一種婦炎康片的檢測方法
2023-09-20 18:36:10
專利名稱：一種婦炎康片的檢測方法
技術領域：
本發明屬於中藥檢測領域，涉及一種婦炎康片的檢測方法，更具體地說是檢測婦炎康片中芍藥苷的方法，
背景技術：
婦炎康片以丹參、赤芍、當歸、醋延胡索、炒川楝子、醋香附、醋三稜、醋莪朮、山藥、 炒芡實、苦參、黃柏、土茯苓等13味中藥組成，經過中藥材炮製、提取、濃縮、乾燥、粉碎、制粒、壓片、包衣而成，為純中藥製劑。方中丹參、赤芍、當歸活血化瘀，為君藥，醋延胡索、炒川楝子、醋香附合用行氣解鬱止痛，加之醋三稜、醋莪朮增強行氣止痛兼軟堅散結，山藥、炒芡實滋腎止帶，苦參、黃柏清熱燥溼，土茯苓解毒利溼，諸藥配合可達到活血化瘀，清熱解毒、 軟堅散結、止痛利溼的目的，能消除炎症，解除病人腰腹疼痛，減少白帶，有治癒慢性盆腔炎等婦科炎症的療效。具有清熱利溼，理氣活血，散結消腫作用。用於溼熱下注，毒淤互阻所治帶下病。症見帶下量多、色黃、氣臭、少腹痛、腰骶痛，口苦咽幹，陰道炎、慢性附件炎、慢性盆腔炎見上述證候者。赤芍是方中的君藥，而原質量標準中沒有赤芍的檢測方法，所以增加赤芍活性成分的檢測，具有保證產品質量意義。赤苟為毛茛科植物苟藥 Paeonia lactiflora Pall.或川赤苟 Paeonia veitchii Lynch的乾燥根。味苦，微寒。歸肝經。具有清熱涼血，散瘀止痛作用。用於溫毒發斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝鬱脅痛，經閉痛經，症瘕腹痛，跌扑損傷，癰腫瘡瘍。藥理作用1.抗血栓形成作用赤芍煎劑15_20g(生藥)/kg給大鼠灌胃，使血栓形成時間明顯延長，長度縮短，重量減輕；凝血酶原時間和白陶土部分凝血活酶時間延長，優球蛋白溶解時間縮短，表明對血凝有顯著抑制作用。赤芍提取液125-250mg(生藥)/ml，除使凝血酶原時間、部分凝血活酶時間明顯延長外，250mg(生藥)/ml也明顯抑制凝血酶凝集牛纖維蛋白原，在500 1000mg/ml時均完全不凝。此外能激活纖溶酶原，使凝固的纖維蛋白溶解，因此赤芍通過抑制凝血酶和激活纖溶酶原而發揮抗血栓作用。赤芍精(d-兒茶精， d-catechin) 200mg/只灌服，每日1次，連續46日，使高脂飼料飼養的大鼠血小板聚集時間， 血小板血栓形成時間和血栓形成時間顯著延長，血栓長度和溼重顯著低於對照組。赤芍精對高粘滯血冠心病患者也有改善血液流變性作用，使中、低切速下全血粘度降低，紅細胞電泳時間延長，血小板聚集性降低，草芍藥浸膏片能使肺原性心臟病患者的全血粘度、血漿粘度和血細胞比容明顯降低。2.抗血小板聚集作用赤芍提取物在體外對腎上腺素、二磷酸腺苷(ADP)、烙鐵頭蛇毒(TMVA)和花生四烯酸(AA)誘導的血小板聚集均有顯著抑制作用，並使血小板粘附與血小板第三因子活性降低，血小板內cAMP含量升高。赤芍成分及其衍生物801、802在 5X10-4 5X 10-3ml/L時對ADP和膠原誘導的兔血小板聚集均有明顯抑制作用，其中802 作用最強，對ADP誘導的血小板聚集尚有解聚作用。3藥的抗血小板聚集作用與降低大鼠肝線粒體氧耗量、呼吸控制率和減少磷/氧(P/0)比值等作用頗為一致，表明3藥的抗血小板作用與幹擾血小板的能量代謝有關。赤芍精抑制兔富血小板血漿(PRP)與AA孵育時血栓烷A2(TXA》樣物質的生物合成，使其生成物對兔主動脈條的收縮幅度顯著降低，表明赤芍精抑制血小板聚集與對抗TXA2的促聚集作用有關。給冠心病心絞痛患者靜滴赤芍精可使擴大聚集型血小板的百分數與聚集數顯著減少，表明能使增高的血小板表面活性和聚集性明顯降低。上述實驗表明，赤芍抑制血小板聚集的機制可能與幹擾血小板的能量代謝，抑制 TXA2的生物合成及提高血小板內cAMP含量等有關。3.降血脂和抗動脈硬化作用赤芍浸膏片5g(生藥)/kg，每日服1次，連用10-15 星期，使高脂血兔的血漿總膽固醇(Tch)，三醯甘油(TG)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-Ch)、 極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-Ch)顯著降低；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-Ch)及HDL2_Ch顯著高於對照組；Tch/HDL-Ch, Tch/HDL2_Ch，LDL-Ch/HDL-Ch 和 LDL_Ch/HDL2_Ch 比值顯著降低，同時使高脂血症所致血栓烷A2/前列環素(TXA2/PGI2)比值趨於正常。此外並可降低血漿過氧化脂質(LPO)，動脈壁脂質、鈣和磷脂及主動脈斑塊面積。赤芍抗動脈硬化的機制可能與改善脂蛋白組分比值、降低血漿過氧化脂質、減少鈣沉積於動脈壁，抑制血小板聚集，調節 TXA2/PGI2平衡和激活腺苷酸環化酶而增加動脈壁內cAMP濃度等有關。4.對心血管系統的影響赤芍(草芍藥)煎劑對離體蟾蜍心臟和家兔在位心臟，小劑量(1 0.5,0. 05ml)輕度抑制，使心率減慢，搏出量減少；大劑量(1 0.5，0. 15ml)明顯抑制，並有傳導阻滯。血管灌流使蟾蜍內臟、後肢和離體兔耳血管輕度擴張。以0.2%赤芍注射液灌流大鼠離體心臟，使冠脈流量增加觀.4%。給麻醉犬動脈注射也使冠脈流量增加，靜脈注射除增加冠脈流量外，也使外周阻力降低，血壓下降；這些作用不受利血平預處理影響，可能為直接作用。給小鼠腹腔注射赤芍注射液，使心肌86Rb攝取量增加，表明使心肌營養血流量增加，此作用可被普萘洛爾抑制，表明與受體有關。對大鼠燙傷後早期出現的心臟功能降低，赤芍注射液IOg (生藥)/kg灌胃，有一定緩解和改善作用。赤芍注射液 lg/kg肌內注射，對實驗性肺動脈高壓兔有治療和預防作用，使肺血管擴張、肺血流改善、肺動脈壓降低，心輸出量增加，心功能改善。赤芍注射液對肺源性心臟病患者也有擴張肺血管，降低肺動脈壓和肺血管阻力，增加心輸出量，改善右心功能和血液流變性等作用。草芍藥浸膏片對肺源性心臟病患者也有相似作用。赤芍注射液40g(生藥)/kg和80g(生藥)/ kg腹腔注射，明顯延長小鼠常壓缺氧的存活時間。8g/kg靜脈注射對腦垂體後葉素所致大鼠急性心肌缺血有明顯保護作用。40g/kg灌胃，也能延長小鼠減壓缺氧的存活時間。5.抗腫瘤作用赤芍正丁醇提取物(赤芍D)1 2g/kg腹腔注射，對小鼠S180實體瘤的抑制率為31%-49%。赤芍水提取物(赤芍A)或70%乙醇提取物(赤芍C)單用對S180實體瘤無明顯作用，當與閾下劑量的環磷醯胺合用時則有明顯抑制作用；赤芍A、C 對615小鼠白血病無明顯作用，而與小劑量甲氨蝶呤合用時，可顯著延長615白血病小鼠的生存時間。腫瘤組織中的cAMP含量明顯低於正常組織，赤芍A、C、D可分別增加S180實體瘤、S180腹水癌或Lewis肺癌組織中的cAMP水平，此作用可能與抗癌或抗癌增效作用有關。 S180實體瘤小鼠的血漿纖維蛋白含量比正常高2-3倍，赤芍A2g/kg腹腔注射，可使其明顯降低，此作用也可能與抗癌增效有關。赤芍A或C單用促進Lewis肺癌自發性轉移，小劑量環磷醯胺也無明顯影響，但與赤芍A合用可顯著減少此肺癌轉移。
6.保肝作用赤芍注射液3. 3mg/ml, 1. 67mg/ml和0. 7mg/ml，對體外培養肝細胞的 DNA合成有明顯促進作用，對肝細胞再生和肝功能恢復有良好影響。赤芍注射液3. 75g/kg 靜脈注射，對D-半乳糖胺所致大鼠肝損傷有明顯保護作用，使動物存活率增加，肝臟萎縮與丙氨酸轉氨酶明顯低於對照組，FN(單核-巨噬細胞系統的主要調理素)高於對照組。 保肝機制可能是提高大鼠血漿纖維聯結蛋白(PFN)的水平，從而增強網狀內皮系統的吞噬功能和加強調理素活性，以保護肝細胞，防止肝臟免疫損傷和促進肝細胞再生。赤芍801， 2%ig/kg腹腔注射，每日1次，連續2星期，對大鼠肝臟和心臟羧基酯酶(CEase)活性均有明顯誘導作用，此作用有促進體內水解過程，促進體內毒物排洩的作用。d-兒茶精IOOmg/ kg或50mg/kg腹腔注射，對乙醇誘導的小鼠肝線粒體急性損傷有保護作用，能降低模型動物肝線粒體膜脂質流動性，增加肝線粒體還原型谷臉甘肽(GSH)含量，降低Ca葉+攝取和脂質過氧化物生成，通過對抗乙醇的毒素作用，緩解肝線粒體膜結構的急性損傷。7.其他作用赤芍成分沒食子酸的衍生物沒食子酸丙酯具有清除氧自由基的能力， 能明顯抑制硫酸亞鐵和維生素C等誘導的線粒體腫脹和脂質過氧化反應，可保護線粒體結構和功能的正常。赤芍對正常離體豚鼠迴腸無明顯作用，但能解除乙醯膽鹼所致腸痙攣。赤芍正丁醇提取物3g/kg皮下注射可促進網狀內皮系統的吞噬功能，增加肝臟重量，對溶血素生成與遲髮型超敏反應無明顯影響。川赤芍提取物對羥基甲基戊二酸輔酶A 和鈣離子通道阻滯劑受體有顯著抑制作用。赤芍在體外對痢疾桿菌、傷寒桿菌和溶血性鏈球菌有較強抑制作用。草芍藥煎劑灌胃，可使家兔血糖暫時升高，窄葉芍藥水-醇提取物有顯著鎮靜和一定的鎮痛作用，還能提高胃液的酸度，增進食慾和消化功能。從上述文獻報導表明，赤芍及其有效成分芍藥苷的藥理作用與婦炎康片的臨床作用是相一致的。因此對婦炎康片中的芍藥苷進行檢測是非常必要的，在現有的婦炎康片質量標準中，包括中國藥典中婦炎康片標準中，均未見對赤芍有效成分芍藥苷的檢測方法。由於婦炎康片是中藥複方製劑，所含成分極為複雜，各成分之間採用一般的方法很難分離開，本法是將赤芍中的一種有效成分-芍藥苷從樣品中分離出來，採用高效液相色譜法檢測芍藥苷含量。
發明內容
本發明提供一種婦炎康片檢測方法，採用高效液相色譜法，檢測測定婦炎康片中的芍藥苷。本發明包括下列步驟(a)色譜條件選擇色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；檢測器為紫外檢測器；乙腈0. 磷酸=60 90 40 10為流動相；檢測波長為230nm，理論塔板數按芍藥苷峰計算應不低於2500 ；(b)供試品溶液製備取本品50g，研細，取0. 5 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加入乙醇25ml，浸泡0. 5h,超聲處理30min，功率250W，頻率250KHz，放冷，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水30ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合併正丁醇液，搖勻，取正丁醇液5 15ml，蒸乾，殘渣加甲醇溶解，並轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；(c)對照品溶液製備精密稱取芍藥苷對照品適量，置5ml量瓶中，用甲醇製成每毫升中含芍藥苷0. 05 0. 15mg的對照品溶液；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 15ul，注入液相色譜儀，測定，按外標法計算，即得。本發明的一種實施方式是，包括如下步驟(a)色譜條件選擇色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；檢測器為紫外檢測器；乙腈0.1%磷酸=85 15為流動相；檢測波長為230nm ；理論塔板數按芍藥苷峰計算應不低於2500 ；(b)供試品溶液製備取本品50g，研細，取1. 0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0. 5h,超聲處理30min，功率250W，頻率250KHz，放冷，濾過，濾液蒸乾， 殘渣加水30ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合併正丁醇液，搖勻，取正丁醇液10ml，蒸乾，殘渣加甲醇溶解，並轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；(c)對照品溶液製備精密稱取芍藥苷對照品適量，置5ml量瓶中，用甲醇製成每毫升中含芍藥苷0. Img的溶液，即得；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，按外標法計算，即得。本發明是通過大量試驗所得到的切實可行的方法，本方法具有操作簡便、穩定、精密度高、重現性好、易掌握的特點，達到了有效控制藥物質量的發明目的。
具體實施例方式對於本領域技術人員而言，根據本發明所公開的技術內容，本領域技術人員將很清楚本發明的其它實施方案，本發明實施例僅作為示例。在不違反本發明主旨及範圍的情況下，可對本發明進行各種改變和改進，但只要使用本發明所述的檢測方法，均在本發明的保護範圍之內。實驗例芍藥苷含量測定方法的建立1.方法1. 1儀器與試劑LC-10A高效液相色譜儀；紫外檢測器；N2000工作站；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。1. 2色譜條件色譜柱十八烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6mm X 250mm)；乙腈-0. 磷酸(85 15)為流動相；檢測波長為230nm。理論塔板數按芍藥苷計算應不低於2500。2.對照品的來源及純度芍藥苷對照品，購自中國藥品生物製品檢定所，採用反相高效液相色譜法歸一化法標定，色譜條件同上，進樣量 ο μ 1，純度為芍藥苷99. 71 %。3.方法學考察3. 1流動相的選擇比較流動相(1)乙腈0. 磷酸=85 15 ； (2)乙腈0. 1% 磷酸=80 20 ； (3)乙腈0. 磷酸=90 10 ； (4)乙腈無水乙醇=75 25，結果流動相(1)中芍藥苷峰達到基線分離，分離度很好，並列入正文。3. 2測定波長的選擇經測定芍藥苷紫外吸收光譜，芍藥苷最大吸收波長為218nm， 屬於末端吸收，在此波長處，基線嚴重漂移，參考2010版藥典二部148頁赤芍的含量測定條件選擇230nm作為檢測波長。3. 3系統適用性試驗根據上述確定的條件，得到赤芍對照品及樣品的色譜圖，計算
6其理論塔板數N = 2500。3. 4供試品提取條件的選擇試驗參考2010年版藥典赤芍的含量測定的樣品溶解方法，分別採用甲醇50ml，25ml、20ml、IOml，結果見表1。表1不同溶解方法的樣品含量測定
權利要求
1.一種婦炎康片的檢測方法，其特徵在於包括下列步驟(a)色譜條件選擇色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；檢測器為紫外檢測器； 乙腈0. 1%磷酸=60 90:40 10為流動相；檢測波長為230nm，理論塔板數按芍藥苷峰計算應不低於2500 ；(b)供試品溶液製備取本品50g，研細，取0.5 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0. 5h,超聲處理30min，功率250W，頻率250KHz，放冷，濾過，濾液蒸乾， 殘渣加水30 ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25 ml，合併正丁醇液，搖勻，取正丁醇液5 15 ml，蒸乾，殘渣加甲醇溶解，並轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；(c)對照品溶液製備精密稱取芍藥苷對照品適量，置5ml量瓶中，用甲醇製成每毫升中含芍藥苷0. 05 0. 15mg的對照品溶液；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 15ul，注入液相色譜儀， 測定，按外標法計算，即得。
2.如權利要求1所述的婦炎康片的檢測方法，其特徵在於包括如下步驟(a)色譜條件選擇色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；檢測器為紫外檢測器； 乙腈0. 1%磷酸=85:15為流動相；檢測波長為230nm ；理論塔板數按芍藥苷峰計算應不低於 2500 ；(b)供試品溶液製備取本品50g，研細，取1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0. 5h,超聲處理30min，功率250W，頻率250KHz，放冷，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水30 ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25 ml，合併正丁醇液，搖勻，取正丁醇液10 ml，蒸乾，殘渣加甲醇溶解，並轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；(c)對照品溶液製備精密稱取芍藥苷對照品適量，置5ml量瓶中，用甲醇製成每毫升中含芍藥苷0. Img的溶液，即得；(d)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，按外標法計算，即得。
全文摘要
本發明涉及一種婦炎康片的檢測方法，屬於中藥檢測領域。包括下列步驟供試品溶液的製備，色譜條件選擇色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；檢測器為紫外檢測器，乙腈-0.1%磷酸為流動相，檢測波長為230nm;對照品溶液的製備，測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，按外標法計算，即得。本方法具有操作簡便、穩定、精密度高、重現性好、易掌握的特點，達到了有效控制藥物質量的發明目的。
文檔編號G01N30/06GK102279235SQ20111021686
公開日2011年12月14日 申請日期2011年8月1日 優先權日2011年8月1日
發明者於翠霞, 王旭佳, 蔡蕾 申請人:吉林省中研藥業有限公司