含人生長激素的水性藥物組合物的製作方法

2023-09-18 13:10:00

專利名稱：含人生長激素的水性藥物組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種含人生長激素的可注射藥物製劑，特別涉及一種溶液形式的含人生長激素的藥物製劑。
人生長激素(略稱為「hGH」)是一種單鏈多肽激素，是包含191個胺基酸殘基的天然存在型激素，hGH通常以生物活性單體形式存在，但已知在熱力或機械力作用下，如對藥物製劑加以振蕩，可凝集成二聚物，然後是多聚物，使其失去生物活性(Berker,G.W.等,(1987)Biotechnol.Appl.Biochem.,9,p.478)。
另一方面，眾所周知，長時間保存的hGH水溶液會逐漸產生脫醯氨基產物，而較少形成hGH的聚合產物。這些脫醯氨基hGH的生物活性雖然沒有什麼改變(Becker,G.W.等(1998)Biotechnol.Appl.Biochem.,10,p.326)，但由於它的存在被認為是質量的下降，所以不是一種理想的藥物，其被允許的含量通常在說明書中加以規定。
另外，一般認為因凝聚而引起的hGH變性大多數是由於物理力的作用，而因脫醯氨基引起的變性主要是在化學力作用下產生的。
鑑於上述原因，至今還沒有獲得一種令人滿意的hGH水性製劑，常用的是在注射前溶解的凍幹製劑。
由於用hGH來緩解侏儒症需要很長一段時間，所以，允許患者自己進行注射，一般從治療開始就可在家用藥。使用hGH的凍幹製劑時，先將製劑溶於適當的溶劑中，然後由患者自己(通常是孩子)或其家人進行皮下或肌內注射。這樣，溶解凍幹製劑是由患者或其家人來做的。所以，需要醫生正確指導患者如何進行溶解，以避免產生會減弱hGH生物活性的凝聚物。產品廣告還包括使用須知和hGH應採用溫和的圓周運動加以溶解的指導。
由於在形成凍幹製劑時已注意到凝聚物的形成，所以，人們已經嘗試用各種方法抑制凝聚物的形成，但是，仍迫壓希望有一種更容易處理、更穩定的製劑來代替通常所用的需要在使用前溶解的製劑。最近，一種帶有注射器的藥盒型製劑已經投入使用，由於它具備較複雜的結構，所以溶解凍幹hGH的操作可在注射器中進行，這樣就必須對患者或其家人進行仔細而詳盡的使用說明，因此，不能夠排除各種不可預見的錯誤操作出現的危險性。
由於患者或其家人一般是在家裡注射hGH，所以，供應一種省去溶解步驟的水性hGH製劑將會更方便。這種合適的水性製劑將會減少給患者及其家人帶來的不便，因為它不需要分為兩個部分、並在使用前進行溶解這樣複雜的結構，例如，有一種筆型產品，它包括用隔膜隔開的凍幹hGH和溶劑。
以下是各種較好的關於hGH水性製劑的專利申請。
CABI在待審專利公報No.508156/1994(以下稱為「CABI公報」)中揭示了hGH的注射用組合物，或pH為5～7.5、含有2～50mM檸檬酸緩衝劑的活性類似物。該公報還揭示了用檸檬酸鹽能夠獲得比磷酸鹽更好的穩定性，pH值以約6.0～7.0為好。
上述CABI公報還揭示了該製劑能夠至少穩定保存12個月。該公報中的單體穩定性是指其含量不少於最初的85％，考慮到一般認為單體含量應不少於90％，所以，上述CABI揭示的製劑幾乎不具備充分的穩定性。
另外，本發明者們獨立於上述CABI揭示內容對質量和穩定性的改進進行研究後還發現，pH值是製備溶液形式的hGH製劑的關鍵因素，使用能夠將pH值維持在5～7的範圍內，更理想地在5.5～6.5pH範圍內的緩衝劑。例如檸檬酸鹽，作為這樣的緩衝劑是有效的(待審專利公報No.92125/1996)。
此外，GenentechInc.在待審專利公報No.509719/1995(以下稱為「Genentech公報」)中揭示了包含hGH、甘露糖醇、緩衝液和非離子型表面活性劑的液體hGH製劑。該公報揭示了較理想的檸檬酸鹽緩衝液。
Novo Nordisk Pharma在待審專利公報No.507497/1993中揭示了一種製劑，它的製備過程如下首先，在二價陽離子(如Zn2+)存在下，添加丙酮或乙醇使hGH結晶，然後使結晶冷凍乾燥，再將經過乾燥的結晶放置在pH為6.1～6.2的含有磷酸鹽、乙酸鋅、甘油和苄醇的混懸液中。該公報還揭示，在22～24的溫度下，對上述hGH結晶的混懸液進行為時6個月的穩定性測試，分別用離子交換HPLC測定脫醯氨基反應和分解反應的情況，用GPC測定二聚物和聚合物的含量。其結果是，6個月後，該製劑中的脫醯氨基產物為5.0％，二次脫醯氨基產物為1.8％，二聚物為1.2％，聚合物為0.3％，都低於對一般的凍幹製劑重新獲得的溶液進行穩定性測試後獲得的數據。上述公報還揭示在結晶時要獲得較大結晶的關鍵是Zn2+。而且，雖然在hGH的結晶過程中使用了可溶於水的溶劑，如丙酮或乙醇，但並沒有提到混懸液中的hGH結晶的次級或更高級結構有進一步的變化，這就留下了疑問。
丙酮和乙醇常用於純化蛋白質，以得到沉澱形式。該方法是利用了蛋白質對有機溶劑的溶解度較低這一特性。雖然上述公報中的有機溶劑濃度低於使蛋白質沉澱的濃度，但將它們用於人服用的藥物製劑卻是不合適的。
鑑於上述情況，本發明者們進行了進一步研究以求獲得更好的水性hGH製劑。在研究過程中，按照本發明者們的待審專利公報和CABI公報所述的方法，使用檸檬酸鹽緩衝液製備了各種液狀水性hGH製劑，並測定了它們在各時間段的穩定性。結果發現，任何一種製劑都產生了肉眼可見的微粒，在聚集後尤為明顯，用孔徑為0.22μm的濾膜過濾可除去微粒，但在長期保存後或振蕩產生的應力下仍會出現。由於這些微粒的形成會影響藥物製劑的質量，所以，希望有一種能夠抑制微粒產生的水性製劑。
另一方面，有報導認為，檸檬酸鹽作為酸性極弱至較弱的緩衝液被廣泛地用於注射用製劑，在用於hGH時，該製劑皮下或肌內注射會引起疼痛感(待審專利公報No.51003/94)。本發明者們自己也用按照上述CABI公報和上述本發明者們的待審專利公報中描述的方法製得的製劑作了試驗，同樣發現在注射這些含有檸檬酸鹽的hGH注射劑時產生較強烈的疼痛感。
不象製劑的穩定性問題那樣，注射時的疼痛感對於製劑的質量不是很重要的問題。但是，考慮到hGH製劑需要在很長一段時間內經常注射，而且患者通常為孩子，所以，為了減輕患者的疼痛感，從而確保患者的配合，人們希望有一種本身不會引起疼痛感的注射液。目前，實際上還沒有一種在注射時病人不會覺得疼的製劑被用於治療，因此，對於上述CABI公報和Genentech公報(後者認為檸檬酸鹽緩衝液是一種較理想的緩衝液)所描述的製劑，以及本發明者們的上述專利申請所述製劑來講，還可以在減輕注射時的疼痛感這一方面作些改進，消除或減輕疼痛感將有益於患者。
本發明的第一個目的是解決注射用hGH水性製劑的穩定性問題，即提供一種脫醯氨基、聚合和聚集等現象實質上都被抑制、且不會產生上述微粒的穩定的hGH水性製劑。
本發明的另一目的是提供一種在皮下或肌肉注射時能夠消除或減輕因其組分而引起疼痛感的hGH水性製劑。
本發明者們以冷凍乾燥前不經意地保存過一段時間的各種hGH製劑進行試驗，發現將hGH溶於用馬來酸鹽緩衝液或琥珀酸鹽緩衝液使pH值維持在6左右的水溶液而獲得的製劑，其穩定性接近於用檸檬酸鹽緩衝液將pH值維持在同樣水平的溶液(如待審專利公報No.92125/1996所述)，而且，它們不會產生二聚物或聚合物，也不會產生脫醯氨基產物。進行以下試驗，能夠發現人生長激素的質量發生了哪些重大變化，即用體積排除高效液相色譜法(SE-HPLC)測定單體含量，用反相高效液相色譜法測定脫醯氨基產物的含量，觀察一般外觀，測定pH值。在製備過程中對水性製劑進行進一步認真研究的結果是，在熱力作用下、並在涼爽的地方放置6個月後，從丙酮酸鹽緩衝液、乙酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、琥珀酸鹽緩衝液和馬來酸鹽緩衝液中選出的具備較好緩衝能力的緩衝液是馬來酸鹽緩衝液、琥珀酸鹽緩衝液和檸檬酸鹽緩衝液。
這樣就能夠再次確定，通過使用上述緩衝液，能夠在極弱或較弱酸性的pH範圍內獲得hGH的穩定性。但是，進一步觀察後發現，在極弱或較弱的酸性條件下完成製劑的製備後，製劑中出現了極少量肉眼可見的微粒，它們能散射光並區別於凝聚物，所以，本發明者為了尋求抑制微粒形成的方法而試驗了很多化合物的作用，結果發現低濃度的苯扎氯銨能夠有效地抑制微粒的產生。在此基礎上又進行進一步研究的結果是，採用某些水性製劑配方，按此配方將hGH溶於含有苯扎氯銨的極弱或較弱酸性溶液中能夠形成穩定的hGH水性製劑，該hGH水性製劑中的脫醯氨基反應、聚合反應和聚集現象、以及形成微粒現象都受到抑制，從而完成了本發明。
同時，對上述極弱或較弱酸性水性製劑進行深入研究時發現，當選用檸檬酸鹽作為緩衝液將pH值維持在一定範圍內時，在皮下或肌內注射時會產生較強烈的疼痛感，而選用馬來酸鹽或琥珀酸鹽這些類似的多元羧酸鹽時，卻幾乎不產生疼痛感。所以，在上述研究的基礎上，成功製備了穩定性良好、注射時不會產生疼痛感的含有hGH的水性藥物組合物。
本發明提供一種用於注射的含有人生長激素的水性藥物組合物，其中所述人生長激素被溶於含有苯扎氯銨的極弱或較弱酸性緩衝溶液中。
上述極弱或較弱酸性緩衝溶液的pH值以5～7為宜，較好為5.5～6.5，更好的是5.75～6.25，特別好的是6。
從穩定性的觀點來看，本發明組合物中所含的苯扎氯銨的量可確定在一個較寬的範圍內，只要在製備過程中和長期保存過程中均可抑制微粒的產生。然而，以0.002～0.03mg/ml的量為宜，該量是皮下或肌內注射用藥物製劑所允許的量，更好的是0.005～0.02mg/ml。
至於緩衝劑，較合適的是將pH值調節在7以下，較佳為不超過6.5，且具有將pH值保持在下限以上、不引起hGH沉澱的緩衝能力。具備將pH值維持在5～7的範圍內，更好是在5.5～6.5的範圍內的緩衝液作用的緩衝劑將被優先選擇，具體例子包括馬來酸鹽、琥珀酸鹽和檸檬酸鹽。
只要能夠保證緩衝能力，對緩衝劑的濃度就沒有特別的限定，其濃度一般為1～100mM，較好為1～50mM，更好為2～20mM。本說明書中，術語「濃度」在指緩衝劑時，是指包括構成緩衝液的游離有機酸及其一級解離或進一步解離形成的所有共軛鹼在內的化學物的總濃度。
上述緩衝劑中，較好的是馬來酸鹽和琥珀酸鹽緩衝劑，因為在皮下或肌內注射本發明組合物時不會因組分的緣故引起疼痛感。尤其好的是馬來酸鹽，作為皮下或肌內注射劑的緩衝劑已有豐富經驗。
本發明進一步提供一種注射用含人生長激素的水性藥物組合物，其中所述的人生長激素被溶解於含苯扎氯銨的極弱或較弱酸性緩衝溶液中，所用的緩衝劑為馬來酸鹽緩衝劑或琥珀酸鹽緩衝劑，特別好的是馬來酸鹽緩衝劑，這樣在注射時，上述組合物就不會引起疼痛感。這種組合物不僅能保持較高的hGH穩定性，而且，大大減輕了患者在每次注射時的疼痛感，因而有更多益處。
本發明中，術語「人生長激素」或其簡稱「hGH」包括191個胺基酸組成的天然hGH。對其起源沒有特別限定，可以通過任何途徑獲得，如利用遺傳重組技術或從垂體提取。此外，該術語還包括利用遺傳重組技術獲得的具有N-末端甲硫氨酸、由192個胺基酸組成的生理活性hGH，以及部分胺基酸缺失、被取代或被插入，但與天然人生長激素的活性接近的其他變異物。
對包含在本發明組合物中的人生長激素的量沒有特別的限定。其上限為能溶於所用緩衝液的最大量，下限為在一般製劑中的含量。人生長激素的含量較好為≤10mg/ml左右，該量被這些製劑經常採用。
製備本發明的組合物時，所用的苯扎氯銨可以是液體也可以是固體，只要它是作為藥品的添加劑所允許的級別即可。
注射劑的滲透壓對皮下或肌內注射尤為重要，必須引起重視。注射劑低滲或高滲都會在注射時引發疼痛感。一般推薦注射溶液與生理鹽水的相對克分子滲透壓為0.9～1.6，較好為1.0～1.4。
一般通過單獨或混合添加D-甘露糖醇和中性鹽將本發明組合物的相對克分子滲透壓濃度調整到上述範圍內。D-甘露糖醇可將相對克分子滲透壓濃度調整到0.9～1.6，較好為1.0～1.4，其量是每1ml本發明組合物中含30～100mg。中性鹽如氯化鈉等，也可將滲透壓調整到0.9～1.6，較好為1.0～1.4，其量是每1ml本發明組合物中含5～20mg。
目前，作為藥品使用的hGH劑量被控制在每周每公斤體重0.5[IU]，因此其凍幹製劑往往要分數次注射，所以，需要在保存期間常添加防腐劑以防止細菌等的感染。
添加到本發明組合物中的防腐劑的量以不影響hGH的質量，並能夠發揮其防腐作用為佳。一般來說，最適合本發明組合物的防腐劑首推苯甲酸鈉，另外也可使用苯甲酸、苯酚等。一般被應用於需在使用前溶解的冷凍hGH製劑中的苄醇、間甲酚和對羥基苯甲酸甲酯不被推薦用於本發明組合物，因為它們與苯甲酸鈉、苯甲酸或苯酚相比，對脫醯氨基產物的形成會起促進作用。上述防腐劑的用量可參考通常用於注射劑的防腐劑用量方便地進行調整。例如，苯甲酸鈉的用量一般是每1ml本發明組合物0.1～5mg，較好為0.5～3mg。
本發明組合物中還可包含非離子型表面活性劑，例如吐溫20或吐溫80，當每1ml本發明組合物中的添加量為0.5～5mg時，更好為1～2mg時，雖然作用不是很大，但能夠進一步提高穩定性。
製備本發明組合物的方法可參考常用的製備水性注射劑的方法。本發明組合物最好保存在涼爽的地方，溫度最好為2～8℃。
由於本發明組合物為水溶液，所以能夠以比以往使用前需要溶解的製劑更為方便的形式供患者使用。採用傳統的製備單一溶液型注射劑的方法將組合物裝入容器時，較好的是在裝瓶後排除氣泡，以減少保存時振蕩的影響，從而更加確保穩定性。
(穩定性試驗)hGH中常會形成二聚物、聚合物和脫醯氨基產物，前兩者可以用體積排除的HPLC(SE-HPLC)測定，後者可以通過反相HPLC(RP-HPLC)測定。另外，以已知生物活性為參照標準，用物理化學方法測定hGH已被接受為hGH生物檢定的合適的測定方法，因為觀察到hGH體積排除HPLC測定檢出的單體峰面積與其生物活性有相關性(Yuki等，Iyakuhin Kenkyu,25:383(1994))。因此，用這兩種HPLC對hGH進行評估不僅能夠測定單體和脫醯氨基產物，還能夠測定hGH的生物活性。
本發明者們用上述測試方法對本發明的hGH水性製劑的穩定性進行測定的結果是，在30℃和40℃的溫度下保存後檢出了脫醯氨基產物的逐漸生成，由測定結果計算出的值表明，在溫度為4℃。pH值為5.5～6.5的條件下，脫醯氨基產物的量被控制在12％以下。而且，在4℃的溫度下保存1年後，單體含量維持在98％左右，甚至更多。這些結果說明本發明的hGH水性藥物組合物可以作為一種產品被保存在涼爽的地方，而不用象以往產品那樣進行冷凍乾燥。以下，將對穩定性研究的具體情況進行說明。
(測定方法)按照Yuki等的方法(Iyakuhin Kenkyu,25:383(1994))，進行體積排除HPLC和反相HPLC測試。
1．體積排除HPLC(SE-HPLC)採用的柱子、洗脫液和流速等情況如下所示。
(1)柱子TSK凝膠G3000SWXL(7.8mm×30cm)(2)洗脫液0.2M磷酸鈉緩衝液(pH6.5),0.2M氯化鈉(3)流速0.6ml/min，柱溫室溫，測試時的波長280nm。
2．反相HPLC(RP-HPLC)採用的柱子、洗脫液和流速等情況如下所示。
(1)柱子Vydac214TP54(4.6mm×25cm)(2)洗脫液50mM Tris-鹽酸緩衝液(pH7.5)∶正丙醇=71∶29(3)流速0.5ml/min，柱溫45℃，測試時的波長280nm。
(試驗例1)[緩衝溶液1]每1ml 20mM檸檬酸鹽緩衝溶液包含0.02mg苯扎氯銨和100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。每1ml 20mM檸檬酸鹽緩衝溶液包含100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。每1ml 20mM馬來酸鹽緩衝溶液包含0.02mg苯扎氯銨和100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。每1ml 20mM馬來酸鹽緩衝溶液包含100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。每1ml 20mM琥珀酸鹽緩衝溶液包含0.02mg苯扎氯銨和100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。每1ml 20mM琥珀酸鹽緩衝溶液包含100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。
在上述6種緩衝溶液中分別加入等體積的6.8mg/ml天然hGH水溶液，輕輕混合後，分別獲得水性組合物1～6(最終pH為6)。然後，用孔徑為0.22μm的濾膜過濾每種溶液，再吸入注射針筒中，各為1ml，排出氣泡後密封，獲得試樣。
最後，使上述每種水性製劑的一部分在2～8℃溫度下水平振蕩(振幅為20mm，每分鐘來回振蕩220次)24小時。其結果如表1所示。
上述水性製劑中，製劑2、4、6都不含苯扎氯銨，當它們被分到注射器中並密封時，注意到痕量微粒的形成，微粒量隨著振蕩而增加。與此相反，水性製劑1、3和5都含有苯扎氯銨，在被分到注射器中並密封時，沒有發現形成了微粒，而且，即使劇烈振蕩，也不會形成微粒。至於由SE-HPLC測得的單體含量或由RP-HPLC測得的脫醯氨基產物量，則在振蕩前和振蕩後沒有明顯差別，而且添加了苯扎氯銨也不引起任何差異。上述結果暗示在包含hGH的水性製劑中，苯扎氯銨是一種能夠有效抑制微粒形成的穩定劑。
表1穩定性和緩衝溶液中苯扎氯銨的存在之間的關係
(試驗例2)在每1ml含0.002～0.1mg苯扎氯銨和100mg D-甘露糖醇的20mM檸檬酸鹽緩衝液(pH6.0)和馬來酸鹽緩衝液(pH6.0)中分別加入等體積的6.8mg/ml天然hGH水溶液，輕輕混合(最終pH為6)。然後，用孔徑為0.22μm的濾膜過濾每種溶液，再吸入注射針筒中，各1ml，排出氣泡後密封。以它們的一般外觀為基礎進行評估，測定能有效抑制微粒形成的苯扎氯銨量。結果如表2所示。當每ml製劑中的苯扎氯銨含量達到0.002～0.3mg時，就能夠觀察到抑制效果。
表2苯扎氯銨濃度和抑制微粒產生效果的關係
試驗例3)分別將試驗例1的水性製劑1、3和5放置在40℃和50℃恆溫箱中，時間為0、3、7、10、14和21天，然後啟封，用RP-HPLC和SE-HPLC進行分析。其結果如表3所示。RP-HPLC分析的結果與穩定性評估方程式相符合，這就表明雖然會出現脫醯氨基產物的逐漸形成，但當規定脫醯氨基產物上限為12％時，這些製劑至少可以穩定保存1年。另一方面，從SE-HPLC的分析結果可看出，即使在2～8℃的溫度下保存1年，單體含量也可維持在98％左右，或者超過98％。比較保存期間各時間點所取試樣，從這些HPLC測定所得結果，未見各緩衝液之間的差異。
表3在40℃和50℃的溫度下放置後的水性製劑1、3和5的穩定性
(試驗例4)[緩衝溶液7]每1ml 20mM檸檬酸鹽緩衝液中包含0.02mg苯扎氯銨和100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。每1ml 20mM馬來酸鹽緩衝液中包含0.02mg苯扎氯銨和100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。每1ml 20mM琥珀酸鹽緩衝液中包含0.02mg苯扎氯銨和100mg D-甘露糖醇(pH6.0)。
在上述三種緩衝溶液中各加入等體積的6.8mg/ml天然hGH水溶液，輕輕混合，分別獲得水性製劑7～9(最終pH為6)。然後，用孔徑為0.22μm的濾膜過濾每種溶液，再吸入注射針筒中，各1ml，排出氣泡後密封，獲得試樣。然後將每種水溶液放置在2～8℃的溫度下，時間為6個月，分別在保存0、1、3、6個月後測定試樣中單體含量、脫醯氨基產物量和一般外觀的變化，結果如表4所示。在這些製劑中均未觀察到微粒的形成。
表4水性製劑7～9在2～8℃的溫度下保存6個月的結果
試驗例5)注射時的疼痛試驗為了測試組合物引起的皮下注射的疼痛感，分別在檸檬酸鹽、馬來酸鹽或琥珀酸鹽緩衝液(最初pH6.0)中添加適量的D-甘露糖醇製得注射用製劑，它們與生理鹽水的克分子滲透壓濃度比為1.1。由於測試的目的是檢測上述各緩衝液所造成的疼痛感，所以其中沒有添加hGH。充分解釋了測試目的後，進行測試，即給十個健康男性志願者注射以下三種製劑，測定疼痛程度。這三種製劑的測試採用的是盲法。疼痛程度用以下四種方式表示(++)表示很疼，(+)表示較疼，(±)表示有點疼，(-)表示不疼。
配方110mM檸檬酸鹽緩衝液+D-甘露糖醇(pH6.0)配方210mM馬來酸鹽緩衝液+D-甘露糖醇(pH6.0)配方310mM琥珀酸鹽緩衝液+D-甘露糖醇(pH6.0)表5注射時的疼痛感和緩衝液的類型的關係(每組十個試樣
測試結果如表5所示。表中的數據表示給出相應判斷的受試者的人數。全部十名受試者都認為注射了以檸檬酸鹽為基礎組分製得的製劑後「很疼」，而注射了以馬來酸鹽為基礎組分製得的製劑後「不疼」。另外，九名受試者認為注射了以琥珀酸鹽為基礎組分製得的製劑後「不疼」，僅有一名受試者認為「有點疼」。上述結果表明注射了以馬來酸鹽或琥珀酸鹽為基礎組分製得的製劑後，沒有疼痛感，或只有一點點疼，與此相反，注射了以檸檬酸鹽為基礎組分製得的製劑後會引起很強的疼痛感。
(試驗例6)[緩衝溶液10]每1ml 20mM檸檬酸鹽緩衝液中包含0.02mg苯扎氯銨、50mg D-甘露糖醇、5mg氯化鈉和2mg苯甲酸鈉(pH6.0)。每1ml 20mM馬來酸鹽緩衝液中包含0.02mg苯扎氯銨、50mg D-甘露糖醇、5mg氯化鈉和2mg苯甲酸鈉(pH6.0)。每1ml 20mM琥珀酸鹽緩衝液中包含0.02mg苯扎氯銨、50mgD-甘露糖醇、5mg氯化鈉和2mg苯甲酸鈉(pH6.0)。
在上述三種緩衝溶液中加入等體積的6.8mg/ml天然hGH水溶液，輕輕混合，分別獲得水性製劑10～12(最終pH為6)。然後，用孔徑為0.22μm的濾膜過濾每種溶液，再吸入注射針筒中，各1ml，排出氣泡後密封，獲得試樣。然後將每種水溶液放置在40℃和50℃的溫度下，21天後打開，用RP-HPLC和SE-HPLC進行分析，其結果如表6所示。
表6水性製劑10-12的分析結果
在40℃和50℃的溫度下保存21天後，任何一種水性製劑中的單體含量都沒有什麼變化，而脫醯氨基產物的形成在上述試驗例3所述預期的長期穩定性限度內，即足以預期1年的穩定性。
(試驗例7)[緩衝溶液13]每1ml 20mM馬來酸鹽緩衝液中包含0.02mg苯扎氯銨和100mg D-甘露糖醇鈉(pH6.0)。
在上述緩衝溶液13中加入等體積的20.4mg/ml天然hGH水溶液，輕輕混合，獲得水性製劑13(最終pH為6)。然後，用孔徑為0.22μm的濾膜過濾該溶液，再吸入注射針筒中，各1ml，排出氣泡後密封，獲得試樣。然後將該水性製劑13保溫於40℃和50℃的溫度下，21天後打開，用RP-HPLC和SE-HPLC進行分析，其結果如表7所示。
表7水性製劑13的分析結果<
在40℃和50℃放置21天後，該水性製劑的單體含量沒有什麼變化，而脫醯氨基產物的形成在上述試驗例1所述預期的長期穩定性限度內，即足以預期1年的穩定性。
以下，參照實施例對本發明進行更為詳細的說明，但應當注意，本發明並不僅限於這些實施例，可以增加或減少以下實施例中所述每種組分的量或濃度，也可用其他組分代替一種或多種實施例中的組分，或者添加其他組分。
(實施例1)按照如下配方將各組分進行混合，製得緩衝溶液，然後添加以下所述hGH溶液，再通過過濾滅菌，獲得注射用製劑(最終pH為6.0)。苯扎氯銨 0.02mgD-甘露糖醇 100mg20mM檸檬酸鹽緩衝液 適量總量 1ml(pH6.0)6.8mg/ml天然hGH水溶液…1ml(實施例2)與實施例1同樣操作，按照如下配方製得注射用製劑(最終pH為6.0)。苯扎氯銨 0.02mgD-甘露糖醇 100mg20mM馬來酸鹽緩衝液 適量總量 1ml(pH6.0)[hGH溶液]6.8mg/ml天然hGH水溶液…1ml(實施例3)與實施例1同樣操作，按照如下配方製得注射用製劑(最終pH為6.0)。苯扎氯銨 0.02mgD-甘露糖醇 100mg20mM琥珀酸鹽緩衝液 適量總量 1ml(pH6.0)[hGH溶液]6.8mg/ml天然hGH水溶液…1ml(實施例4)與實施例1同樣操作，按照如下配方製得注射用製劑(最終pH為6.0)。苯扎氯銨 0.02mgD-甘露糖醇 50mg氯化鈉 5mg苯甲酸鈉 2mg20mM檸檬酸鹽緩衝液 適量總量 1ml(pH6.0)6.8mg/ml天然hGH水溶液…1ml(實施例5)與實施例1同樣操作，按照如下配方製得注射用製劑(最終pH為6.0)。苯扎氯銨 0.02mgD-甘露糖醇 50mg氯化鈉 5mg苯甲酸鈉 2mg20mM馬來酸鹽緩衝液 適量總量 1ml(pH6.0)[hGH溶液]6.8mg/ml天然hGH水溶液…1ml(實施例6)與實施例1同樣操作，按照如下配方製得注射用製劑(最終pH為6.0)。苯扎氯銨 0.02mgD-甘露糖醇 50mg氯化鈉 5mg苯甲酸鈉 2mg20mM琥珀酸鹽緩衝液 適量總量 1ml(pH6.0)[hGH溶液]6.8mg/ml天然hGH水溶液…1ml(實施例7)與實施例1同樣操作，按照如下配方製得注射用製劑(最終pH為6.0)。苯扎氯銨 0.002mgD-甘露糖醇 100mg20mM馬來酸鹽緩衝液 適量總量 1ml(pH6.0)[hGH溶液]
6.8mg/ml天然hGH水溶液…1ml(實施例8)與實施例1同樣操作，按照如下配方製得注射用製劑(最終pH為6.0)。苯扎氯銨 0.01mgD-甘露糖醇 100mg20mM馬來酸鹽緩衝液 適量總量 1ml(pH6.0)[hGH溶液]6.8mg/ml天然hGH水溶液…1ml
權利要求
1．一種含人生長激素的注射用水性藥物組合物，其中所述人生長激素被溶於含有苯扎氯銨的極弱或較弱酸性緩衝溶液中。
2．如權利要求1所述的組合物，其pH值等於或大於5，並小於7。
3．如權利要求1或2所述的組合物，1ml所述組合物中苯扎氯銨的含量為0.002～0.03mg。
4．如權利要求1-3的任一項所述的組合物，其中所用的緩衝溶液為馬來酸鹽，它可減輕組合物在注射時引起的疼痛感。
5．如權利要求1-3的任一項所述的組合物，其中所用的緩衝溶液為琥珀酸鹽，它可減輕組合物在注射時引起的疼痛感。
6．如權利要求1-3的任一項所述的組合物，其中所用的緩衝溶液為檸檬酸鹽。
7．如權利要求1-6的任一項所述的組合物，所述組合物中緩衝溶液的濃度為1～100mM。
8．如權利要求1～7的任一項所述的組合物，所述組合物中還含有D-甘露糖醇和/或中性鹽。
9．如權利要求8所述的組合物，1ml所述組合物中D-甘露糖醇的含量為30～100mg。
10．如權利要求8或9所述的組合物，其中所述的中性鹽為氯化鈉。
11．如權利要求10所述的組合物，1ml所述組合物中氯化鈉的含量為30～100mg。
12．如權利要求1～11的任一項所述的組合物，所述組合物中還包含防腐劑。
13．如權利要求12所述的組合物，其中所述的防腐劑選自苯甲酸鈉、苯甲酸和苯酚。
14．如權利要求13所述的組合物，其中所述的防腐劑為苯甲酸鈉。
15．如權利要求14所述的組合物，1ml所述組合物中苯甲酸鈉的含量為0.1～5mg。
16．如權利要求1～15的任一項所述的組合物，所述組合物中還包含非離子型表面活性劑。
17．如權利要求16所述的組合物，其中所述的非離子型表面活性劑為吐溫20和吐溫80。
18．如權利要求16或17所述的組合物，1ml所述組合物中非離子型表面活性劑的含量為0.5～5mg。
19．一種含人生長激素的注射用水性藥物組合物，其中所述人生長激素被溶於含有苯扎氯銨的極弱或較弱酸性緩衝溶液中，其中的緩衝劑選自馬來酸鹽、琥珀酸鹽和檸檬酸鹽緩衝液，所述組合物還包含D-甘露糖醇和/或氯化鈉。
20．如權利要求19所述的組合物，所述組合物還包含苯甲酸鈉。
全文摘要
本發明提供了一種含人生長激素的注射用水性藥物組合物,其中所述人生長激素被溶於含有苯扎氯銨的極弱或較弱酸性緩衝溶液中,較好的緩衝溶液是馬來酸鹽緩衝液。該組合物是一種穩定性良好的液體製劑,而且注射時引起的疼痛感軟弱。
文檔編號A61K47/10GK1229676SQ9910178
公開日1999年9月29日 申請日期1999年2月4日 優先權日1998年2月4日
發明者辰巳正史, 井上桂, 梶原淳一 申請人:日本化學研究株式會社