一種運用重組唾液酸酶轉化多唾液酸神經節苷脂製備單唾液四己糖神經節苷脂的方法
2023-09-16 12:24:55 1
一種運用重組唾液酸酶轉化多唾液酸神經節苷脂製備單唾液四己糖神經節苷脂的方法
【專利摘要】本發明提供一種運用重組唾液酸酶轉化多唾液酸神經節苷脂製備單唾液四己糖神經節苷脂的方法，包括以下步驟：1)提供一種游離的重組唾液酸酶，所述重組唾液酸酶是由SEQ?ID?NO:1所示的鹼基序列編碼的蛋白；以及2)將步驟1)中的重組唾液酸酶與多唾液酸神經節苷脂混合，以將所述多唾液酸神經節苷脂(GLS)轉化為單唾液四己糖神經節苷脂(GM1)。本發明首次通過全合成唾液酸酶的全長基因，在大腸桿菌中成功實現了唾液酸酶的可溶性表達，該重組唾液酸酶比活高，製備成本低，並且該方法通過採用透析原位分離產物唾液酸可進一步解除唾液酸的抑制作用，促進反應向產物方向進行，從而將高濃度的GLS完全轉化為GM1。
【專利說明】一種運用重組唾液酸酶轉化多唾液酸神經節苷脂製備單唾 液四己糖神經節苷脂的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於酶法轉化製備單唾液四己糖神經節苷脂領域，更具體地涉及一種運用 重組唾液酸酶轉化多唾液酸神經節苷脂製備單唾液四己糖神經節苷脂的方法。
【背景技術】
[0002] 神經節苷脂是含唾液酸的鞘糖脂。1942年Klenk首先在神經節細胞內找到這類 化合物，故名神經節苷脂。神經節苷脂由神經醯胺、寡糖和唾液酸組成。神經節苷脂所含 的寡糖是一種特異的以β-糖苷鍵連接的四糖。四糖按半乳糖（Gal)、N-乙醯半乳糖胺 (N-GalNAC)、半乳糖及葡萄糖（Glu)順序連接，最後通過葡萄糖殘基與神經醯胺（Cer)相 連。神經節苷脂的唾液酸殘基均連接於寡糖的半乳糖基上，其數目從無（無唾液酸神經節 苷脂）到四個或更多不等。目前已從腦組織中分離出30多種神經節苷脂，其命名通常採用 Svennerholm法，主要內容包括：（1):用大寫"G"表示神經節苷脂；（2)用A、M、D、T、Q、P、H、 S分別表示含0-7個唾液酸；(3)用（5-糖基數）之差表示含相同唾液酸但不同糖基數的神 經節苷脂；（4)用a、b、c表示唾液酸的連接部位。
[0003] 下圖舉例說明一個神經節苷脂縮寫名稱中各部分含義。
[0004]
【權利要求】
1. 一種運用重組唾液酸酶轉化多唾液酸神經節苷脂製備單唾液四己糖神經節苷脂的 方法，其特徵在於，包括以下步驟： 1) 提供一種游離的重組唾液酸酶，所述重組唾液酸酶是由SEQ ID NO: 1所示的乳酪短 桿菌唾液酸酶喊基序列編碼的蛋白；以及 2) 將步驟1)中的重組唾液酸酶與多唾液酸神經節苷脂混合，以將所述多唾液酸神經 節苷脂轉化為單唾液四己糖神經節苷脂。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述多唾液酸神經節苷脂是以神經節苷 脂混合物形式提供。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述重組唾液酸酶是通過將SEQ ID NO: 1 所示的乳酪短桿菌唾液酸酶鹼基序列連接載體並在大腸桿菌中進行可溶性表達獲得的蛋 白。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述步驟2)進一步包括採用膜透析的方 法去除反應產物唾液酸。
5. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述膜透析的截留分子量為 10000-50000kDa。
6. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述透析液是50mM的pH5. 5的醋酸鈉緩 衝液。
7. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述轉化反應的溫度控制在30?40°C。
【文檔編號】C12P19/44GK104195200SQ201410441305
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年9月1日 優先權日:2014年9月1日
【發明者】王學東, 龍輝, 魏東芝 申請人:華東理工大學