作為lkb1狀態的預測性生物標誌物的基因表達譜的鑑定的製作方法

2023-09-20 06:24:20

作為lkb1狀態的預測性生物標誌物的基因表達譜的鑑定的製作方法
【專利摘要】本文提供用於預測患者或生物樣本的LKB1狀態的方法，所述方法包括相對於一組參比水平測量特定基因表達水平，所述參比水平代表沒有LKB1基因或蛋白質丟失或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKB1基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平。本文還提供用於治療和/或預防患者的癌症或腫瘤綜合症的方法，所述方法包括將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有特徵在於特定基因表達水平的癌症或腫瘤綜合症的患者。
【專利說明】作為LKB1狀態的預測性生物標誌物的基因表達譜的鑑定
[0001]本申請要求2011年8月32日提交的美國臨時申請號61/514，798的權益，其完整內容通過引用結合到本文中。
1.發明領域
[0002]本文提供用於預測患者或生物樣本的LKBl狀態的方法，所述方法包括測量相對於代表沒有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平的一組參比水平的特定基因表達水平。本文還提供用於治療和/或預防患者的癌症或腫瘤綜合症的方法，所述方法包括將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有特徵在於特定基因表達水平的癌症或腫瘤綜合症的患者。
[0003]2.發明背景
[0004]已知蛋白質磷酸化異常與疾病的原因或結果之間的聯繫超過20年。因此，蛋白質激酶已成為非常重要的藥物靶標。參見Cohen, Nat.Rev.Drug Disc.，1:309-315 (2002)；Grimmiger 等,Nat.Rev.Drug Disc.9 (12): 956-970 (2010)。各種蛋白質激酶抑制劑已在臨床上用於治療各種疾病，例如癌症和慢性炎性疾病，包括糖尿病和中風。參見Cohen, Eur.J.Biochem., 268:5001-5010 (2001) ；Protein Kinase Inhibitors for theTreatment of Disease:The Promise and the Problems (用於治療疾病的蛋白質激酶抑制劑:前景與問題)，Handbook of Experimental Pharmacology, Springer BerlinHeidelberg, 167(2005)。
[0005]蛋白質激酶屬於催化蛋白質磷酸化和在細胞信號轉導中起關鍵作用的大且多種多樣的酶的家族。根據靶蛋白，蛋白質激酶可起正或負的調節作用。蛋白質激酶參與調節例如但不限於代謝、細胞周期進程、細胞粘附、血管功能、細胞凋亡和血管生成等細胞功能的特殊信號轉導途徑。細胞信號轉導功能障礙與許多疾病有關，最多表徵的包括癌症和糖尿病。信號轉導受細胞因子調節和信號分子與原癌基因和腫瘤抑制基因的關聯已得到充分證實。類似地，糖尿病和相關病況與蛋白質`激酶水平失調之間的關係已得到證實。參見例如Sridhar等，Pharm.Res.17 (11): 1345-1353 (2000))。病毒感染及其相關病況也與蛋白質激酶的調節有關。Park 等，CelllOl (7): 777-787 (2000)。
[0006]可根據蛋白質激酶靶向的胺基酸(絲氨酸/蘇氨酸、酪氨酸、賴氨酸和組氨酸)的特性將其分成大的組別。例如，酪氨酸激酶包括受體酪氨酸激酶(RTK)(例如生長因子)和非受體酪氨酸激酶(例如src激酶)家族。還存在靶向酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸兩者的雙重特異性蛋白質激酶，例如細胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)。
[0007]由於蛋白質激酶調節幾乎每個細胞過程，包括代謝、細胞增殖、細胞分化和細胞存活，因此它們是用於各種疾病狀態治療幹預的有吸引力的靶標。例如，蛋白質激酶在其中起關鍵作用的細胞周期控制和血管生成是與多種疾病病況有關的細胞過程，所述疾病例如但不限於癌症、炎性疾病、血管生成異常及其相關疾病、動脈粥樣硬化、黃斑變性、糖尿病、肥胖症和疼痛。[0008]蛋白質激酶已成為用於治療癌症的有吸引力的靶標。Fabtoo等，Pharm.Ther.93:79-98 (2002)。已提出蛋白質激酶參與人惡性腫瘤的發展可通過以下而發生:(I)基因組重排(例如慢性髓細胞白血病中的BCR-ABL)，(2)導致組成型活性激酶活性的突變，例如急性髓細胞白血病和胃腸腫瘤，(3)由癌基因活化或腫瘤抑制功能喪失所至激酶活性失調，例如在具有致癌性RAS的癌症中，(4)因過量表達所致激酶活性失調，如在EGFR的情況下，和(5)可促進腫瘤表型發生和維持的生長因子異位表達。Fabbro等，Pharm.Ther.93:79-98(2002)。
[0009]蛋白質激酶途徑的錯綜複雜以及各種蛋白質激酶與激酶途徑間的關係和相互作用的複雜性的闡述強調開發能夠起對多種激酶或多種激酶途徑具有有益活性的蛋白質激酶調諧劑、調節劑或抑制劑的藥劑的重要性。因此，依然需要新的激酶調諧劑。
[0010]命名為mTOR(雷帕黴素的哺乳動物靶)的蛋白質，亦稱FRAP、RAFTI或RAPT1，是一種2549個胺基酸的Ser/Thr蛋白質激酶，已表明其是調節細胞生長和增殖的mTOR/PI3K/Akt 途徑中最關鍵的蛋白質之一。Georgakis 和 Younes Expert Rev.AnticancerTher.6 (I): 131-140 (2006)。mTOR 存在於兩個複合物 mTORCl 和 mT0RC2 內。雖然 mTORCl 對雷帕黴素類似物(例如坦羅莫司或依維莫司)敏感，但是mT0RC2大多對雷帕黴素不敏感。值得注意的是，雷帕黴素不是TOR激酶抑制劑。在針對癌症治療的臨床試驗中，已對或正在對若干種mTOR抑制劑進行評價。坦羅莫司於2007年獲準用於腎細胞癌，已發展成血管內皮生長因子受體抑制劑的依維莫司於2009獲準用於腎細胞癌患者。另外，西羅莫司於1999獲準用於預防腎移植排斥。這些mTORCl抑制化合物引人關注但有限的臨床成就表明mTOR抑制劑在癌症和移植排斥治療中的有用性，且具有mTORCl和mT0RC2抑制活性兩者的化合物的潛力提聞。
[0011]體細胞突變影響肺癌的關鍵途徑。因此，鑑定與肺癌有關的特異性突變可導致治療方案得到改進。最新研究發現存在於肺癌、宮頸癌、乳腺癌、腸癌、睪丸癌、胰腺癌和皮膚癌中的LKBl基因的大量體細胞突變(Distribution of somatic mutations inSTKlI, Catalogue of Somatic Mutations in Cancer (STK11 中體細胞突變的分布,癌症中體細胞突變的目錄)，Wellcome Trust Genome Campus, Hinxton, Cambridge)。
`[0012]本申請第2部分中任何參考文獻的引用或標識不得解釋為承認所述參考文獻是本申請的現有技術。
[0013]3.發明概述
[0014]本文提供用於預測患者或生物樣本的LKBl狀態的方法，所述方法包括測量預測性基因表達水平。雖然不受理論限制，但是認為某些基因表達水平代表LKBl基因和/或蛋白質突變和/或丟失。
[0015]本文還提供用於治療或預防例如非小細胞肺癌或宮頸癌等癌症或治療例如佩一吉綜合症(Peutz-Jeghers Syndrome)等腫瘤綜合症的方法,所述方法包括將有效量的TOR激酶抑制劑給予患者，所述患者患有特徵在於與野生型的相比有特定基因表達水平的癌症或腫瘤綜合症。
[0016]本文還提供用於治療預防例如非小細胞肺癌或宮頸癌等癌症的方法，所述方法包括針對與野生型的相比存在特定基因表達水平來篩選患者的癌症，並且將有效量的TOR激酶抑制劑給予患者，所述患者患有特徵在於存在特定基因表達水平的癌症。[0017]本文還提供用於預測患者(「試驗患者」)的例如非小細胞肺癌或宮頸癌等癌症中LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的方法，所述方法包括:a)從患者的癌中獲得生物試驗樣本山)獲得所述生物樣本中選自表1的一種或多種基因的基因表達水平；c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平；其中特徵在於與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明患者的癌中LKBl基因或蛋白質丟失或突變的可能性提高。
[0018]本文還提供用於治療非小細胞肺癌、宮頸癌或佩一吉綜合症的方法，所述方法包括將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有非小細胞肺癌、宮頸癌或佩一吉綜合症的患者，其中所述患者生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於與沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的野生型樣本的基因表達水平相比，與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性，且其中所述基因選自表1。
[0019]還提供用於治療非小細胞肺癌或宮頸癌的方法，所述方法包括針對與野生型相比存在LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變來篩選患者的癌或癌症，並且將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有特徵在於基因表達水平的非小細胞肺癌或宮頸癌的患者，所述基因表達水平的特徵在於與沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的野生型樣本的基因表達水平相比，與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性，且其中所述基因選自表1。
[0020]本文還提供用於預測患有例如非小細胞肺癌或宮頸癌等癌症的患者中對用TOR激酶抑制劑治療的反應的方法，所述方法包括:a)從患者的癌中獲得生物試驗樣本；b)獲得所述生物試驗樣本的選自表1的一種或多種基因的基因表達水平；c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平；其中特徵在於與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明對所述患者的癌症的TOR激酶抑制劑治療起反應的可能性提高。
[0021]本文還提供用於預測用TOR激酶抑制劑對例如非小細胞肺癌或宮頸癌等癌症的患者進行TOR激酶抑制劑治療的治療效能的方法，所述方法包括:a)從患者的癌中獲得生物試驗樣本；b)獲得所述生物試驗樣本的選自表1的一種或多種基因的基因表達水平；c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平；其中其特徵在於與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明所述患者的所述TOR激酶抑制劑治療的治療效能的可能性提高。
[0022]本文還提供針對LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變篩選患有例如非小細胞肺癌或宮頸癌等癌症的患者的方法，所述方法包括:a)從患者的癌中獲得生物試驗樣本；
b)獲得所述生物試驗樣本的選自表1的一種或多種基因的基因表達水平；c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平；其中其特徵在於與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的可能性提聞。
[0023]本文還提供用於治療例如佩一吉綜合症等腫瘤綜合症的方法，所述方法包括將患者基因表達水平與野生型的進行比較，並將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有特徵在於基因表達水平的腫瘤綜合症的患者，所述基因表達水平的特徵水平在於與沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的野生型樣本的基因表達水平相比，與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性，且其中所述基因選自表1。
[0024]還提供用於治療例如佩一吉綜合症等腫瘤綜合症的方法，所述方法包括針對與野生型相比存在LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變來篩選患者，並且將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有特徵在於基因表達水平的腫瘤綜合症的患者，所述基因表達水平的特徵水平在於與沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的野生型樣本的基因表達水平相t匕，與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性，且其中所述基因選自表1。
[0025]本文還提供用於預測患有例如佩一吉綜合症等腫瘤綜合症的患者中LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的方法，所述方法包括:a)從患者中獲得生物試驗樣本；b)獲得所述生物試驗樣本的選自表1的一種或多種基因的基因表達水平；c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平；其中其特徵在於與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明患者中LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的可能性提聞。
[0026]本文還提供用於預測患有例如佩一吉綜`合症等腫瘤綜合症的患者對TOR激酶抑制劑療法的反應的方法，所述方法包括:a)從患者中獲得生物試驗樣本；b)獲得所述生物試驗樣本的選自表1的一種或多種基因的基因表達水平；c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平；其中其特徵在於與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明對所述患者的腫瘤綜合症對TOR激酶抑制劑治療起反應的可能性提高。
[0027]本文還提供用於預測用TOR激酶抑制劑治療患有例如佩一吉綜合症等腫瘤綜合症的患者的治療效能的方法，所述方法包括:a)從患者中獲得生物試驗樣本；b)獲得所述生物試驗樣本的選自表1的一種或多種基因的基因表達水平；c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平；其中其特徵在於與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明所述患者的所述TOR激酶抑制劑治療的治療效能的可能性提高。[0028]本文還提供針對LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變篩選患有例如佩一吉綜合症等腫瘤綜合症的患者的方法，所述方法包括:a)從患者中獲得生物試驗樣本；b)獲得所述生物試驗樣本的選自表1的一種或多種基因的基因表達水平；c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平；其中其特徵在於與具有LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明LKBl基因和/或蛋白質丟失和/或突變的可能性提高。
[0029]在本文提供的某些實施方案中，生物試驗樣本的基因表達水平採用基因mRNA測量獲得。在本文提供的某些方法和實施方案中，生物試驗樣本的基因表達水平採用RT-PCR或Affymetrix HGU133plus2獲得。在一些實施方案中，基因表達水平的比較採用R微陣列預測分析(「Prediction Analysis of Microarrays for R, PAMR^) (http: / / cran.r-project.0rg/web/packages/pamr/pamr.pdf)進行。
[0030]本文還提供包含一個或多個容器的試劑盒，所述容器裝有TOR激酶抑制劑或其藥物組合物、用於測量患者的癌或患有腫瘤綜合症的患者的基因表達水平的試劑和用於測量患者的癌或患有腫瘤綜合症的患者的基因表達水平的說明書。
[0031]在一些實施方案中，TOR激酶抑制劑是本文所述化合物。
[0032]參照旨在說明非限制性實施方案的詳細描述和實施例，可更全面的理解本實施方案。
[0033]4.附圖簡述
[0034]圖1。圖1提供採用微陣列預測分析(PAM)提取獲得的某些LKBl陽性(野生型)和陰性(LKB1基因和/或蛋白質丟失和/或突變)非小細胞肺癌細胞類型的基因表達水平的 heatmap。
[0035]圖2。圖2提供富集GeneOntology組別列表。
[0036]圖3。圖3根據所報告的DNA序列、所報告的突變、完整LKBl蛋白的存在(陽性)或不存在(陰性)(按蛋白質免疫印跡測定)列出非小細胞肺癌(NSCLC)細胞系的LKBl突變狀態。
[0037]圖4。圖4提供富集途徑組別的列表。
[0038]5.發明詳述
[0039]5.1 定義
[0040]「烷基」是飽和、部分飽和或不飽和的直鏈或支鏈非環狀烴，其具有1-10個碳原子、通常1-8個碳，或者在一些實施方案中為1-6、1-4或2-6個碳原子。代表性的烷基包括-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戍基和_正己基；而飽和支鏈烷基包括_異丙基、-仲丁基、-異丁基、-叔丁基、-異戍基、2-甲基戍基、3-甲基戍基、4-甲基戍基、2，3- 二甲基丁基等。不飽和烷基的實例尤其包括但不限於乙烯基、烯丙基、-CH=CH (CH3)、-CH=C (CH3) 2、-C (CH3)=CH2^-C(CH3)=CH(CH3) ,-C(CH2CH3) =CH2^-C = CH,-C = C(CH3) ,-C = C(CH2CH3) ,-CH2C = CH^-CH2C = C(CH3)和-CH2C = C(CH7CH3)15烷基可以是取代的或未取代的。除非另有說明，否則當本文所述烷基被稱為「取代的」時，它們可被如存在於本文公開的示例性化合物和實施方案的取代基的任一個或多個以及以下基團取代:滷素(氣、鵬、漠或氣)；烷基；羥基；烷氧基；烷氧基燒基；氣基；烷基氣基；竣基；硝基；氰1基；疏基；硫釀；亞胺；酸亞胺；脈；狐；稀胺；氣基擬基；醯基氨基；膦酸酯基(phosphonato);膦；硫代羰基；磺醯基；碸；磺醯胺；酮；醛；酯；脲；氨基甲酸酯基；肟；羥胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；醯肼；腙；疊氮化物；異氰酸酷基；異硫氰1酸酷基；氰1酸基；硫氰1酸基；氧(_ O) ;B (OH) 2或O (烷基)氣基擬基。
[0041]「烯基」為具有2-10個碳原子、通常2-8個碳原子並包括至少一個碳碳雙鍵的直鏈或支鏈非環狀烴。代表性的直鏈和支鏈(C2-C8)烯基包括-乙烯基、-烯丙基、-1- 丁烯基、_2- 丁烯基、_異丁基烯基、_1_戍烯基、_2-戍烯基、_3-甲基-1- 丁烯基、-2-甲基-2- 丁烯基、_2，3- 二甲基-2- 丁烯基、-1-己烯基、-2-己烯基、-3-己烯基、-1-庚烯基、_2_庚稀基、-3-庚烯基、-1-辛烯基、-2-辛烯基、-3-辛烯基等。烯基的雙鍵可不與或與另一個不飽和基團綴合。烯基可以是未取代或取代的。
[0042]「環烷基」是3-10個碳原子的飽和、部分飽和或不飽和的環狀烷基，其具有可被
1-3個烷基任選取代的單個環狀環或多個稠環或橋環。在一些實施方案中，環烷基具有3-8個環成員，而在其它實施方案中，環碳原子的數目的範圍為3-5、3-6或3-7。舉例來說，這類環烷基包括單環結構例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、1-甲基環丙基、
2-甲基環戊基、2-甲基環辛基等，或多環或橋環結構例如金剛烷基等。不飽和環烷基的實例尤其包括環己烯基、環戊烯基、環己二烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基。環烷基可以是取代或未取代的。舉例來說，這類取代的環烷基包括環己酮等。
[0043]「芳基」是具有單環(例如苯基)或多元稠環(例如萘基或蒽基)的6-14個碳原子的芳族碳環基。在一些實施方案中，芳基含有6-14個碳，在其它實施方案中在基團的環部分中含有6-12或甚至6-10個碳原子。具體的芳基包括苯基、聯苯基、萘基等。芳基可以是取代或未取代的。短語「芳基」還包括含有稠環的基團，例如稠合的芳族-脂族環系統(例如茚滿基、四氫萘基等)。
[0044]「雜芳基」是具有1-4個`雜原子作為雜芳環系統中的環原子的芳環系統，其中原子的其餘部分為碳原子。在一些實施方案中，雜芳基含有5-6個環原子，在其它實施方案中，在基團的環部分中含有6-9或甚至6-10個原子。合適的雜原子包括氧、硫和氮。在某些實施方案中，雜芳環系統是單環或雙環的。非限制性實例包括但不限於例如以下基團:吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、pyrο I y 1、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、苯並噻吩基、呋喃基、苯並呋喃基(例如異苯並呋喃-1，3- 二亞胺)、吲哚基、氮雜吲哚基(例如吡咯並吡啶基或IH-吡咯並[2，3-b]吡啶基)、吲唑基、苯並咪唑基(例如IH-苯並[d]咪唑基)、咪唑並吡啶基(例如氮雜苯並咪唑基、3H-咪唑並[4，5-b]吡啶基或IH-咪唑並[4，5-b]吡啶基)、吡唑並吡啶基、三唑並吡啶基、苯並三唑基、苯並噁唑基、苯並噻唑基、苯並噻二唑基、異噁唑並吡啶基、硫雜萘基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、四氫喹啉基、喹喔啉基和喹唑啉基。
[0045]「雜環基」是芳族(亦稱為雜芳基)或非芳族環烷基，其中1-4個環碳原子被選自0、S和N的雜原子獨立置換。在一些實施方案中，雜環基包括3-10個環成員，而其它這類基團具有3-5、3-6或3-8個環成員。雜環基也可與在任何環原子上(即在雜環的任何碳原子或雜原子上)的基團鍵合。雜環基烷基可以是取代或未取代的。雜環基包括不飽和，部分飽和和飽和環系統，例如咪唑基、咪唑啉基和咪唑烷基。短語雜環基包括稠環類，包括包含稠合的芳族和非芳族基團的稠環類，例如苯並三唑基、2，3-二氫苯並[1，4] 二氧雜環己烯基和苯並[1，3] 二氧雜環戊烯基。短語還包括含有雜原子的橋接的多環環系，例如但不限於喹啉基(quinuclidyl)。雜環基的代表性實例包括但不限於氮雜環丙烷基、氮雜環丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、噻唑烷基、四氫噻吩基、四氫呋喃基、二氧雜環戊烯基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、吡唑基、吡唑啉基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻唑啉基、異噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基(例如四氫-2H-吡喃基)、四氫噻喃基、氧硫雜環己烷、dioxyl、二噻烷基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、三嗪基、二氫吡啶基、dihydrodithiinyl,dihydrodithionyl >聞喊嚷基、喧琳基、Π引噪基、二氣Π引噪基、異Π引噪基、氣雜Π引噪基(吡略並吡啶基)、吲唑基、吲嗪基、苯並三唑基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並噻吩基、苯並噻唑基、苯並噁二唑基、苯並噁嗪基、benzodithiinyl、苯並氧硫雜環己二烯基、苯並噻嗪基、苯並噁唑基、苯並噻唑基、苯並噻二唑基、苯並[1，3] 二氧雜環戊烯基、吡唑並吡啶基、咪唑並吡啶基(氮雜苯並咪唑基；例如IH-咪唑並[4，5-b]吡啶基或IH-咪唑並[4，5-b]吡啶-2(3H)_酮基)、三唑並吡啶基、異噁唑並吡啶基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、喹嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基、蝶啶基、硫雜萘基、二氫苯並噻嗪基、二氫苯並呋喃基、二氫吲哚基、二氫苯並二氧雜環己烯基、四氫吲哚基、四氫吲唑基、四氫苯並咪唑基、四氫苯並三唑基、四氫吡咯並吡啶基、四氫吡唑並吡啶基、四氫咪唑並吡啶基、四氫三唑並吡啶基和四氫喹啉基。代表性的取代雜環基可以是單取代的或多於一次取代的，例如但不限於被各種取代基(例如下列取代基)2-、3-、4-、5_或6-取代或二取代的吡啶基或嗎啉基。
[0046]「環烷基烷基」是式:_烷基-環烷基的基團，其中烷基和環烷基如上定義。取代的環烷基烷基可在烷基、環烷基或基團的烷基和環烷基部分兩者處被取代。代表性的環烷基烷基包括但不限於環戊基甲基、環戊基乙基、環己基甲基、環己基乙基和環己基丙基。代表性的取代的環烷基烷基可以是單取代的或多於一次取代的。
[0047]「芳烷基」是式:_烷基-芳基的基團，其中烷基和芳基如上定義。取代的芳烷基可在烷基、芳基或基團的烷基和芳基部分兩者處被取代。代表性的芳烷基包括但不限於苄基和苯乙基和稠合的(環烷基芳·基)烷基，例如4-乙基-茚滿基。
[0048]「雜環基烷基」是式:_烷基-雜環基的基團，其中烷基和雜環基如上定乂。取代的雜環基烷基可在烷基、雜環基或基團的烷基和雜環基部分兩者處被取代。代表性的雜環基烷基包括但不限於4-乙基-嗎啉基、4-丙基嗎啉基、呋喃-2-基甲基、呋喃-3-基甲基、批啶(pyrdine)-3-基甲基、(四氫-2H-吡喃-4-基)甲基、(四氫-2H-吡喃-4-基)乙基、四氫呋喃-2-基甲基、四氫呋喃-2-基乙基和吲哚-2-基丙基。
[0049]「滷素」為氟、氯、溴或碘。
[0050]「羥基烷基」是被一個或多個羥基取代的上述烷基。
[0051]「烷氧基」為-0-(烷基)，其中烷基如上定義。
[0052]「烷氧基烷基」為_(烷基)-0-(烷基)，其中烷基如上定義。
[0053]「氨基」為式:-NH2的基團。
[0054]「烷基氨基」為式:-NH-烷基或-N(烷基)2的基團，其中各烷基獨立地如上定義。
[0055]「羧基」為式:_C (0) OH的基團。
[0056]「氨基羰基」為式:-C (O)N(Rs)2、-C (O)NH(Rs)或-C (O)NH2的基團，其中各Rs獨立地為如上定義的取代或未取代的烷基、環烷基、芳基、芳烷基、雜環基或雜環基。
[0057]「醯基氨基」為式:-NHC(0) (Rfl)或_N(烷基)C (O) (Rfl)的基團，其中各烷基和Rs獨立地如上定義。
[0058]「烷基磺醯基氨基」為式:-NHS02 (Rfl)或-N (烷基)SO2 (Rfl)的基團，其中各烷基和Rs如上定義。
[0059]「脲」為式:-N(烷基)C(O)N(Rfl)2, _N(烷基)C(O)NH(Rfl), -N(烷基)C(0)NH2, -NHC (O) N (Rfl)2, -NHC (O) NH (Rfl)或-NH (CO) NHRfl的基團，其中各烷基和Rs獨立地如上定義。
[0060]當本文所述基團(除烷基以外)被稱為「取代的」，它們可被任何合適的一個或多個取代基取代。取代基的示例性實例是存在於本文公開的示例性化合物和實施方案的那些以及滷素(氣、鵬、漠或氣);烷基；羥基；烷氧基；烷氧基烷基；氣基；烷基氣基；竣基；硝基；氰1基；疏基；硫釀；亞胺；酸亞胺；脈；狐；稀胺；氣基擬基；酸基氣基；勝酸酷基；勝；硫代羰基；磺醯基；碸；磺醯胺；酮；醛；酯；脲；氨基甲酸酯基；肟；羥胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；醯肼；腙；疊氮化物；異氰酸酯基；異硫氰酸酯基；氰酸基；硫氰酸基；氧(=O) ;B (OH)2、O(烷基)氣基擬基；環烷基，其可為單環基或桐合或非桐合的多環基(例如環丙基、環丁基、環戊基或環己基)或雜環基，其可為單環基或稠合或非稠合的多環基(例如批略烷基、喊唳基、喊嚷基、嗎琳基或唾嚷基)；單環基或桐合或非桐合的多環芳基或雜芳基(例如苯基、萘基、吡咯基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、吖啶基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、苯並咪唑基、苯並噻吩基或苯並呋喃基)芳氧基；芳烷基氧基；雜環基氧基和雜環基烷氧基。
[0061]本文所用術語「藥學上可接受的鹽」是指由藥學上可接受的無毒酸或鹼(包括無機酸和鹼和有機酸和鹼)製備的鹽。TOR激酶抑制劑的合適的藥學上可接受的鹼加成鹽包括但不限於由鋁、鈣、鋰 、鎂、鉀、鈉和鋅製成的金屬鹽或由賴氨酸、N，N』 - 二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因製成的有機鹽。合適的無毒酸包括但不限於無機酸和有機酸例如乙酸、藻酸、鄰氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、甲酸、富馬酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、穀氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、羥基乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、苯基乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸和對甲苯磺酸。具體的無毒酸包括鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。具體的鹽的實例因此包括鹽酸鹽和甲磺酸鹽。其它是本領域眾所周知的，參見例如Remington』 s PharmaceuticalSciences,第 18 版，Mack Publishing, Easton PA(1990)或 Remington:The Science andPractice of Pharmacy,第 19 版，Mack Publishing, Easton PA(1995)。
[0062]如本文所使用的並且除非另有說明，否則術語「包合物」意指TOR激酶抑制劑或其鹽，呈含有具有截留在其中的客體分子(例如溶劑或水)的空間(例如通道)的晶格或者其中TOR激酶抑制劑是客體分子的晶格的形式。
[0063]如本文所使用的並且除非另有說明，否則術語「溶劑合物」意指TOR激酶抑制劑或其鹽，其還包括通過非共價分子間力結合的化學計量的或非化學計量的量的溶劑。在一個實施方案中，溶劑合物為水合物。
[0064]如本文所使用的並且除非另有說明，否則術語「水合物」意指TOR激酶抑制劑或其鹽，其還包括通過非共價分子間力結合的化學計量的或非化學計量的量的水。
[0065]如本文所使用的並且除非另有說明，否則術語「前藥」意指可以水解、氧化或以其它方式在生物條件下起反應(體外或體內)以提供活性化合物、特別是TOR激酶抑制劑的TOR激酶抑制劑衍生物。前藥的實例包括但不限於TOR激酶抑制劑的衍生物和代謝物，其包括可生物水解部分，例如可生物水解醯胺、可生物水解酯、可生物水解氨基甲酸酯、可生物水解碳酸酯、可生物水解醯脲和可生物水解磷酸酯類似物。在某些實施方案中，具有羧基官能團的化合物的前藥是羧酸的低級烷基酯。通過使分子上存在的任何羧酸部分酯化方便地形成羧酸酯。前藥通常可採用眾所周知的方法製備，例如Burger』 s MedicinalChemistry and Drug Discovery 第 6 版(Donald J.Abraham 編輯，2001，Wiley)和 Designand Application of Prodrugs (H.Bundgaard 編輯，1985，Harwood Academic PublishersGmfh)。
[0066]如本文所使用的並且除非另有說明，否則術語「立體異構體」或「立體異構純的」意指TOR激酶抑制劑的一種立體異構體，其基本上不含該化合物的其它立體異構體。例如，具有一個手性中心的立體異構純的化合物可能基本不含化合物的相反的對映異構體。具有兩個手性中心的立體異構純的化合物基本不含化合物的其它非對映異構體。典型的立體異構純的化合物包含大於約80%重量的化合物的一種立體異構體和小於約20%重量的化合物的另一種立體異構體、大於約90%重量的化合物的一種立體異構體和小於約10%重量的化合物的另一種立體異構體、大於約95%重量的化合物的一種立體異構體和小於約5%重量的化合物的另一種立體異構體或大於約97%重量的化合物的一種立體異構體和小於約3%重量的化合物的另一種立體異構體。TOR激酶抑制劑可具有手性中心，並且可作為外消旋體、各個對映異構體或非對映異構體及其混合物出現。所有這類異構體都包括在本文公開的實施方案內，包括其混合物。這類TOR激酶抑制劑的立體異構純的形式的用途以及這些形式的混合物的用途都包括在本文公開的實施方案內。例如，包含等量或不等量的具體TOR激酶抑制劑的對映異構體的混合物可用於本文公開的方法和組合物。可採用標準技術例如手性柱或手性拆分劑，對這些異構體進行不對稱地合成或拆分。參見例如Jacques, J.等，Enantiomers, Racem`ates and Resolutions (對映異構體、外消旋體和拆分)(Wiley-1nterscience,New York,1981) ；ffilen, S.H.等，Tetrahedron33:2725(1977)；Eliel, E.L., Stereochemistry of Carbon Compounds (碳化合物的立體化學)(McGraw-Hill, NY, 1962);以及 Wilen, S.H.，Tables of Resolving Agents and OpticalResolutions (拆分劑和旋光拆分表)第 268 頁(E.L.Eliel 編輯，Univ.0f Notre DamePress, Notre Dame, IN, 1972)。
[0067]還應注意到，TOR激酶抑制劑可包括E和Z異構體或其混合物及其順式和反式異構體或混合物。在某些實施方案中，將TOR激酶抑制劑作為順式或反式異構體分離。在其它實施方案中，將TOR激酶抑制劑作為順式和反式異構體的混合物。
[0068]「互變異構體」是指彼此處於平衡的化合物的異構體。異構體的濃度將取決於化合物存在的環境，並且可根據例如化合物是固體還是在有機溶液或水性溶液中而不同。例如，在水性溶液中，吡唑可顯示下列異構體，其稱為彼此的互變異構體:
[0069]
【權利要求】
1.一種用於預測患者癌中的LKBl基因或蛋白質丟失或突變的方法，所述方法包括: a)從患者的癌中獲得生物試驗樣本； b)獲得所述生物樣本中選自表1的一種或多種基因的基因表達水平； c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平； 其中特徵在於與具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明患者的癌中LKBl基因或蛋白質丟失或突變的可能性提聞。
2.權利要求1的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平採用基因mRNA測量獲得。
3.權利要求1的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平採用RT-PCR或Affymetrix HGU133plus2 獲得。
4.權利要求1的方法，其中所述基因表達水平的比較採用PAMR進行。
5.權利要求1的方法，其中所述癌症是非小細胞肺癌或宮頸癌。
6.權利要求1的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於表1中具有負倍數變化值的一種或多種基因的上調。·
7.權利要求1的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於表1中具有正倍數變化值的一種或多種基因的下調。
8.權利要求1的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於一種或多種下列基因上調:清道夫受體A類，成員5(推定)；血纖蛋白原Y鏈；血纖蛋白原α鏈；胰島素樣4 (胎盤)；有機溶質轉運蛋白β ;磷酸二酯酶1Α，依賴於鈣調蛋白；氨甲醯磷酸合成酶1，線粒體；捲曲同源物10(果蠅)；黏蛋白5AC，寡聚粘液/形成凝膠的；三葉因子I ;瞬時受體電位陽離子通道，亞家族C，成員6 ;白介素I受體，II型；血纖蛋白原β鏈；染色體12可讀框39 ;受ΑΚ090616支持的假定基因；R-spondin3同源物(非洲爪蟾);和白介素I受體，II型。
9.權利要求1的方法，其中所述基因表達水平的特徵在於一種或多種下列基因下調:幾丁質酶3樣I (軟骨糖蛋白-39) ；odz,odd Oz/ten_m同源物2 (果蜆)；趨化因子(C-C基序)配體5 ;骨形態發生蛋白4 ;鈣磷蛋白；未表徵蛋白質L0C100131897 ;和⑶74分子，主要組織相容性複合體，II類恆定鏈。
10.一種用於治療非小細胞肺癌、宮頸癌或佩一吉綜合症的方法，所述方法包括將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有非小細胞肺癌、宮頸癌或佩一吉綜合症的患者，其中所述患者的生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於與沒有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的野生型樣本的基因表達水平相比，與具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性，且其中所述基因選自表1。
11.權利要求10的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平採用基因mRNA測量獲得。
12.權利要求10的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平採用RT-PCR或Affymetrix HGU133plus2 獲得。
13.權利要求10的方法，其中所述表達水平的比較採用PAMR進行。
14.權利要求10的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於表1所示具有負倍數變化值的一種或多種基因的上調。
15.權利要求10的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於表1所示具有正倍數變化值的一種或多種基因的下調。
16.權利要求10的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於一種或多種下列基因上調:清道夫受體A類，成員5(推定)；血纖蛋白原Y鏈；血纖蛋白原α鏈；胰島素樣4 (胎盤)；有機溶質轉運蛋白β ;磷酸二酯酶1Α，依賴於鈣調蛋白；氨甲醯磷酸合成酶1，線粒體；捲曲同源物10(果蠅)；黏蛋白5AC，寡聚粘液/形成凝膠的；三葉因子I ;瞬時受體電位陽離子通道，亞家族C，成員6 ;白介素I受體，II型；血纖蛋白原β鏈；染色體12可讀框39 ;受ΑΚ090616支持的假定基因；R-spondin3同源物(非洲爪蟾);和白介素I受體，II型。
17.權利要求10的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平的特徵在於一種或多種下列基因下調:幾丁質酶3樣I (軟骨糖蛋白-39) ；odz,odd Oz/ten_m同源物2 (果蠅)；趨化因子(C-C基序)配體5 ;骨形態發生蛋白4 ;鈣磷蛋白；未表徵蛋白質L0C100131897 ；和CD74分子，主要組織相容性複合體，II類恆定鏈。
18.一種用於治療非小細胞肺癌或宮頸癌的方法，所述方法包括針對相對於野生型存在LKBl基因或蛋白質丟失或突變來篩選患者的癌或癌症，並將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有特徵在於基因表達水平的非小細胞肺癌或宮頸癌的患者，所述基因表達水平的特徵在於與沒有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的野生型樣本的基因表達水平相比，與具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性，且其中所述基因選自表1。
19.權利要求18的方法，其中所述基因表達水平採用基因mRNA測量獲得。`
20.權利要求18的方法，其中所述基因表達水平採用RT-PCR或AffymetrixHGU133plus2 獲得。
21.權利要求18的方法，其中所述表達水平的比較採用PAMR進行。
22.權利要求18的方法，其中所述患者的癌或癌症的基因表達水平的特徵在於一種或多種下列基因上調:清道夫受體A類，成員5(推定)；血纖蛋白原Y鏈；血纖蛋白原α鏈；胰島素樣4(胎盤)；有機溶質轉運蛋白β ;磷酸二酯酶1Α，依賴於鈣調蛋白；氨甲醯磷酸合成酶1，線粒體；捲曲同源物10 (果蠅)；黏蛋白5AC，寡聚粘液/形成凝膠的；三葉因子I ;瞬時受體電位陽離子通道，亞家族C，成員6;白介素I受體，II型；血纖蛋白原β鏈；染色體12可讀框39 ;受麼1(090616支持的假定基因；R-spondin3同源物(非洲爪蟾)；和白介素I受體，II型。
23.權利要求18的方法，其中所述患者的癌或癌症的基因表達水平的特徵在於一種或多種下列基因下調:幾丁質酶3樣1(軟骨糖蛋白-39) ；odz, odd Oz/ten-m同源物2(果蠅)；趨化因子(C-C基序)配體5;骨形態發生蛋白4;鈣磷蛋白；未表徵蛋白質L0C100131897 ;和⑶74分子，主要組織相容性複合體，II類恆定鏈。
24.一種用於治療佩一吉綜合症的方法，所述方法包括將患者的基因表達水平與野生型的進行比較，並將有效量的TOR激酶抑制劑給予患有特徵在於基因表達水平的佩一吉綜合症的患者，所述基因表達水平的特徵在於與沒有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的野生型樣本的基因表達水平相比，與具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性，且其中所述基因選自表1。
25.權利要求24的方法，其中所述基因表達水平採用基因mRNA測量獲得。
26.權利要求24的方法，其中所述基因表達水平採用RT-PCR或AffymetrixHGU133plus2 獲得。
27.權利要求24的方法，其中所述基因表達水平的比較採用PAMR進行。
28.權利要求24的方法，其中所述患者的基因表達水平的特徵在於一種或多種下列基因上調:清道夫受體A類，成員5(推定)；血纖蛋白原Y鏈；血纖蛋白原α鏈；胰島素樣4(胎盤)；有機溶質轉運蛋白β ;磷酸二酯酶1Α，依賴於鈣調蛋白；氨甲醯磷酸合成酶1，線粒體；捲曲同源物10 (果蠅)；黏蛋白5AC，寡聚粘液/形成凝膠的；三葉因子I ;瞬時受體電位陽離子通道，亞家族C，成員6;白介素I受體，II型；血纖蛋白原β鏈；染色體12可讀框39 ;受八1(090616支持的假定基因；R-spondin3同源物(非洲爪蟾);和白介素I受體，II型。
29.權利要求24的方法，其中所述患者的基因表達水平的特徵在於一種或多種下列基因下調:幾丁質酶3樣I (軟骨糖蛋白-39) ；odz,odd Oz/ten_m同源物2 (果蠅)；趨化因子(C-C基序)配體5 ;骨形態發生蛋白4 ;鈣磷蛋白；未表徵蛋白質L0C100131897 ;和⑶74分子,主要組織相容性複合體，II類恆定鏈。
30.一種預測在患有癌症的患者中對用TOR激酶抑制劑治療的反應的方法，所述方法包括: a)從患者的癌中獲得生物試驗樣本； b)獲得所述生物試驗樣本的選自表1的一種或多種基因的基因表達水平； c)將所述基因表達水平與一組參比水平進行比較，所述參比水平代表沒有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平； 其中特徵在於與具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平有更高相似性的生物試驗樣本的基因表達水平，表明對所述患者的癌症的TOR激酶抑制劑治療起反應的可能性提聞。
31.權利要求30的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平採用基因mRNA測量獲得。
32.權利要求30的方法，其中所述生物試驗樣本的基因表達水平採用RT-PCR或Affymetrix HGU133plus2 獲得。
33.權利要求30的方法，其中所述基因表達水平的比較採用PAMR進行。
34.一種包含一個或多個容器的試劑盒，所述容器裝有TOR激酶抑制劑或其藥物組合物，用於測量患者的癌或患有腫瘤綜合症的患者的基因表達水平的試劑和用於測量患者的癌或患有腫瘤綜合症的患者的基因表達水平的說明書。
35.權利要求34的試劑盒，其中所述測量包括測量表1的一種或多種基因的表達水平。
36.權利要求34的試劑盒，其中所述基因表達測量說明書是RT-PCT或AffymetrixHGU133plus2 說明書。
37.權利要求35的試劑盒，其還包括用於將表達水平與一組參比水平進行比較的說明書，所述參比水平代表沒有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的生物野生型樣本的基因表達水平和具有LKBl基因或蛋白質丟失或突變的參比樣本的基因表達水平。
38.權利要求37的試劑盒，其中所述用於表達水平比較的說明書是使用PAMR的說明書。·
【文檔編號】C12Q1/68GK103857804SQ201280047570
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年8月2日 優先權日:2011年8月3日
【發明者】寧餘紅, 許衛明, 拉傑什·喬普拉, 彼得·沃蘭德, 徐水蟾 申請人:西格諾藥品有限公司