一種葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束及其製備方法

2023-09-16 09:16:30

專利名稱：一種葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束及其製備方法
技術領域：
本發明屬於納米材料技術領域的聚合物膠束及其製備方法，具體涉及一種葡聚糖-磷 脂醯乙醇胺聚合物膠束及其製備方法。
技術背景多糖類高分子聚合物在自然界中蘊藏量大，廣泛分布於動植物和微生物中，來源豐 富，種類繁多，價格低廉。作為藥物的載體材料，多糖具有性質穩定、安全無毒、具有 很好的生物可降解性和生物相容性以及容易在其結構上進行化學或者生化方面的調整等 優點。近年來親水性多糖已發展成為極有前景的藥物載體，它可使大分子順利通過上皮組 織，增強黏膜藥物的生物利用度(Gm^"W Z/ra I, Jowma/ o/ tow7a/m'a&"e/h^7化w'，,，￥7,^-97, 。葡聚糖是具有線狀主鏈的一類多糖，主要可以被黴菌等降解，是一種常用的多糖類藥物製劑材料，具有很好的生物可降解性和生物相容性以 及容易在其結構上進行化學或者生化方面的調整等特點(Ca^A/M4， Ce廳etoF, C^a &325 (7-": "0-"6 M9F " 2卯6; /fe朋/"A:『￡, De Jcwg 57;萬ay G『'KWfe^ TK/' va" /Vastn^/w CF, /wZ^rwa"cwa/ /owrwa/ 0/p/zarmacewHci1 277 (7-2j.' _99-/(^ JT/iV 77 26^4;coWro//eflfre/ea^S0(7-5;:57-6S^Pi "2(W二' J> ，它廣泛應用於藥物載體和醫用材料中。 磷脂醯乙醇胺是磷脂質的一種，亦曾稱腦磷酯(Kepha—lin)。在生物界所存在的磷脂中， 磷脂醯乙醇胺的含量僅次於卵磷酯，在大腸菌中，其約佔總磷脂的80%。組成脂肪酸因 生物不同而異，在微生物和卵黃中的，構成的飽和脂肪酸比動物組織中多。在生物界還 存在著含有單甲基乙醇胺、二甲基乙醇胺的衍生物。這些都通過S-腺苷甲硫氨酸使磷脂醯乙醇胺甲基化而形成的，研究表明在微生物中，磷脂醯乙醇胺是通過磷酯醯絲氨酸的 脫羧作用形成的。在動物中，它是通過胞苷二磷酸乙醇胺和1， 2-甘油二酯的反應生成的。 通過磷酯酶A的作用生成溶血磷脂醯乙醇胺。眾所周知，如果聚合物中同時具有親水和疏水兩部分組成，那麼這種兩親性聚合物 在水溶液中就可以自組裝形成聚合物納米膠束，聚合物納米膠束作為藥物載體發展於20 世紀90年代，是由兩親性聚合物在水溶液中自發形成的一種自組裝結構，親水性片段形 成外殼，疏水性片段形成內核，構成獨特的核-殼結構。具有載藥量高、載藥範圍廣，穩 定性好、體內滯留時間長、獨特的體內分布以及增加藥物的穩定性、提高生物利用度和 降低毒副作用等特點。兩親性聚合物膠束因具有核一殼結構、臨界膠束濃度低、熱穩定性好等特點在藥物 釋放體系等領域具有廣泛的應用前景。近十幾年，由兩親型共聚物材料組成的膠束給藥體系以其突出的優點以及在腫瘤藥 物、基因藥物、抗傳染藥物等方面的極大應用前景而受到了國際醫藥界的廣泛關注。兩 親型共聚物膠束體系是目前研究的最多和最成熟的聚合物膠體給藥體系(^""K,"及Wegrac/。6/e w朋o/ afWcfes1》r朋d <iewe /o ce〃s awt/ /^Mre ", yi(ivaf"ce<iZ)ragDe//wo/7 m'ew, 55, 3"-347入大量研究表明，兩親型聚合物給藥系統的載體能夠自聚集成為獨特核殼結構的膠束(rorc/j!7fM, K i5泣n/c加re am/ cfew'gn o/pofy附m'c ra/^c,aW-6aseddrag e/^雄.Z/m W M/cAefo/; C兄De油h/ MPT. 7畫屍,C碰o"'爿.7iw7orCawcw/"W. 9S:B5-￥4J，由於聚合物膠束具有的"核-殼"結構類似於生物體中脂 蛋白和病毒的結構在某種意義上具有一定的仿生性，而且聚合物膠束的較高穩定性決定 了其在濃度極稀時仍能穩定存在，膠束表面的親水性外殼可降低巨噬細胞對粒子的識別和吞噬能力，延長其在血液中的循環時間，可保護藥物免遭生理環境的破壞，在體內緩
慢釋放；膠束的粒徑小，能通過毛細胞血管直接進入器官和細胞內部，被更有效的吸收； 膠束給藥系統的廣泛給藥方式是其它任何劑型都無法比擬的，它可通過口服、注射(靜 脈注射、肌肉注射、皮下注射)、透皮等方式加入人體血液循環系統等顯著優點。由於葡聚糖具有生物降解性和親水性，磷脂醯乙醇胺具有疏水性，所以用葡聚糖和 磷脂醯乙醇胺作為基本材料製備的兩親性共聚物可組裝形成納米膠束作為藥物載體，由 於葡聚糖的親水性可以避免被網狀內皮細胞捕獲，有效地延長了藥效，降低了毒性，提 高了生物利用度和生物活性。葡聚糖能產生立體位阻層，從而減弱血中各種成分的作用，特別是血漿蛋白的調理作 用以及隨後的RES (網狀內皮細胞)攝取作用，同時脂蛋白的交換、磷脂酶的水解等均受 到有效抑制；提高膜表面親水性葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物有很長的極性基團，能提高 載體表面的親水性，從而提高了MPS (巨噬細胞系統)對其吸收破壞作用的能壘，有效組 織了載體表面與血白蛋白的調理作用，並降低了載體的MPS的親和作用。由於葡聚糖層 的存在，使得該種物質作為載體鍵合配體物質時在體內外穩定性有了很大改變，增加再分 散性；延長了在體循環中的時間，可減少被MPS攝取的速度和程度，並降低對這個主要 宿主防禦系統的不良反應。本發明中，我們提出了一種簡單易行的製備兩親性葡聚糖衍生物(葡聚糖-磷脂醯乙 醇胺)膠束及其製備方法，該聚合物及其膠束製備過程重複性好，在藥物載體上具有廣 泛的應用性。發明內容本發明的目的在於針對葡聚糖和磷脂醯乙醇胺具有的生物降解性、生物相容性的特 點，而提出一種新的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束及其製備方法。 本發明的技術方案如下本發明提供的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束，其特徵在於，其為具有生物 降解性、物相容性的葡聚糖和磷脂醯乙醇胺的兩親性材料組裝而成的葡聚糖-磷脂醯乙醇 胺聚合物膠束；該葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束為大小125~161nm的圓球形結構規整 的膠束粒子，其臨界膠束濃度為1.02Xl(r2~6.52X10-2mg/ml。所述磷脂醯乙醇胺為二硬酯醯磷脂醯乙醇胺、二油酯醯磷脂醯乙醇胺或二棕 櫚醯磷脂醯乙醇胺。 所述的葡聚糖分子量為1.5kDa 、 5kDa或70kDa。本發明提供的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束的製備方法，其具體步驟如下(1) 以下述比例製備活化的葡聚糖將0.54-9.9g葡聚糖溶於50ml體積比為l: 1的二甲基亞碸和吡啶混合溶液中； 然後將40mg的4-二甲氨基吡啶和1.0-4.0g對-硝基苯基氯甲酸酯添加到上述溶液中，-10°C攪拌反應1-8小時後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙醇洗，產物乾燥後在-20。C下儲存得活化的葡聚糖乾粉；所述活化的葡聚糖乾粉狀中葡聚糖與對-硝基苯碳酸酯的重量百分比為70%: 30%;(2) 將磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成磷脂醯乙醇胺的濃度為50mg/ml的磷脂醯 乙醇胺氯仿溶液；(3)步驟l中活化的葡聚糖乾粉在N, N-二甲基甲醯胺中分散得活化的葡 聚糖分散液，所述活化的葡聚糖分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%;(4) 以下述比例製備液態葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物粗產物取4ml步驟(2)所得磷脂醯乙醇胺氯仿溶液，加入至lml三乙胺；將含三乙胺的 磷脂醯乙醇胺溶液加入至20ml活化後的活化的葡聚糖分散液中，所述活化的葡聚糖分 散液的活化葡聚糖含量為l.Og，在氬氣下，室溫攪拌反應24小時；然後，產物過濾除 雜質，過濾後的產物進行減壓真空蒸發除氯仿得到液態葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物粗 產物；(5) 將上述步驟(4)中得到的液態葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物粗產物放入到 pH=5.1檸檬酸鈉緩衝溶液中4QC下透析去除N， N-二甲基甲醯胺；(6) 將透析後得到的產物冷凍乾燥，之後，用體積比為70: 30的甲醇和0.01M 鹽酸溶液作為流動相，對透析後得到的冷凍乾燥產物進行反向高效液相色譜純化；再通 過減壓真空蒸發除去流動相，經過冷凍乾燥，得純化的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物幹 粉；在-20。C下進行乾粉儲存；所述冷凍乾燥純化後的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物中葡 聚糖與磷脂醯乙醇胺的重量百分比為70%: 30%;(7) 以下述比例用相分離-透析法製備葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束 將0.2§冷凍乾燥純化後的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物溶於61!11的N， N-二甲基甲醯胺中，邊攪拌邊滴加到14ml去離子水中，最後形成的帶藍光乳液，裝入透析袋中， 放入31去離子水中分多次透析48小時，得到葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束。
所述活化的葡聚糖的製備過程中，其中的反應物對-硝基苯基氯甲酸酯和葡聚糖的 摩爾比為5: 1-50: 1。所述的葡聚糖分子量為1.5kDa 、 5kDa或70kDa。所述的磷脂醯乙醇胺為二硬酯醯磷脂醯乙醇胺、二油酯醯磷脂醯乙醇胺或二棕櫚醯 磷脂醯乙醇胺。本發明提供的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束及其製備方法，其優點(1) 原料為具有生物降解、生物相容的葡聚糖和磷脂醯乙醇胺組成，它們都為可 用於人體的藥物載體材料，具有良好的生物相容性和安全性；(2) 該膠束中葡聚糖的親水性可以避免被網狀內皮細胞捕獲，有效地延長了藥效， 降低了毒性，提高了生物利用度和生物活性；(3) 該膠束由於臨界膠束濃度(CMC)很低，形成的膠束穩定，粒徑小，具有長 循環性，可用於包載各種親、疏水藥物，是具有發展前途的藥物載體；(4) 製備方法簡單，重複性好，在藥物載體上具有廣泛的應用性。


圖1為本發明的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺成膠束(實施例1)透射電鏡圖.
具體實施例方式
實施例1:1、 活化葡聚糖將0.54g葡聚糖(分子量為1.5kDa)溶於50ml二甲基亞碸和吡啶混合溶液(l:l,V/V) 中，然後把4-二甲基氨基吡啶(40mg)和對-硝基苯基氯甲酸酯(2.0g)添加到上述溶液中， -10。C攪拌反應，lh後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙醇洗，所得產物純化乾燥後，在-20。C 下保存得活化的葡聚糖乾粉；2、 將二硬酯醯磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成濃度為50mg/ml的二硬酯醯磷 脂醯乙醇胺氯仿溶液；3、 步驟l中活化的葡聚糖乾粉在N， N-二甲基甲醯胺中分散得活化的葡聚 糖分散液，所述活化的葡聚糖分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%;4、 將步驟2中的二硬酯醯磷脂醯乙醇胺氯仿溶液(50mg/ml)取4ml，然後加入lml三乙胺。將含三乙胺的磷脂醯乙醇胺溶液加入到20 ml活化後的葡聚糖l.Og分散液 中，在氬氣下，室溫攪拌反應24小時。然後，產物過濾除雜質，過濾後的產物進行減壓 真空蒸發除氯仿得到液態的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺聚合物的粗產物；5、 將步驟4中得到的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺粗產物放入到pH=5.1檸 檬酸鈉緩衝溶液中4°C下透析除去N， N-二甲基甲醯胺,透析後產物冷凍乾燥；6、 將步驟5中冷凍乾燥後的物質用反向高效液相色譜純化(用甲醇/0.01M鹽 酸溶液，(70: 30， v/v)作為流動相)。流動相通過減壓真空蒸發除去，純化後的葡聚糖 -二硬酯醯磷磷脂醯乙醇胺經過冷凍乾燥，在-20。C下作為乾粉儲存。7、 用相分離-透析法製備聚合物膠束。將0.2§純化後的葡聚糖-二硬酯醯磷脂 醯乙醇胺溶於6mlN， N-二甲基甲醯胺中,邊攪拌邊滴加到14ml去離子水中，最後形成 的帶藍光乳液裝入透析袋中，放入31去離子水中分多次透析48小時得到共聚物膠束。 然後對膠束進行動態光散射、透射電鏡及螢光光譜測定觀察,結果表明:動態光散色射測定 其粒徑為131 nm,分散指數為0.08;透射電鏡觀測粒子為規整的圓球形；螢光光譜測定其 臨界膠束濃度為5.43x10—2 mg/ml。實施例2:1、 活化葡聚糖的製備將2.97g葡聚糖(分子量為1.5kDa)溶於50ml二甲基亞碸 和吡啶混合溶液(1: 1,V/V)中，然後把4-二甲基氨基吡啶(40mg)和對-硝基苯基氯甲 酸酯(2.0g)添加到上述溶液中，-10°(3攪拌反應，lh後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙 醇洗，所得產物純化乾燥後，在-20。C下保存。2、 將二硬酯醯磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成濃度為50mg/ml的溶液。3、 步驟1中活化的葡聚糖可以在N， N-二甲基甲醯胺中分散，所述活化的葡聚糖 分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%。4、 將步驟2中的二硬酯醯磷脂醯乙醇胺溶液(50mg/ml)取4ml，然後加入lml 三乙胺。將含三乙胺的磷脂醯乙醇胺溶液加入到20ml活化後的葡聚糖(1.0g)分散液中， 在氬氣下，室溫攪拌反應24小時。然後，產物過濾除雜質，過濾後的產物進行減壓真空 蒸發除氯仿得到液態的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺聚合物的粗產物。5、 將步驟4中得到的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺粗產物放入到PH=5.1擰 檬酸鈉緩衝溶液中4°C透析,透析後產物冷凍乾燥。6、 將冷凍乾燥後的物質用反向高效液相色譜純化(用甲醇/0.01M鹽酸溶液，(70: 30， v/v)作為流動相)。流動相通過減壓真空蒸發除去，純化後的葡聚糖-二硬酯 醯磷磷脂醯乙醇胺經過冷凍乾燥，在-20。C下作為乾粉儲存。7、 用相分離-透析法製備聚合物膠束。將0.2g純化後的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇 胺溶於6mlN， N-二甲基甲醯胺中,邊攪拌邊滴加14ml去離子水中，最後形成的帶藍光 乳液裝入透析袋中，放入31去離子水中分多次透析48小時得到共聚物膠束。然後對膠 束進行動態光散射、透射電鏡及螢光光譜測定觀察,結果表明:動態光散色射測定其粒徑為 137nm，分散指數為0.09;透射電鏡觀測粒子為規整的圓球形；螢光光譜測定其臨界膠束 濃度為5.29xl(T2 mg/ml。實施例3:1、 活化葡聚糖的製備將0.54g葡聚糖(分子量為1.5kDa)溶於50ml二甲基亞碸 的吡啶混合溶液(1: 1,V/V)中，然後把4-二甲基氨基吡啶(40mg)和對-硝基苯基氯甲酸 酯(2.0g)添加到上述溶液中，-10°0攪拌反應，8h後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙醇洗， 所得產物純化乾燥後，在-20。C下保存。2、 將二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成濃度為50mg/ml的溶液。3、 步驟l中活化的葡聚糖可以在N， N-二甲基甲醯胺中分散，所述活化的 葡聚糖分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%。4、 將步驟2中的二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺溶液(50mg/ml)取4ml，然後加入lml三乙胺。 將含三乙胺的二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺溶液加入到20ml活化後的葡聚糖(1.0g)分散液中， 在氬氣下，室溫攪拌反應24小時。然後，產物過濾除雜質，過濾後的產物進行減壓真空 蒸發除氯仿得到液態的葡聚糖-二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺聚合物的粗產物。-5、 將步驟4中得到的葡聚糖-二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺粗產物放入到pt^5.1檸檬酸鈉 緩衝溶液中4。C透析除去N， N-二甲基甲醯胺,透析後產物冷凍乾燥。5、 將冷凍乾燥後的物質用反向高效液相色譜純化(用甲醇/0.01M鹽酸溶液，(70: 30， v/v)作為流動相)。流動相通過減壓真空蒸發除去，純化後的葡聚糖-二棕櫚醯磷脂 醯乙醇胺經過冷凍乾燥，在-20。C下作為乾粉儲存。6、 用相分離-透析法製備聚合物膠束。將0.2§純化後的葡聚糖-二棕櫚醯磷脂醯乙醇 胺溶於6mlN， N-二甲基甲醯胺中,邊攪拌邊滴加到14ml去離子水中，最後形成的帶藍 光乳液裝入透析袋中，放入31去離子水中分多次透析48小時得到共聚物膠束。然後對 膠束進行動態光散射、透射電鏡及螢光光譜測定觀察，結果表明動態光散色射測定其粒 徑為125 nm,分散指數為0.06;透射電鏡觀測粒子為規整的圓球形；螢光光譜測定其臨界 膠束濃度為6.52xl(T2 mg/ml。實施例4:1、活化葡聚糖的製備將9.9g葡聚糖(分子量為5kDa)溶於50ml二甲基亞碸和 吡啶混合溶液(l: 1,V/V)中，然後把4-二甲基氨基吡啶(40mg)和對-硝基苯基氯甲酸酯 (2.0g)添加到上述溶液中，-10°0攪拌反應，lh後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙醇洗， 所得產物純化乾燥後，在-2(TC下保存。2、 將二硬酯醯磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成濃度為50mg/ml的溶液。3、 步驟1中活化的葡聚糖可以在N， N-二甲基甲醯胺中分散，所述活化的葡聚糖 分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%。4、 將步驟2中的二硬酯醯磷脂醯乙醇胺溶液(50mg/ml)取4ml，然後加入lml三乙胺。 將含三乙胺的磷脂醯乙醇胺溶液加入到20 ml活化後的葡聚糖(1.0g)分散液中，在氬氣 下，室溫攪拌反應24小時。然後，產物過濾除雜質，過濾後的產物進行減壓真空蒸發除 氯仿得到液態的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺聚合物的粗產物。5、 將步驟4中得到的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺粗產物放入到pH=5.1檸檬酸鈉 緩衝溶液中4°C透析除去N， N-二甲基甲醯胺,透析後產物冷凍乾燥。6、 將冷凍乾燥後的物質用反向高效液相色譜純化(用甲醇/0.01M鹽酸溶液，(70: 30， v/v)作為流動相)。流動相通過減壓真空蒸發除去，純化後的葡聚糖-二硬酯醯磷脂 醯乙醇胺經過冷凍乾燥，在-20。C下作為乾粉儲存。7、 用相分離-透析法製備聚合物膠束。將0.2g純化後的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇 胺溶於6mlN， N-二甲基甲醯胺中,邊攪拌邊滴加到14ml去離子水中，最後形成的帶藍 光乳液裝入透析袋中，放入31去離子水中分多次透析48小時得到共聚物膠束。然後對 膠束進行動態光散射、透射電鏡及螢光光譜測定觀察,結果表明:動態光散色射測定其粒徑 為150 nm,分散指數為0.09;透射電鏡觀測粒子為規整的圓球形；螢光光譜測定其臨界膠 束濃度為3.10x10—2 mg/ml。
實施例5:1、 活化葡聚糖的製備將1.98g葡聚糖(分子量為5kDa)溶於50ml二甲基亞碸和 吡啶混合溶液(1: 1,V/V)中，然後把4-二甲基氨基吡啶(40mg)和對-硝基苯基氯甲酸酯 (4.0g)添加到上述溶液中，-10°<:攪拌反應，4.5h後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙醇洗， 所得產物純化乾燥後，在-20。C下保存。2、 將二油酯醯磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成濃度為50mg/ml的溶液。3、 步驟1中活化的葡聚糖可以在N， N-二甲基甲醯胺中分散，所述活化的葡聚糖 分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%。4、 將步驟2中的二油酯醯磷脂醯乙醇胺溶液(50mg/ml)取4ml，然後加入lml三乙胺。 將含三乙胺的磷脂醯乙醇胺溶液加入到20 ml活化後的葡聚糖(1.0g)分散液中，在氬氣 下，室溫攪拌反應24小時。然後，產物過濾除雜質，過濾後的產物進行減壓真空蒸發除 氯仿得到液態的葡聚糖-二油酯醯磷脂醯乙醇胺聚合物的粗產物。5、 將步驟4中得到的葡聚糖-二油酯醯磷脂醯乙醇胺粗產物放入到pH=5.1擰檬酸鈉 緩衝溶液中4°C透析,透析後產物冷凍乾燥。6、 將冷凍乾燥後的物質用反向高效液相色譜純化(用甲醇/0.01M鹽酸溶液，(70: 30， v/v)作為流動相)。流動相通過減壓真空蒸發除去，純化後的葡聚糖-二油酯醯磷脂 醯乙醇胺經過冷凍乾燥,在-20。C下作為乾粉儲存。7、 用相分離-透析法製備聚合物膠束。將0.2§純化後的葡聚糖-二油酯醯磷脂醯乙醇 胺溶於6mlN， N-二甲基甲醯胺中，邊攪拌邊滴加14ml去離子水中，最後形成的帶藍光 乳液裝入透析袋中，放入31去離子水中分多次透析48小時得到共聚物膠束。然後對膠 束進行動態光散射、透射電鏡及螢光光譜測定觀察,結果表明動態光散色射測定其粒徑 為142 nm,分散指數為0.09;透射電鏡觀測粒子為規整的圓球形；螢光光譜測定其臨界膠 束濃度為4.36xl(T2 mg/ml。實施例6:1、活化葡聚糖的製備將6.9g葡聚糖(分子量為70kDa)溶於50ml二甲基亞碸和 吡啶混合溶液(1: l,VAO中，然後把4-二甲基氨基吡啶(40mg)和對-硝基苯基氯甲酸 酯(l.Og)添加到上述溶液中，-10°<2攪拌反應，lh後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙醇
洗，所得產物純化乾燥後，在-20°(3下保存。2、 將二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成濃度為50mg/ml的溶液。3、 步驟l中活化的葡聚糖可以在N， N-二甲基甲醯胺中分散，所述活化的葡聚糖 分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%。4、 將步驟2中的二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺溶液(50mg/ml)取4ml，然後加入lml三乙胺。 將含三乙胺的二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺溶液加入到20 ml活化後的葡聚糖(l.0 g)分散液中， 在氬氣下，室溫攪拌反應24小時。然後，產物過濾除雜質，過濾後的產物進行減壓真空 蒸發除氯仿得到液態的葡聚糖-二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺聚合物的粗產物。5、 將步驟4中得到的葡聚糖-二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺粗產物放入到pH=5.1檸檬酸鈉 緩衝溶液中4°C透析,透析後產物冷凍乾燥。6、 將冷凍乾燥後的物質用反向高效液相色譜純化(用甲醇/0.01M鹽酸溶液，(70: 30， v/v)作為流動相)。流動相通過減壓真空蒸發除去，純化後的葡聚糖-二棕櫚醯磷脂 醯乙醇胺經過冷凍乾燥，在-20。C下作為乾粉儲存。7、 用相分離-透析法製備聚合物膠束。將0.2g純化後的葡聚糖-二棕櫚醯磷脂醯乙醇 胺溶於6mlN， N-二甲基甲醯胺中,邊攪拌邊滴加到14ml去離子水中，最後形成的帶藍 光乳液裝入透析袋中，放入31去離子水中分多次透析48小時得到共聚物膠束。然後對 膠束進行動態光散射、透射電鏡及螢光光譜測定觀察結果表明動態光散色射測定其 粒徑為153 nm,分散指數為0.06;透射電鏡觀測粒子為規整的圓球形；螢光光譜測定其臨 界膠束濃度為2.88x10—2 mg/ml。實施例7:1、 活化葡聚糖的製備將6.9g葡聚糖(分子量為70kDa)溶於50ml二甲基亞碸的 吡啶混合溶液(1: l,VAO中，然後把4-二甲基氨基吡啶(40mg)和對-石肖基苯基氯甲酸酯 (l.Og)添加到上述溶液中，-10。C攪拌反應，8h後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙醇洗， 所得產物純化乾燥後，在-20°<:下保存。2、 將二硬酯醯磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成濃度為50mg/ml的溶液。3、 步驟l中活化的葡聚糖可以在N， N-二甲基甲醯胺中分散，所述活化的葡聚糖 分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%。4、 將步驟2中的二硬酯醯磷脂醯乙醇胺(50mg/ml)取4ml，然後加入lml三乙胺。
將含三乙胺的二硬酯醯磷脂醯乙醇胺溶液加入到20ml活化後的葡聚糖(1.0g)分散液中， 在氬氣下，室溫攪拌反應24小時。然後，產物過濾除雜質，過濾後的產物進行減壓真空 蒸發除氯仿得到液態的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺聚合物的粗產物。5、 將步驟4中得到的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇胺聚合物的粗產物放入到p1^5.1 檸檬酸鈉緩衝溶液中4°C透析,透析後產物冷凍乾燥。6、 將冷凍乾燥後的物質用反向高效液相色譜純化(用甲醇/0.01M鹽酸溶液，(70: 30， v/v)作為流動相)。流動相通過真空蒸發除去，純化後的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙 醇胺經過冷凍乾燥,在-20。C下作為乾粉儲存。7、 用相分離-透析法製備聚合物膠束。將0.2g純化後的葡聚糖-二硬酯醯磷脂醯乙醇 胺溶於6mlN， N -二甲基甲醯胺中,邊攪拌邊滴加到14ml去離子水中，最後形成的帶藍 光乳液裝入透析袋中，放入31去離子水中分多次透析48小時得到共聚物膠束。然後對 膠束進行動態光散射、透射電鏡及螢光光譜測定觀察,結果表明動態光散色射測定其粒 徑為161 nm,分散指數為0.09;透射電鏡觀測粒子為規整的圓球形；螢光光譜測定其臨界 膠束濃度為1.02x10—2 mg/ml。
權利要求
1、一種葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束，其特徵在於，其為具有生物降解性、生物相容性的葡聚糖和磷脂醯乙醇胺的兩親性材料組裝而成的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束；該葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束為大小125～161nm的圓球形結構規整的膠束粒子，其臨界膠束濃度為1.02×10-2～6.52×10-2mg/ml。
2、 葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束，其特徵在於，所述磷脂醯乙醇胺為二硬 酯醯磷脂醯乙醇胺、二油酯醯磷脂醯乙醇胺或二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺。
3、 根據權利要求1所述的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束，其特徵在於，所 述的葡聚糖分子量為1.5 kDa 、 5kDa或70kDa。
4、 一種如權利要求1所述的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束的製備方法，其 特徵在於，具體步驟如下(1) 以下述比例製備活化的葡聚糖將0.54-9.9g葡聚糖溶於50ml體積比為1: 1的二甲基亞碸和吡啶混合溶液中； 然後將40mg的4-二甲氨基吡啶和1.0-4.0 g對-硝基苯基氯甲酸酯添加到上述溶液中，-10°C攪拌反應1-8小時後，將反應液用乙醇沉澱，並用乙醇洗，產物乾燥後在-20。C下儲存得活化的葡聚糖乾粉；所述活化的葡聚糖乾粉狀中葡聚糖與對-硝基苯碳酸酯的重量百分比為70%: 30%;(2) 將磷脂醯乙醇胺溶於氯仿中，配成磷脂醯乙醇胺的濃度為50mg/ml的磷脂醯 乙醇胺氯仿溶液；(3)步驟l中活化的葡聚糖乾粉在N， N-二甲基甲醯胺中分散得活化的葡 聚糖分散液，所述活化的葡聚糖分散液中所述活化的葡聚糖含量為5%;(4) 以下述比例製備液態葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物粗產物取4ml步驟(2)所得磷脂醯乙醇胺氯仿溶液，加入至lml三乙胺；將含三乙胺的磷脂醯乙醇胺溶液加入至20ml活化後的活化的葡聚糖分散液中，所述活化的葡聚糖分散液的活化葡聚糖含量為l.Og，在氬氣下，室溫攪拌反應24小時；然後，產物過濾除雜質，過濾後的產物進行減壓真空蒸發除氯仿得到液態葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物粗 產物；(5) 將上述步驟(4)中得到的液態葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物粗產物放入到 pH-5.1檸檬酸鈉緩衝溶液中4。C下透析去除N， N-二甲基甲醯胺；(6) 將透析後得到的產物冷凍乾燥，之後，用體積比為70: 30的甲醇和0.01M 鹽酸溶液作為流動相，對透析後得到的冷凍乾燥產物進行反向高效液相色譜純化；再通 過減壓真空蒸發除去流動相，經過冷凍乾燥，得純化的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物幹 粉；在-2(TC下進行乾粉儲存；所述冷凍乾燥純化後的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物中葡 聚糖與磷脂醯乙醇胺的重量百分比為70%: 30%;(7) 以下述比例用相分離-透析法製備葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束 將0.2g冷凍乾燥純化後的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物溶於6ml的N， N-二甲基甲醯胺中，邊攪拌邊滴加到14ml去離子水中，最後形成的帶藍光乳液，裝入透析袋中， 放入31去離子水中分多次透析48小時，得到葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束。
5、 根據權利要求4所述的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束的製備方法，其特 徵在於，活化的葡聚糖的製備過程中，其中的反應物對-硝基苯基氯甲酸酯和葡聚糖的摩 爾比為5: 1-50: 1。
6、 根據權利要求4所述的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束的製備方法，其特 徵在於，所述的葡聚糖分子量為1.5kDa 、 5kDa或70kDa。
7、 根據權利要求4所述的葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束的製備方法，其特 徵在於，所述的磷脂醯乙醇胺為二硬酯醯磷脂醯乙醇胺、二油酯醯磷脂醯乙醇胺或二 棕櫚醯磷脂醯乙醇胺。
全文摘要
一種葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束由葡聚糖和磷脂醯乙醇胺組裝而成；製備步驟活化的葡聚糖乾粉分散於N，N-二甲基甲醯胺；磷脂醯乙醇胺氯仿加三乙胺中，再加至活化葡聚糖分散液中，氬氣下室溫攪拌過濾除雜，減壓真空蒸發得液態葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物粗產物；粗產物在檸檬酸鈉緩衝液中透析除N，N-二甲基甲醯胺，冷凍乾燥，再以甲醇/鹽酸溶液流動相進行反向液相色譜純化，減壓真空蒸發除流動相，冷凍乾燥純化所得葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物乾粉溶於N，N-二甲基甲醯胺中，攪拌下滴加離子水，透析袋中進行透析，得葡聚糖-磷脂醯乙醇胺聚合物膠束。本方法條件溫和，操作簡單，原料易得，重複性實用性強，廣泛適用於藥物載體。
文檔編號C08B37/02GK101392034SQ200710121940
公開日2009年3月25日 申請日期2007年9月18日 優先權日2007年9月18日
發明者雁 吳 申請人:國家納米科學中心