番荔枝內酯化合物v在製備治療抗癌藥物中的應用的製作方法

2023-09-20 20:50:00 2

專利名稱：：番荔枝內酯化合物v在製備治療抗癌藥物中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種抗癌藥物的新用途，具體地說是以番荔枝種子為原料提取的一種番荔枝內酯化合物v的新用途，該化合物v在製備治療肺癌、乳腺癌及肝癌藥物中的應用。二
背景技術：
：癌症是危害人類健康的大敵。我國每年新發癌症病例約有160萬人，每年死於癌症的約有130萬人，全國因癌症而死亡的人數逐年上升，我國為肺癌、乳腺癌、肝癌等癌症的高發區域，癌症死亡率居高不下。目前尚無有效的藥物治癒大多數癌症患者。化療藥物對癌症雖有一定療效，但毒副作用大，中成藥對癌症的療效普遍較低，療效均不理想。本發明人經過十幾年艱苦研究了番荔枝(AnnonasquamosaLinn)種子的抗癌有效物質，從中提取出多種抗癌活性化合物，經抗癌實驗研究表明，對人肝癌細胞、人胃癌細胞、人食管癌細胞和動物移植性腫瘤(如Si犯、H22和Heps)均有顯著的體內外抗癌治療效果，並己申請獲得3項抗癌產品發明專利證書(專利號分別為ZL02148474.0、ZL02148475.9、ZL03112707.X)。在上述研究的基礎上，本發明人繼續提取分離、篩選番荔枝種子的抗癌有效化學成分，即番荔枝內酯化合物V，具有特別顯著抗癌活性。三
發明內容1、發明目的本發明的目的是涉及一種番荔枝內酯化合物V的新用途，具體是涉及其番荔枝內酯化合物V在製備治療抗癌藥物中的應用。2、技術方案本發明從番荔枝(AnnonasquamosaLinn)種子提取分離到一種抗癌物質番荔枝內酯化合物V。先用乙醇、石油醚、氯仿等有機溶劑從番荔枝種子中提取番荔枝內酯；再將番荔枝內酯經矽膠柱層析，氯仿-甲醇，石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，得到一種番荔枝內酯化合物V，其含量為質量分數的50%90%。番荔枝種子粗粉用濃度為95%97%的乙醇回流提取；乙醇提取液常壓濃縮後，依次用石油醚(206(TC)、水飽和乙酸乙酯、氯仿萃取；萃取液濃縮乾燥後經多次矽膠柱層析，矽膠粒度為ioo300目，與萃取物的質量比為io:i20:i;以體積比為ioo:090:io的氯仿-甲醇梯度洗脫，將收集到的番荔枝內酯物質濃縮乾燥。再經多次矽膠柱層析，矽膠粒度為ioo300目，與番荔枝內酯物質的質量比為io:i50:i;以體積比為ioo:o90:io的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，用薄層層析檢査，以碘化鉍鉀試劑顯色；將收集到的番荔枝內酯化合物v濃縮乾燥，其含量為質量分數的50%90%。番荔枝內酯化合物V對肺癌、乳腺癌、肝癌細胞的生長有明顯的抑制作用，其抗癌活性百倍高於化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)。番荔枝內酯化合物V對小鼠移植性肺癌的生長抑制作用不同劑量15pg/kg、30|ag/kg和60pg/kg的番荔枝內酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性肺癌的生長(PO.Ol)，其抑瘤率分別為63.01%、70.04%、77.81%。番荔枝內酯化合物V抗肺癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶的百倍以上。番荔枝內酯化合物V對小鼠移植性乳腺癌的生長抑制作用不同劑量15pg/kg、3(Hig^cg和60pg/kg的番荔枝內酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性乳腺癌的生長(PO.Ol)，其抑瘤率分別為41.18%、65.44%、78.68%。番荔枝內酯化合物V抗乳腺癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶的百倍以上。番荔枝內酯化合物V對小鼠移植性肝癌的生長抑制作用不同劑量15ng/kg、30pg/kg和60pg/kg的番荔枝內酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性肝癌的生長(PO.Ol)，其抑瘤率分別為49.70%、64.24%、78.18%。番荔枝內酯化合物V抗肝癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶的百倍以上。3、有益效果本發明一種番蔡枝內酯化合物V是從番荔枝種子中提取得到的抗癌活性物質。動物體內抗癌實驗結果顯示，番荔枝內酯化合物V對肺癌、乳腺癌、肝癌細胞的生長均有非常高的抗癌活性，其體內抗癌活性百倍高於化療藥5-氟脲嘧啶(5-Fu)。這為提高抗癌臨床療效提供了非常有前景的高效預選藥物。具體實施例方式實施例1:番荔枝內酯化合物V的提取製備方法番荔枝種子20kg，粉碎成粗粉，用濃度為95%的乙醇回流提取3次，乙醇提取液常壓濃縮後得1.2kg。依次用10倍量石油醚(2060°C)、水飽和乙酸乙酯、氯仿萃取3次，合併萃取液濃縮乾燥後得610g。經多次矽膠柱層析，矽膠粒度為ioo300目，與萃取物的質量比為io:120:i;以體積比為ioo:o90:io的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集到的番荔枝內酯物質濃縮乾燥得230g。再經多次矽膠柱層析，矽膠粒度為100300目，與番荔枝內酯物質的質量比為io:i50:i;以體積比為ioo:090:10的石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，收集到的流分濃縮乾燥得到蠟狀固體38g，即為番荔枝內酯V。實施例2:番荔枝內酯化合物V對移植性肺癌的抑制作用1、實驗動物和瘤株雄性健康C57BL/6小鼠，體重18—22g，鼠齡6_8周，購自本校動物實驗中心；小鼠Lewis肺癌瘤株購自江蘇省腫瘤研究所動物實驗中心。2、造模與實驗方法C57BL/6小鼠60隻，按比例隨機留10隻為陰性對照組，其餘50隻進行造模。製備Lewis肺癌荷瘤小鼠，剝離生長旺盛期的瘤組織，選取生長良好的腫塊1.5mn^左右，按腫瘤(g):生理鹽水(ml)為1:3比例勻漿，調細胞數為2X106/ml。選取健康小鼠，在無菌條件下每隻小鼠右側腋窩皮下接種0.2ml。整個接種過程須在無菌罩內以無菌操作進行，lh內完成接種。接種後隨機分為5組，每組10隻，分別為腫瘤模型對照組、15pg/kg、30pg/kg和60ng/kg試驗組、5-fu陽性對照組，另加陰性對照組，共6組。接種瘤細胞24h後，試驗組腹腔注射番荔枝內酯V，劑量分別為15|ag/kg、30pg/kg和60pg/kg，陰性對照組和腫瘤模型對照組等體積注射藥物溶媒，5-FU對照組以生理鹽水為溶劑，劑量為20mg/kg，各組動物均按0.2ml在腹腔注射，連續給藥10d。末次給藥後次日，進行如下觀察完整剝離瘤塊,並稱重計算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率=(對照組腫瘤重量一治療組腫瘤重量)/對照組腫瘤重量><100%。3、實驗結果番荔枝內酯化合物V對小鼠移植性肺癌的生長抑制作用不同劑量的番荔枝內酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性肺癌的生長(PO.01)。番荔枝內酯化合物V的劑量極小，其抗肺癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，見表l。表1番蒸枝內酯V對小鼠移植性肺癌Lewis作用結果劑量動物數(開始/結束)瘤重(x±s)抑瘤率(％)P值NS10/103.92±0.195-FU20mg/kg10/101.36±0.2065.31%<0.01番荔枝內酯V15pg/kg10/101.45±0.1763.01%<0.0130|ig/kg10/101.16±0.2170.04%<0.0160pg/kg10/100.87±0.1577.81%<100%。3、實驗結果番荔枝內酯化合物V對小鼠移植性乳腺癌的生長抑制作用不同劑量的番荔枝內酯化合物V均能顯著抑制小鼠移植性乳腺癌的生長(PO.Ol)。番荔枝內酯化合物V的劑量極小，其抗乳腺癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，見表2。表2tableseeoriginaldocumentpage7實施例4:番荔枝內酯化合物V對移植性肝癌的抑制作用3、實驗動物和瘤株雄性健康昆明種小鼠，體重18—22g，鼠齡6—8周，來自本校動物實驗中心；昆明鼠傳代腹水型鼠肝癌HepS瘤株均購自江蘇省腫瘤研究所動物實驗中心。小鼠在南京中醫藥大學動物實驗中心的動物實驗房飼養，溫度2125'C，溼度為45%55%。2、造模與實驗方法昆明種雄性小鼠60隻，按比例隨機留IO只為陰性對照組，其餘50隻進行造模。無菌抽取接種HepS瘤種8天的小鼠的腹水，以生理鹽水稀釋10倍，0.02%伊紅染色,滴加到細胞計數板上計數後，調細胞濃度至lX107/ml，迅速地分別將50隻小鼠右腋皮膚消毒，每鼠接種0.2111111叩8腫瘤細胞懸液於皮下。整個接種過程須在無菌罩內以無菌操作進行，lh內完成接種。接種後隨機分為5組，每組10隻，分別為腫瘤模型對照組、15pg/kg、30pg/kg和60ng/kg試驗組、5-fo陽性對照組，另加陰性對照組，共6組。接種瘤細胞24h後，試驗組腹腔注射番荔枝內酯化合物V，劑量分別為15pg/kg、30|ig/kg和60pg/kg，陰性對照組和腫瘤模型對照組等體積注射藥物溶媒，5-FU對照組以生理鹽水為溶劑，劑量為20mg/kg，各組動物均按0.2ml在腹腔注射，連續給藥8d。末次給藥後次日，進行如下觀察完整剝離瘤塊,並稱重計算腫瘤抑制率，腫瘤抑制率=(對照組腫瘤重量一治療組腫瘤重量)/對照組腫瘤重量x100。/。。3、實驗結果番荔枝內酯化合物V對小鼠移植性肝癌HepS的生長抑制作用不同劑量的番荔枝內酯V均能顯著抑制小鼠移植性肝癌HepS的生長(PO.Ol)。番荔枝內酯V的劑量極小，其抗肝癌活性是化療藥5-氟脲嘧啶(5-FU)的百倍以上，見表3。表3番荔枝內酯V對小鼠移植性肝癌HepS作用結果complextableseeoriginaldocumentpage8權利要求1、一種番荔枝內酯化合物V在製備治療抗癌藥物中的應用。2、根據權利要求l所述的應用，其特徵在於番荔枝內酯化合物V在製備治療肺癌藥物中的應用。3、根據權利要求l所述的應用，其特徵在於番荔枝內酯化合物V在製備治療乳腺癌藥物中的應用。4、根據權利要求l所述的應用，其特徵在於番荔枝內酯化合物V在製備治療肝癌藥物中的應用。5、根據權利要求2、3或4所述的應用，其特徵在於番荔枝內酯化合物V在體內對肺癌，乳腺癌或肝癌細胞有明顯的抑制作用，其抗癌活性高於化療藥物5-氟脲嘧啶。全文摘要本發明涉及一種番荔枝內酯化合物V的新用途，具體地說是涉及化合物V在製備治療抗癌藥物中的應用。先用乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿等有機溶劑從番荔枝種子粗粉中提取番荔枝內酯；再將番荔枝內酯經矽膠柱層析，氯仿-甲醇，石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇洗脫，得到一種番荔枝內酯化合物V，其含量為質量分數的50％～90％。經動物體內抗癌藥理實驗，其內酯化合物V對肺癌、乳腺癌、肝癌細胞的生長有明顯的抑制作用，其抗癌活性百倍高於化療藥5-氟脲嘧啶，可用於抗癌藥物的製備。文檔編號A61K31/365GK101342202SQ20081012458公開日2009年1月14日申請日期2008年8月26日優先權日2008年8月26日發明者章永紅申請人:南京中醫藥大學