一株高產γ-氨基丁酸乳酸菌及其篩選方法

2023-09-19 03:53:05 1

一株高產γ-氨基丁酸乳酸菌及其篩選方法
【專利摘要】本發明公開了一株高產γ-氨基丁酸乳酸菌及其篩選方法，屬於生物【技術領域】。其由以下步驟製得：1）供試乳酸菌發酵培養，2）根據是否具有穀氨酸脫羧酶活性對γ-氨基丁酸產生菌初步篩選，3）高產γ-氨基丁酸乳酸菌的復篩。使用該方法篩選得到經過發酵培養後發酵液中γ-氨基丁酸含量達到5.025g/L，L-穀氨酸鈉轉化率達到90.05%植物乳桿菌。本發明解決了傳統食品靠外源添加γ-氨基丁酸或γ-氨基丁酸含量過低地的問題，降低了產品生產成本投入。
【專利說明】一株高產Y -氨基丁酸乳酸菌及其篩選方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬於生物【技術領域】，具體涉及一株高產γ -氨基丁酸乳酸菌的篩選方法。

【背景技術】
[0002] γ -氨基丁酸，化學名稱：4-氨基丁酸，英文名：γ-aminobutyric acid(GABA)，結 構式：NH2-CH2-CH2-COOh ;分子式：C4H9N02;分子量：103. 1(渠巖等· γ -氨基丁酸及其在大豆 發酵食品中的研宄進展[J].中國釀造，2010, 3:1-4) GABA結構式為：

【權利要求】
1. 一株高產Y-氨基丁酸乳酸菌，其特徵在於經如下篩選方法製得： 1) 供試乳酸菌發酵培養 用MRS培養基對供試乳酸菌在41°C靜置厭氧培養24h，以3%的接種量接種到含有1% L-穀氨酸鈉的GYP發酵培養基中，靜置厭氧培養48h，取發酵液進行離心，轉速2000r/min、 離心時間lOmin，取上清液； 2) 根據是否具有穀氨酸脫羧酶活性對Y _氨基丁酸產生菌初步篩選 用微量進樣器吸取1)經離心處理的上清液2ML，點樣於G型薄層矽膠板上，點樣線距 底邊2cm，點樣點間距1. 5cm，以展開劑系統：正丁醇：乙酸：水=5:3:2,採用4g/L茚三酮 作為顯色劑，當層析到達矽膠板上端l_2cm時結束層析，在65°C條件下烘乾濾紙，以是否存 在Y -氨基丁酸對應的斑點作為檢測指標，同時以1%的Y -氨基丁酸和L-穀氨酸鈉標準 樣品做為對照檢測，篩選出能夠合成y-氨基丁酸的乳酸菌； 3) 高產Y _氨基丁酸乳酸菌的復篩 將初篩出的菌株接種到含有150mL/250mL的無菌種子培養基的三角瓶中，41°C靜置培 養24h後，以5%的接種量接入含有150mL/250mL的無菌發酵培養基的三角瓶中，每瓶種子 接三瓶發酵液進行對照，41 °C靜置培養24h，採用液相色譜法測定發酵液中GABA的含量，挑 出GABA產量較高的菌株即可。
2. 根據權利要求書1所述的高產Y _氨基丁酸乳酸菌，其特徵在於：所述高產y _氨 基丁酸乳酸菌的菌株為植物乳桿菌，該植物乳桿菌經過發酵培養後發酵液中Y -氨基丁酸 含量達到5. 025g/L，L-穀氨酸鈉轉化率達到90. 05%。
3. -種如權利要求書1所述的高產Y _氨基丁酸乳酸菌的篩選方法，其特徵在於包括 如下步驟：1)供試乳酸菌發酵培養 用MRS培養基對供試乳酸菌在41°C靜置厭氧培養24h，以3%的接種量接種到含有1% L-穀氨酸鈉的GYP發酵培養基中，靜置厭氧培養48h，取發酵液進行離心，轉速2000r/min、 離心時間lOmin，取上清液； 2) 根據是否具有穀氨酸脫羧酶活性對Y _氨基丁酸產生菌初步篩選 用微量進樣器吸取1)經離心處理的上清液2ML，點樣於G型薄層矽膠板上，點樣線距 底邊2cm，點樣點間距1. 5cm，以展開劑系統：正丁醇：乙酸：水=5:3:2,採用4g/L茚三酮 作為顯色劑，當層析到達矽膠板上端l_2cm時結束層析，在65°C條件下烘乾濾紙，以是否存 在Y -氨基丁酸對應的斑點作為檢測指標，同時以1%的Y -氨基丁酸和L-穀氨酸鈉標準 樣品做為對照檢測，篩選出能夠合成y-氨基丁酸的乳酸菌； 3) 高產Y _氨基丁酸乳酸菌的復篩 將初篩出的菌株接種到含有150mL/250mL的無菌種子培養基的三角瓶中，41°C靜置培 養24h後，以5%的接種量接入含有150mL/250mL的無菌發酵培養基的三角瓶中，每瓶種子 接三瓶發酵液進行對照，41 °C靜置培養24h，採用液相色譜法測定發酵液中GABA的含量，挑 出GABA產量較高的菌株即可。
【文檔編號】C12N1/20GK104480187SQ201410730515
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月5日 優先權日:2014年12月5日
【發明者】趙迎慶 申請人:臨沂格瑞食品有限公司