富含甲基化兒茶素茶多酚的製備方法

2023-09-18 17:51:45

專利名稱：富含甲基化兒茶素茶多酚的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種利用吸附層析柱法，以中國產茶葉為原料，利用大孔樹脂對茶葉 中功能性成分的特異性吸附，製備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法。
背景技術：
很久以來，茶葉一直受到人們的喜愛，僅次於水，是世界上最廣受歡迎的飲料。除 了膾炙人口的色香味之外，還以其祛病健身的功效折服人類，而茶的風味與保健功能正是 茶葉所特有的多酚化合物所賦予的。茶多酚是兒茶素(黃烷醇類)、花色素類(花青素和花白素)、花黃素類(黃酮與 黃酮類)等集於茶葉中的一群多酚複合物的總稱。其中兒茶素佔60%-80%，分為酯型兒 茶素和游離型兒茶素，酯型兒茶素佔兒茶素的70%左右。酚類物質早就被報導具有多種生 理活性，尤其是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。近幾年研究發現茶葉中含有另一種 兒茶素，即兒茶素的甲基化衍生物，以(-)_表沒食子兒茶素3-0(3-0-甲基)沒食子酸酯 (EGCG3'le)和(_)_表沒食子兒茶素3-0(4_0_甲基)沒食子酸酯(EGCG4"Me)為主。目前 關於甲基化兒茶素生理功能的研究主要集中在對甲基化EGCG的抗過敏作用的研究方面， 尤其是對最常見的花粉過敏症具有顯著的預防和抑制作用。在日本，部分富含甲基化EGCG的產品已經進入商業發展階段，在食品行業，餅乾、 口香糖、茶飲料等添加甲基化EGCG給食品行業注入了新的賣點，得到了更多消費者的青 睞。因此，甲基化兒茶素的研究至關重要，在學術、生物學方面都具有非常重要的意義。目前，研究報導的甲基化兒茶素的體外合成主要有化學法和生物酶法。但是，化學 合成法中需要使用大量有機溶劑和各種基團保護劑，合成反應條件較為苛刻，專一性差，副 產物多，因此，化學合成不宜作為甲基化兒茶素的體外合成方法。體外酶法合成雖然專一性 強、反應條件溫和、安全性高，但目前甲基化兒茶素的體外轉化研究均沒有對合成反應物進 行分離純化與結構解析，沒有實現酶法合成產物的大量製備。從茶葉中直接提取甲基化兒 茶素，由於其來源於天然產物，有著較好的安全性。從食品工業角度看，作為一種大量使用 的功能性基料，必須考慮原料充足，方便，易得，無毒性，生產成本低等問題。因此，合理的方 法是從茶葉中直接提取甲基化兒茶素。經過實驗分析測定，比較一些中國產茶葉中甲基化 兒茶素的含量，發現中國產茶葉中一些茶葉的甲基化兒茶素含量較高。因此可以利用這些 茶葉為原料，結合吸附柱層析法的工藝，製備出富含甲基化兒茶素的茶多酚產品。

發明內容
本發明要解決的技術問題是以中國產茶葉為原料，提供一種製備富含甲基化兒茶 素茶多酚的方法，能夠保證提取的產品純度高、成本低、效率高、環境友好，且工藝易於實現 工業化生產。為解決上述問題，本發明提供了一種利用中國產茶葉作為原料製備富含甲基 化兒茶素茶多酚的方法，包括如下工藝步驟1)茶葉經熱水提取，乾燥，得到茶多酚粗提取物；
2)採用特定的大孔樹脂A處理茶多酚相提取物，先用水充分洗脫，去除色素和咖 啡鹼；3)接著用一定濃度的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，經濃縮和乾燥，得到富含甲基化 兒茶素的茶多酚組分I (甲基化兒茶素含量18%左右)；4)採用Toyopearl HW-40S樹脂處理富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I，用一定 濃度的乙醇溶液洗脫，收集不同時間的洗脫液，經濃縮和乾燥，分別得到(-)_表沒食予兒 茶素3-0(3-0-甲基)沒食子酸酯(EGCG3" Me)和(-)-3-0-甲基-表兒茶素沒食子酸酯 (ECG3』 Me)的單體成分(純度均大於95% )；5)採用特定的大孔樹脂B處理富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I，用一定濃度的 乙醇溶液洗脫，收集特定時間的洗脫液，經濃縮和乾燥，得到富含甲基化兒茶素的茶多酚 II (甲基化兒茶素含量> 60% )。本發明所述工藝提取的EGCG3" Me和ECG3，Me純度均大於95%，製備得到的富含 甲基化兒茶素的茶多酚II中甲基化兒茶素含量大於60%，大孔吸附樹脂再生性能好，可以 再生重複利用，洗脫劑乙醇無毒無害，也可以回收多次利用。本工藝成本低、效率高、環境友 好，易於實現工業化生產。


圖1為富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I的HPLC圖譜(其中8. 33anin和 10. 286min 分別為 EGCG3" Me 和 ECG3，Me)圖 2 為 EGCG3" Me 的 HPLC 圖譜圖3為EGCG3" Me的核磁共振氫譜4為ECG3』 Me的核磁共振氫譜圖具體實施方法1)茶多酚粗提取物茶葉用熱水浴浸提30min，料液比1 20，水浴溫度為80°C， 浸提之後在40°C下進行減壓濃縮；2)大孔樹脂A處理選取大孔樹脂A，用pH3. 0緩衝液平衡，上樣液也調整成同樣 的PH，上樣後用水充分洗脫，水的洗脫流速為每小時2個柱床體積；3)富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I 使用80%濃度的乙醇溶液洗脫大孔樹脂A， 流速為每小時1個柱床體積，收集洗脫液，在50°C下進行減壓濃縮；4) Toyopearl HW-40S樹脂處理選取Toyopearl HW-40S樹脂，富含甲基化兒茶素 的茶多酚組分I上樣後使用40%濃度的乙醇溶液洗脫樹脂，流速為每小時1個柱床體積，分 別收集不同時間的洗脫液，將收集的不同組分在40°C下減壓濃縮、乾燥；5)大孔樹脂B處理選取大孔樹脂B，富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I上樣後使 用70%濃度的乙醇溶液洗脫樹脂，流速為每小時1個柱床體積，收集特定時間的洗脫液，在 40°C下減壓濃縮、乾燥。
權利要求
1.製備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，包括如下步驟1)茶葉(甲基化兒茶素含量較高的中國產茶葉)經熱水提取，乾燥，得到茶多酚粗提取物；2)採用特定的大孔樹脂A處理茶多酚粗提取物，先用水充分洗脫，去除色素和咖啡鹼；3)接著用一定濃度的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，經濃縮和乾燥，得到富含甲基化兒茶 素的茶多酚組分I (甲基化兒茶素含量18%左右)；4)採用ToyopearlHW-40S樹脂處理富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I，用一定濃 度的乙醇溶液洗脫，收集不同時間的洗脫液，經濃縮和乾燥，分別得到(-)_表沒食子兒茶 素3-0(3-0-甲基)沒食子酸酯(EGCG3" Me)和(-)-3-0-甲基-表兒茶素沒食子酸酯 (ECG3』 Me)的單體成分(純度均大於95% )；5)採用特定的大孔樹脂B處理富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I，用一定濃度的乙醇 溶液洗脫，收集特定時間的洗脫液，經濃縮和乾燥，得到富含甲基化兒茶素的茶多酚11(甲 基化兒茶素含量>60%)；
2.根據權利要求1所屬的製備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特徵在於步驟1)中 茶葉提取的料液比為1 20，在80°C下水浴浸提30min。
3.根據權利要求1所屬的製備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特徵在於步驟2)中 選取的大孔樹脂A，用pH2. 0-3. O的緩衝液平衡，上樣液也調整成相同的pH值，上樣後用水 充分洗脫，水的洗脫流速為每小時1-2個柱床體積。
4.根據權利要求1所屬的製備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特徵在於步驟3)中 使用一定濃度的乙醇溶液(30% -50% )洗脫大孔樹脂A，流速為每小時1-2個柱床體積，收 集洗脫液，在40-50°C下減壓濃縮。
5.根據權利要求1所屬的一種製備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特徵在於步驟4)中選取的ToyopearlHW-40S樹脂，富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I上樣之後使用一定 濃度的乙醇溶液(70% -80% )洗脫樹脂，流速為每小時1-2個柱床體積，分別收集不同時 間的洗脫液，將收集的不同組分在40-50°C下減壓濃縮、乾燥。
6.根據權利要求1所屬的一種製備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特徵在於步驟5)中選取的大孔樹脂B，富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I上樣之後使用一定濃度的乙醇 溶液(70% -80% )洗脫樹脂，流速為每小時1-2個柱床體積，收集特定時間的洗脫液，在 40-50°C下減壓濃縮、乾燥。
全文摘要
本發明公開了一種從中國產茶葉中製備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法。包括如下步驟以一種甲基化兒茶素含最較高的中國產茶葉為原料，經熱水提取與乾燥得到粗提取物；粗提取物經過大孔樹脂A處理之後，得到富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I(甲基化兒茶素含量18％左右)；富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I經過Toyopearl HW-40S樹脂分離純化後，分別得到(-)-表沒食子兒茶素3-O(3-O-甲基)沒食子酸酯(EGCG3″Me)和(-)-3-O-甲基-表兒茶素沒食子酸酯(ECG3』Me)的單體成分(純度均大於95％)；富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I經過大孔樹脂B處理之後，得到富含甲基化兒茶素的茶多酚II(甲基化兒茶素含量＞60％)。作為一種成本低、效率高、環境友好的製備工藝，本發明易於工業化生產，具有廣闊的應用前景。
文檔編號C07D311/62GK102086186SQ20111000727
公開日2011年6月8日 申請日期2011年1月14日 優先權日2011年1月14日
發明者周蓓, 張鑫, 曾曉雄, 王琳, 高遠 申請人:南京農業大學