一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法
2023-09-18 12:47:30 1
專利名稱：：一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法
技術領域：
：本發明屬於醫藥質量檢測
技術領域：
，涉及一種中成藥的質量檢測方法，具體涉及一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法。
背景技術：
：現有技術中，原申請號為200710152383.4，名稱為"一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物及其製備方法"的專利，公開了一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物，其是由血竭、水姪、三稜、莪朮、土鱉蟲、大黃、桃仁、蛇床子、白礬、黃萃、黃芪、白芍、甘草經過研磨、提揮髮油、乙醇提取、濃縮、混合等工序製成的口服固體製劑。該發明屬中藥製劑，對人體無毒副作用，且原料藥資源豐富，工藝簡單易行，降低了生產成本，製備方法合理，使藥物成分具有更強的生理活性，提高藥材利用率，增強療效。標準中以血竭素高氯酸鹽為定量指標，關於血竭素高氯酸鹽的含量測定方法，我們釆用目前最先進的高效液相色譜法，因其具有靈敏、準確、重現性好等特點；故參照有關資料，選擇用高效液相色譜法測定該製劑中血竭素髙氯酸鹽的含量，作為控制該製劑質量的含量測定方法。
發明內容本發明的目的是為克服
背景技術：
的不足，而提供一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法。為了實現上述目的，本發明採用的技術方案是一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法，其特徵在於該方法包括以下步驟(1)取所述藥物組合物5g，加甲醇1030mL,浸漬50~80分鐘，濾過，取濾液525mL,蒸乾，殘渣加水5-25mL使溶解，再加鹽酸0.5~1.5mL，置水浴中加熱20~40分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2~3次，每次1030mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇0.51.5mL使溶解，作為供試品溶液；另取水蛭對照藥材0.5g，加60%~80%乙醇10mL,冷浸12小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各lOjiL,分別點於同一矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯乙酸乙酯的體積比為30:i,展開，取出，晾千，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的螢光斑點；(2)取所述藥物組合物5g,加乙醚1030mL,冷浸3~5小時，過濾，用乙醚洗滌殘渣，合併，濾液蒸乾，加三氯甲烷l3mL充分溶解，作為供試品溶液；另取莪朮對照藥材2g，同供試品製備方法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4nL,分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18:2，展開，取出，晾乾，噴以香草醛硫酸溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取所述藥物組合物5g，加甲醇1030mL浸漬5080分鐘，濾過，取濾液525mL,蒸乾，殘渣加水525mL使溶解，再加鹽酸0.5-1.5mL，置水洛中加熱20~40分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2~3次，每次1030mL,合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇0.51.5mL使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇製成每lmL含lmg大黃素或lmg大黃素甲醚的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15pL,大黃素對照品和大黃素曱醚對照品各10fiL,分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，石油醚、甲酸乙酯和甲酸的體積比為15:5:1，展開，取出，晾乾，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的螢光斑點；(4)取所述藥物組合物5g，加乙醚820mL,冷浸3~5小時，濾過，將濾液濃縮至幹，殘渣加甲醇溶解至3~6mL,作為供試品溶液；另取蛇床子素對照品，加甲醇製成每lmL含0.5mg蛇床子素的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15nL,對照品溶液6jiL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30:1,展開，取出，晾乾，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；(5)取所述藥物組合物5g,加甲醇1030mL，浸漬40~80分鐘，濾過，濾液蒸乾，加水1020mL使溶解，再加鹽酸0.51.5mL,置水浴中加熱20~40分鐘，立即冷卻，用乙醚分1~3次提取，每次1030mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇0.52mL使溶解，作為供試品溶液；另取桃仁對照藥材lg,加乙醚515mL，超聲處理3~10分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5jiL,分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18:2，展開，取出，晾乾，噴以香草醛硫酸溶液，烘約2~8分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色的斑點；(6)取所述藥物組合物5g,加水10-20mL，攪拌使溶解，轉移至分液漏鬥中，加以水飽和的正丁醇提取1~3次，每次1020mL，合併正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌1~3次，每次515mL，棄去水液，正丁醇液置水浴上濃縮至約0.5~2mL，加適量的中性氧化銷在水浴上拌勻乾燥，裝入預先裝填好的中性氧化鋁小柱，以5080mL乙酸乙酯-甲醇洗脫，乙酸乙酯和甲醇的體積比為1:1，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加乙醇0.52mL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇製成每lmL含2mg芍藥苷的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5nL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯_甲醇_甲酸為展開劑，三氯曱烷、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的體積比為40:5:10:0.2,展開，取出，晾乾，噴以硫酸乙醇溶液，烘2~8分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(7)取所述藥物組合物5g,加乙醚3050mL，加熱回流40~80分鐘，濾過，藥渣揮幹乙醚，加甲醇2040mL，加熱回流50~80分鐘，濾過，濾液揮幹，殘渣加水30~60mL使溶解，用正丁醇提取2~4次，每次1530mL，合併正丁醇溶液，用水洗滌24次，蒸乾，殘渣加甲醇3~8mL使溶解，作為供試品溶液；另取黃萃苷對照品，加甲醇製成每lmL含1.5mg黃芩苷的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10nL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的體積比為5:3:i:i，預平衡10-50分鐘，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(8)血竭素的含量測定分別製備供試品溶液和對照品溶液，用高效液相色譜法測定；對照品為血竭素高氯酸鹽；色譜條件與系統適用性為用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液為流動相，乙腈和0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積百分比為30~70:30~70,A為乙睛，B為0.05mol/L磷酸二氬鉀，A+B=100%;UVD檢測器，檢測波長為440nm;柱溫3040。C,理論塔板數按血竭素髙氯酸鹽峰計算應不低於4000;其中對照品溶液的製備精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品5mg，置lOmL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取lmL，置5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每lmL含血竭素高氯酸鹽O.lmg,血竭素的重量=血竭素高氯酸鹽的重量/1.377;其中供試品溶液的製備精密稱取治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物2.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入3。/。磷酸甲醇溶液1050mL，塞緊，搖勻，超聲處理3~30分鐘，功率300W,超聲頻率50KHz，濾過，精密量取續濾液l5mL，置525mL棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10jiL,注入液相色譜儀，測定即得；藥物組合物每粒含血竭以血竭素計，不得少於0.50mg，血竭素的分子式CnHw03。本發明優選的技術方案是一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法，其特徵在於(1)取所述藥物組合物5g，加甲醇20mL浸漬l小時，濾過，取濾液15mL,蒸乾，殘渣加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL,置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取水蛭對照藥材0.5g，加70。/。乙醇10mL冷浸12小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10jiL，分別點於同一含0.3%羧甲基纖維素鈉的矽膠0薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30:1,展開，取出，晾乾，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的螢光斑點；(2)取所述藥物組合物5g，加乙醚20mL，冷浸4小時，過濾，用乙醚洗殘渣，合併，濾液蒸乾，3(TC以下蒸乾，加三氯曱垸2mL充分溶解，作為供試品溶液；另取莪朮對照藥材2g，同供試品製備方法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4fiL，分別點於同一以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠0薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18:2，展開，取出，晾乾，噴以1%香草醛硫酸溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；所述石油醚為沸點6090'C的石油醚；(3)取藥物組合物5g，加甲醇20mL浸漬1小時，濾過，取濾液15mL，蒸乾，殘渣加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL,置水洛中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇的製成每lmL含lmg大黃素或lmg大黃素甲醚的溶液的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15jiL，大黃素對照品和大黃素甲醚對照品各10jiL，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，石油醚、甲酸乙酯和甲酸的體積比為15:5:1,展開，取出，晾乾，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的螢光斑點；所述石油醚為沸點306(TC的石油醚；(4)取所述藥物組合物5g,加乙醚12mL，冷浸4小時，濾過，將濾液濃縮至幹，殘渣加甲醇溶解至5mL，作為供試品溶液；另取蛇床子素對照品，加甲醇製成每lmL含O.Sing的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15nL,對照品溶液6jiL,分別點於同一以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30:1，展開，取出，晾乾，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；(5)取所述藥物組合物5g,加甲醇20mL浸漬1小時，濾過,濾液蒸乾，加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL,置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分二次提取，每次20mL,合併乙醚液，蒸乾，殘渣加lmL使溶解，作為供試品溶液；另取桃仁對照藥材lg,加乙醚10mL，超聲處理5分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5nL,分別點於同一以0.3%的羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18:2，展開，取出，晾乾，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105。C烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色的斑點；所述石油醚為沸點60卯'C的石油醚；(6)取所述藥物組合物5g,加水15mL，攪拌使溶解，轉移至分液漏鬥中，加以水飽和的正丁醇提取2次，每次15mL,合併正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10mL，棄去水液，正丁醇液置水洛上濃縮至約lmL，加適量的中性氧化鋁在水洛上拌勻乾燥，裝入預先裝填好的內徑1.5cm的中性氧化銷小柱，小柱容量5g,以60mL的乙酸乙酯-甲醇洗脫，乙酸乙酯和甲醇的體積比為l:l,收集洗脫液，蒸乾，殘渣加乙醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇製成每lmL含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5jiL,分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的體積比為40:5:io:0.2,展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105'C烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(7)取所述藥物組合物5g，加乙醚40mL，加熱回流l小時，濾過，藥渣揮幹乙醚，加平醇30mL，加熱回流l小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合併正丁醇溶液，用水洗滌3次，蒸乾，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇製成每lmL含1.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10pL,分別點於同一以含4%乙酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的矽膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的體積比為5:3:1:1,預平衡30分鐘，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(8)血竭素的含量測定分別製備供試品溶液和對照品溶液，用高效液相色譜法測定；對照品為血竭素高氯酸鹽；色譜條件與系統適用性為用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液為流動相，乙腈和0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積百分比為50:50,A為乙睛，B為0.05mol/L磷酸二氬鉀，A+B=100%;UVD檢測器，檢測波長為440nm;柱溫40。C,理論塔板數按血竭素高氯酸鹽峰計算應不低於4000;其中對照品溶液的製備精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品5mg,置10mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解並稀釋至，搖句，精密量取lmL，置5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每lmL含血竭素高氯酸鹽O.lmg，血竭素的重量=血竭素高氯酸鹽的重量/1.377;其中供試品溶液的製備精密稱取治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物2.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入3Vo磷酸甲醇溶液30mL，塞緊，搖勻，超聲處理20分鐘，功率300W,超聲頻率50kHz，濾過，精密量取續濾液3mL,置15mL棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10fiL，注入液相色譜儀，測定即得；藥物組合物每粒含血竭以血竭素計，不得少於o.somg,血竭素的分子式CnH"03。本發明與現有技術相比具有以下優點本發明通過薄層色譜法，實現了對水蛭、莪朮、大黃素、大黃素甲醚、蛇床子素、桃仁、芍藥苷、黃芩苷鑑別，同時採用高效液相色譜法對君藥血竭有效成分血竭素的含量的準確測定，方法操作簡便，準確先進，線性關係、重現性、精密度、穩定性、回收率均較好，能夠有效的控制產品的質量，保證產品療效。下面結合實施例對本發明做進一步說明，但本發明的保護範圍不僅僅限於以下實施例。具體實施例方式實施例生產工藝取申請號為200710152383.4的處方量藥材，取血竭3倍量的水煮沸，將血竭放入，隨著水煮沸，血竭逐漸變軟浮出水面，此時撈出，放冷，研磨成細粉，剩餘水濃縮少量體積，冷卻與細粉混合、乾燥、粉碎、過80目篩，備用；取白礬、土鱉蟲淨制，粉碎成細粉，過80目篩，備用；取三稜、莪朮、蛇床子加12倍量的水浸泡4小時，蒸餾5小時，收集揮髮油，將渣液分離，得藥液(I)、藥渣(I);取水蛭、大黃粉碎成粗顆粒，加入2倍量70%乙醇浸潤2小時，裝入滲漉液，再用4倍量的70%乙醇以5mL/分的速度滲漉，收集滲漉液。回收乙醇至完全，繼續濃縮成稠膏(I);取黃荅用開水燁IO分鐘，加入桃仁等剩餘四味中混合，第一次加8倍量的水先浸泡2小時，煎煮2小時，第二次將藥渣(I)加入，加6倍量的水煎煮1.5小時，濾過，將藥液(I)及燁黃萃水液與此藥液混合,濃縮至相對密度1.05~1.10(50'C)加入乙醇，使其含醇量為70%,用鹽酸調PH值45，靜置24小時以上，濾過，回收乙醇至完全，濃縮成稠膏(II)與稠膏(I)混合，並將白礬、土鱉蟲細粉加入，真空乾燥，溫度708(TC,真空度0.080.09MPa，粉碎成細粉與血竭細粉混勻，將揮髮油用少量無水乙醇稀釋噴於細粉中，閉封放置12小時以上，裝入膠嚢，每粒0,35g，製成1000粒，即得。檢驗方法(1)取藥物組合物5g,加甲醇20mL浸漬1小時，濾過，取濾液15mL,蒸乾，殘渣加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL，置水洛中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液。另取水蛭對照藥材0,5g,加70%乙醇10mL冷浸12小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各IOjiL，分別點於同一含03。/。羧甲基纖維素鈉的矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯-乙酸乙酯的體積比為30:1,展開，取出，晾乾，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的螢光斑點。(2)取藥物組合物5g，加乙醚20mL,冷浸4小時，過濾，用乙醚洗殘渣，合併，濾液蒸乾(30。C以下蒸乾)，加三氯甲烷2mL充分溶解，作為供試品溶液。另取莪朮對照藥材2g，同供試品製備方法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4nL,分別點於同一以0.30/0羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚(60卯'C)-乙酸乙酯為展開劑，石油醚(6090'C)-乙酸乙酯的體積比為18:2，展開，取出，晾乾，噴以1V。香草醛硫酸溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(3)取藥物組合物5g，加甲醇20mL浸漬1小時，濾過，取濾液15mL，蒸乾，殘渣加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL,置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃素、大黃素甲醚對照品，分別加甲醇的製成每lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15jiL,大黃素對照品、大黃素甲醚對照品各10nL,分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚(30~60°C)-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，石油醚(30~6(TC)-曱酸乙酯-甲酸的體積比為15:5:1，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的螢光斑點。(4)取藥物組合物5g,加乙醚12mL，冷浸4小時，濾過，將濾液濃縮至幹，殘渣加甲醇溶解至5mL，作為供試品溶液。另取蛇床子素對照品，加甲醇製成每lmL含O.Smg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15jiL，對照品溶液6nL,分別點於同一以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯-乙酸乙酯的體積比為30:1，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。(5)取藥物組合物5g,加甲醇20mL浸漬l小時，濾過，濾液蒸乾，加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL，置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分二次提取，每次20mL,合併乙醚液，蒸乾，殘渣加lmL使溶解，作為供試品溶液。另取桃仁對照藥材lg,加乙醚10mL，超聲處理5分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5jiL，分別點於同一以0.3%的羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚(60卯'C)-乙酸乙酯為展開劑，石油醚(60~卯°。)-乙酸乙酯的體積比為18:2，展開，取出，晾乾，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105-C烘約5分鐘。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色的斑點。(6)取藥物組合物5g，加水15mL,攪拌使溶解，轉移至分液漏鬥中，加以水飽和的正丁醇提取2次，每次15mL,合併正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10mL，棄去水液，正丁醇液置水洛上濃縮至約lmL,加適量的中性氧化鋁在水浴上拌勻乾燥，裝入預先裝填好的中性氧化鋁小柱(內徑1.5cm,5g),以乙酸乙酯-甲醇60mL洗脫，乙酸乙酯、甲醇的體積比為l:l，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加乙醇lmL使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇製成每lmL含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5fiL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的體積比為40:5:io:0.2,展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105'C烘約5分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(7)取藥物組合物5g，加乙醚40mL，加熱回流1小時，濾過，藥渣揮幹乙醚，加甲醇30mL，加熱回流l小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL,合併正丁醇溶液，用水洗滌3次，蒸乾，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇製成每lmL含l，5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10jiL,分別點於同一以含4%乙酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的矽膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水的體積比為5:3:1:1,預平衡30分鐘，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(8)血竭素的含量測定分別製備供試品溶液和對照品溶液，用高效液相色譜法測定；對照品為血竭素高氯酸鹽；色譜條件與系統適用性為用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液為流動相，乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積百分比為50:50，A為乙睛，B為0.05mol/L磷酸二氫鉀，A+B=100%;UVD檢測器，檢測波長為440nm;柱溫40'C。理論塔板數按血竭素高氯酸鹽峰計算應不低於4000。其中對照品溶液的製備精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品5mg,置10mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解並稀釋至，搖勻，精密量取lmL，置5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每lmL含血竭素高氯酸鹽O.lmg,血竭素的重量=血竭素高氯酸鹽的重量/1.377。其中供試品溶液的製備精密稱取藥物組合物2.0g,置具塞錐形瓶中，精密加入3y。轔酸甲醇溶液30mL,塞緊，搖勾，超聲處理(功率300W，頻率50KHz)20分鐘，濾過，精密量取續濾液3mL，置15mL棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖句，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10nL,注入液相色譜儀，測定即得。藥物組合物每粒含血竭以血竭素(:17111403計，不得少於0.50mg.(三)方法學考察1、線性關係考察分別精密吸取血竭素高氯酸鹽對照品溶液(C=0.108mg/mL)3、5、10、15、20jiL,依次測定峰面積，結果見表l。tableseeoriginaldocumentpage18以峰面積值A為縱坐標，血竭素高氯酸鹽的量C(mg)為橫坐標計算回歸方程為A=1806217C-44193.4,相關係數r=0.99997，線性範圍0.324~2.160照。2、精密度試驗分別精密吸取對照品溶液和供試品(批號000413)溶液各10jiL連續進樣5次，記錄峰面積，結果，血竭素高氯酸鹽對照品峰面積的RSD(%)為0.78。1號供試品的RSD(%)為3.39。結果見表2.表2精密度試驗結果tableseeoriginaldocumentpage19結果表明，本發明精密度良好。3、重複性試驗取供試品(批號000403)，按供試品溶液製備方法，按色譜條件進行測定，血竭素高氯酸鹽(mg/g)含量的RSD(%)為0.40%。結果見表表3重複性試驗結果tableseeoriginaldocumentpage19結果表明，本發明重複性良好。4、穩定性試驗精密吸取1號供試品溶液lOmL,每間隔一定時間進樣一次，峰面積見表4。表4穩定性試驗結果tableseeoriginaldocumentpage20結果表明，本發明回收率良好。6、樣品測定按供試品溶液製備方法製備樣品，按色譜條件進樣測定，記錄峰面積，用外標一點法計算血竭素高氯酸鹽的含量。三批樣品的含量結果見表6。表6三批樣品測定結果tableseeoriginaldocumentpage20tableseeoriginaldocumentpage21經過整個標準含量測定研究過程及三批樣品的測定結果，三批樣品以血竭素高氯酸鹽計含量在2.49~2.56mg/g範圍內，換算成以血竭素計含量則在1.81~1.86mg/g範圍內，以每粒含血竭以血竭素計則含量在0.63~0.65mg/粒範圍內，考慮到藥材來源，以及製劑生產，貯藏等因素。每粒膠囊內容物為0.35g,故暫定藥物組合物每粒含血竭素的量不得低於0.50mg。權利要求1.一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法，其特徵在於該方法包括以下步驟(1)取所述藥物組合物5g，加甲醇10～30mL，浸漬50～80分鐘，濾過，取濾液5～25mL，蒸乾，殘渣加水5～25mL使溶解，再加鹽酸0.5～1.5mL，置水浴中加熱20～40分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2～3次，每次10～30mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5～1.5mL使溶解，作為供試品溶液；另取水蛭對照藥材0.5g，加60％～80％乙醇10mL，冷浸12小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯∶乙酸乙酯的體積比為30∶1，展開，取出，晾乾，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的螢光斑點；(2)取所述藥物組合物5g，加乙醚10～30mL，冷浸3～5小時，過濾，用乙醚洗滌殘渣，合併，濾液蒸乾，加三氯甲烷1～3mL充分溶解，作為供試品溶液；另取莪朮對照藥材2g，同供試品製備方法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4μL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18∶2，展開，取出，晾乾，噴以香草醛硫酸溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取所述藥物組合物5g，加甲醇10～30mL浸漬50～80分鐘，濾過，取濾液5～25mL，蒸乾，殘渣加水5～25mL使溶解，再加鹽酸0.5～1.5mL，置水浴中加熱20～40分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2～3次，每次10～30mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5～1.5mL使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇製成每1mL含1mg大黃素或1mg大黃素甲醚的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15μL，大黃素對照品和大黃素甲醚對照品各10μL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，石油醚、甲酸乙酯和甲酸的體積比為15∶5∶1，展開，取出，晾乾，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的螢光斑點；(4)取所述藥物組合物5g，加乙醚8～20mL，冷浸3～5小時，濾過，將濾液濃縮至幹，殘渣加甲醇溶解至3～6mL，作為供試品溶液；另取蛇床子素對照品，加甲醇製成每1mL含0.5mg蛇床子素的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15μL，對照品溶液6μL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30∶1，展開，取出，晾乾，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；(5)取所述藥物組合物5g，加甲醇10～30mL，浸漬40～80分鐘，濾過，濾液蒸乾，加水10～20mL使溶解，再加鹽酸0.5～1.5mL，置水浴中加熱20～40分鐘，立即冷卻，用乙醚分1～3次提取，每次10～30mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5～2mL使溶解，作為供試品溶液；另取桃仁對照藥材1g，加乙醚5～15mL，超聲處理3～10分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18∶2，展開，取出，晾乾，噴以香草醛硫酸溶液，烘約2～8分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色的斑點；(6)取所述藥物組合物5g，加水10～20mL，攪拌使溶解，轉移至分液漏鬥中，加以水飽和的正丁醇提取1～3次，每次10～20mL，合併正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌1～3次，每次5～15mL，棄去水液，正丁醇液置水浴上濃縮至約0.5～2mL，加適量的中性氧化鋁在水浴上拌勻乾燥，裝入預先裝填好的中性氧化鋁小柱，以50～80mL乙酸乙酯-甲醇洗脫，乙酸乙酯和甲醇的體積比為1∶1，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加乙醇0.5～2mL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇製成每1mL含2mg芍藥苷的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的體積比為40∶5∶10∶0.2，展開，取出，晾乾，噴以硫酸乙醇溶液，烘2～8分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(7)取所述藥物組合物5g，加乙醚30～50mL，加熱回流40～80分鐘，濾過，藥渣揮幹乙醚，加甲醇20～40mL，加熱回流50～80分鐘，濾過，濾液揮幹，殘渣加水30～60mL使溶解，用正丁醇提取2～4次，每次15～30mL，合併正丁醇溶液，用水洗滌2～4次，蒸乾，殘渣加甲醇3～8mL使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇製成每1mL含1.5mg黃芩苷的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水的體積比為5∶3∶1∶1，預平衡10～50分鐘，展開，取出，晾乾，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(8)血竭素的含量測定分別製備供試品溶液和對照品溶液，用高效液相色譜法測定；對照品為血竭素高氯酸鹽；色譜條件與系統適用性為用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液為流動相，乙腈和0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積百分比為30～70∶30～70，A為乙睛，B為0.05mol/L磷酸二氫鉀，A+B＝100％；UVD檢測器，檢測波長為440nm；柱溫30～40℃，理論塔板數按血竭素高氯酸鹽峰計算應不低於4000；其中對照品溶液的製備精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品5mg，置10mL棕色量瓶中，加3％磷酸甲醇溶液使溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL，置5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，每1mL含血竭素高氯酸鹽0.1mg，血竭素的重量＝血竭素高氯酸鹽的重量/1.377；其中供試品溶液的製備精密稱取治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物2.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入3％磷酸甲醇溶液10～50mL，塞緊，搖勻，超聲處理3～30分鐘，功率300W，超聲頻率50KHz，濾過，精密量取續濾液1～5mL，置5～25mL棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定即得；藥物組合物每粒含血竭以血竭素計，不得少於0.50mg，血竭素的分子式C17H14O3。2、根據權利要求i所述的一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法，其特徵在於(1)取所述藥物組合物5g，加甲醇20mL浸漬l小時，濾過,取濾液15mL,蒸乾，殘渣加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL,置水洛中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取水蛭對照藥材0.5g,加70。/。乙醇10mL冷浸12小時，濾過,濾液蒸千，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10jiL,分別點於同一含(U。/。羧甲基纖維素鈉的矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30:1，展開，取出，晾乾，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的螢光斑點；(2)取所述藥物組合物5g，加乙醚20mL，冷浸4小時，過濾，用乙醚洗殘渣，合併，濾液蒸乾，3(TC以下蒸乾，加三氯甲烷2mL充分溶解，作為供試品溶液；另取莪朮對照藥材2g，同供試品製備方法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4^iL,分別點於同一以(U。/。羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18:2,展開，取出，晾乾，噴以1%香草醛硫酸溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；所述石油醚為沸點6090。C的石油醚；(3)取藥物組合物5g，加甲醇20mL浸漬1小時，濾過，取濾液15mL，蒸乾，殘渣加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL，置水洛中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合併乙醚液，蒸乾，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇的製成每lmL含lmg大黃素或lmg大黃素甲醚的溶液的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15pL,大黃素對照品和大黃素甲醚對照品各10fiL，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，石油醚、甲酸乙酯和甲酸的體積比為15:5:1,展開，取出，晾乾，置365mn紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的螢光斑點；所述石油醚為沸點3060'C的石油醚；(4)取所述藥物組合物5g，加乙醚12mL，冷浸4小時，濾過，將濾液濃縮至幹，殘渣加甲醇溶解至5mL，作為供試品溶液；另取蛇床子素對照品，加甲醇製成每lmL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液15pL，對照品溶液6pL,分別點於同一以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯為展開劑，苯和乙酸乙酯的體積比為30:1,展開，取出，晾乾，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；(5)取所述藥物組合物5g,加甲醇20mL浸漬l小時，濾過，濾液蒸乾，加水15mL使溶解，再加鹽酸lmL，置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分二次提取，每次20mL,合併乙醚液，蒸乾，殘渣加lmL使溶解，作為供試品溶液；另取桃仁對照藥材lg,加乙醚10mL,超聲處理5分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5fiL，分別點於同一以0.3%的羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，石油醚和乙酸乙酯的體積比為18:2，展開，取出，晾乾，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105。C烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色的斑點；所述石油醚為沸點60卯'C的石油醚；(6)取所述藥物組合物5g，加水15mL,攪拌使溶解，轉移至分液漏鬥中，加以水飽和的正丁醇提取2次，每次15mL,合併正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10niL,棄去水液，正丁醇液置水洛上濃縮至約lmL，加適量的中性氧化鋁在水洛上拌勻乾燥，裝入預先裝填好的內徑1.5cm的中性氧化鋁小柱，小柱容量5g，以60mL的乙酸乙酯-甲醇洗脫，乙酸乙酯和甲醇的體積比為1:1，收集洗脫液，蒸乾，殘渣加乙醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇製成每lmL含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5jiL，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸為展開劑，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的體積比為40:5:io:0.2，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105'C烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(7)取所述藥物組合物5g，加乙醚40mL,加熱回流l小時，濾過，藥渣揮幹乙醚，加甲醇30mL,加熱回流l小時，濾過，濾液揮幹，殘渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL,合併正丁醇溶液，用水洗滌3次，蒸乾，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇製成每lmL含1.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各l(HiL,分別點於同一以含4%乙酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的矽膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，乙酸乙酯、丁酮、曱酸和水的體積比為5:3:i:i，預平衡30分鐘，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(8)血竭素的含量測定分別製備供試品溶液和對照品溶液，用高效液相色譜法測定；對照品為血竭素高氯酸鹽；色譜條件與系統適用性為用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液為流動相，乙腈和0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液的體積百分比為50:50,A為乙睛，B為0.05mol/L磷酸二氬鉀，A+B=100%;UVD檢測器，檢測波長為440nm;柱溫40。C，理論塔板數按血竭素高氯酸鹽峰計算應不低於4000;其中對照品溶液的製備精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品5mg，置10mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解並稀釋至，搖句，精密量取lmL，置5mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勾，即得，每lmL含血竭素高氯酸鹽O.lmg,血竭素的重量=血竭素高氯酸鹽的重量/1.377;其中供試品溶液的製備精密稱取治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物2.0g,置具塞錐形瓶中，精密加入3n/。磷酸甲醇溶液30mL,塞緊，搖勾，超聲處理20分鐘，功率300W,超聲頻率50kHz,濾過，精密量取續濾液3mL,置15mL棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖句，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10fiL,注入液相色譜儀，測定即得；藥物組合物每粒含血竭以血竭素計，不得少於0.50mg,血竭素的分子式C17H1403。全文摘要本發明涉及中藥質量檢測領域，公開了一種治療婦科子宮肌瘤的藥物組合物的質量檢測方法，該方法包括治療婦科子宮肌瘤的藥物的鑑別、檢查、浸出物以及含量測定等步驟。本發明通過薄層色譜法，實現了對水蛭、莪朮、大黃素、大黃素甲醚、蛇床子素、桃仁、芍藥苷、黃芩苷鑑別，同時採用高效液相色譜法對君藥血竭有效成分血竭素的含量的準確測定，本品每粒含血竭以血竭素C17H14O3計，不得少於0.50mg。本發明方法操作簡便，準確先進，線性關係、重現性、精密度、穩定性、回收率均較好，能夠有效的控制產品的質量，保證產品療效。文檔編號G01N30/00GK101279066SQ200810018308公開日2008年10月8日申請日期2008年5月28日優先權日2008年5月28日發明者王延嶺申請人:陝西思壯藥業有限公司