硫酸酯化箬葉多糖及其製備方法
2023-09-20 08:49:15
專利名稱：硫酸酯化箬葉多糖及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種具有抗愛滋病病毒(HIV)活性的多糖及其製備方法，確切的是涉及一種硫酸酯化箬葉多糖及其製備方法。
多糖在醫藥上作為免疫調節劑用來治療腫瘤、肝炎，具有降血脂、抗血栓、抗消化潰瘍、降血糖、誘導幹擾素的產生、促進造血功能恢復以及促進蛋白質和核酸的生物合成等方面的生物活性等功能是已知的。
多糖的來源很廣，但對不同類型的竹葉多糖藥理活性的研究主要集中在我國和日本。自六十年代以來，日本學者對竹葉(Sasaalbomarginata Makino et Shibata)多糖提取液進行了大量的藥理活性研究，其提取液的主要成分為多糖、葉綠素、木質素及礦物質等(Nakahara W等，GANN，1964 55卷，第283-288頁；Kuboyama N等，Folia pharmacol.Japan，1981，77卷，第579-596頁；Ohizumi T等J.of Medical Society of Japan，1986，49卷，第315-321頁；Shibata M等，Folia pharmacol.Japan，1975，71卷，第481-490頁)。該提取液對動物移植性實體型腫瘤具有顯著的抑制作用，並且還發現具有良好的抗炎症、抗潰瘍、增強食慾及抗痙攣作用。此外，對急性病毒性肝炎患者有較好的療效。日本將竹葉和蘆薈提取液加工成一種保健飲料，並申請了專利(JP05,184,339)。
根據聯合國公布的數字(96年)表明，在過去15年中，已有近600萬人死於愛滋病。目前，世界上有近2790萬人患上愛滋病或感染病毒，其中大部分集中在醫療條件較差的亞洲和非洲。世界上每天平均有8500人感染上愛滋病病毒。我國截止至1997年10月已有愛滋病病毒(HIV)感染者8303例，愛滋病人209例，估計實際感染數會超過報告數字的10倍。如不及時加以控制和治療，結果將不堪設想。
目前，世界上還沒有治療愛滋病的理想的特異性藥物。迄今，通過美國醫藥管理局(FDA)批准，且在國際上應用較廣的藥品有兩類一類是逆轉錄酶抑制劑，主要有疊氮胸苷(AZT)、雙脫氧次黃苷(ddI)及雙脫氧胞苷(ddC)及D4T，另一類是HIV蛋白酶抑制劑，這兩類藥物可以延緩疾病發展及死亡，但不能根治。由於這些藥物的副作用較大，易產生耐藥性，且價格昂貴(大於5000美元/年/人)，所以不適合於長期、大量臨床應用，特別是在廣大的發展中國家(感染者佔全球的90％以上)，不具有實用價值。
近年來，國外有報導表明硫酸酯化多糖具有抗愛滋病病毒作用而引起人們的廣泛重視。目前，許多經硫酸酯化的多糖，如香菇多糖、地衣多糖、古旋糖酐、裂褶多糖、木聚糖等的硫酸酯具有明顯的體外抑制HIV-1的作用。Yoshida等人在體外培養人T淋巴細胞株MT-4的實驗結果表明，未經硫酸酯化的香菇多糖和產鹼桿菌多糖在500μg/ml濃度下幾乎對HIV-1沒有抑制作用，MT-4細胞感染HIV-1的陽性率大於90％。而硫酸酯化多糖在10μg/ml濃度以上時，可完全保護MT-4細胞免受HIV-1感染(Yoshida O.等，BiochemicalPharmacology，1988，37卷，第2887-2981頁)。日本Ajinomoto公司開發的Curdlan硫酸酯(CRDS)是以1-3-β-D-葡萄糖為主鏈，硫含量為14.1％的硫酸酯多糖，已進入I期臨床試驗，能很好地為病人所耐受(Gordon M.等，J.Medicine，1995，26卷，第97-131頁)。但是仍存在許多缺陷，如增加p24抗原的產生等副作用，從而限制了其使用。
因此，尋找用於製備新的、有效的、毒性小及成本低的抗HIV-I藥物的化學物質，成為人們所關注的問題。
本發明的目的是為了提供一種具有有效抗愛滋病毒活性並且毒性小的硫酸酯化多糖以用於製備抗HIV-I的藥物。
本發明的另一目的是提供一種製備上述硫酸酯化多糖的工藝方法，以便能大量、簡易、低成本地生產上述產物。
本申請的發明人，經過長期試驗研究，達到了上述目的。提供了一種具有有效抗愛滋病病毒活性，且毒性很小的硫酸酯化箬葉多糖。
本發明的硫酸酯化箬葉多糖是由箬葉多糖經硫酸酯化後得到的。箬葉多糖是由禾本科植物箬竹(Indocalamus tesselatus(Munro)Keng f.)的葉中製備，該植物在我國主要分布在長江流域等地。箬葉的功用治清熱止血，解毒消腫，《本草綱目》記載箬葉″甘寒，無毒″，″主治男女吐血、衄血、嘔血、咯血、下血。又通小便，利肺氣，喉痛，消癰腫″。
本發明的硫酸酯化箬葉多糖是由主體結構為α(1→3)-D-木糖和β(1→6)-D-半乳糖構成的箬葉多糖經硫酸酯化後的產物，其主體結構如下
其中R為H或SO3-n為115本發明硫酸酯化箬葉多糖經高效凝膠滲透色譜法(HPLC-GPC)測得多糖每個單糖單位的羥基被硫酸根取代度(DS)為0.16-2.88，較佳為1.0-2.0，含硫量為2.8-20.1％(重量)，較佳為10.0-17.0％(重量)。
本發明產物的分子量在反應中多糖未發生降解及交聯聚合情況下，隨含硫量不同而有變化。如含硫量為9.6％(重量)時，測得重均分子量Mw為24.4萬，數均分子量Mn為11.1萬，當含硫量為15.5％(重量)時，測得重均分子量Mw為30.4萬，數均分子量Mn為14.5萬，因此，分子量可以由含硫量計算得出。
表1列出了本發明硫酸酯化箬葉多糖的性質。
表1硫酸酯化箬葉多糖的性質化合物元素分析(％)分子量比旋光度 粘度GPC MwMnMw/mn (H2O，/cm3·g-1C H S (×10-4)0.5％)箬葉多糖 37.39 6.11 17.4 20.0 8.5 2.55-43.0 8.0硫酸酯化箬葉多糖 26.62 4.49 9.6 17.4 24.4 11.1 2.20-43.2 8.3硫酸酯化箬葉多糖 27.43 5.07 15.5 17.4 30.4 14.5 2.10-44.0 17.6紅外光譜(KBr，cm-1)3370(O-H)，1650，1420，1240(S＝0)，1050，820(c-o-s)，890(吡喃環)。
本發明硫酸酯化箬葉多糖對愛滋病病毒的抑制結果如下，在HIV-1/MT4培養系中箬葉多糖的細胞毒性濃度為5mg/ml，硫酸酯化箬葉多糖為2.5mg/ml，對細胞毒性小。病毒吸附抑制實驗的結果表明沒有硫酸酯化的箬葉多糖在較高濃度，即0.32mg/ml時，可抑制HIV導致的細胞病變(如表2所示)。硫酸酯化後的箬葉多糖在10μg/ml以上可完全保護MT4細胞免受HIV的感染，有效率可提高32倍。在感染細胞抑制實驗中，沒有硫酸酯化的箬葉多糖，不能抑制感染細胞中病毒的複製(資料未列出)，硫酸酯化後的箬葉多糖可以有效地保護受HIV-1攻擊的細胞，使其不發生病變，有效地抑制感染細胞中病毒的複製(表3)，使病毒的感染滴度下降2-3個對數(表4)。量效實驗表明它的抗病毒作用與劑量呈正相關關係(表5)。
初步體內毒性實驗結果表明在劑量1g/kg體重/d，箬葉多糖表現出毒性較低，死亡率較小，小鼠可耐受，但伴隨有毒性反應，給藥後小鼠不活潑，毛髮光澤度下降，少數便稀。硫酸酯化箬葉多糖毒性較大，灌胃組死亡一半(表5)。在低劑量100mg/kg體重/d(箬葉多糖)和50mg/kg體重/d(硫酸酯化箬葉多糖)，兩種物質連續給藥28天均沒有毒性反應。
上述本發明的硫酸酯化箬葉多糖與已知的硫酸酯化多糖不同，已知的硫酸酯化多糖主要是抑制游離病毒向細胞吸咐，對感染細胞內的病毒複製沒有明顯的抑制作用。而在HIV感染者及愛滋病病人體內99％的病毒存在於細胞內。因此，治療藥物的靶標必須是感染細胞。本發明的硫酸酯化箬葉多糖的最大優點在於既可以抑制病毒的吸附，又可以控制感染細胞中病毒的複製，因而將本發明的化合物用於製備新的、有效的、毒性小而成本低的抗HIV-1藥物，具有良好的開發與應用前景。
此外，本申請還提供了一種專門用於製備上述硫酸酯化箬葉多糖的方法，該方法將由天然箬葉中提取的箬葉多糖作為原料，在無水甲醯胺或吡啶中，以吡啶-N-磺酸為硫酸酯化試劑進行酯化反應得到硫酸酯化箬葉多糖產物。該方法的具體工藝如下；將固體箬葉多糖以1∶50重量比溶解於無水甲醯胺或吡啶中，以硫酸酯化試劑和每個單糖單位為1-14∶1的摩爾比在攪拌下滴入硫酸酯化試劑吡啶-N-磺酸中，室溫攪拌下反應2-4小時後，繼續於45-100℃加熱反應1-8小時，反應結束冷卻後加1-2倍體積水稀釋，再用2.5mol/L NaOH水溶液中和至pH＝8.0，然後將該混合物用透析袋(截留分子量為10000)經自來水透析三天，蒸餾水透析一天，袋內未透過液經冷凍乾燥得淺黃色固體粉和產物硫酸酯化箬葉多糖。上述方法中，反應時的pH值由所用硫酸酯化劑的量所決定，通常為1-5，當硫酸酯化試劑比例較高，酸度大(pH＜1)，溫度較高時，多糖易被氧化、分解，產物顏色加深而變成紅褐色，但羥基取代度高(DS＝2.88)，大部分OH均被硫酸酯化。若硫酸酯化試劑比例太低，產率較高，但取代度低(DS＝0.16).採用反應溫度45℃可得到較佳的結果。
上述方法中所述的吡啶-N-磺酸，是通過在三頸瓶中，在冰浴上劇烈攪拌下，按1-3∶1的體積比將氯磺酸滴入到吡啶中得到，此時有大量HCl釋放，瓶中有白色固體硫酸酯化試劑即吡啶-N-磺酸。
上述方法中所述的箬葉多糖，其製備工藝如下將幹箬葉搗碎後在乙酸乙酯中浸泡過夜，以去除表面脂質，分離掉乙酸乙酯後，洗盡UY晾乾，加入5％(重量)NaOH(含0.05％(重量)NaBH4)溶液在N2保護下加熱至60℃提取，保持3小時，然後離心分離，提取液用冰乙酸中和再次離心分離濃縮上清液，加入乙醇沉澱多糖，放置4小時後，離心得棕黑色粗多糖，再溶於少量蒸餾水，用濃氨水調pH＝8.0於40-50℃攪拌下滴入20％H2O2脫色，然後用稀HCl中和至pH＝7.0，用Savag方法(氯仿∶戊醇為4∶1混和振蕩)等體積萃取除去蛋白質，濃縮至小體積，置於透析袋(截留分子量為10000)中，用自來水透析3天，蒸餾水透析一天，經冷凍乾燥得淡黃色箬葉多糖。經測定，其重均分子量Mw為20萬，數均分子量Mn為8.5萬。
由於箬葉中多糖多以半纖維素形式存在，本發明採用NaOH水溶液提取，產率可大大提高。在提取過程中，採用還原劑NaBH4及N2氣保護，短時間進行提取，從而有效地避免了多糖的降解。
採用H2O2在溫和條件下進行脫色，改進了常規的採用活性炭、離子變換柱等方法脫色，避免了這兩種方法中吸附性大、產率低、脫色效果不理想等缺點。
本發明所用箬葉來源於我國鄂西恩施地區，原料採集容易，每年平均可大量採集。本發明工藝方法較為簡單，所採用的化學試劑價格低廉，不用特殊設備，生產成本低，有利於工業進一步開發利用。
以下的實施例進一步說明了本發明的產品及方法，其中所用的試劑除有特殊說明外，均為一般化學純試劑，所用百分數均為重量百分數。
實施例1取幹箬葉500g(含水量小於1重量％)搗碎，用500ml乙酸乙酯浸泡過液，以除去表面脂質。除去乙酸乙酯後，洗盡晾乾。加入5％NaOH(含0.05％NaBH4)溶液1L提取，在N2氣保護下，加熱至60℃，保持3小時。3000rpm離心10分鐘，分離提取液和殘渣，提取液用冰乙酸中和。再次3000rpm離心10分鐘，分離得沉澱及上清液，將上清液濃縮至100-150ml，加入4倍體積95％乙醇沉澱多糖，放置4小時後，離心得棕黑色粗多粗多糖。再溶於少量蒸餾水，用濃氨水調pH＝8，於50℃攪拌下滴入20％H2O2脫色，然後用稀HCl中和至pH＝7。用Savag方法(氯仿二戊醇為4∶1，混和振蕩)等體積萃取蛋白質5次以後，直至紫外光譜檢測無蛋白質(280nm)和核酸(260nm)等雜質吸收峰。濃縮至小體積，置於透析袋(截留分子量為10000，Sigma公司)中，用自來水透析3天，蒸餾水透析1天，除去無機鹽及低分子雜質。袋內未透過液經冷凍乾燥，得淡黃色箬葉多糖2.22g(產率0.444％)。
實施例2(1)在三頸瓶中，在冰浴劇烈攪拌下將1.0ml氯磺酸緩慢滴入到1.0ml吡啶中，有大量白色HCl釋放，瓶中有白色固體吡啶-N-磺酸生成，反應約30-40min。在冰浴下可保存一周。
(2)稱取100mg箬葉多糖，溶解於5ml無水甲醯胺中，攪拌下滴加(1)中，100℃反應1小時。反應結束，冷卻後加10ml H2O和7.5ml 2.5mol/L NaOH中和調pH＝8.0。該混合物用透析袋(截留分子量為10,000)對自來水透析3天，蒸餾水透析1天，袋內未透過液經冷凍乾燥後即得紅褐色固體粉末產物，32.5mg硫酸酯箬葉多糖。含S20.1％，每個單糖單位的的羥基取代度(DS)為2.88，即糖鏈上的自由羥基大部分被硫酸根基團所取代。
實施例3(1)在三頸瓶中，在冰浴劇烈攪拌下將0.21ml氯碘酸緩慢滴入到0.1ml吡啶中，有大量白色HCl釋放，瓶中有白色固體生成，反應約10min。
(2)稱取100mg箬葉多糖，溶解於10ml無水吡啶中，攪拌下滴加(1)中，室溫反應2.5小時，45℃反應2小時。反應結束，同實施例1中(2)處理得淺黃色固體粉末產物122.5mg硫酸酯多糖，含S9.6％，DS為0.72。
實施例4(1)在三頸瓶中，在冰浴劇烈攪拌下將0.3ml氯磺酸緩慢滴入到0.1ml吡啶中，有大量白色HCl釋放，瓶中有白色固體生成，反應約15min。在冰浴下可保存一周。
(2)稱取100mg箬葉多糖，溶解於5ml無水甲醯胺中，攪拌下滴加(1)中，室溫反應2.5小時，45℃反應2小時。反應結束，同實施例1中(2)處理得淺黃色固體粉末產物32.2mg硫酸酯多糖，含S13.9％，DS為1.27。實施例5(1)在三頸瓶中，在冰浴劇烈攪拌下將2.1ml氯磺酸緩慢滴入到1ml吡啶中，有大量白色HCl釋放，瓶中有白色固體生成。
(2)稱取1g箬葉多糖，溶解於50ml無水甲醯胺中，攪拌下滴加(1)中，室溫反應2.5小時，60℃反應4小時。反應結束，同實施例中(2)處理得淺黃色固體粉末產物740mg硫酸酯多糖，含S15.5％，DS為1.57。實施例6(1)在三頸瓶中，在冰浴劇烈攪拌下將5ml氯磺酸緩慢滴入到2.5ml吡啶中，有大量白色HCl釋放，瓶中有白色固體生成。
(2)稱取2.57g箬葉多糖，溶解於125ml無水甲醯胺中，攪拌下滴加(1)中，室溫反應2.5小時，60℃反應4小時.反應結束，同實施例1中(2)處理得淺黃色固體粉末產物2.41g硫酸酯多糖，含S 13.6％，DS為1.23。實施例7(1)在三頸瓶中，在冰浴劇烈攪拌下將2.1ml氯磺酸緩慢滴入1ml吡啶中，有大量白色HCI釋放，瓶中有白色固體生成。
(2)稱取1g箬葉多糖，溶於20ml無水吡啶中，攪拌下滴加(1)中，室溫反應8小時。反應結束，同實施例1中(2)處理得淺黃色固體粉末產物847mg硫酸酯多糖，含S 2.8％，DS為0.16。
對本發明的硫酸酯化箬葉多糖產物進行了抗病毒活性試驗，以下列出了試驗的實例，其中所用的硫酸酯化箬葉多糖均是含硫量為15.5％(重量)，取代度(DS)為1.57。
例1(1)以HIV-1病毒引起的MT4細胞病變(CPE)作為評價藥效的指標。在96孔微量培養板中將藥物以RPMI-1640培養液作2倍系列稀釋，每孔100μl，每個濃度平行3孔。同時設細胞以及病毒對照，分別加入RPMI-1640培養液150μl及100μl。然後加入50μl 200TCID50病毒液(細胞對照除外)及50μl細胞。37℃，5％CO2條件下培養。6天後觀察CPE。實驗重複3次。
(2)藥物對細胞毒性；將被檢藥物在96孔微量培養板中以RPMI-1-1640培養作2倍系列稀釋，每孔100μl，每個濃度各3孔；然後加入100μl MT-4細胞。37℃培養6天後，以臺盼藍染色法計數活細胞數。細胞數低於正常對照組的75％被認為顯示細胞毒性。將導致細胞毒性的最小藥物濃度作為毒性濃度。結果見表2。表2.箬葉多糖對HIV-1感染MT4細胞的抑制作用化合物 細胞毒性濃度有效抑制濃度(mg/ml)(mg/ml)箬葉多糖 5 0.32硫酸酯化箬葉多糖 2.50.010例2以HIV-1(200 TCID50)接種於MT-4細胞(1×106/ml)，37℃孵育1小時，洗淨後，將細胞接種於96孔微量培養板(含硫酸酯化箬葉多糖625μg/ml)。6天後，觀察細胞病變，收集培養上清，測定p24抗原及細胞存活率。實驗1-4同時設對照組，細胞病變均為+，細胞存活率小於30％，p24抗原抑制率為0。結果見表3。
表3.硫酯酯化箬葉多糖對HIV感染的MT-4細胞的保護作用和抑制病毒複製的作用細胞病變細胞存活率1(％)p24抗原抑制率(％)對照組 + ＜30 0實驗1- 131.4 未做實驗2- 100.5 未做實驗3- 118.0 78.5實驗4- 105.0 84.4例3以HIV-1(200 TCID50)接種於MT-4細胞(1×106/ml)，37℃孵育1小時，洗淨後，將細胞接種於96孔微量培養板(板內含有硫酸酯化箬葉多糖10或160μg/ml)。培養一周，每三天換液1次(液體中含有初始濃度的藥物)，收集培養上清，將其再接種於MT-4細胞，培養一周，觀察細胞病變，計算TCID50。結果見表4。
表4.硫酸酯化箬葉多糖可以使病毒的感染滴度下降2-3個對數硫酸酯化箬葉多糖(μg/ml) TCID50160 10110 1020 104例4以HIV-1(200 TCID50)接種於MT-4細胞(1×106/ml)，37℃孵育1小時，洗淨以後，將細胞接種於96孔微量培養板(板內含有不同濃度的藥物)。培養6天，收集上清，測定p24抗原及細胞存活率(表5)。表5.硫酸酯化箬葉多糖對感染細胞的保護作用和對病毒複製的抑制作用與劑量呈正相關關係硫酸酯化箬葉多糖(μg/ml)細胞存活率(％) p24抗原抑制率(％)0 1000.6 2002.5 3501050 304070 45156 90 55625 100 78例5藥物體內毒性實驗(1)取C57BL/6雌性小鼠30隻，隨機分為3組，每組10隻，用藥物觀察7天，採用灌胃給藥方式。設正常對照組及藥物組，正常對照組給等量生理鹽水。每隻0.5ml，劑量1g/kg/d，連續7天。觀察動物在實驗前、後的體重變化，活動能力、毛髮光澤及糞便狀況，計算存活率(表6)。
(2)取C57BL/6雌性小鼠50隻，隨機分為5組，每組10隻。用藥物觀察7天，採用灌胃和腹腔注射兩種給藥方式。設正常對照組及藥物組，正常對照組給等量生理鹽水。每隻0.5ml，劑量50-100ml/kg/d，連續28天。觀察動物在實驗前、後的體重變化，活動能力、毛髮光澤及糞便狀況，計算存活率(表6)。表6.箬葉多糖及硫酸酯化箬葉多糖對C57BL/6J小鼠的毒性實驗結果分組 劑量 給藥方式 小鼠數量 死亡率 存活率mg/kg/d 實驗前 實驗後 DeathSurvival(％)對照組 灌胃 10 10 0100箬葉多糖 1000灌胃 10 8 2 80硫酸酯化箬葉多糖 1000灌胃 10 5 5 50對照組 灌胃 10 10 0100箬葉多糖 100灌胃 10 10 0100硫酸酯化箬葉多糖 50灌胃 10 10 0100對照組 腹腔注射 10 10 0100箬葉多糖 100 腹腔注射 10 10 0100硫酸酯化箬葉多糖 50 腹深注射 10 10 0100
權利要求
1.一種硫酸酯化箬葉多糖，所述多糖是由主體結構為α(1→3)-D-木糖和β(1→6)-D-半乳糖構成的箬葉多糖經硫酸酯化後的產物，其主體結構如下
其中R為H或SO3-n為115
2.權利要求1所述的硫酸酯化箬葉多糖，其特徵在於所述多糖每個單糖單位的羥基被硫酸根取代度為0.16-2.88，含硫量為2.8-20.1％(重量)。
3.權利要求1所述的硫酸酯化箬葉多糖，其特徵在於所述多糖每個單糖單位的羥基被硫酸根取代度為1.0-2.0，含硫量為10.0-17.0％(重量)。
4.一種製備權利要求1所述硫酸酯化箬葉多糖的方法，其特徵在於所述方法包括如下工藝步驟將固體箬葉多糖溶解於無水甲醯胺或吡啶中，以硫酸酯化試劑和每個單糖單位為1-14∶1的摩爾比在攪拌下滴入硫酸酯化試劑吡啶-N-磺酸中，室溫攪拌下反應2-4小時後，繼續於45-100℃加熱反應1-8小時，反應結束冷卻後加水稀釋，再用NaOH水溶液中和至pH＝8.0，然後將該混合物用透析袋經自來水透析三天，蒸餾水透析一天，袋內未透過液經冷凍乾燥即得本發明產物。
5.權利要求4所述的方法，其特徵在於所述固體箬葉多糖是由以下方法製得將幹箬葉搗碎後在乙酸乙酯中浸泡過夜，分離掉乙酸乙酯後加入5％(重量)NaOH(含0.05％(重量)NaBH4)溶液在N2氣保護下加熱至60℃提取，然後離心分離，提取液用冰乙酸中和後再次離心分離，濃縮上清液，加入乙醇沉澱多糖，放置4小時後，離心得棕黑色粗多糖，再溶於少量蒸餾水，用氨水調pH＝8.0，於40-50℃攪拌下滴入20％H2O2脫色，然後用稀HCl中和至pH＝7.0，用Savag(氯仿∶戊醇為4∶1混和振蕩)等體積萃取除去蛋白質後濃縮至小體積，置於透析袋中，用自來水透析3天，蒸餾水透析1天，經冷凍乾燥得到純箬葉多糖產物。
6.權利要求4所述的方法，其特徵在於所述硫酸酯化試劑吡啶-N-磺酸是由以下方法製得在三頸瓶中，在冰浴上劇烈攪拌下，按1-3∶1的體積比將氯磺酸滴入到吡啶中，此時有大量HCl釋放，瓶中有白色固體即吡啶-N-磺酸。
7.權利要求4所述的方法，其特徵在於所述固體箬葉多糖溶於無水甲醯胺或吡啶的重量比為1∶50。
8.權利要求4所述的方法，其特徵在於在所述室溫下反應2-4小時後，繼續反應時加熱溫度為45℃。
全文摘要
本發明公開了一種由主體結構為α(1→3)－D－木糖和β(1→6)－D－半乳糖構成的箬葉多糖經硫酸酯化後的產物。該酯化的多糖可保護MT－4細胞免受人免疫缺陷病毒1型(HIV－1),即愛滋病病毒感染,可以有效保護受病毒感染的細胞,使其不發生病變,抑制感染細胞中病毒的複製。同時,本發明還公開了製備上述硫酸酯化箬葉多糖的方法,該方法通過箬葉多糖的無水甲醯胺或吡啶溶液,以吡啶－N－磺酸為硫酸酯化試劑,由SO
文檔編號A61K31/715GK1193023SQ98101638
公開日1998年9月16日 申請日期1998年4月24日 優先權日1998年4月24日
發明者陳春英, 蔣巖, 周井炎, 邵一鳴, 徐輝碧, 張輝, 裴麗健 申請人:中國預防醫學科學院