一種甜葉菊組培方法與流程
2023-09-20 21:16:15 1
本發明屬於組培生產技術領域，具體涉及一種甜葉菊組培方法。
背景技術：
甜葉菊，是原產於南美洲巴拉圭的菊科甜葉菊屬多年生草本植物，由於甜葉菊所含的甜菊糖苷有制血糖、降低血壓、促進新陳代謝以及治療糖尿病、肥胖症、調節胃酸、恢復神經疲勞的功效，並且物理、化學性質穩定，無發酵性特點，其製品有比較長的保質期，特別適合作為糖尿病、高血壓等病患者食品的甜味劑、保健品添加劑等，具有廣闊的市場前景和應用範圍。
自我國於20世紀70年代年引種甜葉菊並成功擴大種植以來，已經有30餘年的歷史，但由於甜菊的繁育特性，傳統的繁殖方式包括種子、扦插方式。但是用種子繁育的方法，成活率低；而扦插繁殖導致品質退化，並且這兩種繁育方式時間長、需要大量以莖尖、帶腋芽的莖段、種子等材料。
技術實現要素：
本發明的目的是提供一種甜葉菊組培方法，能降低繁殖的成本，生長周期短、繁殖率高、方便管理、有利於工業化生產和自動化監控，大大的節約了人力、物力和田間作物的土地。
本發明提供了如下的技術方案：
一種甜葉菊組培方法，包括以下步驟，
1）抑菌液的配製，將福美鋅400-600倍液與10%的維生素C水溶液混合，所述福美鋅溶液400-600倍液與10%維生素C水溶液的體積比為2：1，得到抑菌液A；配製0.2%的HgCl2溶液，得到抑菌液B；
2）外植體的獲取，取甜葉菊頂端未老熟的葉片，使用解刨刀沿著甜葉菊葉片的莖幹位置橫切出長15-20 mm，寬10-15 mm的葉片條；
3）培養基方瓶和外植體的消毒，將培養基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡20-30分鐘，用無菌水衝洗2-4次，每次3-5分鐘，將所述葉片條放入抑菌液A中浸泡10-20分鐘，用無菌水洗淨，然後放入抑菌液B中浸泡20-30分鐘，用無菌水洗淨；
4）外植體分化芽，將外植體接種到裝有芽誘導培養基的培養基方瓶中，在28-30℃下，光暗培養15-20天，外植體分化出芽，所述芽誘導培養基為MS+萘乙酸0.1-0.3 mg/L+6-苄基嘌呤0.4-1.0 mg/L+瓊脂8-10 g/L；
5）芽生根成苗，當步驟4）中的芽長至3-5 cm，將其相互分開成單株，並轉接至裝有生根培養基的培養基方瓶中，在28-30℃下，光暗培養20-25天，長出多條根並出現白色根毛，所述生根培養基為1/2MS+吲哚乙酸0.1-0.2 mg/L+萘乙酸0.1-0.2 mg/L+瓊脂5-7 g/L+硫酸亞鐵0.5-1.5 mg/L；
優選的，所述步驟3）中培養基方瓶的規格為500 ml。
優選的，所述步驟4）中光培養的光照強度為1300勒克斯，步驟5）中光培養的光照強度為1800勒克斯。
本發明提供的甜葉菊組織培養方法，取材容易，可以迅速擴繁出大量種源，能降低繁殖的成本，生長周期短、繁殖率高、方便管理、有利於工業化生產和自動化監控，大大的節約了人力、物力和田間作物的土地。
具體實施方式
實施例1
一種甜葉菊組培方法，包括以下步驟，
1）抑菌液的配製，將福美鋅400倍液與10%的維生素C水溶液混合，所述福美鋅溶液400倍液與10%維生素C水溶液的體積比為2：1，得到抑菌液A；配製0.2%的HgCl2溶液，得到抑菌液B；
2）外植體的獲取，取甜葉菊頂端未老熟的葉片，使用解刨刀沿著甜葉菊葉片的莖幹位置橫切出長15 mm，寬10 mm的葉片條；
3）培養基方瓶和外植體的消毒，將培養基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡20分鐘，用無菌水衝洗2次，每次3分鐘，將所述葉片條放入抑菌液A中浸泡10-分鐘，用無菌水洗淨，然後放入抑菌液B中浸泡20分鐘，用無菌水洗淨；
4）外植體分化芽，將外植體接種到裝有芽誘導培養基的培養基方瓶中，在28℃下，光暗培養15天，外植體分化出芽，所述芽誘導培養基為MS+萘乙酸0.1 mg/L+6-苄基嘌呤0.4 mg/L+瓊脂8 g/L；
5）芽生根成苗，當步驟4）中的芽長至3 cm，將其相互分開成單株，並轉接至裝有生根培養基的培養基方瓶中，在28℃下，光暗培養20天，長出多條根並出現白色根毛，所述生根培養基為1/2MS+吲哚乙酸0.1 mg/L+萘乙酸0.1 mg/L+瓊脂5 g/L+硫酸亞鐵0.5 mg/L；
所述步驟3）中培養基方瓶的規格為500 ml。
所述步驟4）中光培養的光照強度為1300勒克斯，步驟5）中光培養的光照強度為1800勒克斯。
實施例2
一種甜葉菊組培方法，包括以下步驟，
1）抑菌液的配製，將福美鋅500倍液與10%的維生素C水溶液混合，所述福美鋅溶液500倍液與10%維生素C水溶液的體積比為2：1，得到抑菌液A；配製0.2%的HgCl2溶液，得到抑菌液B；
2）外植體的獲取，取甜葉菊頂端未老熟的葉片，使用解刨刀沿著甜葉菊葉片的莖幹位置橫切出長18 mm，寬13 mm的葉片條；
3）培養基方瓶和外植體的消毒，將培養基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡25分鐘，用無菌水衝洗3次，每次4分鐘，將所述葉片條放入抑菌液A中浸泡15分鐘，用無菌水洗淨，然後放入抑菌液B中浸泡25分鐘，用無菌水洗淨；
4）外植體分化芽，將外植體接種到裝有芽誘導培養基的培養基方瓶中，在29℃下，光暗培養18天，外植體分化出芽，所述芽誘導培養基為MS+萘乙酸0.2 mg/L+6-苄基嘌呤0.7 mg/L+瓊脂9 g/L；
5）芽生根成苗，當步驟4）中的芽長至4 cm，將其相互分開成單株，並轉接至裝有生根培養基的培養基方瓶中，在29℃下，光暗培養23天，長出多條根並出現白色根毛，所述生根培養基為1/2MS+吲哚乙酸0.15 mg/L+萘乙酸0.15 mg/L+瓊脂6 g/L+硫酸亞鐵1.0 mg/L；
所述步驟3）中培養基方瓶的規格為500 ml。
所述步驟4）中光培養的光照強度為1300勒克斯，步驟5）中光培養的光照強度為1800勒克斯。
實施例3
一種甜葉菊組培方法，包括以下步驟，
1）抑菌液的配製，將福美鋅600倍液與10%的維生素C水溶液混合，所述福美鋅溶液600倍液與10%維生素C水溶液的體積比為2：1，得到抑菌液A；配製0.2%的HgCl2溶液，得到抑菌液B；
2）外植體的獲取，取甜葉菊頂端未老熟的葉片，使用解刨刀沿著甜葉菊葉片的莖幹位置橫切出長20 mm，寬15 mm的葉片條；
3）培養基方瓶和外植體的消毒，將培養基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡30分鐘，用無菌水衝洗4次，每次5分鐘，將所述葉片條放入抑菌液A中浸泡20分鐘，用無菌水洗淨，然後放入抑菌液B中浸泡30分鐘，用無菌水洗淨；
4）外植體分化芽，將外植體接種到裝有芽誘導培養基的培養基方瓶中，在30℃下，光暗培養20天，外植體分化出芽，所述芽誘導培養基為MS+萘乙酸0.3 mg/L+6-苄基嘌呤1.0 mg/L+瓊脂10 g/L；
5）芽生根成苗，當步驟4）中的芽長至5 cm，將其相互分開成單株，並轉接至裝有生根培養基的培養基方瓶中，在30℃下，光暗培養25天，長出多條根並出現白色根毛，所述生根培養基為1/2MS+吲哚乙酸0.2 mg/L+萘乙酸0.2 mg/L+瓊脂7 g/L+硫酸亞鐵1.5 mg/L；
所述步驟3）中培養基方瓶的規格為500 ml。
所述步驟4）中光培養的光照強度為1300勒克斯，步驟5）中光培養的光照強度為1800勒克斯。
以上所述僅為本發明的優選實施例而已，並不用於限制本發明，儘管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對於本領域的技術人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特徵進行等同替換。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。