一種氟喹諾酮類抗生素的快速檢測方法和快速檢測試劑盒的製作方法

2023-09-20 08:09:30 1

專利名稱：一種氟喹諾酮類抗生素的快速檢測方法和快速檢測試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物檢測領域，具體涉及藥品、保健品或食品中非法添加抗生素的
檢測領域，尤其涉及一種藥品、保健品或食品中添加氟喹諾酮類抗生素的快速檢測方法 和快速檢測試劑盒。
背景技術：
中醫藥是我國的偉大寶庫，具有純天然、毒副作用少甚至無毒副作用的巨大優 勢，中成藥及其保健食品是由中草藥直接加工而成，方便病人服用，在規定的劑量內中 藥毒副作用少。但是，近年來，有些不法企業或藥商利用中成藥、保健食品目前缺乏嚴 格的質量標準控制的空子，在中成藥、保健食品中暗中擅自摻入化學藥成分，雖然具有 暫時速效、高效及特效的作用，但也產生了不可預知的嚴重不良反應，而且因為中藥自 身的複雜性，所以這種摻有化學藥成分的中成藥、保健食品其中藥成分與處方無異，導 致有關部門在市場上對其進行抽檢，按照現行標準檢驗均符合規定，具有很好欺騙性和 隱蔽性，因此要加快中醫藥的現代化進程，除了要不斷提高中藥的質量標準，還必須加 強對中成藥的質量監督管理，特別是對非法添加的藥品及保健食品中建立完善、快速、 準確的鑑別方法，利用安全快速檢測新方法不斷促進中醫藥現代化的健康發展。
現在市面上流通的某些治療前列腺疾病的中成藥及保健食品，均聲稱起效快， 能根治前列腺疾病，誇大宣傳療效，高價銷售，經過一系列的市場調查，懷疑是這一類 中成藥及保健食品中非法添加了氟喹諾酮類抗生素。通過查閱文獻資料及調查表明，目 前針對治療前列腺疾病的中成藥及保健食品中非法添加化學藥的檢測方法研究還無相關 的文獻報導，無正式檢驗標準頒布。 氟喹諾酮類藥物是20世紀80年代之後發展並得到廣泛應用的一類人工合成抗生 素類藥物，它們是在第一代萘啶酸和第二代吡哌酸的基礎上引入氟原子開發出的第三代 喹諾酮藥物，具有良好的組織滲透性。氟喹諾酮類藥物對革蘭陽性和陰性桿菌、葡萄球 菌和肺類球菌均有強的抗菌活性，主要用於尿路感染、淋病、呼吸道感染、皮膚感染、 胃腸道感染、傷寒和敗血症及慢性阻塞性呼吸道疾病急性發作的治療，其中一些藥物還 有抗結核作用。由於它們具有抗菌譜廣、抗菌活性強，低毒、高效、副作用少，安全價 廉，多數品種可以口服等許多優點，因此在臨床中得到了廣泛應用，常用的氟喹諾酮類 藥物有諾氟沙星、氧氟沙星、環丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、洛美沙星等。

發明內容
本發明的目的在於針對現有技術的不足，提供一種分析成本低、專屬性強、靈 敏度高、抗共存物質幹擾能力強、試驗現象明顯、檢驗結論正確率高、操作簡便且不需 要使用貴重分析儀器，可實現現場對藥品、保健品或食品中添加氟喹諾酮類抗生素進行 快速檢測的方法。 本發明的另一個目的在於提供一種利用上述方法對藥品、保健品或食品中添加氟喹諾酮類抗生素進行快速檢測的試劑盒。 本發明的上述目的是通過如下方案予以實現的 本發明的快速檢測方法是利用氟喹諾酮類抗生素能與三氯化鐵(Fe,反應生成紅 色的絡合物，從而對藥品、保健品或食品中是否含有氟喹諾酮類抗生素進行快速檢測， 具體包括如下步驟
(1)酸提取 向待測樣品(藥品、保健品或食品)中加入酸溶液，取上層提取液，進行過濾處 理，收集濾液；如濾液顏色幹擾顯色，加入高錳酸鉀溶液處理、退色；
(2)顯色反應。 向上述濾液中加入三氯化鐵溶液進行顯色反應，根據顯色結果即可判斷出待測 樣品中是否添加有氟喹諾酮類抗生素。 上述步驟(l)中，採用酸溶液將待測樣品(藥品、保健品或食品)中的待檢測物質 提取出來，所述酸溶液可選擇任意一種本領域技術人員常用的酸溶液，如乙酸、磷酸、 鹽酸、硫酸、硝酸或鹽酸乙醇等，優選鹽酸或硫酸。 上述步驟(1)中，酸溶液的濃度為1 20體積％ ，優選2體積％ 。上述步驟(l)中，待測樣品的檢測量為l粒(片)即可，片齊U、丸劑在檢測前需
要先研勻。 上述步驟(l)中，對上層提取液進行過濾處理時，可採用本領域技術人員常用的 過濾方法，如濾膜過濾、濾紙過濾、離心過濾等；若遇到較難過濾的凝膠劑，可不用過 濾。 上述步驟(l)中，過濾所得濾液，如果顏色較深幹擾顯色，可向濾液中加入高錳 酸鉀溶液至3 5秒內不退色，或使濾液呈淡黃色，以除去顏色幹擾；高錳酸鉀的作用主 要是氧化濾液中的幹擾物質，使溶液退色；高錳酸鉀的濃度選擇0.01 0.4mol/L，優選 0.04mol/L。 上述步驟(l)中，若滴加了高錳酸鉀後濾液的顏色還是比較深，則可以加少量前
述的酸溶液將過濾液稍稀釋，然後再滴加高錳酸鉀溶液至3 5秒內不退色。 上述步驟(2)中，向步驟(1)中經過處理的濾液中滴加三氯化鐵溶液進行顯色反
應，三氯化鐵溶液的濃度可選擇1質量％ 20質量％，優選濃度為9質量％。 上述步驟(2)中，若顯色反應的顏色為紅色，則說明待測樣品中可能添加有氟喹
諾酮類抗生素，若顯色反應的顏色為淡黃色或棕黃色或其他(只要不是紅色)，則說明待
測樣品中肯定沒有添加氟喹諾酮類抗生素；本發明的顯色反應可以作為藥品、保健品、
食品中是否非法添加有氟喹諾酮類抗生素的初篩程序，將所有經顯色反應鑑別出的樣品
再進行薄層色譜或高效液相色譜等操作，即可進一步確認待測樣品中是否添加有氟喹諾
酮類抗生素。 本發明的快速檢測方法，在進行操作時可同時進行一個陽性樣品對照組，最後 顯色反應結果判斷時，只要和陽性顯色結果一樣則為陽性樣品，若和陽性顯色結果不一 樣則為陰性樣品。 本發明還提供一種基於上述快速檢測方法的快速檢測試劑盒，該試劑盒包含酸 溶液、高錳酸鉀溶液、三氯化鐵溶液、濾頭、注射器和陽性對照；該試劑盒採用酸溶液對待測樣品進行提取後，將提取液經注射器和濾頭過濾後，採用高錳酸鉀溶液進行退色
處理，然後用三氯化鐵溶液進行顯色反應，對比陽性對照的顯色結果，即可對待測樣品
中是否含有氟喹諾酮類抗生素進行判斷。 上述快速檢測試劑盒中，還含有反應瓶和滴管。 與現有技術相比，本發明具有如下有益效果 l.本發明的方法其分析成本低、不需要專門設備、專屬性強、靈敏度高，適用 於現場對藥品、保健品、食品中添加氟喹諾酮類抗生素進行快速檢測，克服了現有技術 存在的缺點，滿足藥品、保健品、食品監督檢驗的需要； 2.本發明的方法對作為提取劑的酸溶液進行了一系列的試驗研究，結果發現鹽 酸和硫酸作為提取劑，提取效果最好，同時本發明還對高錳酸鉀溶液的濃度進行了優化 處理，從而解決了提取液中幹擾色的問題，使得顯色判斷清晰、準確； 3.本發明的方法具有抗共存物質幹擾能力強、顯色結果明顯易於觀察判斷、檢 驗結論正確率高、操作簡便快速，無需對檢測人員進行培訓，所需檢測儀器簡單等特 點； 4.本發明的方法可以從大批量的待建樣品中，將可能非法添加有氟喹諾酮類抗 生素的樣品初篩出來，然後再結合後續的色譜鑑定即可準確地獲得非法添加有氟喹諾酮 類抗生素的藥品或保健食品，因此本發明的方法使得整個檢測成本大大降低，而且提高 了檢測效率； 5.根據本發明的方法製備的快速檢測試劑盒，將能滿足農村地區開展相關的食 品監督檢驗的需要。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發明做進一步地描述，但具體實施例並不對本發明做
任何限定。 實施例1 本實施例中對金列保雄健膠囊中添加氟喹諾酮類抗生素進行快速檢測，具體包
括如下步驟 (1)酸提取 取金列保雄健膠囊一粒，研勻後加2ml2體積X鹽酸溶液，振搖提取30秒，放 置，取上層提取液，濾膜過濾，收集濾液；由於濾液顏色較深，顯棕黃色，所以向該濾 液中滴加0.04mol/l高錳酸鉀溶液，邊滴加邊搖勻，直到濾液呈淡黃色即可；
(2)顯色反應 向上述處理好的濾液中滴加1 2滴9質量％三氯化鐵溶液進行顯色反應，顯色 反應時間為立即顯色，觀察顯色結果。 本實施例中當向濾液中滴加了三氯化鐵溶液後，溶液立刻呈現紅色，由此說明 本實施例的金列保雄健膠囊樣品中可能含有氟喹諾酮類抗生素，對該樣品繼續進行高效 液相色譜法確認，結果證實本實施例的金列保雄健膠囊樣品中確實含有氟喹諾酮類抗生 素。 實施例2
本實施例中對前列回春片中添加氟喹諾酮類抗生素進行快速檢測，具體包括如下步驟 (1)酸提取 取前列回春片一片，研勻後加2ml2體積X鹽酸溶液，振搖提取30秒，放置，取上層提取液，濾膜過濾，收集濾液；由於濾液顏色較深，顯棕黃色，所以向該濾液中滴加0.04mol/l高錳酸鉀溶液，邊滴加邊搖勻，直到濾液呈淡黃色即可；
(2)顯色反應 向上述處理好的濾液中滴加1 2滴9質量％三氯化鐵溶液進行顯色反應，顯色反應時間為立即顯色，觀察顯色結果。 本實施例中當向濾液中滴加了三氯化鐵溶液後，溶液立刻呈現淡棕黃色，由此說明本實施例的前列回春片樣品中肯定不含有氟喹諾酮類抗生素，對該樣品繼續進行高效液相色譜法確認，結果證實本實施例的前列回春片樣品中確實不含有氟喹諾酮類抗生素。 實施例3專一性檢測 本實施例選擇阿莫西林、羅紅黴素、頭孢氨苄、青黴素V鉀、克黴唑素、麥白黴素、四環素、土黴素、鹽酸異丙嗪、鹽酸氯丙嗪、諾氟沙星和氧氟沙星這些抗生素藥品，採用實施例l所述的快速檢測方法，對該方法的專一性進行檢測。
各抗生素的顯色結果如下 l.阿莫西林、羅紅黴素、頭孢氨苄、青黴素V鉀、克黴唑素和麥白黴素的顯色結果均為微黃色，無幹擾，為陰性結果； 2.四環素、土黴素的顯色結果為棕褐色，存在幹擾，但通過稀釋後，和陽性管比較即可排除幹擾，為陰性結果； 3.鹽酸異丙嗪、鹽酸氯丙嗪顯桃紅色幹擾，但滴加高錳酸鉀溶液顏色即退；
4諾氟沙星和氧氟沙星滴加高錳酸鉀溶液紅色顏色不會退，可區分、排除幹擾。
由上述結果可以看出，本發明的快速檢測方法可以專一性地檢測氟喹諾酮類抗生素。 本實施例所用檢測藥品均為市售。
實施例4靈敏度試驗 採用實施例1的檢測方法，對左氧氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星和環丙沙星這四個常用的氟喹諾酮類抗生素進行靈敏度試驗。 各取100mg左氧氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星和環丙沙星對照品，加2%鹽酸溶液10ml，製成10mg/ml的溶液，然後將上述溶液分別稀釋成10、 5、 2.5、 lmg/ml的溶液後，取各濃度的溶液lml，分別加入1滴9質量％三氯化鐵溶液。 實驗結果左氧氟沙星的顯色最低檢出含量為5mg/ml，諾氟沙星、氧氟沙星和環丙沙星的顯色最低檢出含量均為lmg/ml。
實施例5酸溶液濃度的優化 分別配製一系列濃度的鹽酸溶液和硫酸溶液，系列濃度為1體積％ 、 2體積％ 、5%體積、10體積％和20體積％，各取左氧氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星和環丙沙星對照品10mg 5份，分別加入2ml上述系列酸溶液中，再加入1滴9質量％三氯化鐵溶液。
實驗結果左氧氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星和環丙沙星在不同濃度的酸溶液中反應結果均一致，均立即顯紅色，無明顯差異，由此說明酸溶液的濃度從1體積％ 20體積％均可作為提取劑實現本發明，考慮到酸溶液濃度越高，腐蝕性越強，優選2體積％的酸溶液。 實施例6酸溶液的選擇 根據實施例5的試驗結果，本實施例選擇2體積％乙酸、2體積％磷酸、2體積％鹽酸乙醇溶液、2體積％硝酸、2體積％硫酸溶液和2體積％鹽酸溶液，進行快速檢 結果表明 1.當酸溶液為2體積％乙酸溶液時，陽性結果顯色反應為紅色，陰性結果顯色反應為淡黃色或棕黃色或其他(非紅色)，但是陰性樣品產生絮狀沉澱； 2.當酸溶液為2體積％磷酸時，陽性樣品反應速度較慢，且顯色結果顏色比較淺； 3.當酸溶液為2%體積鹽酸乙醇溶液時，所得提取液顏色較深，需要加入的高錳酸鉀較多，且陽性樣品結果顏色較淺； 4.當酸溶液為2體積％硫酸溶液時，顯色速度快，陽性結果顯色反應為紅色，陰
性結果顯色反應為淡黃色或棕黃色或其他(非紅色)，顯色結果易判斷； 5.當酸溶液為2體積％鹽酸溶液時，顯色速度快，陽性結果顯色反應為紅色，陰
性結果顯色反應為淡黃色或棕黃色或其他(非紅色)，顯色結果易判斷； 6.當酸溶液為2體積％硝酸溶液時，顯色速度快，陽性結果顯色反應為紅色，陰
性結果顯色反應為淡黃色或棕黃色或其他(非紅色)，顯色結果易判斷； 根據上述實驗結果，乙酸、磷酸、鹽酸、硫酸、硝酸或鹽酸乙醇均可作為提取
劑實現本發明，其中優選硫酸和鹽酸。 實施例7氧化劑的選擇 本實施例選擇常用的氧化劑雙氧水和高錳酸鉀溶液，進行快速檢測反應。
實驗結果採用雙氧水對酸溶液提取液進行退色處理，退色能力比高錳酸鉀溶液差，而且需要加入的量也比高錳酸鉀溶液多，且雙氧水本身為無色的，因此很難判斷雙氧水的加入量會不會過量，而高錳酸鉀溶液本身是有顏色的，因此利於判斷加入量，此外，雙氧水容易產生氣泡，也不利於對結果的判斷。 根據上述實驗結果，本發明的快速檢測方法選擇高錳酸鉀溶液對提取液進行退色處理。 實施例8高錳酸鉀溶液濃度的優化 配製一系列濃度的高錳酸鉀溶液(0.01mol/L、 0.02mol/L、 0.04mol/L、 0.08mol/L和0.4mol/L)進行快速檢測反應。 實驗結果0.01mol/L 0.4mol/L飽和溶液的高錳酸鉀溶液均可作為氧化劑實現本發明，其中優選0.04mol/L的高錳酸鉀溶液。
實施例9三氯化鐵溶液濃度的優化 配製了20質量％、 13.5質量％、 9.0質量％、 4.5質量％、 1質量％五種不同濃度的三氯化鐵溶液，取2mg/ml諾氟沙星鹽酸溶液lml，分別滴加上述五種濃度的三氯化鐵溶液1滴，溶液均立即變成紅棕色，無明顯差異。
實驗結果1質量％ 20質量％的三氯化鐵溶液均可作為顯色劑實現本發明， 其中優選9質量％的三氯化鐵溶液。
實施例10快速檢測試劑盒 本實施例的快速檢測試劑盒內備有A、 B、 C溶液各l瓶；反應瓶10個；試管 10支；濾頭20個；注射器10支；2ml —次性滴管10支；lml —次性滴管10支；使用
說明書一份；所述A溶液為2體積％鹽酸溶液；所述B溶液為0.04mol/l高錳酸鉀溶液； 所述C溶液為9質量％三氯化鐵溶液。 待測樣品為市售的治療前列腺疾病的中成藥及保健食品一共31個廠家40批樣 品，其中有片劑(9)、膠囊劑(26)、丸劑(2)、顆粒劑(l)、軟膠囊劑(l)、凝膠劑(1)共6種 劑型的樣品。 採用本實施例試劑盒對待測的40個樣品進行快速檢測，共篩查出一批陽性樣 品，接著用薄層色譜法、高效液相色譜法(DAD檢測器)對檢出的陽性樣品進行了確認， 證實了檢出的陽性樣品中確實非法添加了諾氟沙星、氧氟沙星兩種抗生素藥品。
同時對另外快速檢測方法檢出為陰性的樣品也進行薄層色譜法、高效液相色譜 法檢測，結果發現陰性樣品中均沒有非法添加氟喹諾酮類抗生素。 採用本發明的快速檢測試劑盒和快速檢測方法，對40批樣品進行篩選，準確率 為100%，未發現有假陽性和假陰性的樣品。
權利要求
一種藥品、保健品或食品中添加氟喹諾酮類抗生素的快速檢測方法，其特徵在於該方法包括如下步驟(1)酸提取向藥品、保健品或食品中加入酸溶液，取上層提取液，進行過濾處理，收集濾液；(2)顯色反應向上述濾液中加入三氯化鐵溶液進行顯色反應，根據顯色結果即可判斷出藥品、保健品或食品中是否添加有氟喹諾酮類抗生素。
2. 根據權利要求1所述快速檢測方法，其特徵在於步驟(l)中所述酸溶液為乙酸、磷酸、鹽酸、硫酸、硝酸或鹽酸乙醇。
3. 根據權利要求2所述快速檢測方法，其特徵在於所述酸溶液為鹽酸或硫酸。
4. 根據權利要求1所述快速檢測方法，其特徵在於步驟(1)中所述酸溶液的濃度為1 20體積％。
5. 根據權利要求4所述快速檢測方法，其特徵在於所述酸溶液的濃度為2體積％ 。
6. 根據權利要求1所述快速檢測方法，其特徵在於所述步驟(l)中，收集濾液後先採用高錳酸鉀溶液對濾液進行退色處理。
7. 根據權利要求6所述快速檢測方法，其特徵在於所述高錳酸鉀溶液的濃度為0.01 0.4mol/L。
8. 根據權利要求7所述快速檢測方法，其特徵在於所述高錳酸鉀溶液的濃度為0.04mol/L。
9. 根據權利要求1所述快速檢測方法，其特徵在於所述三氯化鐵溶液的濃度為1質量％ 20質量％。
10. —種利用權利要求1所述方法對藥品、保健品或食品中添加氟喹諾酮類抗生素進行快速檢測的快速檢測試劑盒，其特徵在於該試劑盒包含酸溶液、三氯化鐵溶液、高錳酸鉀溶液、濾頭、注射器和陽性對照。
全文摘要
本發明公開一種藥品、保健品或食品中添加氟喹諾酮類抗生素的快速檢測方法和快速檢測試劑盒，該方法用酸溶液對藥品、保健品或食品進行提取處理，將提取液經過濾以及高錳酸鉀溶液退色處理後，加入三氯化鐵溶液顯色，通過顯色結果即可進行判斷。本發明的試劑盒包含酸溶液、高錳酸鉀溶液、三氯化鐵溶液、濾頭、注射器和陽性對照。本發明的方法其分析成本低、抗共存物質幹擾能力強、無需專門設備、靈敏度高、顯色結果明顯易於觀察判斷、檢驗結論正確率高、適用於現場對藥品、保健品或食品中是否添加氟喹諾酮類抗生素進行快速檢測。根據本發明的快速檢測方法，製備快速檢測試劑盒，能滿足農村地區開展相關的食品藥品監督檢驗的需要。
文檔編號G01N31/22GK101692079SQ20091004223
公開日2010年4月7日 申請日期2009年8月28日 優先權日2009年8月28日
發明者洪美華, 溫小霞, 蔡詩填, 陳偉軍, 陳志強 申請人:廣東省汕尾市藥品檢驗所