降低活體內氧化氮水平的方法及其可用的組合物的製作方法

2023-09-18 13:36:55 4

專利名稱：：降低活體內氧化氮水平的方法及其可用的組合物的製作方法
技術領域：
：本發明的領域本發明涉及一種降低哺乳動物體內氧化氮水平的方法。特別地，一方面，本發明涉及一種通過以作為氧化氮的清除劑的二硫代氨基甲酸鹽-金屬配合物向遭受發炎和/或傳染病痛苦的主體給藥而降低哺乳動物體內氧化氮水平的方法，另一方面本發明涉及這裡所公開的方法中所用的組合物和配方。本發明的技術背景氧化氮(·NO)是一種自由基細胞信使，具有多種生物功能，包括調節血管緊張度，調控大腦中的細胞通訊，以及通過非特異性免疫應答處死病原體(見例如Ignarro，L.J.，Ann.Rev.Toxicol30535-560(1990)；Moncada，S.，Acta.Physiol.Scand.145201-227(1992)；和LowensteinandSnyder，Cell70705-707(1992)。氧化氮是L-精氨酸的化學等價的胍基氮原子的五-電子酶催化氧化作用的產物，這種氧化作用受酶即氧化氮合成酶的催化。已經鑑定出兩種主要類型的氧化氮合成酶組成型的氧化氮合成酶和誘導型的氧化氮合成酶。組成型的·NO合成酶存在於內皮中，其中·NO作為有效的血管擴張劑連續不斷地以低濃度從內皮中產生以調節血壓和血管緊張度；誘導型的·NO合成酶存在於多種細胞中，包括巨噬細胞，噬中性白細胞，白細胞，肝細胞，血管內皮細胞和平滑肌細胞。後面這種·NO合成酶受脂多糖(LPS)和細胞活素誘導，以高濃度產生·NO達好幾天，在抗發炎和抗感染的非特異性免疫中起重要作用(Kilbourn和Griffith，J.Natl.CancerInst.，84827-831，(1992)；Moncada和Higga，N.Eng.J.Med.，3292002-2-12，(1993))。在嚴重感染的情況下，·NO和細胞活素的過量產生可導致威脅生命的低血壓，多器官壞死和最終死亡(St.John和Dorinsky，Chest.103932-943(1993)。在血液中，內皮產生的·NO各向同性地沿各個方向擴散進入鄰近的組織。當·NO擴散進入血管平滑肌時，它與催化cGMP產生的鳥苷酸環化酶結合，誘導血管擴張(見例如，Ignarro，L.J.，Supra；Moncada，S.，Supra；和Lowestein和Snyder，Supra)。另一方面，當·NO擴散進入血液循環時，它與血紅細胞中的血紅蛋白反應生成硝酸鹽和高鐵血紅蛋白(Kelm和Schrader，Circ.Res.661561-1575(1990))。硝酸鹽通過腎臟排洩而被消除，高鐵血紅蛋白被紅細胞中的高鐵血紅蛋白還原酶催化轉變，回到血紅蛋白。因此，動物和人類的細胞活素誘導的休克和腐爛性休克中硝酸鹽水平增加也就不足為奇了(見例如，Nava等，J.Cardiovasc.Pharmacol.20(Suppl.12)S132-134(1992)；Hibbs等.J.Clini.Invest.89867-877(1992)；和Evans等CirculatoryShock4177-81(1993)。已經證實，由LPS和細胞活素(如白介素-1(IL-1)，白介素-2(IL-2)，腫瘤壞死因子(TNF)和幹擾素)誘導產生的氧化氮的過量產生能導致全身性低血壓(Kilbourn和Griffith，supra，Moncada和Higgs，supra)。研究了用抑制·NO的產生(通過抑制氧化氮合成酶)的試劑作為治療由·NO的過量產生而導致的全身性低血壓，例如，觀察到NG-甲基-L-精氨酸(NMMA)-一種氧化氮生物合成路線的競爭性抑制劑(在靜脈注射後)能夠逆轉動物體內LPS-誘導的低血壓(Aisaka等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，60881-886(1989)；Rees等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，863375-3379，(1989))。然而，正如最近的許多報導中所述的那樣，抑制·NO合成酶對主體是有害的。參見，例如Henderson等在Arch.Surg.1291271-1275(1994)，Hambrecht等在J.Leuk.Biol.52390-394(1992)，Luss等在Biochem.andBiophys.Res.Comm.204635-640(1994)，Robertson等在Arch.Surg.129149-156(1994)，Statman等在J.Surg.Res.5793-98(1994)，和Minnard等在Arch.Surg.129142-148(1994)所報導的。因此，本領域還需要能夠有效地治療與·NO的過量產生有關的全身性低血壓如腐爛性休克的方法。本發明的簡要描述按照本發明，研製了用於降低活體的氧化氮水平的方法。與現有技術中所述的抑制方法(見前述的參考文獻)相反，本發明採用一種清除方法，其中使過量產生的氧化氮結合到一種合適的氧化氮清除劑上，產生的配合物使得氧化氮無害並最終從主體的尿中排出。按照本發明，還研製了用於實現上述方法的組合物和配方。可望用於本發明方法的氧化氮清除劑為二硫代氨基甲酸鹽-亞鐵配合物，該配合物結合·NO，形成一個穩定的水溶性的具有特徵性的三-線光譜(亞硝醯-鐵配合物的標誌)的二硫代氨基甲酸鹽-鐵-NO配合物，該光譜可以很容易地用電子順磁(EPR)光譜儀在室溫下檢測到(見Komarov等在Biochem.Biophys.Res.Commun.，1951191-1198(1993)；Lai和Komarov在FEBSLett.，345120-124，(1994)中的報導)。這種在實際時間內檢測體液中·NO的方法最近由Lai在這裡通過參考文獻引入的美國專利US5,358,703中作了描述。本發明涉及作為治療遭受發炎和/或感染性疾病的主體的手段而用於降低活體的·NO水平的方法。以含有二硫代氨基甲酸鹽的氧化氮清除劑向需要這樣的治療的主體給藥，這些清除劑與活體產生的·NO作用，形成一個穩定的二硫代氨基甲酸鹽-鐵-NO配合物。雖然游離的·NO是一個有效的血管擴張劑，但是與二硫代氨基甲酸鹽-鐵-配合物螯合的·NO卻不是。然後含NO的配合物通過腎臟過濾，在尿中濃縮，最後被主體排洩掉，因此降低了活體中·NO的水平。附圖的簡要說明圖1說明·NO抑制劑對從家鼠尿中檢測到的[(MGD)2/Fe]-配合物(MGD為N-甲基-D-葡萄糖胺二硫代氨基甲酸鹽)的體外9.5-GhzEPR光譜的影響。在NMMA(50mg/kg)(B)或地塞米松(3mg/kg)(C)的存在下，給家鼠皮下注射0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物，詳細的試驗步驟在實施例中加以描述。注射給藥兩個小時後，處死動物，採集尿樣並轉移到扁平石英池內，於22℃下進行EPR測量。[(MGD)2/Fe]-配合物的三線光譜用空心圓圈指示(○)，作為[(MGD)2/Cu]-配合物光譜的一部分的一條寬EPR線用箭頭指示。圖1A表示注射以上的[(MGD)2/Fe]-配合物時得到的結果。圖1B表示注射[(MGD)2/Fe]-配合物和NMMA時得到的結果。圖2表示注射了15N-精氨酸的家鼠尿中的[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物和[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物體外9.5-GhzEPR光譜。給小鼠注射0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物(326mg/Kg的MGD和34mg/Kg的FeSO4)和(A)10mg15N-精氨酸或(B)5mg15N-精氨酸。注射後兩個小時，處死動物，把尿樣轉移到扁平石英池內，於22℃下進行EPR測量。注意[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的雙線光譜用實心圓圈(●)指示。A中用空心圓圈(○)指示的[(MGD)2/Fe-14NO]的光譜的虛線是在沒有注射15N-精氨酸時得到的。A的接收器增益比B高1.3倍，其它實驗條件都一樣，如圖1所述。圖2A表示注射[(MGD)2/Fe]-配合物和10mg15N-精氨酸時得到的結果。圖2B表示注射[(MGD)2/Fe]-配合物和5mg15N-精氨酸時得到的結果。圖3表示在鼠尾的循環液中的[(MGD)2/Fe-NO]-配合物的活體3.5GhzEPR光譜，以LPS給藥後6小時，給小鼠注射10mg15N-精氨酸的生理鹽水溶液和0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物，在以[(MGD)2/Fe]給藥後2小時，記錄活體的S波段EPR光譜(實線)。圖3A代表[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的特徵雙線光譜(●)，用(○)指示的[(MGD)2/Fe-14NO]的虛線光譜是在從上述的注射液中去掉15N-精氨酸時得到的。圖3B表示從15N-精氨酸處理過的小鼠得到的全血的體外X-波段EPR光譜。圖4表示經靜脈注射15N-精氨酸後，在LPS-處理的小鼠的各種組織中檢測到的[(MGD)2/Fe-15NO]和[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的活體3.5GhzEPR光譜。在LPS給藥後6小時，給小鼠注射10mg15N-精氨酸的生理鹽水溶液和0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物(326mg/Kg的MGD和34mg/Kg的FeSO4)，在[(MGD)2/Fe]-配合物給藥後2小時，處死小鼠，將溼的組織轉移到石英管(內徑2mm)，於22℃下進行EPR測量。圖4A表示從肝組織得到的光譜，[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的雙線光譜(●)與[(MGD)2/Fe-14NO]的三線光譜(○)疊加，[(MGD)2/Fe-14NO]的虛的三線光譜是在從的注射液中去掉15N-精氨酸時得到的，每個光譜為9個30秒的掃描的平均值。圖4B代表從腎組織得到的光譜，所示的光譜為9個30秒掃描的平均值。圖5為NMMA對經LPS處理的小鼠尿中的[(MGD)2/Fe-NO]-配合物的體外9.5-GHzEPR光譜的影響圖。在LPS給藥後6小時，給小鼠注射0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物(326mg/Kg的MGD和34mg/Kg的FeSO4)，腹膜注射NMMA(50mg/kg)或者不注射，在注射[(MGD)2/Fe]-配合物後2小時，處死小鼠，採集尿樣，於22℃下進行EPR測量。圖5A代表單獨注射[(MGD)2/Fe]-配合物時得到的結果。圖5B代表注射[(MGD)2/Fe]-配合物和NMMA(50mg/kg)時得到的結果。注意NMMA給藥後抑制了活體NO的產生，因而顯著降低了尿中[(MGD)2/Fe-NO]的信號強度。圖6代表經LPS處理的注射了15N-精氨酸的小鼠尿中的[(MGD)2/Fe-15NO]和[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的體外9.5-GHzEPR光譜圖。在LPS給藥後6小時，給小鼠注射10mg15N-精氨酸的生理鹽水溶液和0.4mL[(MGD)2/Fe]-配合物(326mg/Kg的MGD和34mg/Kg的FeSO4)，在[(MGD)2/Fe]-配合物給藥後2小時，採集尿樣並轉移到石英管(內徑2mm)中，於22℃下進行EPR測量。圖6A代表從試驗中得到的光譜，其中用了10mg的15N-精氨酸。圖3A中的實線為兩種光譜例如[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的雙線光譜(●)和[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的三線光譜(○)的複合線，[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的虛的三線光譜(○)的是在從注射液中去掉15N-精氨酸時得到的。圖6B代表從試驗中得到的光譜，其中用了5mg的15N-精氨酸。注意與[(MGD)2/Fe-14NO]-配合物的信號強度(○)相比，[(MGD)2/Fe-15NO]-配合物的信號強度(●)至少降低一半。本發明的詳細說明按照本發明，提供了活體降低主體中氧化氮水平的方法，該方法包括以有效量的至少一種含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑對主體給藥。可用於本發明的含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑包括二硫代氨基甲酸酯部分的任意生理上可接受的衍生物(即(R)2N-C(S)-SH)。這樣的化合物可參考下列的一般結構而加以描述[R1R2N-C(S)-S-]xM+1，+2，+3其中R1和R2各自獨立地選自C1-C18烷基，取代的烷基，環烷基，雜環，取代的環烷基，取代的雜環，鏈烯基，取代的鏈烯基，鏈炔基，取代的鏈炔基，芳基，取代的芳基，雜環芳基，取代的雜環芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，芳基鏈烯基，取代的芳基鏈烯基，芳基鏈炔基，取代的芳基鏈炔基，芳醯基，取代的芳醯基，脂醯基，取代的脂醯基，或者R1與R2共同形成一個包含N，R1和R2的5-，6-或7-員環，X為1或2，和當X為1時，M為一價陽離子，或當X為2時，M為生理上可接受的二價陽離子或三價過渡金屬陽離子。優選的具有上述通式結構的化合物是那些化合物，其中R1和R2各自為C1-C12烷基，取代的烷基，鏈烯基，取代的鏈烯基，鏈炔基，取代的鏈炔基，其中取代基選自羧基，-C(O)H，氧醯基，苯酚，苯氧基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，醯氨基，羥基，硝基或磺醯基，而M為Fe+2或Fe+3。特別優選的具有上述通式結構的化合物是那些其中R1＝C2-C8烷基或取代的烷基，其中取代基選自羧基，乙醯基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，醯氨基，羥基或硝基，R2選自C1-C6烷基或取代的烷基，或者R2與R1共同形成一個包含N，R1和R2的5-，6-或7-員環，而M為Fe+2。最優選的具有上述通式結構的化合物是那些其中R1＝C2-C8烷基或取代的烷基，其中取代基選自羧基，乙醯基，醯氨基或羥基，R2＝C1-C4烷基或取代的烷基，而M為Fe+2。當R1與R2共同形成一個5-，6-或7-員環時，R1與R2共同可以為多種飽和或不飽和的選自亞烷基或含有-O-，-S-，-C(O)-和/或-N(R)-的亞烷基部分的4，5或6原子橋基團，其中R為H或低級烷基部分。可用於結合入上述化合物的一價陽離子包括H+，Na+，NH4+，四烷基銨等。考慮用於結合入上述化合物的生理上相容的二價或三價過渡金屬陽離子包括帶電形成的鐵，鈷，銅，錳離子等(例如Fe+2，Fe+3，Co+2，Co+3，Cu+2，Mn+2或Mn+3)。按照本發明，二硫代氨基甲酸酯與平衡離子M的比例可以在很寬的範圍內變化，這樣以含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑給藥時可以不添加任何的金屬平衡離子(例如M＝H+，或者過渡金屬陽離子與二硫代氨基甲酸酯的比值為0)，過渡金屬陽離子與二硫代氨基甲酸酯的比例最高約為1∶2時(例如二硫代氨基甲酸酯∶過渡金屬陽離子＝2∶1)較為合適。這裡所說的「取代的烷基」包括還含有一個或多個選自羥基，烷氧基(低級烷基的)，巰基(低級烷基的)，環烷基，取代的環烷基，雜環，取代的雜環，芳基，取代的芳基，雜環芳基，取代的雜環芳基，芳基氧基，取代的芳基氧基，滷素，三氟甲基，氰基，硝基，氮羰基，氨基，醯氨基，-C(O)H，醯基，氧醯基，羧基，氨基甲酸酯，磺醯基，磺醯氨基，碸基等取代基的烷基。這裡所說的「環烷基」是指包含3-8個碳原子的含環的基團，而「取代的環烷基」是指還含有一個或多個上述取代基的環烷基。這裡所說的「鏈烯基」是指含有至少一個碳碳雙鍵，含有2-12個碳原子的直鏈或支鏈烴基，而「取代的鏈烯基」是指還含有一個或多個上述取代基的鏈烯基。這裡所說的「鏈炔基」是指含有至少一個碳碳三鍵，含有2-12個碳原子的直鏈或支鏈烴基，而「取代的鏈炔基」是指還含有一個或多個上述取代基的鏈炔基。這裡所說的「芳基」是指含有6-14個碳原子的芳香基，而「取代的芳基」是指還含有一個或多個上述取代基的芳基。這裡所說的「烷基芳基」是指烷基取代的芳基，而「取代的烷基芳基」是指還含有一個或多個上述取代基的烷基芳基。這裡所說的「芳基烷基」是指芳基取代的烷基，而「取代的芳基烷基」是指還含有一個或多個上述取代基的芳基烷基。這裡所說的「芳基鏈烯基」是指芳基取代的鏈烯基，而「取代的芳基鏈烯基」是指還含有一個或多個上述取代基的芳基鏈烯基。這裡所說的「芳基鏈炔基」是指芳基取代的鏈炔基，而「取代的芳基鏈炔基」是指還含有一個或多個上述取代基的芳基鏈炔基。這裡所說的「芳醯基」是指芳基羰基，而「取代的芳醯基」是指還含有一個或多個上述取代基的芳醯基。這裡所說的「雜環」是指含有一個或多個作為環結構組成部分的雜原子(例如N，O，S等)，含有3-14個碳原子的環狀(例如含有環的)基團，而「取代的雜環」是指還含有一個或多個上述取代基的雜環基團。這裡所說的「醯基」是指烷基羰基。這裡所說的「滷素」是指氟，氯，溴或碘原子。按照本發明的另一個實施方案，提供了治療主體內氧化氮過量產生的方法，該發明方法包括以有效量的至少一種含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑向主體給藥。氧化氮的過量產生與廣泛的病態和/或症狀例如腐爛性休克，局部缺血，細胞活素的給藥，細胞活素的過量表達，潰瘍，發炎性腸道疾病(例如潰瘍性結腸炎或節段性迴腸炎)，糖尿病，關節炎，哮喘，早老性症，帕金森式症，硬化症，硬變病，同種移植排斥，腦脊髓炎，腦膜炎，胰腺炎，腹膜炎，脈管炎，淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎，腎小球性腎炎，眼色素層炎，迴腸炎，肝炎，腎炎，出血性休克，過敏性休克，發燒，感染(包括細菌性(如大腸桿菌感染)，病毒性(如HIV)，真菌性(如念珠菌病和組織胞漿菌病)和寄生性(例如利什曼病和血吸蟲病)感染)，滲血病，慢性疲勞綜合症，中風，癌症(例如乳腺癌，黑色瘤，腫瘤等)，心肺分流術，局部缺血/再灌損傷等有關。特別地，針對細胞活素治療，本發明將會發現廣泛的用途，因為細胞活素治療(其結果為誘導氧化氮的過量產生)一般用於對癌症和愛滋病患者治療。由與·NO的過量產生而導致的全身性低血症是受劑量限制的細胞活素治療的副作用，因此眾多數量的患者群體將有益於本發明的方法。優選的按照本發明的方法治療的症狀包括腐爛性休克，局部缺血，IL-1的給藥，IL-2的給藥，IL-6的給藥，IL-12的給藥，腫瘤壞死因子的給藥，幹擾素-γ的給藥，潰瘍，潰瘍性結腸炎，糖尿病，關節炎，哮喘，早老性症，帕金森式症，多硬化症，硬變病或同種移植排斥。特別優選的按照本發明的方法治療的症狀包括與腐爛性休克相關的氧化氮過量產生和與細胞活素治療相關的氧化氮過量產生。按照本發明的一個特定方面，把含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑與細胞活素(例如IL-1，IL-2，IL-6，IL-12，TNF或幹擾素-γ)，抗生素(例如慶大黴素，妥布黴素，阿米卡星，哌拉西林，氯林可酶素，頭孢西丁或萬古黴素或其混合物)，血管作用劑(例如茶酚胺，去甲腎上腺素，多巴胺或多巴酚丁胺)，或其混合物。這樣，利用含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑，許多上述藥劑的有害的副作用可以排出或減少。因此，可以用氧化氮過量產生的證據(例如血壓降低)對用上述任何藥劑治療的病人進行監督，第一次得到氧化氮過量產生的證據時，就開始同時以合適的劑量以上述的含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑給藥，因而減輕(或極大地減小)了主要治療的副作用。本領域技術人員知道這裡所述的含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑可以多種方式給藥，例如口服，靜脈注射，皮下注射，腸胃外給藥，直腸給藥，吸入法給藥等。由於各個主體的症狀的嚴重程度差異很大，每種藥劑都有其特定的治療特性，對每個主體其精確的給藥方式和所用劑量留給執業醫生去處理。一般地，本發明方法中所用的含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑的劑量落在大約0.01-0.5mmole/kg(主體體重)/小時的範圍。按照本發明的另外一個實施方案，提供了包含具有下述的結構式I或結構式II的化合物的有生理活性的組合物，以一種使所說的化合物能通過口服，皮下注射，靜脈注射，肌肉注射，表面滲透，鼻腔吸入等方式傳送。如上所述，結構式I的化合物(例如不含過渡金屬陽離子的二硫代氨基甲酸酯)能直接用於本發明中，或者前體形式的二硫代氨基甲酸酯-過渡金屬螯合物(例如II的化合物)(過渡金屬與二硫代氨基甲酸酯具有不同比例)可以用於本發明中。依所用的傳送方式，含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑可以多種藥學上可接受的形式傳送，例如清除劑可以固體，溶液，乳液，分散液，膠束，脂質體等形式傳送。本發明的藥物組合物可以固體，溶液，乳液，分散液，膠束，脂質體等形式使用，其中產生的組合物含有一種或多種本發明的化合物作為活性成分，與有機或無機載體或賦形劑混合，適於內用或外用。例如，活性成分可與通常的無毒的，藥學上可接受的載體組合製成片劑，丸劑，膠囊，拴劑，溶液，乳液，分散液，懸浮液，或任何其它適於使用的形式。可使用的載體包括葡萄糖，乳糖，阿拉伯樹膠，明膠，甘露糖醇，澱粉糊，聚三矽酸鎂，滑石粉，玉米澱粉，角蛋白，膠態氧化矽，馬鈴薯澱粉，脲尿，中等鏈長度的三甘油酯，葡聚糖和其它固體，半固體或液體形式的適用於產生製備的載體。除助劑外，還可以使用穩定劑，增稠劑，染色劑和芳香劑。把活性化合物(即這裡所說的結構式I的化合物和結構式II的化合物)以一定數量包括在藥物組合物中使得在病症的治療方法或條件下產生預期的效果。包含活性成分的藥物組合物可以為適於口服的劑型例如片劑，錠劑，糖錠劑，水性或油性懸浮液，可分散的粉劑或粒劑，乳劑，硬的或軟的膠囊，或酏劑。以口服方式使用的組合物可按照本領域已知的產生藥物組合物的方法製備，為了提供美味上口的藥物，這樣的組合物還可以含有一種或多種選自甜味劑(例如蔗糖，乳糖或糖精)，調味劑(例如薄荷，冬青油或草莓)，著色劑和防腐劑的助劑。含有與無毒的藥學上可接受的賦形劑混合使用的活性成分的片劑也可以用已知的方法產生。所用的賦形劑例如可以是(1)惰性稀釋劑如碳酸鈣，乳糖，磷酸鈣或硫酸鈉；(2)成粒劑或崩解劑如玉米澱粉，馬鈴薯澱粉或藻酸；(3)粘合劑如黃薯膠，玉米澱粉，明膠或阿拉伯樹膠和(4)潤滑劑如硬脂酸鎂，硬脂酸或滑石粉。片劑可以是不包衣的或者是用已知技術包衣的以延緩在消化道內的崩解和吸收，因而提供持續長時間的作用。例如可以用一種時間延長材料如單硬脂酸甘油酯或二單硬脂酸甘油酯，也可以用美國專利US4,256,108，US4,160,452和US4,265,874中所述的技術包衣，製成可滲透的控制釋放的治療片劑。在某些情況下，口服用的劑型可以製成硬膠囊，其中活性成分與一種惰性的固體賦形劑例如碳酸鈣，磷酸鈣或者高嶺土混合；也可以製成軟膠囊形式，其中活性成分與水或油介質例如花生油，液體石蠟或橄欖油混合。藥物組合物可以製成無菌的可注射的懸浮液，這種懸浮液可以按照已知的方法，用合適的分散劑或潤溼劑和懸浮劑製成。這種無菌的可注射的藥劑也可以是一種溶於無毒的胃腸能接受的賦形劑或溶劑中的無菌的可注射的溶液或懸浮液，例如溶於1，3-丁二醇而成的溶液。無菌的固定油通常用作溶劑或懸浮介質，為了這種目的，可用任何空白的固定油包括合成的甘油一酯或甘油二酯，脂肪酸(包括油酸)，天然產的植物油象芝麻油，可可油，花生油，棉籽油等，合成的脂肪賦形劑象油酸乙酯等。緩衝液，防腐劑，抗氧劑等可按需要摻入。考慮用於本發明的化合物也可以製成拴劑用於向直腸給藥。這些組合物可以通過把藥物與一種合適的無刺激性的賦形劑例如可可油，合成的聚乙二醇甘油酯混合而製成，該組合物常溫下為固體，但在直腸腔中液化和/或溶解以釋放藥物。由於各個主體在病症的嚴重程度上存在巨大的差異，而且每種藥物都有它獨特的醫療特性，有待於執業醫生去確定主體對治療的反應並相應地改變劑量。一般地，典型的每日劑量落在大約10μg-100mg/kg體重的範圍，優選在50μg-10mg/kg體重的範圍，並且每日給藥可高達到4次，每日的四次劑量落在大約1μg-100mg/kg體重的範圍，優選在10μg-10mg/kg體重的範圍。按照本發明的另一個實施方案，提供了具有結構式I的化合物R1R2N-C(S)-S-M+(I)其中R1和R2定義如上，而M為一價陽離子，然而，條件是下列化合物要從式I的定義中掉，即當R1為乙基時，R2不是乙基；或者當R1為CH2(CHOH)4CH2OH時，R2不是甲基，異戊基，苄基，4-甲基苄基或對異丙基苯甲基；或者當R1為CH2CO2-時，R2不是CH2CO2-；或者當R1為CO2-時，R2不是CH3；或者當R1為CH2CH2-OH時，R2不是CH2CH2-OH；或者當R1和R2結合在一起時，它們與氨基甲酸酯的氮原子一起形成吡咯烷基-2-羧酸酯。按照本發明的再一個實施方案，提供了具有結構式II的化合物[R1R2N-C(S)-S-]2M+2，+3(II)其中R1和R2定義如上，而M為生理上相容的二價或三價過渡金屬陽離子，然而，條件是下列化合物要從式I的定義中掉，例如當R1為乙基時，R2不是乙基；或者當R1為CH2(CHOH)4CH2OH時，R2不是甲基，異戊基，苄基，4-甲基苄基或對異丙基苯甲基；或者當R1為CH2CO2-時，R2不是CH2CO2-；或者當R1為CO2-時，R2不是CH3；或者當R1為CH2CH2-OH時，R2不是CH2CH2-OH；或者當R1和R2結合在一起時，它們與氨基甲酸酯的氮原子一起形成吡咯烷基-2-羧酸酯。還考慮了代表結構式I的化合物與結構式II的化合物的組合的組合物，即二硫代氨基甲酸酯，其中比值M+1二硫代氨基甲酸酯小於1∶1，比值M+2，+3二硫代氨基甲酸酯小於1∶2，優選的組合物是其中比值M+2，+3二硫代氨基甲酸酯小於大約1∶5(例如把大約40％的二硫代氨基甲酸酯摻入二硫代氨基甲酸酯過渡金屬陽離子配合物中，而大約60％的二硫代氨基甲酸酯以一價形式存在)。優選的具有結構式II的化合物是那些化合物其中R1＝C1-C12的烷基，取代的烷基，鏈烯基，取代的鏈烯基，鏈炔基，取代的鏈炔基，其中取代基選自羧基，-C(O)H，氧醯基，苯酚，苯氧基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，醯氨基，羥基，硝基或磺醯基，R2＝C1-C4的烷基或取代的烷基，而M＝Fe+2或Fe+3。特別優選的具有結構式II的化合物是那些化合物，其中R1＝C2-C8的烷基或取代的烷基，其中取代基選自羧基，乙醯基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，醯氨基，羥基或者硝基，R2＝甲基，乙基，丙基或丁基，而M＝Fe+2。最優選的具有結構式II的化合物是那些化合物，其中R1＝C2-C8的烷基或取代的烷基，其中取代基選自羧基，乙醯基，醯氨基或者羥基，R2＝甲基，乙基，丙基或丁基，而M＝Fe+2。現在通過參考下面的非限制性實施例對本發明作更加詳細的描述。實施例1ICR小鼠(雌性，20-30g)由HarlanSprague-Dawley(Indianapolis，IN)提供。地塞米松，脂多糖(LPS；E.coli026B6)和氯化乙醯膽鹼從Sigma(St.Louis，MO)獲得，15N2-胍基-L-精氨酸(15N-精氨酸)從CambridgeIsotopeLaboratories(Woburn，MA)購得，NG-一甲基-L-精氨酸(NMMA)從Calbiochem(SanDiego，CA)得到，甲氧氟烷從Pitman-Moore(Mundelein，IL)得到。純淨的·NO氣體從Matheson(Joliet，IL)購得，而純淨的氬氣從Airo(MurrayHill，NJ)得到。飽和的·NO水溶液按照下面的Kelm和Schrader，supra方法製得。經世界精密儀器公司(Sarasota，FL)產生的NO標準儀證實，飽和·NO水溶液的濃度為2.0mM，NO2-用光度分析法測量(Green等，Anal.Biochem.126131-138(1982))，先用E.coli硝酸還原酶把NO3-在轉化為NO2-(Bartholomew，B.，Fd.Chem.Toxic.22541-543(1984)，然後按上述方法測量。N-甲基-D-葡萄糖氨和二硫化碳從Aldrich公司(Milwaukee，WI)得到，N-甲基-D-葡萄糖氨二硫代氨基甲酸酯(MGD)用下列Shinobu等人的方法合成(ActaPharmacol.Toxicol.54189-194(1984)。實施例2氧化氮水平的EPR測量A.活體測量LPS處理的小鼠的循環液中[(MGD)2/FE-NO]的水平以EPR光譜儀記錄非侵害的活體EPR光譜，用S-波段微波橋和具有1cm長的4-mm環的低頻環隙諧振腔在3.5GHz下測量(Froncisz和Hyde，J.Magn.Reson.47515-521(1982))。儀器設置包括100G磁場掃描，30秒的掃描時間，0.1秒的時間常數，2.5G的調製幅度，100KHz的調製頻率和25mW的微波功率。測量的空諧振腔的空載Q值為3000，負載Q值為400(在鼠尾的存在下)，其它儀器參數的設置和試驗條件已有記載(Komarov等，supra和Lai及Komarov，supra)。為測量15NO的產生，在通過外側的鼠尾靜脈進行靜脈注射LPS(6mg/只小鼠)後6小時，用甲氧氟烷麻醉小鼠，然後皮下注射15N-精氨酸(5mg或10mg/只小鼠)的生理鹽水和0.4ml[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和34mg/kg的FeSO4)的水溶液，注射的[(MGD)2/Fe]配合物濃度最高達體重的1％時不影響小鼠的生存(Lai和Komarov，supra)。注射後，立即把小鼠關進一個有機玻璃約束管中並轉移到S波段的EPR光譜儀，通過用一個薄而窄的有機玻璃刺拍擊使鼠尾不動，然後將其置於諧振腔中；沒有使用麻醉劑，注射[(MGD)2/Fe]配合物後2小時，記錄活體的EPR信號(Lai和Komarov，supra)。為作抑制試驗，在LPS處理6小時後，給小鼠腹膜注射整份的50mg/kg的N-甲基-L-精氨酸(NMMA)的生理鹽水，NMMA既是結構性合成酶，又是誘導性合成酶活性的抑制劑(Aisaka等，Supra和Rees等，supra)。在其它的試驗中，在LPS激發前1.5小時，給小鼠靜脈注射3mg/kg的地塞米松的生理鹽水，地塞米松是誘導性·NO合成酶的抑制劑，但不是結構性合成酶的抑制劑(Rees等，Biochem.Biophys.Res.Commun.173541-547(1990)。在注射[(MGD)2/Fe]配合物後2小時，也記錄下活體的EPR信號(Lai和Komarov，supra)。B.體外測量家鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]的水平給關在一個約束管中的家鼠皮下注射0.4ml[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和4mg/kg的FeSO4)，2小時後處死動物，從膀胱採集尿樣，將棕黑色的([(MGD)2/Fe]存在的表徵)尿樣轉移到一個平板石英池，進行EPR測量，在22℃下，用X-波段EPR光譜儀，於9.5GHz下測量記錄光譜。儀器參數設置包括100G磁場掃描，4分鐘的掃描時間，0.5秒的時間常數，2.5G的調製幅度，100KHz的調製頻率和100mW的微波功率。通過比較從樣品得到的信號強度與含有0.1mM的[(MGD)2/Fe-NO]配合物的標準溶液的信號強度，計算尿樣中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的濃度。要作抑制試驗，在注射[(MGD)2/Fe]配合物之後，立即給小鼠腹膜注射50mg/kg的NMMA的生理鹽水，在其它的試驗中，在注射[(MGD)2/Fe]配合物前1.5小時，給小鼠靜脈注射3mg/kg的地塞米松的生理鹽水。要測量家鼠中15NO的產生，在給小鼠皮下注射15N-精氨酸(5或10mg/只小鼠)的生理鹽水之後，立即注射[(MGD)2/Fe]配合物。氯化乙醯膽鹼是在皮下注射之前新鮮製備的，劑量為67mg/kg。C體外測量LPS-處理的小鼠尿中的[(MGD)2/Fe-NO]的水平在LPS處理後0，2，4，6或8小時(6mg/只小鼠，至少每組三隻動物)，把小鼠關進一個約束管中，用甲氧氟烷麻醉小鼠，然後皮下注射0.4ml[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和34mg/kg的FeSO4)，2小時後處死動物，從膀胱採集尿樣並立即轉移到一個平板石英池，按照上述實施例2B中的方法進行X波段EPR測量。用NMMA或地塞米松進行的抑制試驗，除了在·NO抑制試驗步驟之前用LPS處理小鼠外，按照實施例2A的方法進行。溼組織和血液樣品的S-波段EPR的測量方法以前已有記載(Lai和Komarov，supra)。實施例3家鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]配合物檢測給家鼠皮下注射整份的(0.4ml)的[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和4mg/kg的FeSO4)(A)(以及在NMMA(50mg/kg)(B)，或地塞米松(3mg/kg)(C)存在下)後2小時後，處死動物，採集尿樣並轉移到一個平板石英池，在22C下，用X-波段(9.5GHz)進行EPR測量。發現尿樣的光譜由兩個成分組成一個[(MGD)2/Fe-NO]配合物的特徵的三-線光譜(αN＝12.5G，gISO＝2.04)和一個高強度的寬信號(見圖1A)。高強度的寬信號是存在於尿中的由尿中的銅被排出的MGD分子螯合而產生的[(MGD)2/Cu]配合物的光譜的一部分。家鼠尿樣中檢出的[(MGD)2/Fe-NO]配合物的濃度估計為1.3μM(見表1)。表1測定的各種條件下小鼠尿中存在的[(MGD)2/Fe-NO]的數量條件[(MGD)2/Fe-NO]，μMa對照1.3±0.2(8)b+NMMA(50mg/kg)0.4±0.3(8)*+乙醯膽鹼(67mg/kg)3.9±0.8(3)*+地塞米松(3mg/kg)1.4±0.3(7)a通過比較從小鼠尿的EPR信號強度與含有已知濃度的[(MGD)2/Fe-NO]的標準溶液的信號強度，計算小鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的數量。b提供的數據是平均值±標準偏差(小鼠數量)*與對照相比較，P＜0.05同時注射[(MGD)2/Fe]和NMMA顯著地降低了尿樣中[(MGD)2/Fe-NO]的信號，見圖1B和表1，另一方面，如圖1C和表1所示，給預先用地塞米松處理過的小鼠注射[(MGD)2/Fe]對[(MGD)2/Fe-NO]的信號的影響可以忽略不計。這些結果顯示在家鼠尿中檢測到的以[(MGD)2/Fe-NO]配合物形式存在的·NO是由結構性·NO合成酶產生的而不是由誘導性·NO合成酶產生的。為了進一步證實這個建議，試驗了乙醯膽鹼-一種已知能影響基礎性·NO水平而不影響誘導性·NO水平的血管擴張劑(Aisaka等，Biochem.Biophys.Res.Commun.163710-717(1989)；Whittle等，Br.J.Pharmacol.98646-652(1989)；和Vicaut等，J.Appl.Physiol.77536-533(1994))對家鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]的水平的影響，發現注射乙醯膽鹼使尿中[(MGD)2/Fe-NO]的水平增加三倍。這些檢測數據提供了最直接的活體證據，證實由乙醯膽鹼釋放的從內皮產生的鬆弛因子(Furchgott現象)確實是氧化氮。提出的問題是家鼠尿中檢出的·NO(實施例3)和[(MGD)2/Fe]配合物捕獲的·NO是否是由注射[(MGD)2/Fe]配合物而產生的結果。換句話說，單獨注射該配合物能增加活體的·NO產生嗎？在以前的試驗中已經表明，靜脈注射[(MGD)2/Fe]配合物不影響小鼠的平均動脈壓(Komarov等，supra)，這暗示配合物就其本身似乎並不影響活體的·NO產生。實施例4本領域公知，通過·NO合成酶，L-精氨酸被轉變為·NO和胍氨酸(Ignarro，L.J.，supra；Moncada，S.，supra；和Lowenstein及Snyder，supra)。為了確定家鼠尿中檢出的·NO的來源，同時注射15N-精氨酸(10mg/kg)和[(MGD)2/Fe]，然後按上述方法測定產生的尿樣中的EPR信號。這樣，給小鼠注射[(MGD)2/Fe]配合物(326mg/kg的MGD和4mg/kg的FeSO4)和(A)10mg15N-精氨酸或(B)5mg15N-精氨酸。2小時後，處死動物，將尿樣轉移到一個平板石英池，在22℃下EPR測量。可以這樣推理，如果家鼠尿中檢出的NO的來源於精氨酸-NO合成酶途徑，那麼在注射15N-精氨酸後，應當期望能在尿中檢出[(MGD)2/Fe-15NO]配合物形式的15NO。通過EPR可以看到這的確是事實，其中在尿中檢出了[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的雙線光譜以及[(MGD)2/Fe-14NO]配合物一個弱的的三線光譜(圖2A的實線)。除了利用內在的14N-精氨酸作為底物外，14NO也以同樣的酶催化途徑產生。這暗示皮下注射的15N-精氨酸能有效地與內在的14N-精氨酸競爭作為·NO合成酶的底物，當從注射液中去掉15N-精氨酸時，[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的典型的三線光譜變得更加清晰可見了(見圖2A中的虛線)。另一方面，當注射的15N-精氨酸的量減小一半(5mg/只小鼠)時，[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的信號強度與[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的信號強度相比減小了(見圖2B)。因此，可以得出這樣的結論，給家鼠皮下注射的[(MGD)2/Fe]配合物與組織中通過精氨酸-結構性·NO合成酶途徑產生的·NO作用，形成[(MGD)2/Fe-NO]配合物，該配合物最終濃縮在尿中並排出。實施例5LPS處理的小鼠血液循環中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的檢測前人的試驗已經表明，灌注LPS(6mg/kg)藥團後，6小時之內，小鼠處於類似腐爛性休克的狀態，其標誌是平均動脈壓從121±3mmHg緩慢降低到85±7mmHg(Lai和Komarov，supra)。另外，還表明，LPS處理後6小時，用S波段的EPR光譜在鼠尾的循環液中活體觀察到[(MGD)2/Fe-NO]配合物的三線光譜(其中在EPR測量前2小時皮下注射[(MGD)2/Fe])(Lai和Komarov，supra)。為了進一步確認在LPS處理的小鼠中檢測到的·NO的化學本質，給LPS處理的小鼠注射了15N-精氨酸(10mg/kg)和0.4ml[(MGD)2/Fe]自旋標記的試劑(326mg/kg的MGD和4mg/kg的FeSO4)，然後活體測量S波段的EPR光譜，活體S波段的EPR光譜，是在[(MGD)2/Fe-NO]給藥後2小時記錄的。鼠尾循環液中的[(MGD)2/Fe-NO]配合物的活體雙線光譜雖然很弱但清晰可見(圖3A實線)，這更進一步證實在LPS處理的小鼠中以[(MGD)2/Fe-NO]配合物形式檢測到的·NO是以精氨酸-NO合成酶途徑產生的。當去掉15N-精氨酸時，得到了[(MGD)2/Fe-14NO]配合物典型的三線光譜(圖3A虛線)。把用15N-精氨酸處理的小鼠處死，將得到的全血轉移，在22℃下，測量X波段EPR光譜。從15N-精氨酸處理的小鼠得到的全血的EPR信號(圖3B)與圖3A的實線一樣，這暗示圖3A或圖3B中的EPR信號屬於在血液中循環的[(MGD)2/Fe-NO]配合物，而不屬於注射位點或附近鼠尾肌肉中存留的[(MGD)2/Fe-NO]配合物。也檢測了從LPS處理的注射了[(MGD)2/Fe]配合物和15N-精氨酸的小鼠得到的各種分離的組織中[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的S波段EPR信號(圖4)，這樣，在肝和腎臟中觀察到了[(MGD)2/Fe-15NO]的特徵的雙線光譜與[(MGD)2/Fe-14NO]的特徵的三線光譜疊加在一起(分別見圖4A和圖4B)，另外，當從注射液中去掉15N-精氨酸時，在小鼠肝臟檢測到了[(MGD)2/Fe-14NO]的特徵光譜(見圖4A虛線)。實施例6LPS處理的小鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的檢測測定了NMMA對LPS處理的小鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]配合物的體外9.5GhzEPR光譜的影響。這樣，在LPS處理後6小時，給小鼠注射[(MGD)2/Fe]配合物，皮下注射或不注射NMMA(50mg/kg)。注射[(MGD)2/Fe]配合物後2小時，處死小鼠，採集尿樣，在22℃下進行EPR測量。從LPS處理的注射了[(MGD)2/Fe]配合物的小鼠的尿樣中檢測到了[(MGD)2/Fe-NO]配合物較強特徵的三線光譜(見圖5A)，在LPS激發後8小時，配合物的濃度估計為35.1μM；在注射LPS6小時後，注射[(MGD)2/Fe]配合物。注射NMMA顯著的降低了[(MGD)2/Fe-NO]配合物的信號強度和數量(表2)，這與這個觀點，即被注射進LPS處理的小鼠中的[(MGD)2/Fe]配合物捕獲的·NO主要是由誘導性的·NO合成酶產生的，相一致。這樣，活的動物體內的誘導性的·NO合成酶可通過用這裡所述的·NO捕捉劑處理而降低。此外，同時給LPS處理的小鼠注射15N-精氨酸(10mg/kg)和[(MGD)2/Fe-NO]配合物，產生由[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的雙線光譜(實心圓圈)和[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的三線光譜(空心圓圈)的複合光譜，如圖6A(實線)所示，圖6A中虛線所示的純粹的[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的三線光譜是當從注射液中去掉15N-精氨酸時得到的。另外，當15N-精氨酸以5mg/只小鼠的水平給藥時，[(MGD)2/Fe-15NO]配合物的信號強度與[(MGD)2/Fe-14NO]配合物的信號強度相比減小了(圖6B)。這些結果清楚地證實，在LPS處理的鼠尿中測到的·NO是通過精氨酸-NO合成酶的途徑而過量產生的。總之，用15N-精氨酸作的同位素示蹤試驗清楚地證明在正常小鼠或LPS處理的小鼠中被[(MGD)2/Fe]配合物捕獲的·NO是通過精氨酸-NO合成酶的途徑產生的(圖2，3，4和6)。因此，在我們的試驗體系中，活體產生的被[(MGD)2/Fe]配合物捕獲的·NO的真實性已經被牢固地建立起來。LPS給藥後，在尿樣中檢測到的[(MGD)2/Fe-NO]水平隨時間的增加如表2中所示。表2在LPS處理的鼠尿中存在的[(MGD)2/Fe-NO]數量隨時間的變化條件[(MGD)2/Fe-NO]，μMaLPS處理的b0小時1.4±0.4(3)c2小時7.3±2.2(3)*4小時18.2±4.8(4)*6小時17.1±4.8(4)*8小時35.1±5.7(3)*LPS處理的(6小時以後)d+NMMA(50mg/kg)3.6±0.9(4)ι+NMMA(100mg/kg)3.8±2.3(3)ιa鼠尿中[(MGD)2/Fe-NO]數量按表1所述的方法確定。bLPS激發後，在所標出的不同的時間點，給小鼠注射[(MGD)2/Fe]，2小時後處死小鼠，採集尿樣，進行EPR測量。c所列數據為平均值±標準偏差(小鼠數量)。dLPS激發後6小時，注射[(MGD)2/Fe]之前皮下注射的NMMA的各種數量，尿樣是在2小時以後採集的。*與對照相比，P＜0.05(見表1)。ι與LPS處理6小時後的組相比，P＜0.05。實施例7用[(MGD)2/Fe]活體降低LPS處理的小鼠中·NO的水平按照前述方法(見Komarov和Lai，supra)，測定了LPS處理的小鼠原生質中硝酸鹽水平隨時間的增加，其結果概括在表3中。表3LPS和[(MGD)2/Fe]對小鼠原生質中硝酸鹽/亞硝酸鹽總水平的影響條件硝酸鹽/亞硝酸鹽，μMa對照73±7(10)dLPS處理的b2小時103±10(6)*4小時291±38(6)*6小時506±75(4)*4小時638±29(8)*LPS+[(MGD)2/Fe]配合物c8小時336±46(3)*ιa小鼠原生質中硝酸鹽/亞硝酸鹽水平的測定按前述方法進行(見Komarov和Lai，supra)。b靜脈注射LPS後，在所示的不同時間點處死小鼠。cLPS激發後6小時，給小鼠皮下注射[(MGD)2/Fe]，2小時後處死小鼠。d所列數據為平均值±標準偏差(小鼠數量)。*與對照相比，P＜0.05(見表1)。ι與LPS處理6小時後的組相比，P＜0.05。可以看到，LPS激發後，硝酸鹽水平隨時間增大。注射·NO的捕捉劑[(MGD)2/Fe]後，把原生質中的硝酸鹽水平降低了一半，該結果暗示，·NO被LPS處理的小鼠中的[(MGD)2/Fe]捕獲，阻止了它與紅細胞中的血紅蛋白作用，因而降低了原生質中的硝酸鹽水平。這些結果表明，以含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑如[(MGD)2/Fe]配合物給藥，有效地降低了LPS處理的小鼠活體中·NO的水平。實施例8雖然皮下注射的自旋捕捉劑在排入尿中之前進入組織的途徑還不知嘵，但可以想像，皮下注射後，[(MGD)2/Fe]配合物擴散穿過毛細血管床，並在那裡與·NO合成酶產生的·NO作用，形成[(MGD)2/Fe-NO]配合物，後者然後進入血液循環並最終在尿中排洩和濃縮，因而降低了活體中·NO的水平。發現分離出來的含有[(MGD)2/Fe-NO]配合物的尿可在4℃下穩定好幾個小時。當把[(MGD)2/Fe]配合物靜脈注射到正常的或LPS處理的小鼠中時，也在尿中檢測到了[(MGD)2/Fe-NO]配合物的EPR信號。這暗示，不論以何種途徑給藥，含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑如[(MGD)2/Fe]配合物都能與活體產生的·NO作用，形成一個二硫代氨基甲酸酯-Fe-NO的配合物，從而降低了活體中·NO的水平。實施例9如實施例7所示，[(MGD)2/Fe]配合物皮下給藥，降低了LPS處理的小鼠活體中·NO的水。由於已知·NO的過量產生能導致全身性低血壓，注射[(MGD)2/Fe]配合物能降低活體中·NO的水平，也應當能恢復由LPS處理而導致的低血壓動物的血壓。為了驗證這個觀點，作試驗測定了[(MGD)2/Fe]配合物給藥對由LPS激發而導致的低血壓大鼠的血壓的影響。這樣，禁食過夜的雄性威斯塔大鼠用塞布塔巴比妥(仲丁硫巴比妥鈉，100mg/kg，腹膜注射)麻醉，將一個導管插入股靜脈內以利於藥物擴散，股動脈裡插入套管以便連續地測量血壓。給大鼠靜脈注射LPS藥團(S.流行性斑疹傷寒內毒素，4mg/kg)，LPS激發後2小時，按下列方法之一處理大鼠(a)對照組，生理鹽水灌注-靜脈注射1.0ml生理鹽水，然後以1.0ml生理鹽水/hr的速度灌注1.5小時，(b)[(MGD)2/Fe](以2/0.4的比例)-靜脈注射0.1mmole/kg藥團，然後以0.1mmole/kg灌注1.5小時，(c)[(MGD)2/Fe](以2/0.2的比例)-靜脈注射0.1mmole/kg藥團，然後以0.1mmole/kg灌注1.5小時，和(d)[(MGD)2/Fe](以2/0的比例)-靜脈注射0.1mmole/kg藥團，然後以0.1mmole/kg灌注1.5小時，測量的平均動脈壓概括在表4中。表4各種比例的[(MGD)2/Fe]處理對脂多糖(LPS)誘導的休克大鼠的平均動脈壓(MAP，用mmHg表示)的影響1試驗條件如文本中所述2LPS處理前MAP的值3n為每組動物的數量4[(MGD)2/Fe](2/0.4)其意義為[(MGD)2/Fe]的比例為2/0.4被麻醉的大鼠其MAP在96-102mmHg的範圍，LPS處理後2小時，MAP下降到73-77mmHg，這是全身性低血壓開始的標誌。然而生理鹽水灌注1.5小時沒有改變MAP，灌注從2/0.4(MGD/Fe)-2/0(MGD/Fe)範圍的各種比例的[(MGD)2/Fe]，使血壓恢復到87-96mmHg(表4)。這些結果暗示，靜脈灌注MGD，加或不加鐵(Fe)都能使因LPS激發而誘導的低血壓大鼠恢復到正常血壓(表4)。由於MGD不結合·NO，可以想像，因灌注MGD而產生的MAP的恢復可至少部分歸結於MGD對由過量的·NO產生而釋放的細胞內鐵的螯合作用，已知在膿毒病或腐爛性體克期間，過量的·NO產生能進攻細胞內的含鐵蛋白並導致細胞內的鐵損失。這個例子表明MGD，加或不加鐵，都能有效地治療與多種炎症或感染性疾病相關的全身性低血壓症狀。儘管對本發明的詳細描述參考了某些特定的優選的實施方案，但是應當明白，對本發明的改進和變化都在本發明的說明書和權利要求書的實質和範圍內。權利要求1.一種活體降低主體內氧化氮水平的方法，所說方法包括以有效量的含有至少一種二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑向所說的主體給藥。2.一種治療主體內氧化氮過量產生的方法，所說方法包括以有效量的含有至少一種二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑向所說的主體給藥。3.按照權利要求2的方法，其中所說的氧化氮過量產生與腐爛性休克，局部缺血，細胞活素的給藥，細胞活素的過量表達，潰瘍，潰瘍性結腸炎，糖尿病，關節炎，哮喘，早老性症，帕金森式症，多發性硬化症，硬變病，同種移植排斥，腦脊髓炎，腦膜炎，胰腺炎，腹膜炎，脈管炎，淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎，腎小球性腎炎，眼色素層炎，迴腸炎，肝炎，腎炎，出血性休克，過敏性休克，發燒，節段性迴腸炎，感染，滲血病，慢性疲勞綜合症，中風，癌症(例如乳腺癌，黑色瘤，腫瘤等)，心肺分流術，局部缺血/再灌注損傷等有關。4.按照權利要求2的方法，其中所說的氧化氮過量產生與腐爛性休克，局部缺血，IL-1的給藥，IL-2的給藥，IL-6的給藥，IL-12的給藥，腫瘤壞死因子的給藥，幹擾素-γ的給藥，潰瘍，潰瘍性結腸炎，糖尿病，關節炎，哮喘，早老性症，帕金森式症，多發性硬化症，硬變病或同種移植排斥有關。5.按照權利要求2的方法，其中所說的氧化氮過量產生與腐爛性休克有關。6.按照權利要求2的方法，其中所說的氧化氮過量產生與細胞活素治療有關。7.按照權利要求2的方法，其中所說的含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑包括一種生理上相容的二價或三價過渡金屬離子和含有下列結構的二硫代氨基甲酸酯部分R1R2N-C(S)-S-其中R1和R2各自獨立地選自C1-C18的烷基，取代的烷基，環烷基，取代的環烷基，取代的雜環，鏈烯基，取代的鏈烯基，鏈炔基，取代的鏈炔基，芳基，取代的芳基，雜環芳基，取代的雜環芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，或者R1與R2共同形成包含N，R1和R2的5-員環，6-員環或7-員環。8.按照權利要求7的方法，其中過渡金屬離子與二硫代氨基甲酸酯部分的比例在大約0-1∶2的範圍。9.按照權利要求7的方法，其中所說的生理上相容的二價或三價過渡金屬離子選自鐵，鈷，銅或錳。10.按照權利要求2的方法，其中使所說的含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑與細胞活素，抗生素，血管活性劑，或其混合物一起給藥。11.按照權利要求10的方法，其中所說的細胞活素選自IL-1，IL-2，IL-6，IL-12，TNF或幹擾素-γ。12.按照權利要求10的方法，其中所說的血管活性劑選自兒茶酚胺，去甲腎上腺素，多巴胺或多巴酚丁胺。13.按照權利要求2的方法，其中使所說的含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑以口服，靜脈注射，皮下注射，腸胃外，直腸或吸入方式給藥。14.按照權利要求2的方法，其中使所說的含有二硫代氨基甲酸酯的氧化氮清除劑以固體，液體，乳劑，分散劑，膠束或脂質體方式給藥。15.具有結構式I的化合物R1R2N-C(S)-S-M+(I)其中R1和R2各自獨立地選自C1-C18的烷基，取代的烷基，環烷基，取代的環烷基，雜環，取代的雜環，鏈烯基，取代的鏈烯基，鏈炔基，取代的鏈炔基，芳基，取代的芳基，雜環芳基，取代的雜環芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，或者R1與R2共同形成包含N，R1和R2的5-員環，6-員環或7-員環，而M是一價陽離子，然而，條件是下列化合物要從式I的定義中去掉，即當R1為乙基時，R2不是乙基；或者當R1為CH2(CHOH)4CH2OH時，R2不是甲基，異戊基，苄基，4-甲基苄基或對異丙基苯甲基；或者當R1為CH2CO2-時，R2不是CH2CO2-；或者當R1為CO2-時，R2不是CH3；或者當R1為CH2CH2-OH時，R2不是CH2CH2-OH；或者當R1和R2結合在一起時，它們與胺基甲酸酯的氮原子一起形成吡咯烷基-2-羧酸酯。16.按照權利要求15的化合物，其中M+選自H+，Na+，NH4+或四烷基銨。17.具有結構式II的化合物[R1R2N-C(S)-S-]2M+2，+3(II)其中R1和R2各自獨立地選自C1-C18的烷基，取代的烷基，環烷基，取代的環烷基，雜環，取代的雜環，鏈烯基，取代的鏈烯基，鏈炔基，取代的鏈炔基，芳基，取代的芳基，雜環芳基，取代的雜環芳基，烷基芳基，取代的烷基芳基，芳基烷基，取代的芳基烷基，或者R1與R2共同形成包含N，R1和R2的5-員環，6-員環或7-員環，而M是生理上相容的二價或三價過渡金屬離子陽離子，然而，條件是下列化合物要從式(II)的定義中去掉，即當R1為乙基時，R2不是乙基；或者當R1為CH2(CHOH)4CH2OH時，R2不是甲基，異戊基，苄基，4-甲基苄基或對異丙基苯甲基；或者當R1為CH2CO2-時，R2不是CH2CO2-；或者當R1為CO2-時，R2不是CH3；或者當R1為CH2CH2-OH時，R2不是CH2CH2-OH；或者當R1和R2結合在一起時，它們與胺基甲酸酯的氮原子一起形成吡咯烷基-2-羧酸酯。18.按照權利要求17的方法，其中過渡金屬離子與二硫代氨基甲酸酯部分的比例在大約0-1∶2的範圍。19.按照權利要求17的化合物，其中M選自Fe+2，Fe+3，Co+2，Co+3，Cu+2，Mn+2或Mn+3。20.按照權利要求17的化合物，其中R1和R2各自為C1-C12的烷基，取代的烷基，鏈烯基，取代的鏈烯基，鏈炔基，取代的鏈炔基，其中取代基選自羧基，-C(O)H，氧醯基，苯酚，苯氧基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，醯氨基，羥基，硝基或磺醯基，而M為Fe+2或Fe+3。21.按照權利要求17的化合物，其中R1＝C2-C8的烷基或取代的烷基，其中所說的取代基選自羧基，乙醯基，吡啶基，吡咯烷基，氨基，醯氨基，羥基或硝基，R2選自C1-C6的烷基或取代的烷基，或者R2與R1共同形成包含N，R1和R2的5-，6-或7-員環，而M為Fe+2。22.按照權利要求17的化合物，其中R1＝C2-C8的烷基或取代的烷基，其中所說的取代基選自羧基，乙醯基，醯氨基或羥基，R2＝C1-C4的烷基或取代的烷基，而M為Fe+2。23.包含權利要求17的化合物的組合物，該化合物處於一種藥學上可接受的載體中。24.按照權利要求23的組合物，其中所說的藥學上可接受的載體選自固體，溶液，乳液，分散液，膠束或脂質體。25.按照權利要求23的組合物，其中所說的組合物還包括腸溶衣。26.包含權利要求17的化合物和與其結合的藥理學活性劑的組合物。27.按照權利要求26的組合物，其中所說的藥理學活性劑選自細胞活素，抗生素，血管活性劑或其混合物。全文摘要本發明提供了在活體內降低哺乳動物體內氧化氮水平的方法。與現有技術中所述的抑制方法(例如,其中負責產生氧化氮酶的作用受到抑制)相比,本發明採用一種清除方法,其中將過量產生的氧化氮在活體內結合到一種合適的氧化氮清除劑上。產生的配合物使氧化氮不再有害並最終從主體的尿中排出。此外,本發明還提供了用於實現上述方法的組合物和配方。本發明還涉及一種作為治療遭受發炎和/或傳染病痛苦的主體的手段而降低活體的氧化氮水平的方法。以含有二硫代氨基甲酸鹽的氧化氮清除劑向需要這種治療的主體給藥,這些清除劑與活體內產生的·NO反應形成一種穩定的二硫代氨基甲酸鹽－金屬－NO配合物,含NO的配合物然後通過腎過濾,在尿中濃縮,最後被主體排出體外,從而降低了活體中·NO的水平。文檔編號A61P17/02GK1186495SQ9619439公開日1998年7月1日申請日期1996年2月27日優先權日1995年6月2日發明者賴青山申請人:Mcw研究基礎公司