抑制環境雌激素的方法

2023-09-16 09:30:10

專利名稱：抑制環境雌激素的方法
雌激素是內源激素，它在人生理上具有各種顯著的功能。該激素主要影響雄性和雌性的生殖系統。例如在成年雌性，雌激素在懷孕和哺乳階段是不可缺少的。它也降低心臟病發作和骨質疏鬆的危險。另外，出生前和出生後的早期階段的雌激素與雄激素的比例調節性分化和適當的生殖器官的正確形成。雌激素也與乳腺和子宮細胞生長的增加，即癌症相關。雄性中，雌激素調節精子產生，不正常的高濃度導致精子數目的下降。
近幾年，對人類和野生種群暴露在其作用是模仿內源雌激素的人造或天然產生的化學物質的關注增加。這些物質有各種來源，包括農藥，動物健康產品，塑料，燃燒副產物，以及植物(植物雌激素)。具體的例子包括玉米赤黴醇(zeranol)，染料木素，香豆雌醇，o，p-DDT，開篷，甲氧氯，玉米赤黴烯酮，dioxin，對辛基苯酚，和雙酚A。總的來說，這類化合物已稱為環境雌激素，並與許多疾病相關，包括男子女性型乳房(DiRaimondo等，N.Engl.J.Med.301，1089，(1980))，早熟青春期(Comas，Lancet，1299，(1982))，精子數低(R.M.Sharpe等，Lancet，341，1392(1993))，子宮內膜異位(S.E.Rier等，Fundam.Appl.Toxicol.，31，423，(1993))，和乳腺癌(M.S.Wolff等，J.Natl.Cancer Inst.，85，648，(1993))。
本發明提供了抑制環境雌激素作用的方法，包括給需要此種治療的人或其它動物施用有效量的式I化合物，及其可藥用鹽，和其溶劑化物
其中R1和R3單獨為氫，-CH3，
或
，其中Ar任選自取代苯基；R2選自吡咯烷基，六亞甲基亞胺，和哌啶子基；現發明涉及式I的2-苯基-3-芳醯基苯並噻吩(苯並噻吩)對抑制環境雌激素作用是有用的這一發現。特別地，本發明的方法包含抑制環境雌激素的生殖影響。
本發明提供的方法，通過給需要此種處理的人或其它動物服用式I化合物或其藥用鹽或溶劑化物而實施，它對抑制環境雌激素的影響有效。術語「抑制」包括其通常所承認的意思，包括阻止，妨礙，限制，以及減慢，停止或逆轉。照此，本方法包括以適當的方式給與藥物治療和/或預防。
Raloxifene，本發明的化合物，它是式I化合物的鹽酸鹽，R1和R3是氫，R2是1-哌啶基，是核調節分子。已知Raloxifene結合到雌激素受體，原認為其功能和藥理學是抗雌激素的，它阻斷雌激素激活子宮組織的能力和雌激素依賴的乳腺癌。事實上，Raloxifene確實阻斷了雌激素在某些細胞內的作用；然而在另外一些類型的細胞，Raloxifene象雌激素那樣活化相同的基因並顯示相同的藥理學，如骨質疏鬆，高脂血症。因此，Raloxifene已被稱為具有混合激動劑-拮抗劑性質的抗雌激素。Raloxifene所顯示並區別於雌激素的獨特性質現在被認為相對於雌激素-雌激素受體複合物對基因的活化和/或抑制作用歸因於Raloxifene-雌激素受體複合物對各種基因功能獨特的活化和/或抑制作用。因此，雖然Raloxifene和雌激素利用並競爭相同的受體，但不易預料兩者通過基因調控的藥理學結果，而且對兩者中每一個都是獨特的。
一般地，該化合物用普通的賦形劑，稀釋劑或載體配製，並壓成片劑，或配製成酏劑或溶液以方便口服，或經肌內或靜脈途徑給藥。該化合物可以經皮給藥，並可以配製成緩釋製劑形式等等。
在現發明的方法中使用的化合物可以根據已建立的步驟製造，如在美國專利號4,133,814,4,418,068，和4,380,635中詳述的，所有這些在此引入作為參考。總的來說，該過程從具有6-羥基和2-(4-羥基苯基)基團的苯並噻吩開始。該起始物被保護，乙醯化，並脫保護形成式I化合物。製備此化合物的實施例由上面描述的美國專利提供。任選的取代苯基包括苯基和被C1-C6烷基，C1-C4烷氧基，羥基，硝基，氯，氟，或三(氯或氟)甲基取代一次或兩次的苯基。
在本發明的方法中使用的化合物用各種有機和無機酸和鹼形成藥用酸和鹼加合鹽，包括在藥物化學常用的生理上可接受的鹽。此種鹽也是本發明的部分。典型的用於形成此鹽的無機酸包括鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硝酸，硫酸，磷酸，連二磷酸等等。也可以使用從有機酸形成的鹽，如脂族單和二羧酸，苯基取代的鏈烷酸，羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二酸，芳香酸，脂族和芳香族磺酸。於是此藥用鹽包括乙酸鹽，苯乙酸鹽，三氟乙酸鹽，丙烯酸鹽，抗壞血酸鹽，苯甲酸鹽，氯代苯甲酸鹽，二硝基苯甲酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲氧基苯甲酸鹽，甲基苯甲酸鹽，鄰乙酸基苯甲酸鹽，萘-2-苯甲酸鹽，溴化物，異丁酸鹽，苯基丁酸鹽，β-羥基丁酸鹽，丁炔-1，4-dioate，己炔-1，4-dioate，癸酸鹽，辛酸鹽，氯化物，肉桂酸鹽，檸檬酸鹽，甲酸鹽，反式丁烯二酸鹽，乙醇酸鹽，庚酸鹽，馬尿酸鹽，乳酸鹽，蘋果酸鹽，順丁烯二酸鹽，羥基順丁烯二酸鹽，丙二酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽，煙酸鹽，異煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，teraphthalate，磷酸鹽，磷酸氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，丙炔酸鹽，丙酸鹽，苯基丙酸鹽，水楊酸鹽，癸二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，焦硫酸鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磺酸鹽，苯磺酸鹽，對溴苯基磺酸鹽，氯苯基磺酸鹽，乙磺酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，甲磺酸鹽，萘-1-磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，酒石酸鹽，等等。優選的鹽是鹽酸鹽。
藥用酸加合鹽典型地通過式I化合物與等摩爾或過量的酸反應形成。反應物一般在相容溶劑如乙醚或苯中結合。正常地鹽在約1小時到10天內從溶液中沉澱出來，並經過濾分離或用常規方法除去溶劑。
通常用於形成鹽的鹼包括氫氧化銨及鹼金屬和鹼土金屬氫氧化物，碳酸鹽，以及脂肪族和伯，仲和叔胺，脂肪族二胺。製備加合鹽特別有用的鹼包括氫氧化銨，碳酸鉀，甲胺，二乙胺，乙二胺和環己胺。
與其來源的化合物相比，藥用鹽通常具有提高的溶解性，所以常常更易於配製成液體或乳劑。
藥物的配製可以採用技術上已知的步驟。例如，化合物可以用普通的賦形劑，稀釋劑，或載體配製，並製成片劑，膠囊，混懸劑，散劑等等。適合於此配製的賦形劑，稀釋劑和載體包括如下填料和填充劑如澱粉，糖，甘露醇和矽衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物，矽酸鹽，明膠，及聚乙烯吡咯烷酮；溼潤劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；用於阻滯溶解的試劑如石蠟；吸收加速劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇，單硬脂酸甘油酯；吸附載體如高嶺土和膨潤土；以及潤滑劑如滑石硬脂酸鈣和鎂，和固體聚乙二醇。
化合物也可以配製成酏劑或方便口服給藥的溶液或作為適於腸胃外給藥的溶液，例如經肌內，皮下或靜脈途徑。另外，化合物很適合配製成緩釋劑形式等。該製劑可配製成僅在或優選在腸道的特殊部分，可能在一段時間內釋放活性成分。可以用如聚合物或蠟製成塗層，包皮和保護層。
根據本發明抑制環境雌激素的作用所需的適宜化合物的具體劑量依賴於條件的嚴重性，給藥途徑和由出診醫生決定的相關因素。一般地，每日可接受的有效劑量為約0.1-1000mg/日，更典型地為約50-200mg/日。這些劑量每日1-3次給與需要此種治療的受治療者，更經常的用於有效治療綜合症或至少其中一種症狀。
通常優選以酸加合鹽的形式給與式I化合物，正如通常服用含鹼性基團如哌啶子基環的藥物那樣。通過口服施用此化合物也是有利的。為此可使用下列口服劑量形式。
下列配方中，「活性成分」指式I化合物製劑1明膠膠囊硬明膠膠囊用下列方式製備成分 量(mg/膠囊)活性成分 0.1-1000澱粉，NF 0-650可流動澱粉粉末0-650矽酮流體350釐沲 0-15
成分混合，過No.45目美國細篩，填進硬明膠膠囊中。
已製備的Raloxifene特殊膠囊配製的實施例包括如下所示的成分製劑2Raloxifene膠囊成分 量(mg/膠囊)Raloxifene 1澱粉，NF 112可流動澱粉粉末225.3矽酮流體350釐沲 1.7製劑3Raloxifene膠囊成分 量(mg/膠囊)Raloxifene 5澱粉，NF 108可流動澱粉粉末225.3矽酮流體350釐沲 1.7製劑4Raloxifene膠囊成分 量(mg/膠囊)Raloxifene 10澱粉，NF 103可流動澱粉粉末225.3矽酮流體350釐沲 1.7製劑5Raloxifene膠囊成分量(mg/膠囊)Raloxifene50澱粉，NF 150可流動澱粉粉末397矽酮流體350釐沲 3.0上面具體的配製可以按照所提供的的合理變化而改變。片劑配製用如下成分製備製劑6片劑成分 量(mg/片)活性成分 0.1-1000纖維素，微晶 0-650煅制二氧化矽 0-650硬脂酸0-15組分混合後壓成片劑。另外，每片含0.1-1000mg活性成分的片劑製備如下製劑7片劑成分 量(mg/片)活性成分 0.1-1000澱粉 45纖維素，微晶 35聚乙烯吡咯烷酮4(10％水溶液)羧甲基纖維素鈉4.5硬脂酸鎂 0.5滑石 1
活性成分，澱粉和纖維素過No.45目美國細篩並徹底混合。聚乙烯吡咯烷酮的溶液與總粉末混合，然後過No.14目美國細篩。如此形成的顆粒在50°-60℃乾燥並國No.18美國細篩。然後已過No.60美國細篩的羧甲基纖維素鈉，硬脂酸鎂，及滑石加入到顆粒中，混合後，在壓片機上壓成片劑。
每劑5mi含0.1-1000mg藥劑的混懸液製備如下製劑8混懸液成分 量(mg/5ml)活性成分 0.1-1000mg羧甲基纖維素鈉50mg糖漿 1.25mg苯甲酸溶液0.10ml調味劑q.v.顏色 q.v.加純水至 5ml藥劑過No.45目美國細篩並與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成調勻的漿。攪拌下加入用水稀釋的苯甲酸溶液，調味劑，顏色。然後加入足量的水至需要體積。
測試步驟試驗1在解釋方法的實施例中，絕經後模型用於測定不同的治療對循環脂質的作用。
75天齡雌性Sprague Dawley大鼠(體重200-225g)從CharlesRiver實驗室(Portage，MI)獲得。動物在Charles River實驗室被雙側卵巢切除(OVX)並於一周後送來。到達時它們被以每籠3-4隻關在金屬籠中，並隨意攝食(鈣含量約0.5％)和水一周。室溫保持在22.2±1.7℃，最小相對溼度為40％。室內光周期為12小時照明12小時黑暗。
劑量服法組織收集 一周適應期後(即OVX後兩周)，開始每日給與被試化合物Raloxifene。玉米赤黴醇和被試化合物在20％環糊精賦形劑中口服給與。動物每日口服，連續4天。服用後動物稱重並用ketamine賽拉嗪(2∶1，V∶V)混合物麻醉並通過心臟穿刺收集血樣。動物然後通過用二氧化碳窒息處死，中線切開取出子宮並測量子宮溼重。
膽固醇分析 血樣在室溫凝固2小時，3000rpm離心10分鐘後得到血清。用Boehringer Mannheim診斷高效膽固醇測定法測定血清膽固醇。簡要地，膽固醇被氧化成膽甾-4-烯-3-酮和過氧化氫。然後過氧化氫在過氧化物酶的存在下與酚和4-氨基安替匹林反應產生對苯醌亞胺染料，在500nm分光光度計讀數。膽固醇濃度根據標準曲線計算得出。整個實驗用Biomek自動化工作站自動進行。
子宮嗜曙紅細胞過氧化物酶(EPO)試驗子宮保存在4℃直到酶分析。子宮然後用50體積的含0.005％Triton X-100的50mMTris緩衝液(pH8.0)勻漿。加入0.01％過氧化氫和Tris緩衝液中10mM的鄰苯二胺(終濃度)後，在450nm監測吸光度1分鐘。子宮中嗜曙紅細胞的存在是化合物雌激素活性的指示，測定開始的反應曲線線性部分15秒間隔最大速率。
數據歸納如表1所示玉米赤黴醇作為環境雌激素的實例使子宮溼重增加3倍，並導致子宮嗜曙紅細胞顯著增加(相對於OVX對照組EPO最大速率為4mOD/min)和血清膽固醇的減少。這些活性與在此試驗系統中雌激素藥物(即17α-乙炔基雌二醇)所產生的性質上相似。
被試化合物與玉米赤黴醇組合使用時減緩子宮刺激和環境雌激素的降膽固醇活性。在10mg/kg劑量水平被試化合物導致對玉米赤黴醇誘導的子宮重量刺激，子宮EPO升高和血清膽固醇下降的明顯衰減。
表1子宮重量 子宮血清膽固(相對於 EPO醇OVX對照的升 (Vm (相對於高百分比) ax) OVX對的下降百分數照)玉米赤黴醇 200.5 403.8 82.8(10mg/kg)玉米赤黴醇 189.2 429.6 77.710mg/kg+測試化合物(0.1mg/kg)玉米赤黴醇 202.2 360.3 66.210mg/kg+測試化合物(1mg/kg)玉米赤黴醇 91.2 177.9 52.410mg/kg+測試化合物(10mg/kg)17α-乙炔雌二109.2 177.9 86.4醇(0.1mg/kg)試驗2採用了5至40個已知受環境雌二醇處理並顯示出症狀的(即癌症，男子女性型乳房，精子量低)個體。這些個體用式I的化合物治療4至12個月，在此期間環境雌二醇的影響被測定回歸。
在這些研究之一中，這種化合物的實用性為其對於環境雌二醇的影響的作用而證明。
權利要求
1.抑制環境雌激素影響的方法，包括給需要此種治療的人或其它動物施用有效量的式
的化合物，或其溶劑化物的藥用鹽，其中R1和R3單獨為氫，-CH3，
或
，其中Ar選自任選取代的苯基；R2選自吡咯烷基，六亞甲基亞胺，和哌啶子基。
2.權利要求1的方法，其中所說的化合物是其鹽酸鹽。
3.權利要求1的方法，其中所說的化合物是
或其鹽酸鹽。
4.權利要求1的方法，其中所說的影響涉及生殖系統。
全文摘要
抑制環境雌激素作用的方法，包括給與需要的人或其它動物有效量的式(I)化合物或者其溶劑化物的藥用鹽，其中R
文檔編號A61K31/445GK1169116SQ9619159
公開日1997年12月31日 申請日期1996年1月22日 優先權日1995年1月25日
發明者H·U·布賴恩特, J·A·道傑 申請人:伊萊利利公司