾後分裝於容器中，再經冷凍乾燥，充氮氣密封得凍幹的藥盒A瓶；其中所述的還原劑為Sn(II)滷素鹽；中間體配體為D-葡萄糖酸或其鹼金屬或鹼土金屬鹽；所述的輔料為二水合磺基水楊酸、二水合磺基水楊酸鈉或磺基水楊酸二鈉，檸檬酸或其鈉鹽，酒石酸或其鉀或鈉鹽；所述的賦形劑為氯化鈉或甘露醇；所述的PH調節劑為氫氧化鈉、碳酸氫鈉或磷酸氫二鈉；2)B瓶的製備將所述的作為主原料藥的替曲膦季鏻鹽∶輔料∶溶劑＝(1-5)∶(1-10)∶(0.2-1.0)的重量比，使所述的替曲膦季鏻鹽和輔料溶於所述溶劑中，經充分溶解後分裝於容器中，製得藥盒B瓶；其中所述的輔料為吐溫類乳化劑或環糊精；所述的溶劑為水、乙醇水溶液或無水乙醇；3)在無菌操作下，依高鎝酸根99mTcO4-(從醫用99Mo/99mTc發生器獲得)的放射性活度，取適量注入上述製備的藥盒A瓶中，搖勻，再將上述製備的藥盒B瓶中的溶液取出注入上述A瓶中，充分搖勻後，室溫放置15-20分鐘，即得放射性鎝-99m替曲膦注射液。
對於上述的替曲膦注射液，其在A瓶製備中，所述的Sn(II)滷素鹽為Sncl2·2H2O或SnF2；在B瓶製備中，所述的吐溫類乳化劑為吐溫20、吐溫40或溫80，所述的環糊精為Υ-環糊精或β-環糊精。
同時，本發明還涉及上述的放射性鎝-99m替曲膦注射液的製備方法，其是按上述的步驟製得的。本發明進一步涉及將所述的替曲膦藥盒在製備放射性鎝-99m替曲膦注射液而用於在人或動物的器官或組織中作為顯像劑的用途，特別是用於在心肌或腫瘤中作為顯像劑的用途。
通過下述的製備例和實施例可使本發明得到更清楚地說明一、製備例替曲膦的合成替曲膦[(C2H5OC2H4)2PC2H4P(C2H4OC2H5)2]的合成可參考kelly等人文獻[Kelly J D，K.W.Forster，Ina A.Latham.U.S.P.5045302，1991]。以三氯化磷和絕對乙醇為原料，通過酯化、滷代、還原和游離基加成反應製得，其反應路線如下 所得到的替曲膦為無色或淺黃色粘稠液體，在空氣中非常容易氧化。由於替曲膦為三價有機膦化合物，因而在惰性氣體保護下，它可與某些有機或無機酸(如磺基水楊酸、HCl等)在非極性介質中形成易溶於水的鏻鹽。這種鏻鹽降低了P(III)與氧反應的活性，可以長期存放，而且在中性或鹼性條件下鏻鹽可很容易地轉化為原游離態的替曲膦。二、實施例實施例1替曲膦鹽酸鏻鹽[(C2H5OC2H4)2P+(H)C2H4P+(H)(C2H4OC2H5)2]·2Cl-的製備將3g替曲膦在N2保護下溶於10ml無水乙醚中，然後在冰浴冷卻下通入乾燥的HCl氣體至溶液分層，大量油狀物析出完全後將油狀物分離並真空乾燥，得到無色(或淺黃色)粘稠液體約3.2g，產率約為90％。1H NMR(CDCl3，TMS)δ1.10-1.17(12H、OCH2CH3)；2.93-2.96(8H、PCH2CH2OEt)；3.12-3.20(4H、PC2H4P)；3.45-3.56(8H、OCH2CH3)；3.79-3.90(8H、PCH2CH2OEt)ppm。31P NMR(CDCl3，H3PO4)δ14.80ppm。IRν(-C-O-C)1157-1017cm-1，ν(P-H)2240cm-1(液體薄膜)實施例2替曲膦磺基水楊酸鹽的製備 (R1＝COOH，R2＝OH)將溶有3g替曲膦的無水乙醚溶液10ml在N2保護加入配有電磁攪拌和等壓滴液漏鬥的50ml圓底燒瓶中，然後在冰浴冷卻、攪拌下滴入溶有3.4g磺酸水楊酸的乙醚溶液15ml，將析出物分離並真空乾燥，得到無色(或淺黃色)固體約4.7g，產率約為73％。31P NMR(CDCl3，H3PO4)δ12.75ppm。IRν(-C-O-C)1157-1017cm-1，ν(P-H)2310cm-1(液體薄膜)。
實施例3二步法替曲膦藥盒的製備二步法藥盒分為A瓶和B瓶兩部分。其中A瓶為無菌無熱原凍幹藥盒，其主要含有還原劑、中間體配體、賦形劑及其它緩衝pH值的輔料，A瓶的作用在於將99mTcO4-注射液還原為99mTc(V)價，使之形成可與替曲膦配體進行配體交換的99mTc(V)價中間體配合物。
1)、A瓶D-葡萄糖酸鈉凍於藥盒的製備(以1000支為例)取D-葡萄糖酸鈉1000mg、SnCl·2H2O 30mg、二水合磺基水楊酸鈉400mg和甘露醇10000mg溶於充氮二次水中，並用該充氮二次水將該混合溶液定容至1000ml，用NaHCO3調節PH值為7.5-8.5。無菌過濾該混合溶液，取1000支每支10ml的西林瓶，每瓶中分裝1.0ml，然後經冷凍乾燥後充氮密封得A瓶。
2)、B瓶替曲膦安瓶的製備(以1000支為例)二步法藥盒B瓶為安瓿瓶裝的無色無菌和無熱原溶液，其主要提供製備鎝-99m替曲膦注射液的主原料藥。
取實施1製備的替曲膦鹽酸鏻鹽1000mg和吐溫80 5000mg溶於無水乙醇200ml中，經充分溶解後，取1000支每支1mg的安瓿瓶，每瓶中分裝0.2ml該溶液，封口得B瓶。
實施例4放射性鎝-99m替曲膦注射液的製備在無菌條件下，將放射性鎝-99m注射液1-6毫升用注射器注入實施例3中製備的二步法藥盒A瓶(一支D-葡萄糖酸鈉凍幹藥盒西林瓶)中，搖勻，另取一支注射器，將實施例3中製備的二步法藥盒B瓶(一支替曲膦安瓿)中的溶液取出注入所述的A瓶中，充分搖勻後，室溫放置15-20分鐘，即得放射性鎝-99m替曲膦注射液。
下面對二步法替曲膦藥盒的性能測定描述如下1、藥盒的標記方法及其放射化學純度的測定1)標記方法在無菌操作下，依高鎝[99m-Tc]酸鈉注射液鎝放射性活度，取1-6毫升注入上述二步法藥盒A瓶(D-葡萄糖酸鈉凍幹藥盒)中，搖勻，另取一隻注射器將B瓶(替曲膦安瓿)中的溶液取出注入A瓶，充分搖勻後，室溫放置15-20分鐘，即得鎝-99m-替曲膦注射液。
2)中間體99mTc-葡萄糖酸(gluconate)放射化學純度的測定在無菌操作下，依高鎝[99m-Tc]酸鈉注射液的放射性活度，取1-6毫升注入二步法藥盒A瓶中，充分搖勻後，室溫放置5-10分鐘。用生理鹽水/聚醯胺薄層層析鑑定，觀察該層析體系TcO4-和TcO2.xH2O的Rf值，判斷99mTc-葡萄糖酸的生成，計算其標記物的放射化學純度。
3)終產物99mTc-替曲膦(tetrofosmin)放射化學純度的測定用乙腈/聚醯胺層析體系鑑定，觀察該層析體系99mTc-葡萄糖酸、TcO4-、TcO2·xH2O和99mTc-tetrofosmin的RF值判斷99mTc-tetrofosmin的生成，計算其標記物的放射化學純度。
4)二步法藥盒(A、B)的標記及放射化學純度的測定取實施例3所製得的D-葡萄糖酸鈉凍幹藥盒(A瓶)和替曲膦鹽酸鹽安瓿瓶(B瓶)各1支，無菌操作下，將高鎝[99m-Tc]酸鈉注射液2ml(約555MBq)注入D-葡萄糖酸鈉凍幹藥盒中，搖勻後室溫放置5分鐘。用生理鹽水/聚醯胺薄層層析鑑定(層析結果如表3所示)，計算得到中間產物99mTc-葡萄糖酸的放射化學純度均大於95％。
另取一隻注射器將B瓶(替曲膦安瓿)中的溶液取出注入標記好的D-葡萄糖酸鈉藥盒中，充分搖勻後，室溫放置15-20分鐘，即得鎝-99m-替曲膦注射液。用乙腈/聚醯胺層析體系鑑定，(層析結果如表3所示)計算得到99mTc-替曲膦的放射化學純度均大於90％。
表3層析鑑定結果層析體系99mTcO4-99mTcO2·xH2O9mTc-替曲膦99mTc-葡萄糖酸生理鹽水/聚醯胺 0 0 0-0.2 0.7-1.0乙腈/聚醯胺 0.3-0.5 0 0.8-1.0 0-0.12、二步法藥盒的穩定性研究1)A瓶藥盒的穩定性考察將A瓶藥盒樣品分別置於冰箱0℃～4℃、室溫下和38℃～40℃密封水浴中貯存5個月、30天和10天，定期取出進行性狀觀察和標記放射化學純度的檢測，考察A瓶藥盒在上述三種條件下的穩定性。
取實施例3所制D-葡萄糖酸鈉凍幹藥盒共30支，分三組每組10支分別至於冰箱0℃～4℃、室溫下和38℃～40℃密封水浴中貯存5個月、30天和10天，定期取出進行性狀觀察和標記放射化學純度的檢測，考察D-葡萄糖酸鈉藥盒在上述三種條件下的穩定性。穩定性考察結果如下表4、5、6所示表4藥盒於冰箱條件(0℃～4℃)下貯存3個月以上穩定性考察放置時間(天) 放射化學純度(％)性狀199.5 白色粉末20 98.8 無明顯改變60 97.4 無明顯改變90 96.9 無明顯改變120 96.7 無明顯改變160 96.9 無明顯改變由以上數據可見，樣品放置五個月，其性狀無明顯變化，標記放化純度仍大於95％，符合要求，說明二步法替曲膦A瓶藥盒在該條件下是比較穩定的。
表5藥盒於室溫(23℃-25℃)放置30天穩定性考察放置時間(天) 放射化學純度(％)性狀199.5 白色粉末798.7 無明顯改變15 98.1 無明顯改變28 97.4 無明顯改變35 97.1 無明顯改變從以上數據可見，藥盒在室溫下放置30天性狀和放射化學純度均無明顯改變，說明藥盒在該條件下是比較穩定的。
表6藥盒於38℃～40℃密封水浴放置10天穩定性考察放置時間(天) 放射化學純度(％) 性狀1 99.5 白色粉末2 98.7 無明顯改變3 98.2 無明顯改變5 97.4 無明顯改變7 97.9 無明顯改變10 97.1 無明顯改變從以上數據可見，藥盒在38℃～40℃密封水浴放置10天，從性狀觀察無明顯變化，放射化學純度仍均大於95％，說明藥盒在該條件下的穩定性可以滿足藥盒在夏季高熱、潮溼的運輸條件和時間要求。
2)B瓶藥盒的穩定性考察將B瓶藥盒樣品分別置於冰箱0℃～4℃、室溫下和38℃～40℃密封水浴中貯存3個月、15天和10天，定期取出進行性狀觀察和標記放射化學純度的檢測，考察B瓶藥盒在上述三種條件下的穩定性。
取實施例1所製得的替曲膦鹽酸鹽安瓿共30支，分為3組每組各10支分別置於冰箱0℃～4℃、室溫下和38℃～40℃密封水浴中貯存3個月、15天和10天，定期取出進行性狀觀察和標記放射化學純度的檢測，考察替曲膦鹽酸鏻鹽安瓿在上述三種條件下的穩定性。考察結果如下表7、8、9所示。
表7替曲膦鹽酸鏻鹽安瓿於冰箱條件(0℃～4℃)下貯存3個月以上穩定性考察放置時間(天) 放射化學純(％)性狀1 96.5 無色澄明溶液7 97.0 無明顯改變15 96.0 無明顯改變30 96.5 無明顯改變60 95.8 無明顯改變90 95.4 無明顯改變由以上數據可見，樣品放置3個月，其性狀無明顯變化，標記放化純仍大於90％，符合要求，說明替曲膦鹽酸鏻鹽安瓿在該條件下是比較穩定的。
表8替曲膦鹽酸鏻鹽安瓿於室溫(23℃～25℃)放置10天穩定性考察放置時間(天) 放射化學純度(％)性狀1 96.5 無色澄明溶液3 96.9 無明顯改變5 96.5 無明顯改變7 95.8 無明顯改變10 96.0 無明顯改變從以上數據可見，替曲膦鹽酸鏻鹽安瓿在室溫下放置10天性狀和放射化學純度均無明顯改變，說明藥盒在該條件下是比較穩定的。
表9替曲膦鹽酸鏻鹽安瓿瓶藥盒38℃～40℃密封水浴放置10天穩定性考察放置時間(天) 放射化學純(％) 性狀1 96.0 無色澄明溶液3 95.8 無色澄明溶液5 95.4 無明顯改變7 95.1 無明顯改變10 95.1 無明顯改變從以上數據可見，替曲膦鹽酸鏻鹽安瓿在38℃～40℃密封水浴放置10天，從性狀觀察無明顯變化，放射化學純度仍均大於90％，說明藥盒在該條件下的穩定性可以滿足藥盒在夏季高熱、潮溼的運輸條件和時間要求。
3.注射液的急性毒性試驗參照藥典有關實驗方法，取由二步法藥盒製得的鎝-99m替曲膦注射液0.5ml，4-5秒勻速注射於體重18-20g小鼠的尾靜脈，共5隻，按要求觀察48小時是否異常死亡，72小時後解剖觀察心、肝、脾、肺、腎等各臟器是否異常。
1)注射液的小鼠急性毒性試驗取實施例4所製備得到的鎝-99m替曲膦注射液(370MBq/3ml)0.5ml，4-5秒勻速注射於體重18-20g小鼠的尾靜脈，共5隻，按要求觀察48小時小鼠全部存活，72小時後解剖觀察心、肝、脾、肺、腎等各臟器未見異常。
實驗結果表明昆明小鼠在本實驗中所用劑量按每公斤體重給藥量換算大於人體用量的500倍，5隻小鼠實驗後全部存活，未見任何不良反應，解剖檢查未見各臟器異常表現。實驗結果說明注射液毒性較低，經無菌無熱原檢查合格後可以進行臨床試用研究。
4、注射液的生物性能取體重為18-20g的昆明小白鼠，尾靜脈注射約0.74MBq/0.1ml由二步法藥盒製得的放射性鎝-99m-替曲膦注射液，注射後2～60分鐘將小鼠斷頸處死，取出心、肝、肺、肌肉和血，分別稱重，並在井型r探測器內測其放射性計數，計算每克組織的攝取劑量。
1)鎝99m-替曲膦注射液小鼠體內分布實驗取體重約為15～17g的昆明小白鼠，尾靜脈注射0.74MBq/0.1mL的實施例4製備得到的放射性鎝-99m-替曲膦注射液，注射後取時間2分鐘、15分鐘、30分鐘和60分鐘將小鼠斷頸處死，取出心、肝、肺、腎等主要臟器及血和肌肉，分別稱重，並在井型γ探測器內測其放射性計數，計算每克組織的攝取劑量(％ID/g)，百分之一注射劑量(1％ID)的計算是取0.1ml(注射量)配合物溶液，稀釋至100倍後再分別取0.1ml於三支小試管中，在測量組織放射性計數的同時測量其放射性計數，百分之一劑量為三支小試管中放射性計數的平均值；並以心臟為靶器官，比較其與肺、肝、血和肌肉的％ID/g比值。結果如下表10所示。
表10注射後標記化合物在小鼠體內的生物分布(n＝3)給藥時間 2分 5分15分 30分 60分平均標準 平均標準 平均標準 平均 標準 平均 標準組織值 偏差 值 偏差 值 偏差 值 偏差 值 偏差每克組織的攝取劑量(％ID/g)心 19.21.25 18.50.23 17.71.07 16.0 0.76 13.4 0.44肝 9.780.76 11.50.42 9.470.10 7.67 0.25 5.15 0.41肺 9.770.78 8.080.34 4.590.86 3.29 0.11 1.73 0.06腎 44.03.17 32.01.51 28.31.30 20.6 4.52 12.8 0.96肌肉 3.460.72 3.520.72 3.440.26 2.56 0.02 3.21 0.17血 4.210.47 2.570.41 1.380.03 1.04 0.22 0.72 0.03心肌與其它臟器的每克組織計數比值心/肝2.000.17 1.440.18 1.960.52 2.09 0.34 2.75 0.09心/肺1.970.10 2.540.07 3.890.11 4.87 0.48 6.93 0.21心/血4.621.00 7.070.51 12.61.19 17.4 1.22 18.7 1.01由小鼠體內生物分布數據可見，其在心肌中的攝取較高，且滯留較好，有較高的心/血、心/肺比值，符合心肌顯像劑的基本要求。肝的初始攝取底，且清除快，心/肝比較高，有利於得到清晰的顯像圖象。
為了便於進一步說明二步法替曲膦藥盒的穩定性，下面通過比較例來說明。
比較例1二步法藥盒與原一步法配方藥盒的穩定性比較表11為按實施例3製備得到的二步法藥盒(A，B瓶)與參照Amersham公司配方研製的一步法藥盒在38℃～40℃條件下的穩定性比較，從表中穩定性考察結果比較可以看出，二步法藥盒由於將易氧化的主原料藥替曲膦與藥盒中的其它組分分開，使其保存於一個相對有利於其穩定性的介質環境中，從而提高了整個藥盒(A，B瓶)的穩定性。藥盒質量穩定性的提高是二步法藥盒優於原分分開，使其保存於一個相對有利於其穩定性的介質環境中，從而提高了整個藥盒(A，B瓶)的穩定性。藥盒質量穩定性的提高是二步法藥盒優於原Amersham公司配方一步法藥盒的一個重要方面。表11二步法藥盒與原一步法配方藥盒38℃～40℃條件下的穩定性比較
*一步法藥盒數據取自朱根根，朱衛靖.99mTc-tetrofosmin藥盒穩定性的測定，第七界全國放射性藥物與標記化合物學術會議論文摘要彙編，1998.173p。
由於二步法藥盒中所加入輔劑的作用，進一步改善了99mTc-替曲膦(tetrofosmin)注射液的生物性能。主要表現在肝的初始攝取明顯降低，和早期心/肝比值的顯著提高，這樣更加有利於在臨床上得到清晰、高質量的顯像圖象和實現心肌的提前顯像。
比較例2二步法藥盒製備注射液與原一步法藥盒製備注射液的小鼠體內生物分布比較表12為按實施例4製得的注射液與參照原Amersham公司藥盒配方藥盒製得的注射液小鼠體內生物數據比較。
表12兩種注射液在小鼠體內的生物分布比較(n＝3)給藥時間 5分30分 60分注射液 平均值 標準偏差 平均值 標準偏差 平均值 標準偏差每克組織的攝取劑量(％ID/g)二步法 心 18.5 0.23 16.0 0.76 13.5 0.44製備注 肝 11.5 0.42 7.67 0.25 5.15 0.41射液 心肌與其它臟器的每克組織計數比值心/肝 1.44 0.18 2.09 0.34 2.75 0.09每克組織的攝取劑量(％ID/g)一步法 心 15.1 0.77 13.7 0.30 10.9 0.93製備注 肝 15.0 0.67 10.7 0.66 7.40 0.85射液*心肌與其它臟器的每克組織計數比值心/肝 1.01 0.27 1.28 0.21 1.47 0.08*原一步法配方注射液生物數據取自文獻陸潔，王學斌，呂恭序。一種新的188Re-tetrofosmn配合物的製備及其生物分布的研究。核技術，1999，22695由表12可見，與原一步法藥盒配方製得的99mTc-替曲膦(tetrofosmin)注射液相比，二步法藥盒製得的注射液在小鼠體內的心肌攝取明顯增高，而肝的初始攝取明顯降低，這樣大大提高了心/肝比值，更加有利於得到清晰、高質量的顯像圖象和實現心肌的提前顯像。
本發明所具有的有益效果為1、主原料藥替曲膦(tetrofosmin)經過進一步鏻鹽化，得到在空氣中相對穩定的替曲膦鏻鹽，使之可以較長時間的存放，這樣不但解決了原料藥的貯存，而且還保障了其質量的穩定性。
2、二步法藥盒將相對不太穩定的主原料藥與其它組分分開，使其保存在替曲膦相對穩定的介質環境中，這樣不但保存了一步法替曲膦藥盒在注射液製備方面的方便性以及注射液的質量，而且延長了藥盒的保質期，特別是夏季高溫條件下的運輸和貯存。
權利要求
1.一種替曲膦季鏻鹽，其特徵在於它具有下述式(I)，[(C2H5OC2H4)2P+(H)C2H4P+(H)(C2H4OC2H5)2]·2X-……(I)式中X可為滷素，或下式(II)的磺酸根， 式中R1為-H、-COOH，R2為-H、-OH或-COOH。
2.根據權利要求1所述的替曲膦季鏻鹽，其特徵在於，式(I)中X為氯或溴；式(II)中R1為-COOH，R2為-OH。
3.一種具有下述式(I)的替曲膦季鏻鹽的製備方法，[(C2H5OC2H4)2P+(H)C2H4P+(H)(C2H4OC2H5)2]·2X-……(I)式中X為滷素，或下式(II)的磺酸根， 式中R1為-H、-COOH，R2為-H、-OH或-COOH，該方法包括將替曲膦(C2H5OC2H4)2PC2H4P(C2H4OC2H5)2與式HX反應物式中X的定義與式(I)的定義相同，在惰性氣體保護下，在非極性介質中於-10℃-25℃下形成易溶於水的式(I)的替曲膦季鏻鹽。
4.根據權利要求3所述的替曲膦季鏻鹽的製備方法，其特徵在於，其中所述的惰性氣體為氮體；所述的非極性介質為苯、甲苯、乙醚或石油醚。
5.一種將替曲膦原藥製成替曲膦季鏻鹽的替曲膦藥盒，其特徵在於，它是按下述的二步法分別製備(A)瓶和(B)瓶而得到(A)瓶的製備將還原劑∶中間體配體∶輔料∶賦形劑∶充氮二次水＝(0.01-0.1)∶(1-5)∶(0.2-2.5)∶(1-10)∶(0.6-1)的重量比混合均勻，使前述四種物質充分溶於所述量的充氮二次水中，用PH調節劑調節PH至5.0-8.5，經無菌過濾後分裝於容器中，再經冷凍乾燥，充氮氣密封得凍幹的藥盒(4)瓶；其中所述的還原劑為Sn(II)滷素鹽；中間體配體為D-葡萄糖酸或其鹼金屬或鹼土金屬鹽；所述的輔料為二水合磺基水楊酸、二水合磺基水楊酸鈉或磺基水楊酸二鈉，檸檬酸或其鈉鹽，酒石酸或其鉀或鈉鹽；所述的賦形劑為氯化鈉或甘露醇；所述的PH調節劑為氫氧化鈉、碳酸氫鈉或磷酸氫二鈉；(B)瓶的製備將權利要求1所述的作為主原料藥的替曲膦鏻鹽∶輔料∶溶劑＝(1-5)∶(1-10)∶(0.2-1.0)的重量比，使所述的替曲膦季鏻鹽和輔料溶於所述溶劑中，經充分溶解後分裝於容器中，製得藥盒(B)瓶；其中所術的輔料為吐溫類乳化劑或環糊精；所述的溶劑為水、乙醇水溶液或無水乙醇。
6.根據權利要求5所述的替曲膦藥盒，其特徵在於，在(A)瓶製備中，所述的Sn(II)滷素鹽為SnCL2·2H2O或SnF2；在(B)瓶製備中，所述的吐溫類乳化劑為吐溫20、吐溫40或吐溫80，所述的環糊精為Υ-環糊精或β-環糊精。
7.一种放射性鎝-99m替曲膦注射液，其特徵在於，它是按下述的步驟製得的1)、(A)瓶的製備將還原劑∶中間體配體∶輔料∶賦形劑∶充氮二次水＝(0.01-0.1)∶(1-5)∶(0.2-2.5)∶(1-10)∶(0.6-1)的重量比混合均勻，使前述四種物質充分溶於所述量的充氮二次水中，用PH調節劑調節PH至5.0-8.5，經無菌過濾後分裝於容器中，再經冷凍乾燥，充氮氣密封得凍幹的藥盒(A)瓶；其中所述的還原劑為Sn(II)滷素鹽；中間體配體為D-葡萄糖酸或其鹼金屬或鹼土金屬鹽；所述的輔料為二水合磺基水楊酸、二水合磺基水楊酸鈉或磺基水楊酸二鈉，檸檬酸或其鈉鹽，酒石酸或其鉀或鈉鹽；所述的賦形劑為氯化鈉或甘露醇；所述的PH調節劑為氫氧化鈉、碳酸氫鈉或磷酸氫二鈉；2)、(B)瓶的製備將權利要求1所述的作為主原料藥的替曲膦季鏻鹽∶輔料∶溶劑＝(1-5)∶(1-10)∶(0.2-1.0)的重量比，使所述的替曲膦鏻鹽和輔料溶於所述溶劑中，經充分溶解後分裝於容器中，製得藥盒(B)瓶；其中所述的輔料為吐溫類乳化劑或環糊精；所述的溶劑為水、乙醇水溶液或無水乙醇。3)、在無菌操作下，依高鎝酸根99mTcO4-的放射性活度，取適量注入上述製備的藥盒(A)瓶中，搖勻，再將上述製備的藥盒(B)瓶中的溶液取出注入上述(A)瓶中，充分搖勻後，室溫放置15-20分鐘，即得所述的放射性鎝-99m替曲膦注射液。
8.根據權利要求7所述的替曲膦注射液，其特徵在於，在(A)瓶製備中，所述的Sn(II)滷素鹽為SnCL2.2H2O或SnF2；在(B)瓶製備中，所述的吐溫類乳化劑為吐溫20、吐溫40或吐溫80，所述的環糊精為Υ-環糊精或β-環糊精。
9.權利要求5或6所述的替曲膦藥盒在製備放射性鎝-99m替曲膦注射液而用於在人或動物的器官或組織中作為顯像劑的用途。
10.根據權利要求9所述的用途，所述的放射性鎝-99m替曲膦注射液在心肌或腫瘤中作為顯像劑。
全文摘要
本發明涉及一種替曲膦季鏻鹽及其製法。所述的替曲膦季鏻鹽具有式[(C
文檔編號A61K51/04GK1331081SQ0010786
公開日2002年1月16日 申請日期2000年6月28日 優先權日2000年6月28日
發明者陸潔, 王學斌, 呂恭序, 唐志剛 申請人:北京師範大學