MHCⅡ類分子提呈的存活蛋白(Survivin)的部分肽及其利用方法
2023-09-18 17:55:40
專利名稱：MHC Ⅱ類分子提呈的存活蛋白(Survivin)的部分肽及其利用方法
技術領域：
本發明涉及能夠用於癌免疫療法的抗原性多肽、和含有該多肽的惡性腫瘤治療 劑。
背景技術：
作為難以醫治的疾病-癌症(惡性腫瘤)的治療方法之一，可列舉利用患者個體 所具有的免疫系統使癌細胞萎縮的、所謂癌免疫療法。該方法的重點在於，如何使免疫系統 識別癌細胞並將其作為異物、誘導出對癌細胞具有攻擊性的免疫細胞。參與抗腫瘤免疫的重要免疫細胞包括表達細胞表面蛋白CD8的細胞毒性性細胞 (⑶8陽性T細胞)、表達細胞表面蛋白⑶4的T細胞(⑶4陽性T細胞)。⑶8陽性T細胞 被活化時，將提呈與HLAI類分子結合的抗原的細胞溶解。CD4陽性T細胞為分泌細胞因子 的Th細胞，被通過HLAII類分子提呈抗原的巨噬細胞和/或樹突狀細胞等活化，對誘導和 維持CD8陽性T細胞發揮輔助功能。此外，已知Th細胞根據所分泌的細胞因子的種類而分成Thl細胞(產生IFN- γ 等)、Th2細胞(產生IL-4等)和ThO細胞(產生細胞因子能力低或同時產生IFN-Y、IL-4 等)，各細胞的作用正不斷地得到闡明。此外，CD4陽性T細胞通過針對MHC II類分子陰性 腫瘤(MHC II類-腫瘤)的間接機制、如介導巨噬細胞的活化，或者通過針對MHC II類陽 性腫瘤的直接機制，從而也能夠具有效應功能。迄今為止，人的癌免疫治療中的T細胞研究主要聚焦於⑶8陽性HLAI類限制性 CTL應答(CD8+HLA class I restricted CTL response)的鑑定和誘導(專利文獻 1)。CD4 陽性T細胞方面，報導了癌抗原之一的酪氨酸酶及其對CD4陽性T細胞的表位的鑑定以及 幾個表位(專利文獻2)，但其數量明顯少於CD8陽性HLA I類限制性肽的報告例。此外，已經報導的酪氨酸酶在黑素細胞系列的正常細胞和腫瘤細胞中表達，是與 被視為CD4陽性黑素瘤反應性T細胞的特異性靶標的MHC II類分子結合的唯一黑素瘤締 合性組織特異性抗原(非專利文獻1)。然而，酪氨酸酶為僅在有限類型的腫瘤中表達的抗 原，很難稱其為癌免疫治療中有希望的癌抗原。最近，報導了一種基因，其編碼被稱為存活蛋白(Survivin)的、被⑶8陽性T細胞 識別的腫瘤特異性抗原(非專利文獻2)。存活蛋白被鑑定為具有抑制凋亡作用的物質，是 共由142個胺基酸殘基構成的蛋白質。據報導，其顯著特徵為，存活蛋白在正常組織中限於 胎兒組織、成人中的胸腺和精巢等組織表達，在腫瘤組織尤其是癌變的肺、結腸、乳腺、脾、 前列腺和淋巴瘤等中表達增加(非專利文獻2)。還有報導指出，存活蛋白的表達增加與腫瘤性疾患的予後不良相關，認為該蛋白 質作為腫瘤抗原顯示出非常重要的作用，存活蛋白中的MHC II類限制性肽的鑑定正在進行 (非專利文獻3)。然而，非專利文獻3中報告的肽所限制的HLA II類針對有限的HLA型， 為適應臨床，需要使用適應多種HLA型的多種肽。
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非專利文獻1 :Topalian、S. L.等、1994 年、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、第 91 卷、第 9461-9465 頁非專利文獻2 =Chiara Casati 等、CANCER RESEARCH,2003 年、第 63 號、第 4507-4515 頁非專利文獻3 :Matthias Piesche 等、Human Immunology、2007 年、第 68 卷、第 572-576 頁專利文獻1 :W095/19783號公報專利文獻2 :W097/11669號公報
發明內容
發明要解決的問題本發明提供新的腫瘤抗原、和在利用該腫瘤抗原治療惡性腫瘤的方法中有用的新 的治療劑以及能夠用於該治療劑的腫瘤抗原。解決問題的手段本發明人等通過實驗發現，含有腫瘤抗原、和對該腫瘤抗原特異性的Th細胞的治 療劑具有能夠使表達該腫瘤抗原的惡性腫瘤顯著萎縮的效果；進一步，確定了能夠用作該 腫瘤抗原的新的抗原性肽，從而完成了下述各發明。(1) 一種多肽，其由下述的a) g)中的任意一個胺基酸序列構成，且具有使對存 活蛋白特異性的Th細胞產生細胞因子的活性，a)序列號17所示的胺基酸序列；b)在序列號17所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端添加1 數十個任意的 胺基酸而成的胺基酸序列；c)序列號17所示的胺基酸序列的N末端的1 4個胺基酸缺失的胺基酸序列；d)序列號17所示的胺基酸序列的C末端的1 5個胺基酸缺失的胺基酸序列；e)序列號17所示的胺基酸序列中的1 數個胺基酸殘基被置換和/或缺失的氨 基酸序列；f)在序列號17所示的胺基酸序列中的1 數個胺基酸殘基被置換和/或缺失的 胺基酸序列的N末端和/或C末端，添加1 數十個任意的胺基酸而成的胺基酸序列；g)序列號17所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端的1 5個胺基酸缺失的 胺基酸序列中進一步置換了1 數個胺基酸殘基的胺基酸序列。(2)根據⑴所述的多肽，b) g)的胺基酸序列構成的多肽具有由序列號17所 示的胺基酸序列構成的多肽所具有的表位，該表位由CD4陽性T細胞誘導對存活蛋白特異 性的Th細胞。(3)編碼(1)或⑵所述的多肽的核酸。(4)含有(3)所述的核酸的載體。(5)與⑴或⑵所述的多肽特異性結合的抗體。(6) 一種惡性腫瘤免疫治療用疫苗，其含有(1)或(2)所述的多肽中的至少一種以 上作為有效成分。(7) 一種誘導對存活蛋白特異性的Th細胞的方法，所述方法包括在體外孵育(1)
4或(2)所述的多肽中的至少一種以上、抗原提呈細胞和CD4陽性T細胞的工序。(8) 一種惡性腫瘤治療劑，其含有⑴或(2)所述的多肽、以及對該多肽或存活蛋 白特異性的Th細胞。發明效果本發明的肽通過與抗原提呈細胞和⑶4陽性T細胞一起孵育，誘導對存活蛋白特 異性的Th細胞(以下表示為Sur/Th細胞)；此外，具有使該Sur/Th細胞產生細胞因子的 活性。該Sur/Th細胞特異性攻擊表達存活蛋白的惡性腫瘤，因而本發明的肽能夠用作惡性 腫瘤治療劑的成分。此外，本發明的多肽，其組成胺基酸殘基數少，並不限於通過基因重組法製備，也 能通過有機合成的方法大量製造，因而在臨床研究或臨床應用中，能夠穩定且廉價地供給。此外，含有本發明的多肽的惡性腫瘤治療劑通過將腫瘤抗原與對該腫瘤抗原特異 性的Th細胞組合，能夠更強烈地促進Th細胞產生細胞因子。所產生的細胞因子在生物體 內針對表達該腫瘤抗原的惡性腫瘤引發特異性的抗腫瘤免疫反應，使腫瘤萎縮。
圖1是細胞內染色結果的圖，其表示的是對含有由HLA的基因型為 HLA-DRB 1*0101 /HLA-DRB1 *0901的人誘導出的Sur/Th細胞的細胞群，分別添加混合肽 MIXl MIX5時，對Sur/Th細胞的IFN-Y的產生進行測定的結果。圖中，縱軸表示⑶4的 表達強度，橫軸表示IFN-Y的表達強度。圖2是細胞內染色結果的圖，其表示的是對含有由HLA的基因型為 HLA-DRB 1*0101 /HLA-DRB1 *0901的人誘導出的Sur/Th細胞的細胞群，分別添加多肽SU16 SU22時，對Sur/Th細胞的IFN-γ的產生進行測定的結果。圖中，縱軸表示⑶4的表達強 度，橫軸表示IFN-Y的表達強度。圖3表示的是對含有由HLA的基因型為HLA-DRB 1*0101/HLA-DRB 1*0901的人 誘導出的Sur/Th細胞的細胞群，分別添加抗HLA-DP抗體、抗HLA-DQ抗體和抗HLA-DR 抗體時，通過ELISA對Sur/Th細胞的IFN-Y的產生進行測定的結果。圖中，縱軸表示 IFN-y (IFN-g)的產生量。圖4表示的是對含有由HLA的基因型為HLA-DRB 1*0101/HLA-DRB 1*0901的人誘 導出的Sur/Th細胞的細胞群、和對HLA的基因型分別為HLA-DRB1*1201/HLA_DRB1*1405、 HLA-DRB1 *0410/HLA-DRB 1*1201, HLA-DRB1*0405/HLA_DRB1*0901、HLA_DRB1*0401/ HLA-DRB1*0901、HLA-DRB1*0101/HLA-DRB1*0802 和 HLA-DRB1*0101/HLA_DRB1*0101 的異基 因的PBMC，分別添加SU18(congnate)和對照肽(irrelevant)時，通過ELISA對Sur/Th細胞 的IFN-Y的產生進行測定的結果。圖中，縱軸表示HLA的基因型，橫軸表示IFN-Y (IFN-g) 的產生量。圖5表示的是對由HLA的基因型為HLA-DRB1*0101的人誘導出的Sur/Th細胞， 分別添加多肽Tl Tll時，通過ELISA對Sur/Th細胞的IFN- γ的產生進行測定的結果。 圖中，縱軸表示HLA的基因型，橫軸表示IFN-Y (IFN-g)的產生量。圖6為ELISPOTassay圖，其表示的是對由HLA的基因型為HLA_DRB1*1201/ HLA-DRB1*1502的人誘導出的Sur/Th細胞，分別添加多肽Tl TlO時，測定產生IFN-γ的Sur/Th細胞的細胞數的結果。圖7表示的是對含有由HLA的基因型為HLA-DQB1*0302/HLA_DQB1*0601的人 誘導出的Sur/Th細胞的細胞群，分別添加抗HLA-DP抗體、抗HLA-DQ抗體和抗HLA-DR 抗體時，通過ELISA對Sur/Th細胞的IFN-Y的產生進行測定的結果。圖中，縱軸表示 IFN-y (IFN-g)的產生量。圖8表示的是對含有由HLA的基因型為HLA-DQB1*0302/HLA_DQB1*0601的人誘 導出的Sur/Th細胞的細胞群、和對HLA的基因型分別為HLA-DQB1*0301/HLA_DQB1*0302、 HLA-DQBl氺0401/HLA-DQB1 氺0602、HLA—DQB1 氺0302/HLA—DQB1 氺0401 禾口 HLA—DQB1 氺0301/ HLA-DQB 1*0601的異基因的PBMC，分別添加SU18 (congnate)和對照肽(irrelevant)時，通 過ELISA對Sur/Th細胞的IFN- γ的產生進行測定的結果。圖中，縱軸表示HLA的基因型， 橫軸表示IFN-Y (IFN-g)的產生量。圖9表示的是對由HLA的基因型為HLA-DQB 1*0601的人誘導出的Sur/Th細胞， 分別添加多肽Tl TlO時，通過ELISA對Sur/Th細胞的IFN- γ的產生進行測定的結果。 圖中，縱軸表示HLA的基因型，橫軸表示IFN-Y (IFN-g)的產生量。圖10表示的是對由HLA的基因型為HLA_DQB1*0601的人誘導出的Sur/Th細胞， 分別添加多肽Sl S17時，通過ELISA對Sur/Th細胞的IFN- γ的產生進行測定的結果。 圖中，縱軸表示HLA的基因型，橫軸表示IFN-Y (IFN-g)的產生量。
具體實施例方式本發明涉及存活蛋白的部分多肽、含有該部分多肽的腫瘤抗原、以及含有該腫瘤 抗原和對該腫瘤抗原特異性的Th細胞的惡性腫瘤治療劑。本發明的惡性腫瘤治療劑，優選 含有含有存活蛋白的部分多肽的腫瘤抗原、以及通過該腫瘤抗原由自治療對象患者回收 的CD4陽性T細胞誘導的對該腫瘤抗原特異性的Th細胞。本發明的惡性腫瘤治療劑由作為存活蛋白的部分多肽的腫瘤抗原和對該腫瘤抗 原特異性的Th細胞組合而成，通過採取該構成，與對患者分別單獨投與該腫瘤抗原或對該 腫瘤抗原特異性的Th細胞時相比，在惡性腫瘤的萎縮作用中具有顯著效果。對含有存活蛋白的部分多肽的腫瘤抗原特異性的Th細胞是指，受該腫瘤抗原特 異性刺激而產生細胞因子的Th細胞，可以是ThO細胞、Thl細胞、Th2細胞中的任意一種， Thl細胞更適合。所述對腫瘤抗原特異性的Th細胞可通過在適當條件下孵育該腫瘤抗原、 表達HLA II類分子的抗原提呈細胞和⑶4陽性T細胞而由該⑶4陽性T細胞誘導製得。本發明的方法中能夠利用的⑶4陽性T細胞可由採集的血液通過常規方法、例如 使用MACS (Mi ltenyi Biotech公司)等的方法而分離出。本發明中，優選的是，利用從作為 治療對象的具有惡性腫瘤的患者回收的CD4陽性T細胞。本發明的方法中能夠利用的抗原提呈細胞只要是在表面表達HLA II類分子的細 胞即可，除樹突狀細胞外還可列舉出B細胞、巨噬細胞、單核細胞、非增殖性的轉染子等，但 並不限於此。孵育既可以是同時對含有存活蛋白的部分多肽的腫瘤抗原、抗原提呈細胞和CD4 陽性T細胞進行孵育；或者也可以是先孵育該腫瘤抗原和抗原提呈細胞，然後在CD4陽性T 細胞共存下進行孵育。孵育的條件，可以是按照常規方法、例如Tim等(Immimology Today,1996年、第17卷、第3號、第138-146頁)所述的方法，即，在IL-2的存在下，在HLA II類 分子的介導下抗原提呈細胞提呈所需的抗原，由CD4陽性T細胞誘導對該抗原特異性的成 熟Th細胞。此外，可基於西村等(J.Exp. Med.、1999年、第190卷、第5號、第617-627頁) 的記載對孵育的各種條件進行各種變更，能夠由CD4陽性T細胞特異性誘導ThO細胞、Thl 細胞、或Th2細胞中的任意一種。通過用作為存活蛋白的部分多肽的腫瘤抗原再刺激時，對此時產生的各細胞的細 胞因子(例如前述的Tim等)進行確認，可知ThO細胞、Thl細胞、或Th2細胞被誘導出來。 確認細胞因子的產生可利用ELISA法、細胞內染色法、酶聯免疫斑點(ELISP0T)法、以及其 它各種方法。本發明的多肽的一個方式，為相當於被稱為存活蛋白的腫瘤抗原蛋白(前述非專 利文獻2)的第76 94位的胺基酸序列(序列號17，以下稱為SU18)的抗原性多肽。進一步，與SU18(序列號17)的多肽的胺基酸序列存在以下的b) g)的關係的 胺基酸序列所構成的多肽也可用作本發明的腫瘤抗原。b)在序列號17所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端添加1 數十個任意的 胺基酸而成的胺基酸序列；c)序列號17所示的胺基酸序列的N末端的1 4個胺基酸缺失的胺基酸序列；d)序列號17所示的胺基酸序列的C末端的1 5個胺基酸缺失的胺基酸序列；e)序列號17所示的胺基酸序列中的1 數個胺基酸殘基被置換和/或缺失的氨 基酸序列；f)在序列號17所示的胺基酸序列中的1 數個胺基酸殘基被置換和/或缺失的 胺基酸序列的N末端和/或C末端，添加1 數十個任意的胺基酸而成的胺基酸序列；g)序列號17所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端的1 5個胺基酸缺失的 胺基酸序列中進一步置換1 數個胺基酸殘基的胺基酸序列。上述的b) g)的胺基酸序列，規定為構成具有如下性質的多肽保持了存在於 SU18中的表位，具有使Sur/Th細胞產生細胞因子的活性；或具有由CD4陽性T細胞誘導對 存活蛋白或SU18特異性的Th細胞的表位。b) g)中規定的置換、缺失或添加的胺基酸殘基的種類只要在保持之前所示的 多肽的活性或功能的範圍內則沒有特別限制，b)和f)中的添加1 數十個胺基酸是指添 加1 50個胺基酸、優選添加1 30個胺基酸、進一步優選添加1 15個胺基酸。上述的胺基酸的置換、缺失或添加的優選例為沉默置換(silent)、缺失、和添加， 尤其優選保守性胺基酸間的置換。這些例子，對於本發明的多肽使Sur/Th細胞產生細胞因 子的活性、或由CD4陽性T細胞誘導對存活蛋白或SU18特異性的Th細胞的表位沒有改變。 代表性的保守性置換可舉出疏水性胺基酸Ala、Val、LeU、和Ile之間的相互置換、羥基氨基 酸Ser和Thr的相互置換、酸性殘基Asp和Glu的相互置換、醯胺型胺基酸Asn和Gln的相 互置換、鹼性胺基酸Lys和Arg的相互置換、芳香類胺基酸Phe和Tyr的相互置換等。SU18具有如下的活性通過孵育存活蛋白、抗原提呈細胞和⑶4陽性T細胞，使由 ⑶4陽性T細胞誘導的Sur/Th細胞產生細胞因子。這意味著，SU18具有被Sur/Th細胞識 別的表位，進一步，該表位被獲取存活蛋白的抗原提呈細胞的表面所表達的MHC II類分子 提呈。因此，含有存活蛋白、SU18和Sur/Th細胞的惡性腫瘤治療劑為本發明的一個方式。此外，含有通過孵育存活蛋白和/或SU18、抗原提呈細胞和⑶4陽性T細胞而由⑶4陽性T 細胞誘導的對SU18特異性的Th細胞的惡性腫瘤治療劑也是本發明的一個方式。認為SU18對於具有HLA-DRB1*0101這一 HLA基因型的人為腫瘤抗原，同時，對HLA 的基因型為HLA-DRB1*1201/HLA-DRG1*1502、或HLA-DQB1*0601的人而言也是成為腫瘤抗 原的多肽。上述的各多肽均是能夠用作惡性腫瘤治療劑的一個成分的新的多肽，具有由CD4 陽性T細胞誘導對該多肽特異性的Th細胞的活性和/或使所述Th細胞或Sur/Th細胞產生 細胞因子的活性。上述的各多肽的、使對該多肽或存活蛋白特異性的Th細胞產生細胞因子 的活性，可通過利用各種公知的方法測定用該多肽刺激該Th細胞時所產生的細胞因子進 行確認。例如，幹擾素Y(IFN-Y)的產生可使用BD Bioscience制以及其它市售的ELISA 試劑盒簡便地測定、確認。此外，本發明的一個方式即前述的各多肽只要具有構成其的胺基酸序列即可， 例如還能夠進一步加上對蛋白的分離純化有用的通用標籤序列His-Tag、適當的連接子 (linker)序列、GFP類標記蛋白的胺基酸序列等，或者在多肽上添加生物素等標記化合物。 因此，對構成本發明的一個方式即多肽的胺基酸序列，出於除了使對這些多肽特異性的Th 細胞、Sur/Th細胞產生細胞因子或由CD4陽性T細胞誘導前述細胞之外的目的，而添加了 任意的胺基酸殘基、從而形成的胺基酸序列所構成的多肽、還是對本發明的多肽添加適當 的標記化合物的多肽，只要具有使該細胞產生細胞因子的活性或具有由CD4陽性T細胞誘 導特異性的Th細胞的表位，則這種多肽依然包含在本發明的範圍內。本發明的多肽，可通過對編碼其的DNA應用各種公知的基因重組手法以重組蛋白 形式製造該多肽。典型的例子為，使用適當的DNA合成儀合成編碼本發明的多肽的DNA，適 當選擇或組合該技術領域的參考書例如Sambrook等的Molecular Cloning :A Laboratory Manual、第 2 版(Cold Spring Harbor La boratory Press、1989 年等)中介紹的各種方 法，構建表達本發明的多肽的表達載體，用該表達載體轉化大腸桿菌等適當的宿主細胞，生 產該多肽。如前所述，此時可增加用於製造重組多肽的各種操作，如添加組氨酸標籤等。此外，本發明的多肽還可以以經各種保護基修飾過的胺基酸為原料通過化學合成 來製造。不使用基因、宿主細胞而通過有機化學方法合成多肽的方法，對本領域技術人員而 言是眾所周知的。例如，「第5版實驗化學講座16有機化合物的合成IV」 (相本三郎等著、 日本化學會編)等介紹了多肽的化學合成的各種方法，本發明的多肽可使用這些方法中的 任意一種來合成。此外，也可使用通常被稱為多肽合成儀的市售儀器來合成。上述的多肽通過在適當條件下與抗原提呈細胞和⑶4陽性T細胞進行孵育，能夠 將⑶4陽性T細胞誘導為Th細胞。這樣，本發明也提供一種在體外對表達HLA II類分子 的抗原提呈細胞、CD4陽性T細胞和上述的多肽進行孵育，來誘導對上述的多肽和/或存活 蛋白特異性的Th細胞的方法。在孵育中，除IL-2外，優選添加IFN- y、IL-12、或抗IL-4抗 體中的一種以上，在所述條件下，能夠誘導產生IFN-Y且較少產生IL-4的Thl細胞。如前所述，該方法中能夠利用的抗原提呈細胞只要是在表面表達HLA II類分子的 細胞即可，除樹突狀細胞外，可列舉出B細胞、巨噬細胞、單核細胞、非增殖性的轉染子等， 但並不限定於此。另外，孵育既可以是同時對上述多肽、抗原提呈細胞和CD4陽性T細胞進 行孵育；也可以是先孵育本發明的多肽和抗原提呈細胞，然後在CD4陽性T細胞共存下進行孵育。此外，孵育本發明的肽、在細胞表面表達HLA II類分子的抗原提呈細胞和CD4陽性 T細胞的各種條件方面，如前所述，可以是按照常規方法例如前述Tim等所述的方法中的孵 育條件來確定，即，通過HLA II類分子的介導使抗原提呈細胞提呈所需的抗原，由CD4陽性 T細胞誘導對該抗原特異性的成熟Th細胞。根據本發明的方法，由患者處回收抗原提呈細胞和CD4陽性T細胞，將其與本發明 的多肽一起孵育，從而能在體外誘導和培養Sur/Th細胞。將根據該方法誘導的Sur/Th細 胞回輸給患者，從而激活患者自身的免疫系統，能夠期待腫瘤細胞的萎縮。此外，本發明的多肽，通過將其投與給兔子等適當的動物，能在該動物體中誘導特 異性識別存活蛋白的抗體。這樣的抗體能夠特異性檢測表達存活蛋白的細胞的存在、即癌 細胞的存在，能夠有效用於惡性腫瘤的診斷。本發明的惡性腫瘤治療劑中，除腫瘤抗原和對該腫瘤特異性抗原特異性的Th細 胞外，在不妨害上述作用的範圍內，還可以含有藥物製劑化中通常使用的各種賦形劑、其它 藥物活性成分等。尤其是，本發明的惡性腫瘤治療劑優選處於能夠穩定保持腫瘤抗原和對 該腫瘤特異性抗原特異性的Th細胞的緩衝液或液體培養基的形態。緩衝液的非限定性例子，可舉出中性的緩衝生理鹽水或磷酸緩衝生理鹽水等。此 外，還可進一步含有例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖、葡聚糖、麥芽糖等糖質、蛋白質、胺基酸、抗 氧化劑、抑菌劑、螯合劑(例如、EDTA或穀胱甘肽)、佐劑(例如、氫氧化鋁)、滲透壓調節劑、 懸浮劑、增粘劑和/或防腐劑等。此外，本發明的惡性腫瘤治療劑優選處於腫瘤抗原和對該腫瘤特異性抗原特異性 的Th細胞混合的形態，也可以處於腫瘤抗原和該對腫瘤特異性抗原特異性的Th細胞分別 保存而在使用時混合併投與的所謂試劑盒形態。以下，示出實施例對本發明進一步進行詳細說明，但本發明並不受這些實施例的 限制。
實施例SU18的鑑定1)肽的合成如由存活蛋白_2B(序列號56)的第1 20位的胺基酸序列構成的肽、第8 27 位的胺基酸序列構成的肽、第14 34位的胺基酸序列構成的肽這樣，從存活蛋白的N末端 至C末端共設計25種(記作SUl SU27)在C末端和/或N末端具有7 8胺基酸的重 疊序列(Overlap sequence)的19 20個胺基酸殘基所構成的肽(表1)，分別進行化學合 成。表 1
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權利要求
一種多肽，其由下述的a)～g)中的任意一個胺基酸序列構成，且具有使對存活蛋白特異性的Th細胞產生細胞因子的活性，a)序列號17所示的胺基酸序列；b)在序列號17所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端添加1～數十個任意的胺基酸而成的胺基酸序列；c)序列號17所示的胺基酸序列的N末端的1～4個胺基酸缺失的胺基酸序列；d)序列號17所示的胺基酸序列的C末端的1～5個胺基酸缺失的胺基酸序列；e)序列號17所示的胺基酸序列中的1～數個胺基酸殘基被置換和/或缺失的胺基酸序列；f)在序列號17所示的胺基酸序列中的1～數個胺基酸殘基被置換和/或缺失的胺基酸序列的N末端和/或C末端，添加1～數十個任意的胺基酸而成的胺基酸序列；g)序列號17所示的胺基酸序列的N末端和/或C末端的1～5個胺基酸缺失的胺基酸序列中進一步置換了1～數個胺基酸殘基的胺基酸序列。
2.根據權利要求1所述的多肽，其中，b) g)的胺基酸序列構成的多肽具有由序列號 17所示的胺基酸序列構成的多肽所具有的表位，該表位由CD4陽性T細胞誘導對存活蛋白 特異性的Th細胞。
3.—種核酸，其編碼權利要求1或2所述的多肽。
4.一種載體，其含有權利要求3所述的核酸。
5.一種抗體，其與權利要求1或2所述的多肽特異性結合。
6.一種惡性腫瘤免疫治療用疫苗，其以權利要求1或2所述的多肽中的至少一種以上 作為有效成分。
7.一種誘導對存活蛋白特異性的Th細胞的方法，所述方法包括在體外對權利要求1或 2所述的多肽中的至少一種以上、抗原提呈細胞和CD4陽性T細胞進行孵育的工序。
8.—種惡性腫瘤治療劑，其含有權利要求1或2所述的多肽、以及對該多肽或存活蛋白 特異性的Th細胞。
全文摘要
本發明提供新的腫瘤抗原、和在利用該腫瘤抗原治療惡性腫瘤的方法中有用的新的治療劑以及能夠用於該治療劑的腫瘤抗原。本發明提供新的腫瘤抗原和其利用法，所述腫瘤抗原具有誘導作為對存活蛋白特異性的CD4陽性T細胞的Th1細胞的表位。本發明為一種多肽，其由序列號17所示的胺基酸序列等構成，且具有使對存活蛋白特異性的Th細胞產生細胞因子的活性。本發明的肽具有下述活性將其與抗原提呈細胞和CD4陽性T細胞一起孵育，從而誘導對存活蛋白特異性的Th細胞，此外，使該Sur/Th細胞產生細胞因子。
文檔編號A61P37/04GK101981187SQ20098011174
公開日2011年2月23日 申請日期2009年3月31日 優先權日2008年3月31日
發明者西村孝司 申請人:株式會社生物免疫平衡