銀杏科的形成層來源的植物幹細胞及其分離方法

2023-09-17 09:28:05 3

專利名稱：銀杏科的形成層來源的植物幹細胞及其分離方法
銀杏科的形成層來源的植物幹細胞及其分離方法
技術領域：
本發明涉及銀杏科(family Gingkoaceae)的形成層來源的幹細胞及其分離方法。背景技術：
植物過去意味著糧食資源，但現在則是包括藥劑，香料，色素，農藥，顏料等的廣譜的化學物質的供給原，其含義被擴大。尤其，植物來源的有用物質的大部分有抗病毒，抗細菌，抗癌，抗氧化能力等的生理活性，作為可發展為新藥品的理想的資源而受到矚目，且為弄清多種植物來源的物質的化學結構與活性之間的關係的研究正活潑地進行。但是，生理活性物質開發為藥品困難是實情，且其為主的理由如下。第一，植物內生理活性物質的含量極其有限。第二，植物的生長速度非常慢。第三，植物來源的生理活性物質只在植物的特定器官內少量存在。第四，牽涉被稱為自然毀損的環境問題。第五，植物來源的生理活性物質的情況中，化學的結構非常複雜，要求多階段聚合過程而有生產費用非常高的經濟上的問題。從而，將植物來源的生理活性物質商業性地穩定地供給非常困難。然而，作為生物工程學技術之一的植物細胞培養方法不誘發環境問題，且長期被評價為可穩定地供給植物來源的有用物質的，最理想的技術。根據韓國公開專利 1995-0000870(1995. 01. 03)，由植物細胞培養的有用物質的生產與從植物直接提取的方法相比有多種優點。尤其，與以往的提取法不同，不受外部環境的影響，也可持續性的生產，被認為是可解決如生態系統破壞的明顯問題等的最適的方法。但是，儘管也有對於植物細胞培養的大量關心與努力，產業化成功的例到現在還極其少。這是因為，在多種植物細胞培養中，細胞增殖與生產性的變異仍主要是問題。在植物表達系統中利用植物細胞的情況中，植物細胞的分化組織，例如葉，莖，種子等由於是喪失分裂能力的永久組織，所以為使轉變為具有分裂能力的細胞系而必需先進行脫分化過程。所述脫分化過程是指，利用植物體的一種組織或器官培養時，解除組織或細胞的已經為施行特定功能而分化的狀態。但是，這樣的脫分化過程中由染色體變異而可發生細胞系的嚴重的變異。尤其，通過植物細胞培養的有用物質的生產只有在長期的培養期間穩定地維持快的細胞增殖與高的代謝物質生產能力才可產業化，但大部分的細胞系由傳代培養而遭遇與本來不同的大量的變異。從而，為克服這樣的變異問題，在通過植物細胞培養的有用物質生產中獲得遺傳穩定的細胞系的方案是切實的實情。對此，本發明人中部分開發有隻利用從植物的莖採集的形成層而誘導愈傷組織的方法(韓國註冊專利第0533120號)，但此註冊專利僅是簡單地利用木本植物的莖形成層誘導了愈傷組織。愈傷組織(callus)是脫分化發生而形成的組織，對此所述註冊專利仍有由脫分化的變異問題的問題。另外，本發明人中部分作為解決由脫分化的變異的問題，並可穩定地增殖的遺傳穩定性高的細胞系的提供方法，開發有國際專利申請PCT/KR2006/001M4 號的發明。但是，屬於落葉喬木的銀杏作為有用植物廣泛地被知，由此仍然需要獲得解決由脫分化的變異的問題，並可穩定地增殖的遺傳穩定性高的細胞系。
對此本發明人分離了銀杏科植物的形成層來源的幹細胞，為了提供有用的植物細胞系而銳意研究的結果，分離銀杏科植物的形成層來源的幹細胞，並穩定地增殖所述幹細胞，並確認培養時無變異，從而完成了本發明。發明概述本發明的目的在無脫分化過程地提供銀杏科的形成層來源的幹細胞及其分離方法。為達成所述目的，本發明提供銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，源於銀杏科(family Gingkoaceae)的形成層，且是不經脫分化的先天性的未分化細胞。本發明另外提供，銀杏科(family Gingkoaceae)的形成層來源的幹細胞的分離方法，包括下列步驟(a)從銀杏科植物收穫含有形成層的組織的步驟；(b)將所述收穫的含有形成層的組織在培養基中培養的步驟；及(c)從所述形成層分離細胞，從而收穫形成層來源的幹細胞的步驟。本發明另外提供抗氧化用組合物，其含有所述銀杏科的形成層來源的幹細胞，其提取物，其破碎物及其培養物中任一種以上。本發明另外提供抗氧化用功能性食品，其含有所述銀杏科的形成層來源的幹細胞，其提取物，其破碎物及其培養物中任一種以上。本發明的別的特徵及實施方式將通過以下詳述及隨附的專利權利要求書而更加明晰。

圖1是從材料植物(銀杏)的橫斷面觀察形成層的照片。圖2作為根據本發明的幹細胞的誘導及分離照片，而2A是呈現幹細胞(箭標)與韌皮部(phloem)細胞(星號)的極其不同的形態的照片，並2B是分離幹細胞之後培養3 周后的照片。圖3是根據本發明的幹細胞(A)及銀杏的樹皮外植體誘導愈傷組織(B)的固體培養時照片。圖4是觀察在本培養過程的幹細胞(A)及銀杏的樹皮組織中誘導的愈傷組織(B) 的細胞凝集程度的顯微鏡照片(X100)。圖5是根據本發明的幹細胞⑶及銀杏體細胞⑶的顯微鏡照片，左側下端的標尺是25 μ m。圖6是利用Neutral red染色液泡後觀察的在根據本發明的幹細胞㈧及銀杏樹皮組織中誘導的愈傷組織(B)的顯微鏡照片，而右側下端的標尺是25 μ m。圖7是觀察在根據本發明的幹細胞(A)及銀杏樹皮組織中誘導的愈傷組織(B)的線粒體的照片。圖8是示根據本發明的幹細胞的在生物反應器中的細胞生長曲線的坐標圖。圖9是示在根據本發明的幹細胞(Stem cell)及銀杏樹皮組織中誘導的愈傷組織 (callus)的生長速度比的坐標圖。圖10是示在3L氣升式生物反應器(A)，20L氣升式生物反應器(B)及250L氣升式生物反應器(C)中培養10天的結果的照片。圖11是示在根據本發明的幹細胞(Stem cell)及銀杏樹皮組織中誘導的愈傷組織(callus)的冷凍保存後細胞生存率的坐標圖。圖12是呈現處理根據本發明的幹細胞提取物(GG-E)及誘發劑而培養的培養物的提取物(GP-E)的依濃度自由基消除能力的坐標圖。發明詳述及具體的實施方式只要不以不同的方式定義，在本說明書中使用的全部技術性的及科學的術語具有與由本發明所屬的技術領域中熟練的專家常規地理解相同的含義。一般情況下，在本說明書中使用的命名法在本技術領域中良好已知，並常規地被使用。在本發明詳述等中使用的主要術語的定義如下。在本申請中，維管束「形成層」是位於植物的維管束組織(vascular tissue)內的側生分生組織而位於莖與根。由形成層的活動而發生植物的加厚生長，且其結果便可存在具有11，000年以上的年輪的巨大植物體。從發生學來看，由於維管束形成層起源於前形成層，所以是維持著分生組織的連續性，並漸進性地分化的相同分生組織，僅為了方便而加以區別(植物形態學，LeeZaedu外7人共著，學院書籍，第10章，1993)，對於本發明而言，形成層被解釋為包括前形成層。這樣的形成層與前形成層作為相同的初生分生組織，對於本發明而言，明晰使用形成層及前形成層組織而得到相同的效果。在本申請中植物「幹細胞」(Mem cell)是指不經脫分化過程而在遺傳上更加穩定的先天性的未分化細胞。在本申請中「破碎物」是指將細胞用利用去汙劑等的化學的方法或物理性的方法等破碎而得到的細胞裂解物，且細胞系的"提取物"是將細胞溶解於溶劑而分離的物質， 而可利用蒸餾或蒸發濃縮。另外，細胞系"培養液"是指培養細胞之後，將細胞除去而留下的細胞培養溶液。額外地，在本申請中"培養物"是包括培養液和/或培養的細胞系的物質，此時培養的細胞系是全部包括由培養條件分化，或有用物質的生產能力和/或分泌能力提高的細胞系的概念。在本申請中〃先天性的未分化狀態(innately undifferentiated)『『是指不是經脫分化過程而以未分化狀態存在的，本來就維持分化前狀態的狀態。在本申請中"愈傷組織"是指通過脫分化過程而成為不分化的狀態的細胞或細胞塊(PNAS,99(25) 15843，2002)。根據本發明的一個觀點，作為涉及銀杏科的形成層來源的幹細胞，而這來源於銀杏科的形成層，且是不經脫分化的先天性的未分化細胞。使用作為已經分化的組織的葉或莖，根部分的情況中，為形成愈傷組織，則應經從分化的組織返回未分化組織(rejuvenilation)的脫分化(dedifferentiation)過程，然而在此脫分化過程中在體細胞出現突變而成細胞不穩定性的原因。對此本發明人在研究幾乎無體細胞變異的植物細胞系統時，只在作為分生組織的形成層中特異性地誘導細胞系的情況中，著眼於由於可不經脫分化而使用分生組織自身具有的旺盛的分裂能力，所以無體細胞變異而遺傳穩定性高，並可誘導生理上均一的細胞系的點，由此分離了形成層來源的幹細胞。根據本發明的銀杏科的形成層來源的幹細胞可以具有下列中至少一個特性作為特徵(a)懸浮培養時與銀杏科的脫分化的愈傷組織相比而包括大量的單細胞，或包括小尺寸的細胞集合體；(b)示具有多個液泡(vacuole)的形態學的特徵；(c)與銀杏科的脫分化的愈傷組織相比而具有活性增加的線粒體；(d)與銀杏科的脫分化的愈傷組織相比而生長速度更快，並可長期生長；及(e)與銀杏科的脫分化的愈傷組織相比而在生物反應器中對於剪切應力(shear stress)具有更低的敏感性。此時，具有"多個液泡"是指與銀杏科的脫分化的愈傷組織等比較而具有2倍以上的多個液泡。此外，根據本發明的幹細胞與銀杏科的愈傷組織等比較而具有尺寸小的液泡。此外，具有"多個發達的形態的線粒體"是指與銀杏科的脫分化的愈傷組織比較而具有2倍以上的多個在顯微鏡下活潑地運動的線粒體。對於本發明而言，所述幹細胞可以具有所述(a) (e)的特性中至少兩個以上的特性作為特徵，且優選可以具有所述(a) (e)的特性中至少三個以上的特性作為特徵，且更優選可以具有所述(a) (e)的特性中至少4個以上的特性作為特徵。此外，對於本發明而言，所述幹細胞可以具有(a) (e)的特性之全部作為特徵。此外，誘導銀杏科形成層來源的幹細胞的分化而確認了具有可分化為導管元件 (tracheary elements)的分化能力。構成植物幹細胞的特徵的特性中在自我再生能力 (self renewal)以外有分化能力(pluripotency)，由此確認了根據本發明的銀杏科形成層來源的細胞是幹細胞。另一方面，根據本發明的幹細胞可由包括(a)從銀杏科植物收穫含有形成層的組織的步驟；(b)將所述收穫的含有形成層的組織在培養基中培養的步驟；及(c)從所述形成層分離細胞，從而收穫形成層來源的幹細胞的步驟的分離方法而得到，此時，所述(b)步驟可以培養含有形成層的組織而誘導從形成層增殖的培養的形成層作為特徵，而所述(c)步驟可以分離所述培養的形成層，從而收穫形成層來源的幹細胞作為特徵。此外，所述(b)步驟可以在包括茁長素(auxin)的培養基中培養作為特徵，此時，作為茁長素，可使用ΝΑΑ(α 萘乙酸)或ΙΑΑ(吲哚3-乙酸)，且這樣的茁長素可以以1 5mg/l的濃度包括作為特徵。 另外，所述(c)步驟可以由從形成層以外的部分增殖成無定形的愈傷組織層分離所述培養的形成層，從而收穫形成層來源的幹細胞作為特徵。在本發明的一實施例中，從作為銀杏科銀杏屬的銀杏分離了銀杏的形成層來源的幹細胞，且對此本發明優選以是銀杏屬植物的形成層來源的幹細胞作為特徵，且更優選可以是銀杏的形成層來源的幹細胞作為特徵。另外，在本發明中，確認了如上所述收穫的銀杏的形成層來源的幹細胞的抗氧化效果，且對此本發明在別的觀點，涉及含有所述銀杏科的形成層來源的幹細胞，其提取物， 其破碎物及其培養物中任一種以上的抗氧化用組合物。在本發明中，所述培養物可以將所述幹細胞在作為誘發劑，包括3 5重量％的粗糖或蔗糖；或茉莉酮酸甲酯(methyl jasmonate)，脫乙醯殼多糖，苯丙氨酸 (phenylalanin),苯甲酸，ABA,/K楊酸(salicylic acid)及乙酸鈉(sodium acetate) 中任一種以上的培養基中額外施行額外培養的階段而收穫作為特徵。此時，優選地，所述培養基的特徵可以是包括選自3 5重量％的粗糖或蔗糖；及茉莉酮酸甲酯(methyl jasmonate)，真菌類提取物，細菌類提取物，酵母(yeast)提取物，脫乙醯殼多糖，葡甘露聚糖(glucomanan),葡聚糖(glucan),苯丙氨酸(phenylalanine),苯甲酸(benzoic acid)，水楊酸(salicylic acid)，花生四烯酸(arachonic acid), STS，甲羥戊酸 N-苯甲醯甘氨酸，ABA, SNP，IPP，BHT，CCC，乙烯利(eth 印 hon)，馬尿酸(hippuic acid)，硝酸鋪銨(amminoium eerie nitrate), AgNO3,硫酸氧 凡(vanadyl sulfate), ρ-氨基苯甲酸 (p-aminobenzoic acid)，油菜素留酉享(brassinosteroids)，藻酸鈉(sodium alginate)，乙酸鈉(sodium acteate)的物質的培養基。本發明中另外可利用，向所述幹細胞作為誘發劑，處理紫外線，熱，乙烯，抗真菌齊U，抗生素，重金屬鹽及高的鹽濃度等而加物理性的化學的應激而收穫的培養物。對於本發明而言，另外，所述提取物可以利用選自蒸餾水，乙醇等醇，丙酮， DMSO(二甲基亞碸)及這些的混合溶劑的溶劑而提取出作為特徵。在本發明的一實施例中，確認了根據本發明的幹細胞提取物及其培養物的提取物的對於以作為氧化劑的DPPH開始氧化的自由基的消除能力與作為合成抗氧化劑廣泛地被使用的BHT類似或更優秀。從而，根據本發明的幹細胞提取物可作為非常優秀的抗氧化用組合物有用地被使用。對此，在本發明中即便無提示含有所述幹細胞或其破碎物的組合物呈現抗氧化活性的具體的實施例，也如上所述確認了其幹細胞及其培養物的提取物具有抗氧化活性，本領域普通技術人員明晰含有根據本發明的幹細胞自身或其破碎物的組合物的情況也示抗氧化活性而抑制氧化。含有根據本發明的幹細胞，其提取物，其破碎物及其培養物中任一種以上作為有效成分的抗氧化用組合物可將這些各自單獨地包括，或可包括一種以上的藥學容許的載質，賦形劑或稀釋劑而提供為藥學組合物，且所述幹細胞等可根據疾病及其患病程度，患者的年齡，體重，健康狀態，性別，施用途徑及治療期間等以適當的藥學有效量包括在藥學組合物中。所述"藥學容許的"是指生理學地容許，且給人施用時，不常規地引起如胃腸障礙，頭暈症的過敏反應或與此類似的反應的組合物。作為所述載質，賦形劑及稀釋劑的例， 則可舉乳糖，右旋糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇，木糖醇，赤蘚糖醇，麥芽糖醇，澱粉，阿拉伯膠，藻酸鹽，明膠，磷酸鈣，矽酸鈣，纖維素，甲基纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，水，甲基羥基苯甲酸鹽，丙基羥基苯甲酸鹽，滑石，硬脂酸鎂及礦物油。所述藥學組合物可額外包括填充劑，抗凝集劑，潤滑劑，潤溼劑，香料，乳化劑及防腐劑等。另外，為將本發明的藥學組合物施用到哺乳動物之後使可提供活性成分的迅速，持續或延遲的釋放而可使用本領域中公知的方法劑型化。劑型可為粉末，顆粒，片劑，乳液，糖漿，氣霧劑，軟質或硬質明膠膠囊，滅菌注射溶液，滅菌粉末的形態。本發明再一方面，涉及含有根據本發明的幹細胞，其提取物，其破碎物及其培養物中任一種以上作為有效成分的抗氧化用功能性食品。在本申請中『功能性食品『是指向一般食品添加根據本發明的幹細胞或其提取物，其破碎物及其培養物中任一種以上，從而提高食品的功能性的食品。實施例以下，通過實施例更詳細地說明本發明。本領域普通技術人員明晰，這些實施例僅旨在例示本發明，本發明的範圍不受這些實施例的限制。尤其，在以下實施例中，確認了銀杏的形成層來源的幹細胞提取物及其培養物的抗氧化效果，但本領域普通技術人員明晰，使用其幹細胞自身或其破碎物也可得到類似的結果。實施例1銀杏科的形成層來源的幹細胞的製備1-1植物材料的準備銀杏科銀杏屬的銀杏(Ginkgo biloba，忠清南道扶餘，韓國)如圖1，通過間苯三酚(Phloroglycinol)染色而可觀察木質部(xylem)與韌皮部(phloem)纖維，可確認此間存在形成層(cambium)。為從這樣的銀杏收穫所述形成層來源的幹細胞，首先採集銀杏的莖之後，立即浸漬到抗氧化劑100mg/L抗壞血酸(L-ascorbic acid, DUCHEFA，The Netherlands)溶液而運送-保存。此時，為利用前形成層而收穫相同的幹細胞，則代替莖採集殘枝。此後，在 1 % 苯菌靈(benomyl, Dongbu Hannong Chemical, Korea), 1 % 百菌清(daconil, Dongbu Hannong Chemical, Korea), 1 %鏈黴素(sterptomycin sulphate, DUCHEFA, The Netherlands),0. 1 % 頭孢噻 B虧(cefotaxime sodium DUCHEFA, The Netherlands)的混合溶液中M小時預處理後為除去酚化合物(phenolic compound)與殘留化學物質而用自來水(tap water)洗滌了 30分鐘。以及，在70%乙醇(ethanol，DC Chemical, Korea)中 1 分鐘，在 30%過氧化氧(hydrogen peroxide, LG Chemical, Korea) 中15分鐘，在CL0R0X溶液中15分鐘，在3% CL0R0X溶液中5分鐘而表面殺菌後洗滌了 3 4次。1-2從莖包括形成層的外植體的製備及組織分離拿鑷子夾經實施例1-1的殺菌過程的莖(利用前形成層時是殘枝)的作為中央部位的木質部，並舉起包括形成層的樹皮(bark)組織，則容易地從木質部(xylem)剝下。剝下的組織構成包括形成層，韌皮部(phloem)，皮層(cortex)，表皮(印idermis)的外植體。1-3銀杏的形成層來源的幹細胞誘導步驟將所述實施例1-2在中準備的包括形成層的外植體接種到表1的幹細胞誘導培養基(培養基1)中而進行培養。表1 細胞系誘導培養基(培養基1)
權利要求
1.銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，來源於銀杏科(familyGingkoaceae) 的形成層，且是不經脫分化的先天性的未分化細胞。
2.權利要求1的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，額外具有下列中的至少一個特性(a)懸浮培養時與銀杏科的脫分化的愈傷組織相比而包括大量的單細胞，或包括小尺寸的細胞集合體；(b)示具有多個液泡(vacuole)的形態學的特徵；(c)與銀杏科的脫分化的愈傷組織相比而具有活性增加的線粒體；(d)與銀杏科的脫分化的愈傷組織相比而生長速度更快，並可長期生長；及(e)與銀杏科的脫分化的愈傷組織相比而在生物反應器中對於剪切應力(shear stress)具有更低的敏感性。
3.權利要求2的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，具有所述(a) (e)的特性中至少兩個特性。
4.權利要求2的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，具有所述(a) (e)的特性中至少三個特性。
5.權利要求2的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，具有所述(a) (e)的特性中至少四個特性。
6.權利要求2的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，具有所述(a) (e)的特性之全部。
7.權利要求1的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，所述銀杏科的形成層來源的幹細胞由包括下列步驟的分離方法分離出(a)從銀杏科植物收穫含有形成層的組織的步驟；(b)將所述收穫的含有形成層的組織在培養基中培養的步驟；及(c)從所述形成層分離細胞，從而收穫形成層來源的幹細胞的步驟。
8.權利要求1 7中任一項的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，所述銀杏科的植物是銀杏屬(genus Gingko)。
9.權利要求1 7中任一項的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其特徵在於，所述銀杏科的植物是銀杏(Gingko biloba)。
10.銀杏科(familyGingkoaceae)的形成層來源的幹細胞的分離方法，包括下列步驟(a)從銀杏科植物收穫含有形成層的組織的步驟；(b)將所述收穫的含有形成層的組織在培養基中培養的步驟；及(c)從所述形成層分離細胞，從而收穫形成層來源的幹細胞的步驟。
11.權利要求10的方法，其特徵在於，所述(b)步驟在包括茁長素(auxin)的培養基中培養。
12.權利要求11的方法，其特徵在於，所述培養基以1 5mg/l的濃度包括茁長素。
13.權利要求10的方法，其特徵在於，所述(c)步驟將培養的形成層從源於形成層以外部分的增殖成無定形的愈傷組織層分開之後，從形成層分離細胞而收穫形成層來源的幹細胞。
14.權利要求10的方法，其特徵在於，所述銀杏科的植物是銀杏屬(genusGingko)。
15.權利要求10的方法，其特徵在於，所述銀杏科的植物是銀杏。
16.抗氧化用組合物，其含有權利要求1 7中任一項的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其提取物，其破碎物及其培養物中任一種以上。
17.權利要求16的抗氧化用組合物，其特徵在於，所述培養物是將所述幹細胞在包括3 5重量％的粗糖或蔗糖；或茉莉酮酸甲酯(methyl jasmonate)，真菌類提取物， 細菌類提取物，酵母(yeast)提取物，脫乙醯殼多糖，葡甘露聚糖(glucomanan)，葡聚糖 (glucan)，苯丙氨酸(phenylalanine),苯甲酸(benzoic acid)，7jC楊酸(salicylic acid), 花生四烯酸(arachonic acid)，STS，甲羥戊酸N-苯甲醯甘氨酸，ABA, SNP，IPP，BHT，CCC, 乙烯利(ethephon),馬尿酸(hippuic acid),硝酸鋪銨(amminoium eerie nitrate), AgNO3,硫酸氧釩(vanadyl sulfate)，ρ-氨基苯甲酸(p-aminobenzoic acid)，油菜素甾醇 (brassinosteroids),藻酸鈉(sodium alginate)及乙酸鈉(sodium acteate)中任一禾中以上的培養基中額外培養而收穫的。
18.權利要求16的抗氧化用組合物，其特徵在於，所述銀杏科的植物是銀杏屬(genus Gingko)ο
19.權利要求16的抗氧化用組合物，其特徵在於，所述銀杏科的植物是銀杏。
20.抗氧化用功能性食品，其含有權利要求1 7中任一項的銀杏科的形成層來源的幹細胞，其提取物，其破碎物及其培養物中任一種以上。
21.權利要求20的抗氧化用功能性食品，其特徵在於，所述培養物是將所述幹細胞在包括3 5重量％的粗糖或蔗糖；或茉莉酮酸甲酯(methyl jasmonate)，真菌類提取物， 細菌類提取物，酵母(yeast)提取物，脫乙醯殼多糖，葡甘露聚糖(glucomanan)，葡聚糖 (glucan),苯丙氨酸(phenylalanine),苯甲酸(benzoic acid), /K楊酸(salicylic acid), 花生四烯酸(arachonic acid)，STS,甲羥戊酸N-苯甲醯甘氨酸，ABA, SNP，IPP，BHT，CCC, 乙烯利(ethephon),馬尿酸(hippuic acid),硝酸鋪銨(amminoium eerie nitrate), AgNO3,硫酸氧釩(vanadyl sulfate)，ρ-氨基苯甲酸(p-aminobenzoic acid)，油菜素甾醇 (brassinosteroids),藻酸鈉(sodium alginate)及乙酸鈉(sodium acteate)中任一禾中以上的培養基中額外培養而收穫的。
22.權利要求20的抗氧化用功能性食品，其特徵在於，所述銀杏科的植物是銀杏屬 (genus Gingko)。
23.權利要求20的抗氧化用功能性食品，其特徵在於，所述銀杏科的植物是銀杏。
全文摘要
本發明涉及銀杏科(family Gingkoaceae)的形成層來源的幹細胞及其分離方法。根據本發明的銀杏科的形成層來源的幹細胞無脫分化過程地分離成未分化狀態，從而在長期培養時也細胞生長率與生長模式無變異地穩定地被維持而可大量培養，從而有用。此外，測定根據本發明的銀杏科的形成層來源的幹細胞的由氧化劑處理而發生的自由基消除能力的結果，呈現為與以往的合成抗氧化劑類似，或具有更高的抗氧化效果，從而可作為優秀的抗氧化用組合物有用地被使用。
文檔編號C12N5/02GK102459572SQ201080028922
公開日2012年5月16日 申請日期2010年5月26日 優先權日2009年5月26日
發明者李銀慶, 洪宣美, 洪湳周, 陳榮雨 申請人:雲火公司