龍晶粉及其製備工藝和應用的製作方法
2023-09-19 03:31:50
專利名稱：龍晶粉及其製備工藝和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於中醫藥領域，涉及一種龍晶粉及其製備工藝和應用。
背景技術：
人體的五臟六肺由各種功能細胞所構成，其存活和維持正常生理狀態都需要血液 供其營養和氧氣，要做到這一點的先決條件是保持全身血脈暢通，使帶著各種養料和新鮮 氧氣的血能在全身順暢運行。保持全身血液暢通，必須保持正常平衡的血粘度。人的血管中流通的血液粘度是 以血小板為主的凝血因子和血管內皮細胞分泌的ATP抗凝因子平衡的結果，一般三十歲左 右健康人其正常血粘度為2. 5左右，但隨著年齡增長血管內皮細胞破損不易恢復，血液中 ATP越來越少，血液中多餘的脂肪、膠元物質和纖維蛋白逐漸凝成粥樣物附著在血管壁上減 少血管彈性，影響舒張、壓縮，形成高血壓。當粥樣物布滿血管壁時游離的血栓形成，微血栓 的進一步發展可進一步堵塞各臟器賴以生存的微血管(微循環系統)代謝通道，導致冠心 病、腦血管相關病變等。地龍作為藥用在我國已有4000多年的悠久歷史。我國有關地龍的最早記載見於 《詩經》、《禮記，月令》，有孟夏之月「蚯蚓出」、仲夏之月「蚯蚓結」之觀察記錄。最早的藥學 專著《神農本草經》中，收載67種動物藥物，其中就有蚯蚓。《本草經集注》、《別錄》、《本草 拾遺》等書，對蚯蚓皆有不少描述。李時珍所著《本草綱目》一書中，在蚯蚓條下列出40條 處方。其中記載地龍可治療小兒熱病、癲癇、耳聾、中風、痢疾、喉癉等。在治療中風的方藥 「補陽還五湯」中，地龍是主要藥物之一。說明我國古代對地龍的臨床應用已積累了豐富的 經驗。近50年來，國內對蚯蚓的應用較為廣泛，從傳統的散膏藥及煎劑，到精製成針劑， 臨床驗證已對20餘種疾病具有不同療效。目前，已知蚯蚓具有降壓、溶栓、抗凝、鎮靜和抗 驚厥作用。國外也有類似的研究報導，。日本的類原恆教授發現蚯蚓體內含有一種酶與尿 激酶一樣能溶解纖維蛋白形成的血栓，國內許多學者用蚯蚓製品防治心血管疾病，並取得 一定的療效。
發明內容
本發明的目的是提供一種具有溶栓作用的龍晶粉及其製備方法和在製備改善微 循環及溶栓藥物中的應用。本發明中所提到的龍晶粉是特指從愛森赤子鮮活蚯蚓中按照本發明所述製備方 法提取、分離、濃縮、乾燥而製得的天然活性蛋白混合物。本發明的技術方案是一種龍晶粉，其特徵在於該龍晶粉是通過以下步驟製得的取愛森赤子活蚯蚓漂洗乾淨後在-20°C 士3°C溫度下凍成冰塊，使蚯蚓活細胞凍 松；
將上述蚯蚓冰塊取出放置在0-50°C的生理鹽水中溶解，然後自溶攪拌成漿；將蚯蚓漿液至少進行一次離心處理；離心後的上清液過3-4次400目篩；過濾後得到的蚯蚓上清液用滅菌膜進行預過濾滅菌；滅菌後的上清液先用孔徑為2000道爾頓的膜進行超濾，收集濾出液；再用孔徑為 1000道爾頓的膜對前次超濾的濾出液進行二次超濾濃縮，兩次超濾的壓力維持在1. 8個大 氣壓士 0. 1個大氣壓；濃縮後的蚯蚓濃縮液乾燥成粉。乾燥工序中，將蚯蚓濃縮液冷凍乾燥成粉。本發明的製備方法中，其離心工序最好分兩次完成，第一次先將蚯蚓勻漿液 在IOOOrpm 3000rpm的速度下進行預離心，去掉蚯蚓體內大部分糞便和殘渣，然後在 2000rpm SOOOrpm的速度下進行再離心，以充分去除蚯蚓勻漿後未溶解完的雜質。龍晶粉的製備工藝，其特徵在於該工藝由以下步驟組成取愛森赤子活蚯蚓漂洗乾淨後在-20°C 士3°C溫度溫度下凍成冰塊，使蚯蚓活細 胞凍松；將上述蚯蚓冰塊取出放置在0-50°C的生理鹽水中溶解，然後自溶攪拌成漿；將蚯蚓漿液至少進行一次離心處理；離心後的上清液過3-4次400目篩；過濾後得到的蚯蚓上清液用滅菌膜進行預過濾滅菌；滅菌後的上清液先用孔徑為2000道爾頓的膜進行超濾，收集濾出液；再用孔徑為 1000道爾頓的膜對前次超濾的濾出液進行二次超濾濃縮，兩次超濾的壓力維持在1. 8個大 氣壓士 0. 1個大氣壓；濃縮後的蚯蚓濃縮液乾燥成粉。乾燥工序中，將蚯蚓濃縮液冷凍乾燥成粉。本發明的製備方法中，其離心工序最好分兩次完成，第一次先將蚯蚓勻漿液在小 於IOOOrpm 3000rpm的速度下進行預離心，去掉蚯蚓體內大部分糞便和殘渣，然後在 2000rpm SOOOrpm的速度下進行再離心，以充分去除蚯蚓勻漿後未溶解完的雜質。龍晶粉可單獨灌入膠囊製成單方，也可與其他中藥如黃芪、川芎等配成複方製成 膠囊劑。本發明的有益效果1、本發明採用凍融、勻漿、離心、滅菌、超濾濃縮和乾燥等工序製得的龍晶粉，其活 性物質成分保存下來，徹底去除了蚯蚓體內的糞便，並使鉛、砷等有害元素大幅降低，使其 安全性得到可靠保證。本發明由於採用離心後直接預過濾滅菌和超濾濃縮，故既可有效控 制微生物指標，又可充分表現出蚯蚓的價值，且本發明產品配以生物多糖(如甲殼素等)可 製成健康食品，用於改善人體血管微循環，促使血液暢通，延緩衰老，還可配以其他輔料或 中藥製成藥品，用於治療腦血栓、中風等老年疾病，社會效益和經濟效益十分顯著。2、龍晶粉能不依賴於血漿抗凝血酶III(AT-III)直接溶解血栓，具有抗凝和激活 纖溶的雙重作用，從而抑制血栓形成，促進血栓溶解。3、龍晶粉與普通中藥材店出售的地龍幹對全血凝塊和纖維蛋白凝塊的體外溶解 作用比較，龍晶粉體外溶解全血凝塊和纖維蛋白凝塊的能力明顯優於後者。4、龍晶粉對血管內皮細胞破損有修復作用，從而有利於血粘度的正常平衡，血管內粥樣物和血栓產生的機率降低。長服龍晶粉有利於恢復血粘度平衡，有利於治療各種因 血脈不通而引發的老年病；有利於延緩衰老延年益壽。
具體實施例方式下面結合附圖
和實施例對本發明作進一步的說明。實施例1.龍晶粉的製備(以生產10公斤龍晶粉為例)取約500公斤的鮮活蚯蚓漂洗乾淨後放在_20°C的冷庫中凍成若干冰塊，這樣可 將蚯蚓活細胞凍松破裂。將上述蚯蚓冰塊取出後放在37°C的生理鹽水中溶解，約1小時可 溶解完。(溶解溫度越低所需時間越長)，由於蚯蚓活細胞已凍松破裂，溶解後細胞內的活 性物質很容易釋放出來，得到蚯蚓勻漿液。生理鹽水的作用是用來保護蚯蚓活性物質不受 破壞。將蚯蚓勻漿液用離心機以IlOOrpm的速度進行預離心，是蚯蚓體內的糞便被沉澱排 除掉，得到的上清液再用離心機以5000rpm的速度再進行離心處理，使得蚯蚓勻漿液中未 溶解的雜質被充分沉澱，離心後的上清液過4次400目篩。將上述兩次離心處理後的上清 液經0. 22 μ m滅菌膜預過濾滅菌處理，得到滅菌上清液。透過液再用孔徑為2000D的超過 濾膜進行超過濾，濾出液經孔徑為1000D的超濾膜進行二次超濾濃縮，兩次超濾的壓力維 持在1. 8士0. 1個大氣壓，使所需要的物質截留下來，而將水分和蚯蚓體內的有害元素(如 鉛、砷等元素)。預過濾滅菌和兩次超濾濃縮是在密閉管道內完成的，這樣就可控制最終產 品的微生物指標，同時去除了對人體有害元素。超濾濃縮後的濃縮液，最後用真空凍幹機凍 幹成粉。即得約10公斤的龍晶粉。用它配以不同輔料，即可製得不同的蚯蚓類製品。實施例2.龍晶粉對大鼠體外血栓形成的影響參照Chandler法改良[1]，自行設計裝置cast-Ι模擬血栓儀。矽化的聚乙烯管直 徑5mm，長245mm，圓環形。旋轉半徑為47mm，與水平面夾角為75°，鐘擺式擺動，血液在環 內流動速度為61.57mm/S。實驗時儀器和管子溫度為38士0. 1°C。旋轉觀察時間8分鐘。 Wistar大鼠42隻，用一次性塑料注射器及塗矽針頭取血1ml。龍晶粉溶於用蒸餾水配製成 22. 4mg/ml的水溶液，灌胃劑量為0. 2ml/100gB. W，灌胃1小時後取血。DIC大鼠實驗前經陰 莖背靜脈注射大鼠腦粉浸出液，劑量0. 5ml/100g B. W.。注射腦粉浸出液後立即灌服龍晶粉 溶液，1小時後取血。體外加龍晶粉(或生理鹽水)組正常大鼠取血Iml後體外加0. 2ml 龍晶粉(22.4mg/ml)或生理鹽水，然後在體外血栓形成儀上轉8分鐘，測量血栓長度，稱血 栓溼重。另取結果如表1和表2。表1龍晶粉對正常大鼠體外血栓形成的影響 *P < 0. 05表2 口服龍晶粉對DIC大鼠體外血栓形成的影響 *P < 0. 05實施例3.龍晶粉對全血凝塊和纖維蛋白凝塊的體外溶解作用取正常大鼠的全血lml，15分鐘後在此凝固的全血中加入0.5ml龍晶粉溶液 (22. 4mg/ml)。4°C放置24小時後稱重。領取0. 5ml血漿加0. 5mlCaCl2，形成白色纖維蛋白 凝塊後，再加0. 5ml龍晶粉溶液，放置24小時後稱重。對照組一律以同容量生理鹽水代替， 結果如表3。表3龍晶粉對全血凝塊和纖維蛋白凝塊的影響(體外24h後) *P < 0. 01上述實驗結果說明，龍晶粉能不依賴於AT-III直接溶解血栓。實施例4.龍晶粉對家兔凝血、纖溶的作用正常家兔22隻，DIC家兔12隻。DIC模型是用靜脈注射兔腦粉方法複製，劑量 60mg/3ml/Kg[2]。正常家兔及DIC家兔均於灌胃龍晶粉溶液(或生理鹽水，劑量22. 4mg/ ml/Kg) Ih後取血，每次6ml，用常規方法分別測定一下指標[3]白陶土部分凝血活酶時間 (KPTT)、凝血酶原時間(PT)、優球蛋白溶解時間(ELT)、纖維蛋白含量以及3P試驗(定性)。 結果3P試驗(全部介於- +之間)、纖維蛋白原含量及PT與生理鹽水組比差異均不顯 著，但龍晶粉組KPTT明顯延長，ELT明顯縮短，差異顯著(P <0.05).具體結果見表4。表4 口服龍晶粉溶液對正常及DIC家兔凝血與纖溶的作用 氺P < 0. 05 氺*P < 0. 01實施例5.龍晶粉對正常及DIC大鼠血漿t-PA活性的影響Wiatar大鼠38隻(正常組20隻，DIC組18隻)，雄性。DIC模型的複製用靜脈注 射鼠腦粉的方法，劑量10mg/0.5ml/100g B.W. [2]。正常大鼠分為灌胃龍晶粉組及生理鹽水 組，劑量同上，服藥Ih後取血1ml。用發色底物檢測法檢測t-PA的活性[3]。結果為龍晶粉 t-PA活性較對照組有非常明顯的升高(見表5，P < 0. 05). DIC大鼠分為預防組、治療組和 鹽水對照組。結果預防組、治療組的t-PA活性顯著增高(見表6，P <0.05).表5龍晶粉對正常大鼠血漿t-PA活性的影響 *P < 0. 05 表6龍晶粉對DIC大鼠血漿t-PA活性的影響
*Ρ < 0. 05 (與對照組比)實施例6.龍晶粉與普通中藥材店出售的地龍幹對全血凝塊和纖維蛋白凝塊的體 外溶解作用比較取正常大鼠的全血lml，15分鐘後在此凝固的全血中加入0.5ml龍晶粉溶液 (22. 4mg/ml)。4°C放置24小時後稱重。領取0. 5ml血漿加0. 5mlCaCl2，形成白色纖維蛋白 凝塊後，再加0. 5ml龍晶粉溶液，放置24小時後稱重。地龍幹組將從普通中藥店購買的地 龍幹打磨成粉過80目篩，用蒸餾水溶解，製成22.4mg/ml的水溶液，其餘操作同龍晶粉組， 結果如表7。
表7龍晶粉與地龍幹對全血凝塊和纖維蛋白凝塊的體外溶解作用比較(體外24h
後) *P < 0. 01實施例7.龍晶粉的製備(以生產10公斤龍晶粉為例)取約500公斤的鮮活蚯蚓漂洗乾淨後放在-20°C的冷庫中凍成若干冰塊，這樣可 將蚯蚓活細胞凍松破裂。將上述蚯蚓冰塊取出後放在37°C的生理鹽水中溶解，約1小時可 溶解完。(溶解溫度越低所需時間越長)，由於蚯蚓活細胞已凍松破裂，溶解後細胞內的活 性物質很容易釋放出來，得到蚯蚓勻漿液。生理鹽水的作用是用來保護蚯蚓活性物質不受 破壞。將蚯蚓勻漿液用離心機以ISOOrpm的速度進行預離心，是蚯蚓體內的糞便被沉澱排 除掉，得到的上清液再用離心機以4500rpm的速度再進行離心處理，使得蚯蚓勻漿液中未 溶解的雜質被充分沉澱去除，離心後的上清液過3次400目篩。將上述兩次離心處理後的 上清液經0. 22 μ m滅菌膜預過濾滅菌處理，得到滅菌上清液。透過液再用孔徑為2000D的 超過濾膜進行超過濾，濾出液經孔徑為1000D的超濾膜進行二次超濾濃縮，兩次超濾的壓 力均約為1.8個大氣壓，使所需要的物質截留下來，而將水分和蚯蚓體內的有害元素(如 鉛、砷等元素)。預過濾滅菌和兩次超濾濃縮是在密閉管道內完成的，這樣就可控制最終產 品的微生物指標，同時去除了對人體有害元素。超濾濃縮後的濃縮液，最後用真空凍幹機凍 幹成粉。即得約10公斤的龍晶粉。用它配以不同輔料，即可製得不同的蚯蚓類製品。參考文獻
[2]朱益棟主編.彌散性血管內凝血.人民衛生出版社，1982，279 293[3]王振義主編.血栓與止血.上海科技出版社，1988，368 393本發明未涉及部分均與現有技術相同或可採用現有技術加以實現。
權利要求
一種龍晶粉，其特徵在於該龍晶粉是通過以下步驟製得的1)取愛森赤子活蚯蚓漂洗乾淨後在 20℃±3℃溫度下凍成冰塊，使蚯蚓活細胞凍松；2)將上述蚯蚓冰塊取出放置在0 50℃的生理鹽水中溶解，然後自溶攪拌成漿；3)將蚯蚓漿液至少進行一次離心處理；4)離心後的上清液過3 4次400目篩；5)過濾後得到的蚯蚓上清液用滅菌膜進行預過濾滅菌；6)滅菌後的上清液先用孔徑為2000D的膜進行超濾，收集濾出液；再用孔徑為1000D的膜對前次超濾的濾出液進行二次超濾濃縮；7)濃縮後的蚯蚓勻漿濃縮液乾燥成粉。
2.按權利要求1所述的龍晶粉，其特徵在於其中的離心工序分兩次完成，第一次先將 蚯蚓勻漿液在IOOOrpm 3000rpm的速度下進行預離心，然後再在2000rpm 8000rpm的速度下進行再離心。
3.按權利要求1所述的龍晶粉，其特徵在於乾燥工序中，將蚯蚓濃縮液冷凍乾燥成粉。
4.權利要求1所述的龍晶粉的製備工藝，其特徵在於該工藝由以下步驟組成1)取愛森赤子活蚯蚓漂洗乾淨後在_20°C士3°C溫度下凍成冰塊，使蚯蚓活細胞凍松；2)將上述蚯蚓冰塊取出放置在0-50°C的生理鹽水中溶解，然後自溶攪拌成漿；3)將蚯蚓漿液至少進行一次離心處理；4)離心後的上清液過3-4次400目篩；5)過濾後得到的蚯蚓上清液用滅菌膜進行預過濾滅菌；6)滅菌後的上清液先用孔徑為2000D的膜進行超濾，收集濾出液；再用孔徑為1000D 的膜對前次超濾的濾出液進行二次超濾濃縮；7)濃縮後的蚯蚓勻漿濃縮液乾燥成粉。
5.按權利要求4所述的製備工藝，其特徵在於其中的離心工序分兩次完成，第一次先 將蚯蚓勻漿液在IOOOrpm 3000rpm的速度下進行預離心，然後再在2000rpm 8000rpm 的速度下進行再離心。
6.按權利要求4所述的製備工藝，其特徵在於乾燥工序中，將蚯蚓濃縮液冷凍乾燥成粉。
7.權利要求1所述的龍晶粉在製備改善微循環或溶栓藥物中的應用。
全文摘要
本發明屬於中醫藥領域，涉及一種龍晶粉及其製備工藝和應用。龍晶粉是特指從愛森赤子鮮活蚯蚓中按照本發明所述製備方法提取、分離、濃縮、乾燥而製得的天然活性蛋白混合物。其製作工藝是將鮮活的愛森赤子蚯蚓洗淨後凍成冰塊，然後放在鹽的水溶液中溶解，並自溶攪拌成漿，得到的勻漿液至少進行一次離心處理，離心後的上清液先經3-4次400目篩過濾，再進行預過濾滅菌和連續兩次超濃縮，最後乾燥成粉製得。龍晶粉具有抗凝和激活纖溶的雙重作用，從而抑制血栓形成，促進血栓溶解，可用於製備改善微循環和溶栓藥物。
文檔編號A61K35/64GK101890052SQ20091002779
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月21日 優先權日2009年5月21日
發明者龔之森 申請人:龔之森