用於治療犬骨關節炎的ω-3脂肪酸的製作方法

2023-09-15 22:52:25

專利名稱：：用於治療犬骨關節炎的ω-3脂肪酸的製作方法用於治療犬骨關節炎的fi)-3脂肪酸本申請是申請號為200480023251.6、發明名稱為"用於治療犬骨關節炎的-3脂肪酸"的專利申請的分案申請.
背景技術：
：骨關節炎是一種常發生在人和寵物中的變性關節病(Richardson等，Vet.Clin.NorthAmer.SmallAnimalPractice27:883-91,1997;Curtis等，DrugDisc.Today9:165-172,2004).該病涉及帶有最低限度炎症的關節軟骨的進行性退化(Schoenherr等在SmallAnimalClinicalNutrition她Ed.中所述，Hand等Eds"WalsworthPublishingCompany,Marceline,MO,2000,907-921;Hedborn等，CellMol.LifeSci59:45-53,2002;Pool,FrontBiosci4:D662-70，1999)骨關節炎的控制可以包括藥物治療、外科手術、給予營養品和膝食控制.然而，治療目前的控制手段集中在症狀緩解，且照此它們尚未在疾病控制或治療潛在病理學情況中獲得完全成功.因此，對控制人和寵物中的骨關節炎的新手段仍然存在持續的需求.概述因此，本發明者在本文中已經成功地發現給予有效量的-3脂肪酸，特別是二十碳五烯酸(EPA)可以提供用於控制狗的骨關節炎的新手段，該方法可以有效控制狗的骨關節炎.因此，本發明在不同的實施方案中可以包括用於恢復患有骨關節炎的狗的更接近正常的關節功能的方法.該方法可以包括對所述的狗飼哏包括濃度至少約為0.2%重量或濃度至少約為0.3%重量的EPA的組合物.本發明還可以包括用於終止狗發生骨關節炎的可能性的方法.該方法可以包括對所述的狗飼哏包括濃度至少約為0.2%重量或濃度至少約為0，3%重量的EPA的組合物.本發明用於恢復骨關節炎性狗的更接近正常的關節功能的方法還可以包括對所述的狗銅哏一種組合物，該組合物為基於包括脂肪酸成分的組合物，所述的脂肪酸成分包括恢復關節功能用量的EPA.本發明用於終止狗發生骨關節炎的可能性的方法可以類似地包括對所述的狗飼哏一種組合物，該組合物為基於包括脂肪酸成分的組合物，所述的脂肪酸成分包括恢復關節功能用量的EPA.本發明還可以包括用於終止狗發生骨關節炎的可能性的方法和用於恢復骨關節炎性狗的更接近正常的關節功能的方法，包括對所述的狗給予包括用量約37.5mg/kg體重、約56.25mg/kg體重、約75mg/kg體重或約93.75mg/kg體重的EPA的組合物.可以由動物食品組合物、動物治療刑或動物補充刑包括這類組合物.在不同的實施方案中，用於恢復骨關節炎性狗的更接近正常的關節功能的方法可以包括治療狗的骨關節炎病或減輕該病的症狀，且用於減少狗發生骨關節炎的可能性的方法包括預防狗發生骨關節炎病或減輕狗的該病症狀表現.本發明的方法還可以基於進一步包括如下用重的成分的組合物總量不大於約3%重量的-6脂肪酸和/或比例約0.2-約1.1的-6脂肪酸與-3脂肪酸和或比例約1.0-約12.5的(D-6脂肪酸與EPA.詳細描述本發明可以包括在控制哺乳動物且特別是狗中的骨關節炎性疾病和這類疾病的症狀中給予-3脂肪酸，特別是EPA.-3脂肪酸也稱作n-3脂肪酸，認為它們是一組多不飽和脂肪羧酸類.一般來說，-3脂肪酸舍有帶有亞甲基打斷的雙鍵的12-26個碳原子.在生理上更重要的-3脂肪酸的長度為18-22個碳且是直鏈的.n-3脂肪酸在如從該分子的甲基端確定的第3-4破原子之間帶有雙鍵.二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六蜂酸(DHA)和a-亞麻酸(a-lenolenicacid)(ALA)為用於控制哺乳動物中的骨關節炎的重要的n-3脂肪酸且EPA在控制狗的骨關節炎中是特別重要的.-3脂肪酸的衍生物也可以用於控制骨關節炎.許多類型的衍生物是本領域技術人員眾所周知的.合適的衍生物的實例為醋類，諸如-3脂肪酸，特別是EPA的支鏈或不飽和和/或飽和或不飽和CrC3o環烷基醋類，特別是d-C6烷基酶類.可以通過任意許多給藥途徑，諸如口服、鼻內、靜脈內、皮下等對哺乳動物且特別是狗給予-3脂肪酸且特別是EPA.口服途經是特別合適的且可以通過口服給予溼或幹膳食形式的EPA,可以將其混入膳食中或諸如通過噴霧、聚集、橄粉或沉澱在表面將其施加在任意膳食成分的表面上.它本身可以存在於營養膳食或點心、補充刑或治療刑中，它還可以存在於膳食的液體部分中，諸如水或另一種流體.可以將EPA作為粉末、固體或作為液體，包括凝膠給藥，如果需要，可以將EPA在營養或藥物劑型中口服給葯，諸如膠嚢、片刑、膠嚢形片刑、注射刑等.在所述刑型中，EPA可以作為方面或液體，諸如凝膠存在.可以使用任意的常用營養或藥物栽體，諸如水、葡萄糖、蔗糖等與EPA—起使用.在某些實施方案中，本發明可以包括基本上不含DHA和/或ALA的EPA-膳食組合物.基本上不含DHA或ALA或其混合物的含義指的是DHA和ALA兩者之一或它們兩者基本上不存在或僅存在少量無關重要量的DHA或ALA兩者之一或它們兩者，例如低於約0.1%,低於約0.03%,低於約0.01%,低於約0.03%或低於約0.001%.在基本上不含DHA和/或ALA的實施方案中，存在的任意量的DHA和/或ALA的濃度足夠低，使得在骨關節炎性狗中對骨關節炎疾病、骨關節炎發展或骨關節炎產生的症狀基本上不產生作用.-3脂肪酸且特別是EPA對各種形式的骨關節炎以及其它形式的關節炎，包括類風溼性關節炎均有效.-3脂肪酸，EPA起預防關節軟骨(cartHege)變性過程發展或減少變性過程和由此改善骨關節炎性狗，否則就是可能發生骨關節炎的狗的關節的作用.這種作用還包括-3脂肪酸的抗炎作用，而這種作用在犬的骨關節炎中具有的重要性較低，因為在骨關節炎中涉及的炎症有限.如下文實施例中所示的涉及膝關節軟骨的體外外植術的應用表明EPA是唯一顯著減少糖胺聚糖(GAG)從軟骨中誘導釋放的-3脂肪酸.就預防關節因骨關節炎而受到損害而言，特定目標組的寵物，尤其是犬是那些可能需要這類與一般群體相反的預防性護理的動物.例如，寵物，特別是較大品種的犬類，諸如拉布拉多挽救獵犬、洛特維勒牧犬、德國牧羊犬等更易感骨關節炎，正如它在這些寵物中發生率更高所證實的.另外，大於6(6)歲齡的寵物，特別是狗具有更大的骨關節炎發生率.EPA還可以用於治療患有骨關節炎的犬和貓.目前使用的EPA還可以為其它-3脂肪酸，諸如DHA和ALA以及-6脂肪酸，可以在諸如魚油這類來源中找到相對大量的這些-3脂肪酸.應使用的EPA的量可以顯著改變.正如下文的實施例中所示，觀察到了實際的刑量反應-EPA的含量越大，則抗關節炎作用約高.一般來說，至少約0.2wt。/。的最低用量基於滿足以每日為基礎的犬或貓的一般需求的營養膳食用量.例如，可以在常用營養食物定類中使用以每日為基礎的具體的量或以每日為基礎將在治療劑或補充刑中的相同每日用量提供給動物.另外，只要能夠提供有效量的EPA,則可以使用這些方法或任意其它給予方式的組合.以重量為基礎，EPA的用量範圍包括至少約0.2%,至少約0.25%,至少約0.30%,至少約0.4°/。，至少約0.5%，至少約0.6%至最高達約2%，至最高達約2.25%,至最高達約2.5%,至最高達約3%，至最高達約4%或至最高達約5%.應注意所有的wt。/o均以乾物質為基礎(DMB)EPA為o-3脂肪酸.一般來說，EPA或幼-3與(D-6脂肪酸之比可以顯著改變.在不同的實施方案中，-6:-3之比可以在約1.10-0.2的co-6:1.0的-3或約1.08-0.42的6:1.0的-3，且更具體地說，在約0.2、約0.25、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.8、約l.O或約l.O以上.在不同的實施方案中，-6與EPA之比可以在約12.5-約1.0的-6:1.0的EPA或約12.4-1.12的-6:l.O的EPA，且更具體地說，在約0.2、約0.25、約0.3、約0.4、約0.4、約0.6、約0.8、約1.0、約1.5、約2.0、約2,5、約3、約4、約5、約6、約7，5、約10、約12.5或約12，5.花生四烯酸AA(ffl-6)與EPA之比可以為約0.28-約0.01的AA:1.0的EPA到約0.28-0.08的AA:l.O的EPA，且更具體地說為約0.01、約0.02、約0.04、約0.06、約0.08、約1.0、約1.5、約l.O、約1.5、約2.8或約2.8或以上.可以以作為mg/kg體重計算的用量給予-3脂肪酸，且特別束EPA.因此，例如，可以預計20kg的狗消耗約275g膳食/天.對約27.5rag/kg體重、約41.25mg/kg體重、約55mg/kg體重、約68.75mg/kg體重或約82.5mg/kg體重的狗總計可以給予的EPA在膳食中的量分別約為0.2%、約0.3%、約4%、約0.5%或約0.6%重量.更具體地說，可以給予的EPA重約為20mg/kg體重、約28mg/kg體重、約30mg/kg體重、約40mg/kg體重、約41mg/kg體重、約50mg/kg體重、約55mg/kg體重、約60mg/kg體重、約69mg/kg體重、約70mg/kg體重、約80mg/kg體重、約82mg/kg體重、約90mg/kg體重、約100mg/kg體重、約120mg/kg體重、約150mg/kg體重或約150mg/kg體重或以上.如上所迷，EPA可以可以作為食品形式提供給寵物.這類食品的實例為可提供所有動物的營養物、治療刑、補充刑等的普通膳食.可以在液體或藥物刑型中提供EPA，諸如膠囊、片刑、丸刑、液體乃至非腸道給藥，諸如通過注射器給予的刑型.最重要的方面在於應提供給寵物有效量的EPA以便預防或治療骨關節炎.在不同的實施方案中，給藥途徑可以為口服且可以將EPA混入食品.在寵物食品工業中一般將食品分類為"溼品"或"幹品".溼食品具有相對高含量的水且通常存在於基本上或完全排除空氣的罐或容器中.這類食品的實例為"大塊和肉湯"、存在液體肉湯的單個固體顆粒或一般呈容器形狀的長麵包型的物質.乾食品一般為烤制或優選擠壓成形的物質，然後將後者切成單個成形的部分，通常稱作粗碎物.易於通過常規方式將EPA混入溼食品.可以使用包囊以保護EPA不受乾食品中的空氣氣化，另外，還可以在包裝中使用抗氣化刑和應用氦淨化.這種情況以美國專利US4,895,725為典型，該文獻中特別強調了具體魚油的徵囊化.具有高水平-3脂肪酸的油為油鮮油、娃魚油、錄魚油等.本發明在不同的實施方案中還包括涉及給予包括EPA的組合物以減輕骨關節炎臨床症候和與該病相關的疼痛的嚴重程度和頻率，但沒有顯著的不良反應或副作用的方法.另外，本發明在不同的實施方案中提供了減緩動物骨關節炎性疾病臨床發展的方法.還在不同的實施方案中提供了顯著改善動物的骨關節炎總體情況的方法，使得可以通過骨關節炎性肢體承重增加來客觀地確定這種有益作用.本發明還提供了涉及給予EPA與其它治療骨關節炎的方式聯用的方法，包括對動物給予藥物和/或飼哏體重控制膳食，它們均是本領域中公知的.實施例1本實施例解釋了由培養的犬軟骨組織中的-3脂肪酸引起的糖胺聚糖的釋放.關節軟骨獲自狗的左和右後膝關節(股稞和脛骨坪).將軟骨外植體在含有10%胎牛血清的培養基中培養3天，然後在不含血清的培養基中洗滌3次.然後在不含血清的含有0、100或300ng/mli^脂肪酸(EPA、ALA或DHA)的培養基中將外植體培養6天.在脂肪酸培養基中的該期限後，將所有外植體在不含脂肪酸/不含血清的培養基中洗滌3次.然後在lml脂肪酸和不含血清的不含添加刑(C)、含有10"M視黃酸(RA)或50ng/ml制癌蛋白M(OSM)的培養基中將外植體分別培養4天.注意罔軟骨的可用性問題而導致並非所有的處理都能夠對所有的狗進行.在終止培養時測定釋放入培養基的蛋白聚糖(Mg/mg溼重).在下表中給出了4隻狗中每隻的一式三份培養物的糖胺聚糖(GAG)釋放的平均值和標準偏差.此外，給出了每次處理的培養基乳酸鹽(叫/mg溼重)濃度.表1.*tableseeoriginaldocumentpage8六GAG-糖胺聚糖；O不含血清、不含添加刑的培養基；EPA-二十碳五烯酸；RA-視黃酸；OSM-制癌蛋白M.**未分析.如表1中所示，GAG的釋放因使用在OSM處理的培養物中100嗎/mlEPA和使用在RA和OSM處理的培養物中300叫/mlEPA而顯著減少.在使用任何刑量的EPA情況下，培養基中的乳酸鹽濃度沒有顯著下降.表2.*tableseeoriginaldocumentpage9*GAG-糖胺聚糖；C-不含血清、不含添加刑的培養基；EPA-二十碳五烯酸；RA-視黃酸；OSM-制癌蛋白M.**未分析.如表2中所示，在OSM處理的培養物中，GAG的釋放因使用EPA而顯著減少，但使用ALA或DHA未產生這類結果.使用任何刑量的任何脂肪酸對培養基中的乳酸鹽濃度沒有顯著影響.tableseeoriginaldocumentpage10相關的培養基乳酸鹽改變.tableseeoriginaldocumentpage11頭GAG-糖胺聚糖；C-不含血清、不含添加刑的培養基；EPA-二十碳五蜂酸；RA-視黃酸；OSM-制癌蛋白M.**未分析.如表4中所示，EPA在300ng/ml下顯著減少GAG從RA處理的培養物中釋放，但並非任何其它脂肪酸在任何刑量下均可產生這類結果.在用300ng/mlOSM預處理的對照組、RA-和OSM-處理的培養物中培養基的乳酸鹽濃度顯著降低.實施例2本實施例解釋n-3脂肪酸進入犬的軟骨細胞(chondrocyle)膜.使用單層培養物進行這些實驗中的大部分，不過，在單一實驗中，分析了將脂肪酸進入犬軟骨的外植體培養物.單層培養在24或48小時內沒有18:3n-3脂肪酸ALA進入來自兩隻狗的軟骨細胞，在單獨的培養基中保溫的軟骨細胞中％18:3n-3<l到5(範圍=0.3-0.9%)且在與100或300pg/m，ALA—起保溫24或48小時後，這一百分比沒有顯著改變(範閨=0.3-2.5%),在48小時內20:5n-3脂肪酸EPA大量進入來自1隻狗的軟骨細胞.當用100或300嗎/mlEPA處理48小時時，％20:5n-3從<1%(範圍-0.2-0.6°/0)增加到約7%(範閨=5.6-8%).當在有或沒有5%FCS存在下進行培養時，進入量是不同的.在48小時內20:5n-3脂肪酸EPA大量進入來自l只狗的軟骨細胞，但18:3n-3脂肪酸ALA沒有此結果(每種脂肪酸的刑重為300pg/ml).%20:5n-3從<1%增加到約15%.3或6天內，20:5n-3脂肪酸EPA大量進入來自1隻狗的軟骨細胞(刑量為ng/mlEPAEPA)%20:5n-3從<1%增加至16-18%,在3-6天保溫期間沒有差異.外植體培養在6天內，明顯進入20:5n-3脂肪酸EPA來自1隻狗的軟骨外植體，但18:3n-3DHA或n-6脂肪酸AA(花生四烯酸(arachadonicacid))未產生這類結果(每種脂肪酸的刑量為300ng/ml).%n-320:5從0%(無一種可檢測到)增加到約2%.這些數據表明EPA，但並非其它n-3脂肪酸進入單層或外植體培養物中的犬軟骨細胞胰.實施例3本實施例解釋了n-3脂肪酸對犬軟骨細胞代謝的作用.為了評價n-3脂肪酸對犬軟骨中蛋白質和蛋白聚糖代謝的潛在作用，如實施例1中所述建立培養物，但最終培養4天，不加入分解代謝刺激物(即所有"對照"培養物).在最終24小時的培養過程中，向培養基中加入(1)、04或(ii)"S-甲硤氨酸和"S-半胱氨酸以分別放射性標記新近合成的蛋白聚糖和蛋白質.在終止培養時測定進入軟骨基質的放射性標記.未嘗試對24小時標記期限內從軟骨中缺失的放射性標記物質進行定量.作為DPM/mg溼重進入的3SS04("PG")或"S-甲硤氨酸和"S-半胱氨酸("PROT")的平均值和標準偏差如下表5中所示.表5.*tableseeoriginaldocumentpage13*PG-以DPM/mg溼重計的"S04進入量；PROT-作為DPM/mg溼重的"S-甲疏氨酸和"S-半胱氨酸進入量；EPA-二十碳五烯酸；DHA-二十二碳六蜂酸；ALA-a-亞麻酸(a-lenolenicacid).正如表5中所示，任何n-3脂肪酸對蛋白質合成和進入基質均沒有顯著性作用.EPA在100ng/ml下顯著增加蛋白聚糖合成和進入.沒有其它刑量或脂肪酸可以顯著改變蛋白聚糖合成和進入軟骨基質.逆轉錄-PCR用於測定基質蛋白酶(軟骨聚集蛋白聚糖醉-1和-2)、環加氣醉-1&-2、脂氣合醉-5和12以及潛在的自分泌細胞因子及其受體(例如IL-1、IL-6和TNF)的mRNA信息表達水平.本研究結果發現軟骨聚集蛋白聚糖醉-1和軟骨聚集蛋白聚糖酶-2mRNA信息在"正常"犬軟骨組織中得到表達.此外，某些狗表達了環加氧酶-2(COX-2)的mRNA信息，不過，在這些動物中沒有關節病理學的體徵.這使得監測n-3和n-6脂肪酸補充對未刺激的犬關節軟骨外植體中軟骨聚集蛋白聚糖醉和COX-2的mRNA表達的作用成為可能.EPA是唯一能夠減少犬關節軟骨中降解酶軟骨聚集蛋白聚糖酶-1和軟骨聚集蛋白聚糖酶-2的mRNA信息的脂肪酸.這證明了EPA"切斷'導致軟骨降解的基因的能力.實施例4本研究解釋了-3脂肪酸在犬骨關節炎臨床研究中的作用.在臨床診斷患有骨關節炎的寵物狗中進行三種臨床研究.善醫全科醫師和矯形外科轉科醫師登記了滿足具體合格標準的就診者擁有的狗.要求所有患者基於寵物擁有者的病史記錄和善醫體格檢查而具有可測定的疾病臨床表現的骨關節炎X線照片影像；否則基於體格檢查、CBC、血液化學和尿分析認為健康且沒有併發症；在本研究中登記前30天過程中，如果接受對骨關節炎開據處方的藥物或補充刑，則維持治療方案.進行下列測定，血清脂肪酸分布:通過氣相色謙法測定它，包括用氦仿和甲醇混合物(2:1)提取，使用三氣化硼-甲醉(BF3:MeOH)試刑甲基化，隨後進行火焰離子檢測(FID),通過將保留時間與已知標準品的保留時間進行比較並使用內標定量來鑑定脂肪酸甲癍類.善醫臨床評價:善醫進行體格檢查並在篩選期過程中和臨床試驗過程中的每次飼唯間隔結束時對患者的骨關節炎情況進行臨床評價.善醫評價了5種骨關節炎參數的嚴重程度跛行、負重的勉強性、運動範閨的減少、舉起對側肢體的勉強性和關節觸診時疼痛.在鉤哏期間測定這些參數各自嚴重程度得分的改變.通過對全部S種單個參數的嚴重程度得分改變進行合併衍生出膳食介入對患者骨關節炎病的影響的綜合善醫臨床評價.寵物擁有者的主觀評價:要求寵物擁有者在參與本研究前登記調查表並在臨床試驗過程中的每次飼哏間隔結束時再登記調查表.登記調查表-寵物擁有者評定了觀察到的犬骨關節炎的最常見體徵的頻率和嚴重程度，包括從休息狀態起身的困難、跛行、強直、觸摸時疼痛、行走過程中落在後面、疼痛中的吠或啜泣、攻擊性行為、奔跑困難、行走困難、攀緣步伐困難、跳躍困難、玩耍困難、運動性和總體活動水平受損.此外，擁有者評定了其寵物的總體骨關節炎情況，飼哏調查表-寵物擁有者評定了登記過程中基準化的犬骨關節炎體徵的頻率和嚴重程度改變.此外，寵物擁有者評定了與骨關節炎相關的其動物疼痛的嚴重程度.反作用力測定板歩態分析:在笫0天、6周和12周使用計算機化的生物力學反作用力測定板在各相應的機構評價狗.將所述的測定板固定在lOm走道表面的中央並與該表面齊平.搮縱器控制的快步跑的狗通過反作用力測定板且觀察者對每次通過該板進行評價以證實足撞擊和步態.如果存在不同的同倒前足和後足的撞擊，而狗以1.7-2.0m/s的速度快步跑過反作用力測定板，其中加速改變為-0.5-0.5ms2,那麼認為試驗有效.在每次試驗過程中，使用毫秒計時器和兩個光電開關測定狗向前的速度.對每次試驗進行錄像以便評價和證實足撞擊的有效性.周密考慮以確保狗觸發計時器且在，每次試驗過程中維持通過板一致的速度(如通過搮縱器和觀察者看出的).對每隻狗的每一受患肢和各同側肢獲得了每一試驗期的5次有效試驗.測定峰值垂直力的直角地面反應力、垂直衝動、制動和前衝峰值力以及制動和前衝衝動並用專門的軟體程序記錄(Acquire,SharonSoftware,DeWitt,MI).將所有力對按千克計的體重校準.取來自每側肢的有效試驗的數據的平均值而獲得每一時間期限時每種力或衝動的平均值.比較作為每一時間期限時跛行與同側肢之間的百分比差的治療組與對照組之間的地面反應力數據.在飼哏期開始和結束時比較有關跛行肢的地面力數據的百分比改變.研究#1進行犬的研究以便評價飼哏高水平的n-3脂肪酸對診斷為骨關節炎的狗的膝食作用，在本研究中補充了18位善醫全科醫師來登記患者.將總計131隻狗隨機指定兩種膳食治療並飼哏180天.試驗和對照食品具有相似的大量營養刑分布，但脂肪酸組成明顯不同(表6).試驗膳食含有高水平的ALA、EPA和DHA且用低n-6/n-3比配製.對照組tableseeoriginaldocumentpage16表7.*tableseeoriginaldocumentpage17*ALA-ct-亞麻酸(ot-lenolenicacid);AA-花生四烯酸;EPA-二十碳五烯酸;DHA-二十二碳六烯酸六表8，*tableseeoriginaldocumentpage18*骨關節炎嚴重程度評定量表l-良好；2=未改變；3=惡化.^nsd-無顯著性差異.研究#2進行犬的研究以便評價飼哏高水平的n-3脂肪酸對診斷為骨關節炎的狗的膳食作用.在本研究中2位善醫矯形外科專科醫師登記患者.將總計38隻狗隨機指定兩種膳食治療並飼哏90天.如上所述由相同批量的食品生產試驗和對照膳食(表6).試驗膳食含有高水平的ALA、EPA和DHA且用低n-6/n-3比配製.在0、45和90天時記錄血清脂肪酸、反作用力測定板步態分析和善醫臨床評價.血清脂肪酸分布明顯受到試驗食品調節.在每次飼哏間隔結束時試驗組具有顯著高於對照組的n-3脂肪酸血清濃度(P<0.01),特別是EPA、DHA、ALA,在笫90天時顯著低於對照組的AA濃度(P<0.01),和顯著低於對照組的n-6:n-3比(P<0.01)(表9),tableseeoriginaldocumentpage19(P<0.05),表明試驗組的受侵害肢的承重增加，而對照組在本研究過程中所表現出的承重沒有改變.承重能力還可以通過展示每一媵食組的垂直峰值的百分比改變的頻數分布來表示.在對照組中僅有31%的動物在90天詞哏後表現出承重改善，而在試驗組中有82%的狗在本研究過程中增加了承重.tableseeoriginaldocumentpage20由善醫矯形外科醫師進行的主觀臨床評價為試驗膳食的有效性提供了附加的支持.基於綜合獸醫臨床評價，經評價改善的方面在於消耗試驗食品的狗的百分比顯著高於消耗對照食品的狗(P<0.05).善醫專科醫師還觀察到在試驗組中表現出關節觸診時疼痛減輕的狗的百分比高於對照組(P-0.05).研究#3進行犬的研究以便評價鉤哏高水平的n-3脂肪酸對診斷為骨關節炎的狗的刑量作用.在本研究中28位獸醫全科醫師登記患者.將總計177隻狗隨機指定兩種膳食治療並飼哏90天.約三分之二參與本研究的狗除消耗所評價的治療媵食外，還接受為治療骨關節炎開據的藥物和/或補充刑.三種試驗食品具有相似的大量營養刑分布，但EPA和DHA在組成上改變，其中含有最低水平的變量A且含有最高水平的變量C(表ll).tableseeoriginaldocumentpage21*NFE-作為不含氮的提取物的可溶性碳水化合物舍量；ALA-a-亞麻酸(a-leno，enicacid);AA-花生四烯酸；EPA-二十碳五烯酸；DHA=二十二碳六蜂酸,在0、21、45和90天時記錄血清脂肪酸、寵物擁有者和善醫評價的評價.血清脂肪酸分布明顯受到所有膳食變量調節.在每次飼哏間隔結束時飼艱試驗變量B&C的狗與飼哏試驗變量A的狗相比，前者具有顯著高於後者的n-3脂肪酸血清濃度(P<0.01),特別是EPA、DHA、ALA,前者具有顯著低於後者的n-6脂肪酸濃度，特別是AA(P<0.01),且前者具有顯著低於後者的n-6:n-3比(P<0.01)(表12)tableseeoriginaldocumentpage22寵物擁有者報告14隻消耗任意膳食變量21天的狗中有13隻的各骨關節炎體徵得到改善(表13).另外，寵物擁有者報告14隻消耗任意膳食變量90天的狗中有13隻的各骨關節炎體徵的嚴重程度得到減輕(表14).寵物擁有者還報告在狗消耗任意膳食變量90天後可觀察到的骨關節炎體徵頻率明顯減少(表15).表13.寵物擁有者觀察到的骨關節炎體徵改善(天-0-21)tableseeoriginaldocumentpage23tableseeoriginaldocumentpage24刑量的那些狗在骨關節炎病情方面具有更顯著的改善且在骨關節炎發展方面具有更明顯的減輕(表16).在接受藥物和/或補充劑與未含藥的組之間的骨關節炎病情改善或骨關節炎發展減輕方面沒有顯著性差異(表17).這表明治療性膳食通過對患有骨關節炎的狗通過附加的有益作用而與其它療法以協同方式起作用或至少不與其它療法相牴觸.據報告在參與本研究的狗中不良反應或副作用的發生羋極低.據報告在指定食品的215隻動物中僅有5隻狗發生腹瀉和嘔吐，這困難是因消耗了膳食變量之一所致.對消耗上述討論的兩種研究中的治療性膳食的那些狗報告了不良反應或副作用相似發生率(對實施例1和2而言分別為1/88和1/26,tableseeoriginaldocumentpage26表16.骨，節炎病，的發展膳食N平均值P__A552.3270.2891AvsBB622.1770.1619BvsCC591.9830.0168AvsCtableseeoriginaldocumentpage27將本說明書中引述的所有參考文獻引入本文作為參考.本文引述的所有討論僅擁有概況其作者形成的主張，但不認為任何參考文獻或其部分構成相關的現有技術.申請人保留挑戰引述參考文獻的準確性和適當性的權利.本發明的描述實際上僅為典型的且由此不脫離本發明要點的變化形式均屬於本發明的範圍.並不將這類變化形式看做脫離本發明的實質和範圍.tableseeoriginaldocumentpage27權利要求1.用於恢復患有骨關節炎的狗的更接近正常的關節功能的方法或用於終止狗發生骨關節炎的可能性的方法，該方法包括對所述的狗飼餵包括濃度至少約為0.2％重量的EPA的組合物。2.用於恢復患有骨關節炎的狗的更接近正常的關節功能的方法或用於終止狗發生骨關節炎的可能性的方法，該方法包括對所述的狗飼唯一種組合物，該組合物為基於包括脂肪酸成分的組合物而選棒的組合物，所述的脂肪酸成分包括恢復關節功能用量的EPA.3.用於終止狗發生骨關節炎的可能性的方法或用於恢復骨關節炎性狗的更接近正常的關節功能的方法，該方法包括對所述狗給予包括用量至少約為27.5mg/kg體重的EPA的組合物.4.EPA在製備用於恢復患有骨關節炎的狗的更接近正常的關節功能或用於終止狗發生骨關節炎的可能性的藥物或營養物中的應用，其中所述的藥物或營養物給動物提供了用量至少約為27.5mg/kg體重的EPA,5.權利要求4的應用，其中所述的藥物或營養物包括含有用量至少約為0.2%重量的EPA的膳食.6.權利要求1-4中任一項的方法或應用，其中所迷的組合物、藥物或營養物包括濃度至少約為0.3%重量的EPA.7.權利要求1-5中任一項的方法或應用，其中所述的組合物、藥物或營養物包括約0.2-約1.1比例的-6脂肪酸與-3脂肪酸.8.權利要求1-5中任一項的方法或應用，其中所述的組合物、藥物或營養物包括約1.0-約12.5比例的-6膽肪酸與EPA.9.權利要求1-5中任一項的方法或應用，其中所迷的組合物、藥物或營養物包括食品組合物、治療刑或補充刑.全文摘要本發明披露了用於恢復骨關節炎性狗的更接近正常的關節功能的方法和用於終止狗發生骨關節炎的可能性的方法。這些方法可以包括對狗給予包括有效濃度的ω-3脂肪酸，二十碳五烯酸的組合物。文檔編號A61K31/201GK101653436SQ20091017349公開日2010年2月24日申請日期2004年8月10日優先權日2003年8月11日發明者D·A·弗裡特施,D·E·朱伊爾,W·D·舍恩赫爾申請人:希爾氏寵物營養品公司