等排抗皰疹肽衍生物的製作方法

2023-09-17 05:51:55 5

專利名稱：等排抗皰疹肽衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及具有抗皰疹性質的肽衍生物，並涉及使用該衍生物治療病毒傳染的方法。更具體地說，本發明涉及具有抗皰疹病毒活性的肽衍生物(下文稱為「肽」)，涉及含有肽的藥物組合物以及涉及使用肽以抑制皰疹病毒的複製和治療病毒感染的方法。
皰疹病毒使人和動物遭受多種疾病，例如，皰疹單純性病毒，1型和2型(HSV-1和HSV-2)分別引起唇皰疹和生殖器的損害;水痘帶狀皰疹病毒(VZV)會引起水痘和帶狀皰疹;非洲淋巴細胞瘤病毒(EBV)會引起傳染性單核細胞增多症。
在過去20年來，在研究處置皰疹病毒傳染的新治療劑中，研究人員對已知的如嘌呤和嘧啶核苷類似物一類的化合物予以最大的注意。結果，有幾種核苷類似物已開發為抗病毒劑。至今最成功的是無環鳥苷(acyclovir)，它是選為治療生殖器皰疹單純性感染的藥物。
但是，雖然有一些重要進展，但對用於治療皰疹病毒感染的有效、安全的治療劑的需求繼續存在。有關這方面的現代治療劑的述評可參閱M.C.Nahata，「Antiviral DrugsPharmacokinetics，Adverse Effects and Therapeutic Use」，J.Pharm.Technol.，3，100(1987)。
本申請揭示了一組具有抗皰疹病毒活性的肽衍生物。這些肽的抗皰疹病毒的選擇作用，與大的安全度相結合，使得這些肽成為抗皰疹病毒所要求的製劑。
下述文獻公開了涉及抗皰疹活性的肽或肽衍生物B.M.Dutia等人，Nature，321，439(1986)，E.A.Cohen等人，Nature，321，411(1986)，J.H.Subak-Sharpe等人，UK英國專利申請2185024，7月，8月，1987出版，P.Gaudreau等人，J.Biol.Chem.，262，12413(1987)，E.A.Cohen等人，美國專利4，795，740，1月，3，1989，R.Freidinger等人，美國專利4，814，432，3月，21，1989，V.M.Garskey等人，美國專利4，837，304，6月，6，1989，R.Colonno等人，美國專利4，845，195，7月，4，1989，P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，33，723(1990)，J.Adams等人，歐洲專利申請408，973，1月，23，1991出版，P.L.Beaulieu等人，歐洲專利申請411，332，2月，6，1991出版，J.Adams等人，歐洲專利申請411，333，2月，6，1991出版，J.Adams等人，歐洲專利申請411，334，2月，6，1991出版，R.L.Tolman等人，歐洲專利申請412，595，2月，13，1991出版，W.T.Ashton等人，歐洲專利申請438，873，7月，31，1991出版，P.L.Beaulieu等人，歐洲專利申請461，546，12月，18，1991出版，以及P.Gaudreau等人，J.Med.Chem.，35，346(1992)。
上述文獻中的主題肽和本申請的肽可以通過特徵的結構和生物學上的不同而區別的。
區別本發明肽和常用的明顯結構特徵在於取代內在醯胺的酮亞甲基。因而本發明的肽可以認為是酮亞甲基等排物。
下文所用的縮略語和符號的定義列於本申請的「發明詳述」的一節中。
本發明的肽，或其治療上可用鹽，可以用通式1表示
其中A是苯基(低級)鏈烷醯基;在其芳基部分用低級烷基、氨基、滷素、羥基或低級烷氧基單取代的苯基(低級)鏈烷醯基;用苯基或單取代的苯基雙取代的低級鏈烷醯基，其中，單取代的基選自低級烷基、滷素、羥基和低級烷氧基;或者是｛苯基(低級)烷基｝氨羰基｝;而B是N(CH3)-CHR4(CO)其中R4是低級烷基;或者A和B一起形成通式為R5-NH-C(O)的飽和或未飽和的烷基氨羰基，其中，R5是(2-10C)-烷基、低級環烷基、1-(低級烷基)-(低級環烷基)、1-(2-丙烯)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基;
D是NH-CHR6C(O)，其中R6是低級烷基或用羧基、羥基、巰基或苄氧基取代的低級烷基;
R1是低級烷基、低級環烷基、1-(低級烷基)-(低級環烷基)或NR7R8，其中，R7是氫原子或低級烷基而R8是低級烷基，或R7和R8與其相連的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、嗎啉代或4-甲基哌嗪代;R2是氫或低級烷基而R3是低級烷基，或者R2是氫而R3是低級烷烯基或苯基-(1-4C)烷基，或者R2和R3與和其相連的碳原子一起形成低級環烷基;
E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基;低級環烷基;用低級烷基或(低級烷基)-(低級環烷基)單取代或雙取代的低級環烷基;或者E是NHNR10-R11，其中R10是氫或低級烷基而R11是(4-9C)烷基;或者E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基;低級環烷基或(低級環烷基)-(低級烷基)和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是低級烷基。
本發明的肽或其治療上可用鹽的優選類是用通式1表示的，其中A是苯基(低級)鏈烷醯基;(4-氨基苯)(低級)-鏈烷醯基;(4-滷代苯)-(低級)鏈烷醯基，(4-羥苯基)-(低級)鏈烷醯基;｛4-(低級烷氧基)苯基｝-(低級)鏈烷醯基;用苯基、4-滷代苯基或4-(低級烷氧基)苯基雙取代的低級鏈烷醯基，或者苯基(低級)烷基氨羰基;而B是(N-Me)Val，(N-Me)Ile或(N-Me)Tbg;或者A和B一起形成飽和或未飽和的通式為R5-NH-C(O)的烷基氨羰基，其中R5如上所定義的;D是(S)-2-氨基-3-羥基-3-甲丁酸或(R)-2-氨基-3-巰基-3-甲丁酸的胺基酸殘基或是選自Val、Ile、Tbg和β-EtNva的胺基酸殘基，R1是低級烷基、低級環烷基、1-(低級烷基)-(低級環烷基)、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2和R3如上所定義的;而E是NHR9其中R9是(4-9C)烷基;低級環烷基;以低級烷基單取代或雙取代的低級環烷基;或(低級烷基)-(低級環烷基);或E是NHNR10R11，其中R10是氫、甲基或乙基而R11是(4-9C)烷基;或E是NHCH(R12)-Z其中R12是(4-9C)烷基或(低級環烷基)--甲基而Z如上所定義的。
本發明肽或其治療上可用鹽的更優選的系類是以通式1表示的，其中A是苯乙醯基、苯丙醯基、(4-氨苯基)丙醯基、(4-氟苯基)丙醯基、(4-羥苯基)丙醯基、(4-甲氧苯基)丙醯基、2-(苯甲基)-3-苯丙醯基、2-｛(4-氟苯基)甲基｝-3-(4-氟苯基)丙醯基、2-｛(4-甲氧苯基)甲基｝-3-(4-甲氧苯基)丙醯基或苄氨羰基;B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環丁基、環戊基、環己基、1-甲環戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或苄基，含有R2和R3的碳原子具有(R)-構型，或R2和R3分別各為甲基或乙基或者R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環丁基、環戊基或環己基;而E是NHR9其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲丙基，2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基順或反-2-甲環己基、2，2-二甲環己基或環己基甲基;或者E是NHR10R11，其中R10是氫、甲基、或乙基和R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z1，其中含有R12的碳原子有(S)-構型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或環己基甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、CONH2或C(O)OR13其中R13是甲基、乙基或丙基。
肽或其治療上可用鹽的另外更優選的類是以通式1表示的，其中A和B一起形成飽和或未飽和的烷基氨羰基，它選自丁氨羰基、1-甲乙基氨羰基、1-甲丙基氨羰基、1-乙丙基氨羰基、1，1-二甲丁基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、1-乙戊基氨羰基、1-丁戊基氨羰基、2-乙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙環戊基)氨羰基、(1-丙環己基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基和1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基以及D、R1、R2、R3和E都如上面最後情況所定義的。
本發明或其治療上可用鹽的最佳類是通式1表示的，其中A是苯丙醯基、2-(苯甲基)-3-苯丙醯基或苄氨羰基;B是(N-Me)Val;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環丁基、環戊基、環己基或1-甲環戊基;R2是氫原子和R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或苄基，而含有R2和R3的碳原子具有(R)-構型，或R2和R3各分別為甲基或乙基，或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環丁基、環戊基或環己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-構型，R12是2，2-二甲丙基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基乙基或丙基。
本發明肽或其治療上可用的鹽的另一類最優選的是由通式1表示的，其中A和B一起形成飽和或未飽和的烷基氨羰基，它選自1-乙丙基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙環戊基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯氨羰基以及1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;而D、R1、R2、R3和E與最後一種情況中所定義的一樣。
在本發明的範圍內包括的有一種藥用組合物，它含有抗皰疹病毒有效量的通式1的肽，或其治療上可用鹽，以及藥物上或獸醫上可用載體。
本發明範圍內也包括一種化妝組合物，它含有通式1的肽或其治療上可用鹽以及適用於局部使用的生理上可用載體。
本發明的一個重要方面包括通過對哺乳動物施用抗皰疹病毒有效量的本發明通式1的肽或其治療上可用鹽而治療皰疹病毒感染的一種方法。
另一重要方面包括抑制皰疹病毒複製的方法，它通過將病毒與皰疹病毒核苷酸還原酸抑制量的通式1的肽或其治療上可用鹽相接觸。
還有另一方面包括對哺乳動物的皰疹病毒感染的治療方法，它通過對哺乳動物施用一種抗皰疹病毒有效量的通式1的肽或其治療上可用鹽以及一種抗病毒核苷類似物的混合物。一種含該混合物的藥用組合物也屬於本發明範圍之內。
通式1的肽的製備方法描述於下文。
發明詳述或者通式1可描述如下
涉及胺基酸或胺基酸衍生物的術語「殘基」是指由相應的α-胺基酸，通過除去羧基的羥基和α-氨基的氫所衍生物的基團。
一般來說，對胺基酸和保護基，本文所用的縮略語是基於生物化學命名法的IUPACIUB委員會所推薦的，參閱European Journal of Biochemistry 138，9(1984)。例如Val、Ile、Asp和Leu分別代表L-纈氨酸、L-異亮氨酸、L-天冬氨酸和L-亮氨酸。
當E是如上所限定的NHCH(R12)-Z時，在通式1的肽的主線性軸(即主鏈)上的不對稱碳原子，(該主鏈除去端基A和Z(E的)，但含有帶「R12」的碳原子)具有S構型。但有例外，對含有CH2C(O)R1的碳原子，其中R1是低級烷基、低級環烷基或1-(低級烷基)-(低級環烷基)和對含有2-巰基烷基支鏈的碳原子，在當D的R6是上述支鏈的情況下。對後面兩個例外，碳原子有R構型。
當E如上面所定義的是NHR9時，在端基A和在端基E中，存在於胺基酸或衍生胺基酸殘基的支鏈中的不對稱碳原子可以有S或R構型。
符號「Me」、「Et」、「Pr」和「Bu」分別代表甲基、乙基、丙基和丁基的烷基基團。
例如符號「MeEt2C」和「EtPr2C」分別代表1-乙基-1-甲丙基和1-乙基-1-丙丁基。
符號「Tbg」代表(S)-2-氨基-3，3-二甲丁酸的胺基酸殘基。符號「Cpg」代表(S)-α-氨環戊基乙酸的胺基酸殘基。符號「rMeLeu」代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊酸的胺基酸殘基。符號「z-Me亮氨醇」代表(S)-2-氨基-4，4-二甲戊醇，並由α-氨基中移去一個氫。符號「β-EtNva」代表(S)-2-氨基-3-乙戊酸的胺基酸殘基。
本文所用的其他符號是對(S)-3-甲基-2-(甲氨基)-丁酸的殘基是(N-Me)Val;對(S)-3-甲基-2-(甲氨基)-戊酸的殘基是(N-Me)Ile;對(S)-2-(甲氨基)-3，3-二甲丁酸的殘基是(N-Me)Tbg;對(S)-α-氨基-1-羧環丁烷乙酸的殘基是Asp(cyBu);對(S)-α-氨基-1-羧基環戊乙酸的殘基是Asp(cyPn);對3-(R)-甲基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-甲丁二酸)的殘基是Asp{(R)-Me};對3-(R)-丙基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-丙丁二酸)的殘基是Asp{(R)-Pr};對3-(R)-烯丙基-L-天冬氨酸(即｛S-(R＊，S＊)｝-2-氨基-3-(2-丙烯基)丁二酸)的殘基是Asp{(R)-烯丙基｝。
用於本文的術語「滷素」是指選自溴、氯、氟或碘的滷素基團。
本文所用的術語「(2-10C)烷基」是指含有2～10個碳原子的直鏈和支鏈烷基基團，包括乙基、丁基、1-甲丙基、1-乙丙基、1-丙丁基、2-丙戊基等。
本文所用的術語「(4-9C)烷基」是指含有4～9個碳原子的直鏈和支鏈烷基基團，包括，如1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1，2，2-三甲丙基、3，3-二甲丁基、1-乙基-2，2-二甲丁基和4，4-二甲戊基。
本文所用的術語「低級烷基」或單獨或與另一基團相連而用時都是指含1-6個碳原子的直鏈烷基基團和含有3-6個碳原子的支鏈烷基基團並包括甲基、乙基、丙基、丁基、己基、1-甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基和1，1-二甲乙基。
本文所用的術語「1-(低級烷基)-(低級環烷基)」是指在位1有低級烷基取代基的低級環烷基基團;例如，1-乙環丙基、1-丙環戊基和1-丙環己基。
本文所用的術語「低級環烷基」無論是單獨使用或與其它基團結合使用時，都是指含有3-6個碳原子的飽和環烴基團，包括環丙基、環丁基、環戊基和環己基。
本文所用的術語「低級鏈烯基」是指含有2-6個碳原子的直鏈鏈烯基和含3-6個碳原子的支鏈鏈烯基基團，包括乙烯、1-丙烯、2-丙烯、1-甲基-乙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基和2-丁烯基。
本文所用的術語「低級烷氧基」是指含有1-4個碳原子的直鏈烷氧基基團和含有3-4個碳原子的支鏈烷氧基基團，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲乙氧基、丁氧基和1，1-二甲乙氧基。最後的基團通常認為是叔丁氧基。
本文所用的術語「苯基-(1-4C)烷基」是指苯烷基團，其中其烷基部分是含有1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，包括苄基、2-苯乙基、3-苯丙基、2-甲基-2-苯乙基｛PhCH(CH3)CH2}、1-乙基-2-苯乙基｛PhCH2CH(C2H5)｝等。
本文所用的術語「低級鏈烷醯基」或單獨使用或與其它基團結合使用，是指1-氧代烷基基團，其中，其1-氧代烷基部分是指含有2-6個碳原子的直鏈或支鏈的1-氧代烷基例如乙醯基、丙醯基(1-氧代丙基)和1-氧代-5-甲己基。
本文所用的術語「藥物上可用載體」或「獸醫上可用載體」是指無毒的、通常為隋性的用於活性組份的賦形劑，它對活性組份沒有副作用。
本文所用的術語「生理上可用載體」是指含一個或多個無毒賦形劑的可用的化妝用載體，它不與其中所含的活性組分反應或降低其效力。
本文所用的術語「獸醫上可用載體」是指用於對家畜給藥的藥品物質的生理上可用賦形劑，包括一種或多種無毒藥物上可用賦形劑，它與藥品物質不反應或降低其效力。
術語「有效量」是指抗病毒劑的預定抗病毒的劑量，也就是製劑的量足以有效地抵抗體內病毒有機體。
本文所用的術語「偶合劑」是指一種製劑，它能夠引起胺基酸或肽游離羧基與另一個胺基酸或肽的游離氨基脫水偶合而在反應物之間形成醯胺鍵。同樣，這樣的製劑能實施酸和醇的偶合而形成相應的酯並通過活化羧基基團促進並便於脫水偶合。這種偶合劑和活化基團描述於肽化學的普通教科書中;例如，E.Schroeder和K.L.Lubke，「The Peptides」Vol 1.Academic Press，New York，N.Y.1965，pp2～128，和K.D.Kopple，「Peptides and Aminoacids」，W.A.Benjamin，Inc.New York，N.Y.1966，pp33～51。偶合劑的實例有二苯磷醯疊氮化物、1，1′-羰基二咪唑、二環己基碳化二亞胺、N-羥基琥珀醯亞胺或1-羥基-苯並三唑，並在有二環己基碳化二亞胺存在情況下使用。一種很有實效和有用的偶合劑是(苯並三唑-1-基氧)三(二甲氨基)-磷鎓六氟磷酸鹽，它描述於B.Castro等人的文章Tetrahedron Letters，1219(1975)，也可參閱D.Hudson，J.Org.Chem，53，617(1988)，或就其本身，或在1-羥基苯並三唑存在下進行。還有另一個極有效和有用的偶合劑是商購的2-(1H-苯並三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲脲鎓四氟硼酸鹽。
通式1的肽的製備方法，其中可結合肽合成中所常用的方法，例如，胺基酸殘基和/或肽碎片的經典的溶液偶合。這種方法描述於，如，上述的E.Schroder和K.Luke，教科書系「The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology」，E.Gross等人編輯，Academic Press，New York，N.Y.1979-1987，Vol 1-8，和J.M.Stewart和J.D.Young的「Solid Phase Peptide Synthesis」，2nd ed.Pierce Chem Co.，Rockford，IL，USA，1984。
上述肽製備方法的一般特徵是用合適的保護基團，保護各種胺基酸殘基或衍生物的胺基酸殘基(或者，如有必要，肽的非肽碎片)的可反應的側鏈基團，所述合適的保護基團將阻止在該位點上發生的化學反應直到保護基團最後除去。當整體在羧酸基反應時也通常保護在胺基酸或碎片上的α-氨基基團，接著選擇性地除去α-氨基保護基團，以使在該位點上進行其後的反應。另一個共同特徵是用一個合適的保護基團初步保護胺基酸殘基或肽碎片的C-端羧基，如有的話，它是成為肽的C-端官能基，該合適的保護基團將阻止在該位點上發生的化學反應直到所要求的肽的順序已裝配後除去保護基團。
通式Ⅰ的肽的主要中間體是通式2的中間體
其中W是α-氨基保護基，如叔丁基氧羰基(Boc)，苄氧羰基(Z)或芴-9-基甲氧羰基(Fmoc)，而D和R1如上所限定的。化合物的製備可通過將通式W-D-CH2C(O)OCH2CH＝CH2的烯丙酯以麥可法加到通式為(低級烷基)-OC(O)CH＝CHC(O)R1的芴衍生物中，以得到通式為W-D-CH{C(O)OCH2CH＝CH2}CH{CH2C(O)R1}C(O)O-(低級烷基)的麥可加成化合物。
此後，將後者化合物用四重三苯膦的鈀化合物和三苯膦，在有吡咯烷存在下，按照R.De′ziel的方法(Tetrahedron Letter，28，4371(1987)，進行處理而實施水解，然後將稀丙酯脫羧基而得到主中間體的相應烷基酯。將後者酯在有鹼，如氫氧化鈉或氫氧化鋰的存在下進行水解而得到作為主中間體的非對映異構體的混合物。
或者，通式2的主中間體中，W和D如上面最後情況下所定義的，而R1是NR7R8，其中R7和R8各為低級烷基或R7和R8和與它們相連的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、嗎啉代或4-甲基哌嗪代，其製備方法如下將上面提及的通式W-D-CH2C(O)OCH2CH＝CH2(其中W和D如本文所定義的)的烯丙酯與通式BzlOC(O)CH＝CHC(O)OBzl{(E)-2-丁烯二酸二苄酯的富馬醯衍生物，按麥可反應條件進行反應而得到通式W-D-(RS)-CH{CH{C(O)OBzl}CH2C(O)OBzl}C(O)-OCH2CH＝CH2的相應麥可加成化合物。將後面的加成物在有吡咯烷存在下用四重三苯膦鈀化合物和三苯膦處理(De′ziel，參閱上面)得到通式W-D-CH2-(R，S)-CH{CH2C(O)OBzl}C(O)OBzl的相應的二苄酯。其後，在有覆蓋氫氧化鈀的碳存在下進行氫解，得到相應的二羧酸，該酸通過與過量乙酸酐加熱而轉化為相應的酸酐。在有吡啶存在下用合適的仲胺與酸酐反應而得到主要為通式W-D-CH2-(RS)-CH{CH2C(O)NR7R8｝C(O)-OH(其中W、D和NR7R8如上所定義的)的所要異構體的區域異構體(regioisomers)混合物。後者的產品轉化為其苄基酯而所得的區域異構體的混合物通過高效液體色譜分離而得到作為主要產品的所要異構體。然後在有氫氧化鈀覆蓋的碳存在下氫化後者產品而得到通式2的主中間物，其中W和D如本文所定義的而R1是本文所定義的NR7R8。
因此，通常通式1的肽可通過逐步偶合而製備，按肽、合適的胺基酸或衍生的胺基酸殘基，以及肽的非肽碎片(如主中間體)的順序的次序而進行，如有必要，這些都可適當保護並且如果有，則在完成逐步偶合而得到通式1的肽時除去全部保護基。較具體的方法描述於下面的實施例中。
本發明式Ⅰ的肽可以按治療上可用鹽的形式製備。在特定肽具有鹼功能殘基的情況下，這種鹼的鹽的實例有與有機酸如乙酸、乳酸、琥珀酸、甲磺酸或對-甲苯磺酸、以及聚合酸如丹寧酸或羧甲基纖維素配合的鹽，也有與無機酸如氫滷酸，如鹽酸、或硫酸或磷酸配合的鹽。如有必要，特定酸的加成鹽轉成另一酸的加成鹽例如按R.A.Boissonnas等人(Helv.Chim.Acta，43，1849)，(1960))所描述的方法通過用合適的離子交換樹脂處理而轉成非毒性的、藥物上可用的鹽。
在特定肽具有一個或多個羧基的情況下，這種羧基鹽的實例有與鈉、鉀或鈣陽離子相結合的鹽或與有機鹼，例如與三乙胺或N-甲基嗎啉相結合的鹽。
抗皰疹活性式Ⅰ肽的抗病毒活性可以通過生物化學、微生物學以及生物學方法來說明，表明化合物對皰疹單純性病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)以及其它皰疹病毒如水痘帶狀皰疹病毒和非洲淋巴細胞瘤病毒的複製得有抑制作用。
在下面實施例中指出了代表性的式1肽對皰疹核苷酸還原酶的抑制效應。值得注意的是，與這種特定的抑制皰疹核苷酸還原酶有關的是肽對正常細胞複製所需的細胞核苷酸還原酶活性的這種抑制效應相當小或沒有。
用於說明式1肽對病毒複製的抑制效應的方法是細胞培養技術;參閱，例如，T.Specfor等人的文章，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，4254(1985)。
肽的治療效用可以按實驗動物來說明，例如，通過使用一種基於因皰疹單純性病毒誘發眼病的老鼠模型的檢測以進行抗病毒藥劑試驗，這描述於C.R.Brandt等人的文章，J.Virol.Meth.，36，209(1992)。
當本發明的肽或其治療上可用鹽之一，用作抗病毒劑時，對溫血動物如人、豬或馬是局部給藥或全身給藥，以含有一種或多種藥物上可用載體的賦形劑配製，其比例決定於肽的溶解度和化學性質，和所選擇的給藥的途徑和標準的生物學實踐。對局部給藥，肽可以配製在藥物上可用賦形劑中，它含有0.1-5%，最好為0.5-2%的有效成分。這種製劑可以是溶液、霜劑或洗劑。
作為全身的給藥，式1的肽是通過靜脈、皮下或肌肉注射、以與藥物上可用賦形劑或載體的組合物形式給藥。為了注射給藥，肽最好是在滅菌水溶液賦形劑的溶液中使用，賦形劑中也可含有如緩衝劑或防腐劑的其它溶質以及足量的藥物上可用鹽或葡萄糖，以使溶液等滲。
上述製劑的合適賦形劑或載體描述於標準藥物教科書中，如，在「Remington′s Pharmaceutical Sciences」，18版，Mack，Publishing Company，Easton，Penn，1990。
肽的劑量隨著給藥方式和所擇特定有效成分而不同。再者它也隨著治療的特定宿主而不同。通常，治療是以小增量開始直到達到在這種治療情況下的最佳效果。一般來說，肽最好是按可產生抗病毒療效而不會引起任何有毒或有害副作用的濃度量給藥。
涉及局部使用，肽是按合適的局部製劑對身體的感染面積即皮膚或口部或生殖腔部分，以足以覆蓋感染面積的量皮膚給藥。要重複治療，例如，每4-6小時一次直到損害治癒。
涉及全身的給藥，式1的肽的給藥劑量是每天每公斤體重10μg-500μg，雖然上面提到的劑量會有不同。但，為了達到有效結果，最好使用的劑量是每天每公斤體重約10μg-200μg。
本發明的另一方面是含有皰疹病毒預防量的式1肽，或其治療上可用鹽、與生理上可用的化妝用載體一起的化妝組合物。在製劑中可以含有另外組分，如皮膚軟化劑。本發明的化妝製劑是用於預防地阻止皮膚皰疹損傷的產生。對皮膚的易感染面積可以夜間施用。通常化妝製劑比相應的用於局部使用的藥物組合物含有更少的肽。在化妝組合物中肽的優先含量為0.01-0.2%(重量)。
雖然上述公開的製劑表明是用於治療皰疹病毒感染的有效並相當安全的藥劑，不排除這些製劑可以和其它抗病毒藥物療法或藥物一起給藥以獲得有利的結果。這種其它的抗病毒藥物療法或藥物包括抗病毒核苷，如無環鳥苷和抗病毒表面活性劑或抗病毒幹擾素，如在美國專利4，507，281(1985，3月26日)，由S.S.Asculai和F.Rapp所公開的那些藥物。
更具體地涉及通過同時給藥以治療皰疹病毒感染，發現與式1的肽結合使用抗病毒核苷類似物可以協同增加其抗皰疹活性，而不伴隨毒性作用的增加。因而，同時提供用於治療哺乳動物的皰疹感染的藥物組合物，它含有一種藥物上或獸醫上可用的載體、有效量的一種抗病毒核苷類似物或其治療上可用鹽和一種式Ⅰ的核糖核苷酸還原酶抑制肽或其治療上可用鹽相結合的混合物。
本文也提供了一種治療哺乳動物皰疹病毒感染的方法。方法包括對哺乳動物以一種抗皰疹病毒有效量的組合物給藥，該組合物是式1化合物或其治療上可用鹽和一種抗病毒核苷類似物或其治療上可用鹽的結合物。
用於組合物的抗病毒核苷類似物是一種可酶促地轉化(體內)為皰疹DNA聚合酶的病毒DNA聚酶抑制劑和/或用於皰疹DNA聚合酶的另外基質。抗病毒核苷類似物可選自已知的核苷類似物。本發明的優先核苷類似物包括無環鳥苷及其類似物，例如通式2的化合物或其治療上可用鹽
其中R14是氫、羥基或氨基(當通式2中R14是羥基時就代表無環鳥苷)。
按照本發明所使用的其它優選抗病毒核苷類似物包括阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羥甲無環鳥苷(ganciclovir)、依多西啶(edoxudine)、布羅瓦維(brovavir)、弗西它平(fiacitabine)、潘西克羅維(penciclovir)、法西克羅維(famciclovir)、洛西克羅維(rociclovir)。
術語「協同效應」當用於上面定義的核苷類似物和通式1的肽結合物的抗病毒或抗皰疹活性時，是指抗病毒或抗皰疹效應大於結合物中二個單獨組分的預計加成的效應。
當使用本發明結合物以治療皰疹感染時，則對溫血動物，如人、豬或馬，以在含有一種或多種藥物上可用載體的賦形劑中的結合物給藥，其比例決定於核苷類似物和通式1的肽的溶解度和化學性質，所擇的給途藥徑、標準的生物學實踐，以及由兩個活性組分的相對量，以提供一種協同抗病毒效應。最好，結合物以局部給藥。例如，兩種活性製劑(即抗病毒核苷類似物和通式1的肽，或它們治療上可用鹽)可以在藥物上可用賦形劑中配製成溶液、乳劑、霜劑或洗劑形式。這種製劑可含有0.01-1.0%(重量)的核苷類似物，或一種其治療上可用鹽，和約0.05-1%(重量)的通式1肽或其治療上可用鹽。
在任何情況下，兩種活性製劑在藥物組合物中的含量是按可提供協同抗皰疹效應的量。
以下實施例進一步說明本發明。溫度是以攝氏度數給出的。溶液百分率或比率按體積對體積關係表示，除非另有說明，核磁共振譜記錄在Bruker 200MHz或400MHz的分光計(而400MHz光譜在前言註明);化學位移(δ)按百萬分之幾報導。用於實例的縮略語包括Boc叔丁氧羰基;Bu丁基;Bzl苄基;DMF二甲基甲醯胺;Et乙基;EtOH乙醇;EtOAc乙酸乙酯;Et2O二乙醚;Me甲基;MeOH甲醇;Pr丙基;TLC薄層色譜THF四氫呋喃。
實施例1用於偶合反應的一般方法｛也可參閱R.Knorr等人，Tetrahedron Letters，30，1927(1989)｝將第一反應物，即游離胺(或其氫氯化物鹽)，溶於CH2Cl2或乙腈中，溶液冷至4℃。在氮氣氛下，在攪拌的溶液中加入4當量的N-甲基嗎啉。20分鐘後，加入1當量第二反應物，即游離羧酸，和1.05當量的偶合劑。為此目的的實用和有效的偶合試劑是(苯並三唑-1-基氧)三-(二甲氨)磷鎓六氟磷酸鹽，或優選的是2-(1H-苯並三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲脲鎓四氟硼酸鹽。反應用TLC監測。反應完成後，在低壓下蒸發CH2Cl2(或乙腈)。殘留物溶於EtOAc。溶液依次用1N檸檬酸水溶液、10% Na2CO3水溶液和鹽水洗滌。乾燥有機相(MgSO4)，過濾並在減壓下濃縮至幹。殘留物按照Still的快速色層技術｛W.C.Still等人，J.Org.Chem，43，2923(1978)｝在矽膠(SiO2)上純化。
實施例2中間體H-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CM3)CH2OBzl的製備(a)(S)-α-疊氮-1-｛(苯甲氧基)羰基｝環戊乙酸這化合物是由描述於M.N.Aboul-Enein等人的Pharm.Acta.Helv.，55，50(1980)中的2-氧代螺[4.4]壬烷-1，3-二酮，按照不對稱疊氮化方法，使用Evan助劑[參閱D.A.Evans等人，J.Amer.Chem.Soc.，112，4011(1990)]而製備的。
更明確地說，在氬氣氛下，將1.6M的丁基鋰的己烷溶液(469ml，750mmol)滴加到手性助劑4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮(oxazolidinone)｛96.8g，750mmol，描述於L.N.Pridgen and J.Prol.，J.Org.Chem.，54，3231，(1989)中｝在-40℃的無水THF的溶液中。混合物在-40℃下攪拌30分鐘然後冷卻到-78℃。將2-氧代螺[4.4]壬烷-1，3-二酮逐滴加到冷卻的混合物中。然後將混合物在0℃攪拌1小時。然後將20%(w/v)的檸檬酸水溶液(600ml)加到混合物中，分離有機相併用EtOAc提取水相。用鹽水洗滌合併的有機相，乾燥(MgSO4)並在減壓下濃縮而得到3-｛2-(1-羧基環戊基)-1-氧乙基)｝-4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮的淺紅色固體(300g)。
後者固體(約750mmol)溶於乙腈(1升)中。將苄基溴化物(128.3g，89.2ml，750mmol)和1，8-二氮雜二環[5.4.0]-十一碳-7-烯(114g，112ml，750mmol)加到溶液中。在氬氣下攪拌混合物16小時。在減壓下除去揮發物。殘留物溶於H2O/EtOAc。分出有機相，用10%(w/v)的檸檬酸水溶液、鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並在減壓下濃縮至幹並得到油狀物。油狀物由己烷/EtOAc中結晶而得到白色固體的相應苄基酯(204g，73%)。
在無水THF(200ml)中的後者化合物(70g，187mmol)的溶液冷卻至-78℃。含6%(w/v)枯烯的0.66M的1，1，1，3，3，3-六甲二矽氮烷鉀的THF溶液(286ml，189mmol)在15分鐘期間加到冷溶液中。混合物在-78℃攪拌45分鐘。將2，4，6-三異丙基苯磺醯基疊氮化物(67g，216mmol)在無水THF中的溶液以一次性加到冷的混合物中，2分鐘後加入冰醋酸(50ml，860mmol)。加熱混合物並在35～45℃攪拌1小時，減壓下移去揮發物。用己烷/EtOH(4∶1，1.7升)研製黃色殘留物。所得白色固體收集在濾器上。濾液和SiO2(230～240篩孔)混合。在減壓下除去揮發物，在35℃減壓下乾燥殘留固體以除去枯烯。然後將殘留固體放在SiO2柱上。用己烷/EtOAc(9∶1)洗脫殘留固體和SiO2並濃縮洗脫液而得到3-｛｛2(S)-疊氮-1-氧代-2-｛1-｛苯甲氧基｝-羰基｝環戊基｝乙基｝-4(S)-(1-甲乙基)-2-噁唑烷酮(66g，86%)。
將後者化合物(13.42g，32.4mmol)在THF/H2O(3∶1，608ml)的溶液冷卻到0℃。在冷溶液中加入過氧化氫/H2O(3∶7，16.3ml，518mmolH2O2)，接著加入LiOH·H2O(2.86g，68.2mmol)。混合物在0℃攪拌45分鐘，然後用10%(w/v)的硫化鈉水溶液(400ml)驟冷，在加入NaHCO3(1.93g)後，在減壓下濃縮混合物。通過連續提取(NaHCO3水溶液/氯仿)20小時而回收手性助劑。此後將水相冷至0℃，加入濃鹽酸使之酸性並用EtOAc提取。用鹽水洗滌提取物，乾燥(MgSO4)並在減壓下濃縮得到白色固體的所要化合物(8.2g，84%)，化合物的1H NMR(CDCl3)表明為δ1.6-1.8(m，5H)，1.95-2.05(m，2H)，2.20-2.30(m，1H)，4.55(s，1H)，5.12(s，2H)和7.4(m，5H)。
化合物用於本實施例的(c)節中。
(b)NH2-(S)CH(CH2CMe3)CH2OBzl按照A.Giannis和K.Sandhoff(Angew.Chem.Int.Ed.Engl，28，218(1989))方法，將H-γ MeLeu-OH用LiBH4/Me3SiCl還原而得到氨基醇NH2-(S)-CH(CH2(Me3)CH2OH。將後者化合物(812mg，6.2mmol)、三乙胺(659mg，6.51mmol)和二-叔-丁基二碳酸酯(1.42g，6.51mmol)在無水THF(15ml)中的混合物，在4℃氮氣氛下攪拌15分鐘，然後在室溫再攪拌4小時。減壓下蒸發THF。殘留物溶於EtOAc。溶液用10%檸檬酸水溶液、5%NaHCO3水溶液和鹽水洗滌。乾燥有機相(MgSO4)並在減壓下濃縮至幹。通過快速色層法純化(SiO2，洗脫液∶己烷-EtOAc，2∶1)殘留物而得到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)-CH2OH(1.23g，86%)。
在Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)-CH2OH(1.23g，5.35mmol)在苄基氯(13ml)的溶液中依次加入四丁銨二硫酸鹽(106mg)和50%NaOH水溶液(3ml)。所得混合物在35～40℃下攪拌90分鐘，用EtOAc稀釋，並用H2O和鹽水洗滌。有機相干燥(MgSO4)並在減壓下濃縮至幹。殘留物溶於己烷。溶液倒入SiO2柱。用己烷洗脫以除去苄基氯，然後用己烷-EtOAc(2∶1)洗脫而得到Boc-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl。最後化合物的1H NMR(CDCl3)表明為δ0.95(s，9H)，1.42(s，9H)，1.30-1.55(m，2H)，3.42(d，J＝4Hz，2H)，3.88(闊，1H)，4.54(m，3H)，7.23-7.4(m，5H)。後者化合物(1.23g，3.99mmol)溶於6N HCl/二噁烷(10ml)。溶液在氮氣氛下4℃時攪拌45分鐘。蒸發溶劑得到所求化合物的鹽酸鹽(1.05g)。化合物用於本實施例的下一節中而不需再純化。
(c)本實施例的標題化合物通過按照實施例1的偶合方法，並使用上節的NH2-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的鹽酸化物作為第一反應物而將本實施例(a)節的(S)-α-疊氮-1-｛(苯甲氧基)-羰基｝環戊乙酸作為第二反應物，得到N-{(S)-1-苄氧甲基-3，3-二甲丁基｝-(S)-α-疊氮-1-｛(苯甲氧基)羰基｝環戊乙醯胺。按照N.Maiti等人的方法(Tetrahedron Letter，27，1423(1986))在MeOH中用二氯化錫還原後者化合物而得到本實施例的標題化合物。化合物的1H NMR(CDCl3)表明為δ0.98(s，9H)，1.22-2.25(m，12H)，3.4(d，J＝4Hz，2H)，3.64(s，1H)，4.18(寬，m，1H)，4.52(s，2H)，5.12(s，2H)，7.18(d，J＝7Hz，1H)，7.22-7.38(寬，m，10H)。
實施例3中間體Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OH的製備(a)丙二酸單烯丙酯的鎂鹽將2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮(100g，0.69mol)和烯丙醇(47ml，0.69mol)在苯(800ml)中的溶液加熱回流24小時。在減壓下蒸發溶劑。在減壓下蒸餾殘留物得到丙二酸單烯丙酯(71g，71%，bp123-127°/2.2mmHg)。將後者酯(71g，0.48mol)溶於無水THF(300ml)中。溶液中加入乙醇鎂(28.5g，0.245mol)。在氬氣下在室溫(20～22℃)攪拌混合物4小時。在減壓下蒸發，殘留物用Et2O研製而得到一種褐色固體。將固體研磨這細粒並在減壓下乾燥而得到所要鎂鹽(56g，73%)。該鹽用於本實施例的下一節。
(b)將Boc-Tbg-CH2C(O)OCH2＝CH21，1-羰基二咪唑(12.6g，78mmol)加到Boc-Tbg-OH(15g，64mmol)在無水乙腈(150ml)的溶液中。在氬氣氛下在室溫攪拌混合物2小時。將丙二酸單烯丙酯的鎂鹽(24g，78mmol)和4-(N，N-二甲氨基)吡啶(100mg)加到混合物中。混合物加熱回流1小時，然後在室溫攪拌18小時。其後，在減壓下濃縮混合物。殘留物溶於EtOAc(300ml)中。將溶液用10%檸檬酸水溶液(2×100ml)和鹽水(2×100ml)洗滌，乾燥(MgSO4)並蒸發至幹。殘留物用快速色層法純化(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，9∶1)而得到棕色油狀的所要烯丙酯(19.4g，96%)，放置結晶。1H NMR(CDCl3)表明，該化合物作為在氯仿中按3∶1之比的酮-烯醇互變體混合物存在，δ0.96(s，9H，烯醇形式)，1.04(s，9H)，1.46(s，9H)，3.65(s，2H)，3.90(d，J＝8.5Hz，1H，烯醇形式)，4.20(d，J＝7.5Hz，4.65(m，2H)，5.10(寬，d，J＝7.5Hz，1H)，5.20-5.40(m，2H)，5.80-6.05(m，1H)，12(s，1H，烯醇形式)。
烯丙酯用於本實施例的(d)節中。
(c)(E)-5，5-二甲-4-氧代-2-己烯酸乙基酯按照S.Manfredini等人的方法(Tetrahedron Letters，29，3997(1988))製備這種乙基酯。粗製油狀產品用快速色層(SiO2，洗脫液己烷)純化而得到黃色油狀的所要乙基酯。1H NMR(CDCl3)δ1.21(s，9H)，1.33(t，J＝7.5Hz，3H)，4.28(q，J＝7.5Hz，2H)，6.78(d，J＝15.5Hz，1H)，7.51(d，J＝15.5Hz，1H)。
乙基酯用於本實施例的下一節。
(d)本實施例的標題化合物將描述於本實施例(b)節的Boc-Tbg-CH2C(O)OCH2＝CH2(0.67g，2.1mmol)在氬氣氛下溶於無水THF(25ml)中。溶液中加入氫化鈉(60%油分散體，0.095g，2.4mmol)。混合物在室溫攪拌30分鐘。將本實施例(c)節中描述的(E)-5，5-二甲基-4-氧代-2-己烯酸乙酯(0.435g，2.36mmol)加到混合物中，攪拌混合物直到TLC判斷反應完成為止(約6小時)。其後，混合物用10%檸檬酸水溶液驟冷。減壓下除去THF而所得濃縮液用EtOAc提取(3×25ml)。提取物用水洗，乾燥(MgSO4)並在減壓下濃縮。殘留物用快速色層法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，9∶1)純化而得到相應的麥可反應加成物(1.06g，100%)。
麥可加成物按下面轉化為Boc-Tbg-CH2-(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OH在氬氣氛下將四重三苯膦鈀(O)(0.20g，0.18mmol)和三苯膦(0.060g，0.23mmol)溶於CH2Cl2(10ml)中。加入乙腈(20ml)並將溶液冷卻到0℃。在溶液中加入吡咯烷(0.28ml，2.7mmol)後加入麥可加成物(1.06g，2.1mmol)。將混合物在1小時期間升至室溫並攪拌20小時。之後在氬氣下回流加熱反應混合物1小時以完成反應。蒸發溶劑並用快速色層法(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc 9∶1)純化殘留物而得到Boc-Tbg-CH2(RS)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)OEt(0.77g，83%)。然後將後者化合物(0.77g，1.7mmol)溶於乙二醇二甲醚-H2O(1∶1，10ml)中。在溶液中加入氫氧化鋰一水化合物(0.31g，7.4mmol)。在室溫攪拌混合物4小時，用10%檸檬酸水溶液(20ml)使之酸化並用EtOAc(3×25ml)提取。乾燥提取物(MgSO4)並在減壓下濃縮而得到褐色固體的本實施例的標題化合物(0.69g，由Boc-Tbg-CH2C(O)O-CH2CH＝CH2的總產率為80%)。產品是55045的非對映異構體混合物(由NMR表明)。1H NMR(CDCl3)δ0.99(s，9H，少量異構體)，1.14(s，9H，主要異構體)，1.43(s，9H)，2.68-3.12(m，4H)，3.30(m，1H)，4.09(d，J＝9Hz，1H)，5.11(d，J＝9Hz，1H)。
實施例4中間體H-TbgCH2CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CM3)CH2OBzl的製備按照本實施例1的偶合方法並使用實施例2的標題化合物(3.42g，7.13mmol)作為第一反應物將實施例3的標題化合物(2.50g，6.48mmol)用作第二反應物，粗製產品的快速色層分離(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，4∶1)得到標題化合物的相應N-Boc衍生物(4.64g，84%;Rf＝0.21，己烷-EtOAc，7∶3)。後者衍生物(4.64g，5.44mmol)在6N HCl/二噁烷(50ml)的溶液中在室溫攪拌1小時，並在減壓下濃縮。殘留物溶於Et2O。將後者溶液用NaHCO3的飽和水溶液和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並濃縮而得到含有二種非對映異構體黃色油。通過快速色層(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc-MeOH，5∶4.5∶0.5)而分離二種異構體。得到無色油狀的所要化合物(即，更極性;Rf＝0.18，EtOAc-己烷-MeOH 7∶3∶0.5)，(2.52g，52%)。本實施例的標題化合物的異構體是用於下一個實施例中而不需再純化。
實施例5Boc-(N-Me)Val-Tbg-CH2(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)(Bzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的製備按照實施例1的偶合方法並使用實施例4的標題化合物(4.45g，5.95mmol)作為第一反應物而用N-甲基纈氨酸(4.41g，17.9mmol)作為第二反應物，粗製產品的快速色層分離(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，7∶3)得到本實施例的標題化合物(4.02g，72%收率)。1H NMR(CDCl3)δ0.87(d，J＝7Hz，6H)，0.90(s，18H)，1.10(s，9H)，1.48(s，9H)，1.5-2.0(m，10H)，2.30(m，1H)，2.5-3.1(m，5H)，2.80(s，3H)，3.30(m，2H)，4.0(d，J＝12.5Hz，1H)，4.20(m，1H)，4.32(d，J＝8.5Hz，1H)，4.49(d，J＝4.5Hz，2H)，4.64(d，J＝11Hz，1H)，5.18(d，J＝5Hz，2H)，6.78(寬，d，J＝8.5Hz，1H)，7.11(寬，d，J＝8.5Hz，1H)，7.18(寬，d，J＝11Hz，1H)，7.2-7.45(m，10H)。
實施例6PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(CyPn)-γMe亮氨醇的製備實施例5的標題化合物(4.02g，4.25mmol)在6N HCl/二噁烷(30ml)中的溶液在室溫攪拌1小時後，在減壓下濃縮，得到以鹽酸鹽形式的實施例5標題化合物的游離N-端氨基衍生物。之後，按實施例1偶合方法並用後者化合物作第一反應物而將苯基丙酸(2.00g，13.3mmol)作為第二反應物，通過快速色層(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，3∶2)純化粗製產品得到PhCH2CH2C(O)-N-Me-Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp-(cyPn)(OBzl)-NH-(S)-CH(CH2CMe3)CH2OBzl的白色泡沫狀物(4.00g，94%)，Rf＝0.35，己烷-EtOAc，1∶1)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.79(d，J＝7Hz，3H)，0.91(s，9H)，0.93(s，9H)，1.08(s，9H)，1.5-1.9(m，10H)，2.27(m，1H)，2.5-2.85(m，7H)，2.90(s，3H)，2.97(m，4H)，3.27(dd，J＝11，7Hz，1H)，3.55(dd，J＝11，4.5Hz，1H)，3.48(q，J＝7.5Hz，2H)，4.22(m，1H)，4.27(d，J＝8Hz，1H)，4.48(1，J＝8.5Hz，2H)，4.53(d，J＝11Hz，1H)，4.63(d，J＝0.5Hz，1H)，5.16(q，J＝13Hz，2H)，6.72(d，J＝8Hz，1H)，7.02(d，J＝8.5Hz，1H)，7.17(d，J＝9.5Hz，1H)，7.18-7.4(m，10H)。
將後者化合物(4.00g，4.03mmol)進行氫解｛20%Pd(OH)2/C(200mg)，1大氣壓H2，EtOH，5小時｝。反應完成後，以通過45μm膜的過濾而從反應混合物中除去催化劑。減壓下濃縮濾液得到一種清徹油。將油溶於Et2O(100ml)。減壓下將溶液蒸發至幹。重複溶解和蒸發方法，從而得到一種白色固體。固體用己烷研製，過濾並在減壓下乾燥而得到標題化合物(3.12g，95%)，1H NMR(d6-DMSO)，400MHz，表明化合物以50∶50的兩種旋轉異構體的混合物存在於DMSO中。δ0.71-0.92(m，24H)，1.05(s，4.5H)，1.06(s，4.5H)，1.20-1.78(m，10H)，1.93-2.16(m，2H)，2.48-2.83(m，6H)，2.84(s，1.5H)，2.92(s，1.5H)，2.96-3.06(m，1H)，3.10-3.23(m，2H)，3.72-3.81(m，1H)，4.09-4.14(m，1H)，4.22(d，8Hz，0.5H)，4.54-4.62(寬m，1H)，4.73-4.81(m，1.5H)，7.12-7.29(m，6H)，7.94(d，J＝10Hz，1H)，8.04(d，J＝8Hz，0.5H)，8.32(d，J＝8.5Hz，0.5H)。
按照實施例6的方法，但以2-(苯甲基)-3-苯丙酸(二苄基乙酸代替苯丙酸。得到(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇。
實施例7Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)CO-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇的製備將異氰酸1-乙丙酯(28mg，0.248mmol)加到實施例4的標題化合物(23mg，0.030mmol)和三乙胺(6mg，0.057mmol)在無水CH2Cl2的溶液中。在氬氣氛下在0℃攪拌反應混合物1小時，然後在室溫攪拌18小時。TLC(EtOAc-己烷，1∶1)表明反應完成。減壓下蒸發溶劑。通過快速色層(SiO2，洗脫液己烷-EtOAc，6∶4)純化殘留物而得到本實施例的標題化合物的相應的二苄基衍生物(16mg)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.9(t，J＝7Hz，3H)，0.92(t，J＝7Hz，3H)，0.94(s，9H)，0.95(s，9H)，1.10(s，9H)，1.25-1.90(m，14H)，2.52(m，1H)，2.68(m，1H)，2.81(m，1H)，2.94-3.07(m，2H)，3.27(dd，J＝7.2，9Hz，1H)，3.36(dd，J＝5.5，9Hz，1H)，3.46(m，1H)，4.07(d，J＝9Hz，1H)，4.23(m，1H)，4.28(d，J＝9Hz，1H)，4.48(dd，J＝10Hz，2H)，4.66(d，J＝10Hz，1H)，4.74(d，J＝9Hz，1H)，5.17(dd，J＝14Hz，2H)，7.10(d，J＝8.5Hz，1H)，7.2-7.45(m，11H)。
將後面二苄基衍生物進行氫解(10%鈀覆蓋的碳，1大氣壓，EtOH)而得到標題化合物。質譜703(M+Na)+。
實施例8用於加工通式1肽C-端的其它代表性中間體的製備(a)NH2-(R)-CH(Et)CMe3在4，4-二甲基-3-戊酮(106g，0.92mmol)和(R)-α-甲苄胺(111g，0.92mmol)在苯(1升)中的冷溶液(0℃)中，加入TiCl4(50.5ml，0.46mmol)在苯(200ml)中的溶液，其速度是要使混合物的溫度保持在10°以下。然後，混合物在40°機械攪拌3小時，冷卻到室溫並通過硅藻土過濾。用Et2O洗滌硅藻土。合併濾液和洗液並濃縮。殘留物溶於無水MeOH(2升)中。溶液冷卻到0°並分批加入NaBH4(20g，0.53mmol)，同時將混合物的溫度保持在5°以下。蒸發甲醇。殘留物溶於Et2O。將溶液用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並蒸發至幹而得到紅色油(NMR表明是一種18∶1的非對映異構體的混合物)。用快速色層(SiO2，洗脫液EtOAc/己烷，7∶93)純化油而得到一種液體的N-(1-(R)-苯乙基)-1(R)-乙基-2，2-二甲丙胺(110g，54%)。將這物質溶於己烷(1.5升)。在溶液中，在15分鐘期間加入6N HCl的二噁烷溶液(90ml)。所得白色固體收集在濾器中然後用己烷洗滌而得到N-(1(R)-苯基-乙基)-1(R)-乙基-2，2-二甲丙基氫氯化物(125g，97%)。1H NMR(CDCl3)δ0.55(t，J＝7.5Hz，3H)，1.14(s，9H)，1.54-1.95(m，2H)，2.23(d，J＝6.5Hz，3Hz)，2.36-2.44(m，1H)，4.31-4.49(m，1H)，7.30-7.48(m，3H)，7.74-7.79(m，2H)。
後面化合物(41.5g)在MeOH(120ml)中的溶液與10%(W/V)Pd/C混合，並在帕爾(Parr)氫解器上在50psi氫氣下在室溫攪動混合物48小時。過濾混合物，濃縮濾液而得到以其鹽酸加成鹽形式存在的所要NH2-(R)-CH(Et)CMe3的白色固體(25g，100%)。1H NMR(CDCl3)δ1.10(s，9H)，1.22(t，J＝7Hz，2H)，1.58-1.90(m，2H)，2.70-2.85(m，1H)，8.10-8.40(寬，s，3H)。
按同樣方法，按前面方法中，以3，3-二甲基-2-丁酮代替4，4-二甲基-3-戊酮，而得到NH2-(R)-CH(Me)CMe3·HCl。
(b)NH2N(Me)CMeNaOH(3.3g，8.2mmol)加到鹽酸叔丁基肼(5.1g，41mmol)溶液中。15分鐘後，在混合物中加入二叔丁基二碳酸酯(9.0g，42mmol)在THF(15ml)中的溶液中。混合物在室溫攪拌15小時後用Et2O(3×20ml)萃取。合併的提取物用Na2CO3的飽和水溶液洗滌，乾燥(MgSO4)並濃縮而得到一種白色固體(7.6g)。後面的物質(1.3g，6.9mmol)溶於無水DMF。在溶液中加入NaH在礦物油的60%(W/V)分散液(0.28g，即6.9mmol的NaH)，然後加入DMF(1.5ml)。混合物攪拌20分鐘後，加入純甲基碘(0.97g，6.9mmol)。在室溫攪拌反應混合物15小時後在H2O2和Et2O之間分配。分出有機相，用0.5N HCl水溶液洗滌(2×)。合併的水相用NaHCO3鹼化並用EtPAc提取(3×)。EtOAc提取物乾燥(MgSO4)並濃縮至幹而得到Boc-NHN(Me)CMe3的白色固體(0.9g，64%);1H NMR(CDCl3)δ1.07(s，9H)，1.44(s，9H)，2.43(s，3H)，5.29(s，1H)。後面固體(0.9g)溶於6N HCl/二噁烷(5ml)。溶液在室溫放置30分鐘後濃縮至幹。用己烷研製殘留物而得到白色固體的NH2N(CH3CMe3·HCl(0.5g)。
按同樣方式，但用乙基碘代替前面方法中的甲基碘，得到NH2N(Et)-CMe3·HCl，mp.129-134℃。
實施例9按照實施例7的方法，製備用於加工通式1的肽的N-端的其它代表性中間體的方法(a)異氰酸1-丙基丁酯這中間體由商購的4-氨基庚烷通過V.S.Goldesmidt和M.Wick，Liebigs.Ann.Chem，575 1217(1952)的方法製備。
(b)異氰酸1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯酯將丙腈(14.5g，264mmol)在無水Et2O(40ml)的溶液滴加到1.0M烯丙基溴化鎂/Et2O(880ml)中。反應混合物在回流時機械攪拌2小時，然後冷卻到0℃。在冷卻的反應混合物中小心地加入NH4Cl飽和水溶液(320ml)。分出有機相，乾燥(MgSO4)，冷卻至0°並在同樣溫度下與1M HCl/Et2(200ml)混合。收集所得固體，在減壓下乾燥(約27g)。後面物質溶於CH2Cl2(200ml)。用10%(W/V)的Na2CO3水溶液(2×)洗滌溶液，然後用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並濃縮至幹以得到黃色油。蒸發該油(82-85°/20乇)得到無色液體的1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯胺(11.6g，34%);1H NMR(CDCl3)，400MHz)δ0.89(t，J＝7Hz，3H)，1.39(q，J＝7Hz，2H)，2.11(d，J＝7Hz，2H)，5.06-5.14(m，4H)，5.80-5.89(m，2H)。
後者化合物通過V.S.Goldesmidt和M.Wick(同上)的方法轉化為異氰酸1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯酯。
上一節(b)方法的第一步，即1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯胺的製備是基於G.Alvernhe和A.Laurent[Tetrahedron Lett.，1057(1973)]所述的通用方法。其總體方法是在適當選擇可用於製備其它所需異氰酸酯中間體的反應物，以最終製備在N-端有不飽和的通式1的肽，即通式1的肽，其中A-B是通式R5-NH-C(O)的不飽和的烷氨基羰基，其中R5是支鏈的不飽和烴基團，如1-甲基-1-(2-丙烯)-3-丁烯基。但要注意，當所需異氰酯中間體是用於按照實施例7的方法，則最終產品將是N-端飽和的通式1的相應肽。再者，後者方法代表用於製備這種相應肽的實用方法，例如，MePr2CNHC(O)-或EtPr2-CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Aap(cyPn)-NHCH2CMe3，分別參閱實施例13的表Ⅳ中所列的第8和第5個化合物。
另一方面，當需要保留N-端的不飽和時，通式1的N-端不飽和肽可以按相應的飽和肽相同方法製備，只是要使用羧基保護基，這種保護基可以在有不飽和存在時選擇性地除去。用於此目的的實用羧基保護基是烯丙基。因此，所需要的N-端不飽和肽可以按照實施例2-4和7的方法製備，但要以(S)-α-疊氮-1-(2-丙烯基氧羰基)-環戊酸代替實施例2的(S)-α-疊氮-1-｛(苯甲氧基)-羰基｝環戊酸。前者化合物可以按實施例2(a)中用於苯甲氧基衍生物所述的完全相同的方法製備，除了用烯丙基溴代替苄基溴之外。最後去保護步驟(即除去羧基保護基、或當目的肽的E是NHCH(12)-Z，其中R12按本文所限定的，Z為C(O)OH的情況下的基團)可以按照R.Déziel，Tetrahedron Lett.，28 4371(1987)中所述方法進行，最好在有四重(三苯膦)鈀(O)存在下使用吡咯烷進行。這樣製備的通式1的N-端不飽和肽的實例是Me(CH2＝CH-CH2)2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，參見列於實施例13表Ⅳ中的第7個化合物。
也應注意，當目的N-端不飽和肽的E是NHCH(R10)-Z(其中R10按本文所定義的，Z是CH2OH)時，則用於將含羥基C-端單元結合進行所需肽中的中間體要保護原來的C端羥基。在這種情況下的羥基保護基也可以是能在有不飽和時選擇性除去的保護基。在這種情況下方便的保護基是烯丙氧羰基基團，參見E.J.Corey和J.W.Suggs，J.Org.Chem，38，3223(1973)。
因此，通過使用適當的中間體，實施例1-7的系列偶合和去保護方法就可以用來製備通式1的其它化合物，例如在以下實施例表中所列舉的那些。在某些情況下，最終產品的沉澱不是純物質。在這種情況下，產品可以通過半製備HPLC在C-18反相柱上，使用各含0.06%TFA的乙腈和水的梯度而進行純化。為此，在純化前將粗製產品溶於0.1M NH4OH水溶液，使用0.1M AcOH水溶液使溶液pH回到約7。當使用時，在這方式下，非對映異構體的混合物可以分離。
可以這樣製備的通式1其它化合物的一些實例是(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3和(PhCH2)2CHC(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3。
實施例10抑制皰疹單純性病毒(HSV-1)核糖核苷酸還原酶(a)酶的製備HSV-1核糖核苷酸還原酶(部分純化)是通過用菌株F HSV-1病毒以形成10菌斑單位/細胞感染的休眠BHK 21/C13細胞而製得的，如描述於E.A.Cohen等人，J.Gen.Virol.，66 733(1985)中的方法。
(b)對所列舉的肽的測定和結果按照P.Gaudreau等人在J.Biol.Chem，262，12413(1987)中所述方法，得到列於下面表1的測定結果。對每一個列舉的通式1化合物的測定結果，是以產生50%最大抑制酶活性的化合物濃度(IC50)來表示。用於每個測定的酶製劑的單位數是一定的，它基於酶製劑的比活度。結果是相對於不含測試化合物的對照實驗中所得的活度，並以四次測定的平均值表示而且各次之間的相差低於10%。
表1通式1的化合物 FAB/MS IC50(m/z) μM(M+Na)+實施例6標題化合物 813*0.27PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 849 0.19CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 848 0.26CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 791 0.33CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 803 0.32CH{CH2C(O)-(環戊基)}C(O)-Asp-(cyPn)-NHCH2CMe3PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)- 751.5 0.33CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 659 0.23CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(S)-CH{CH2C(O)- 716 0.17(吡咯烷代)}C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeuclnolEt2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 717 0.12CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHEt2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 716 0.22CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2實施例7的標題化合物 703 0.15Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 671 0.22(環戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 597*0.20CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3
表1(續)通式1的化合物 FAB/MS IC50(m/z) μM(M+Na)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 745 0.15CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 731 0.20CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 665*0.08CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3＊(M+H)+實施例11在細胞培養中皰疹單純性病毒(HSV-2)複製的抑制測定將BHK-21/C13細胞(ATCC CCL 10)以加有8%(V/V)胎牛血清(FBS，Gibco Canade Inc)的α-MEM培養基(Gibco Canada Inc，Burlirgton，Ontario，Canada)在150cm2T-錐形瓶(1.5×106細胞/瓶)培養2天。細胞進行胰酶消化後轉入24孔試驗板的新鮮培養基中，得到在每孔750μl培養基中有25×105細胞。細胞在37℃保溫6小時，使其附著在板上，此後，細胞以500μl加有0.5%(V/V)FBS的α-MEM洗滌一次，然後以750μl相同培養基(低血清)培養3天。在此血清不足階段後，除去低血清培養基，而細胞在500μlBBMT中培養2-3小時。｛BBMT培養基描述於P.Brazeau等人的Proc.Natl.Acad，Sci USA，79，7909(1982)｝。之後細胞在100μl BBMT培養基中以HSV-2(感染複數＝0.02.PFU/細胞)感染。(注所用HSV-2是菌株HG-52，參見Y.Langelier和G.Buttin，J.Gen.Virol.，57，21(1981);病毒保存在-80℃)。在37℃下病毒吸附1小時後，除去培養基，用BBMT(3×250μl)洗滌細胞。在每孔的細胞，以有或沒有(對照)適當濃度的測試製劑溶於200μl的BBMT培養基培養。在37℃保溫29小時後，通過先將試驗板在-80℃冷凍，接著解凍而收集感染細胞。藉助於融冰碎片將每孔中的細胞由孔壁刮下。完全解凍後，收集細胞懸浮液並用150μl BBMT培養基衝洗每個孔。病毒樣品(懸浮液加洗液)在4℃輕輕地聲處理4分鐘。通過離心除去細胞碎片(在4℃，1000×g下10分鐘)。收集上清液並貯存在-80℃直到測定病毒濃度。
病毒濃度的測定是按照M.Langlois等人在Iournal of Biological Standardization，14，201(1986)中的比色測定法的改進法進行的。
更具體地說，按上述同樣方法，將BHK-21/C13細胞胰酶消化並轉入96孔微滴定板的新鮮培養基中而得到每孔100μl的培養基中有20000細胞。在製備板上的細胞在37℃保溫2小時。在這期間，病毒樣品解凍而輕輕地聲處理15秒鐘，並製成對數稀釋樣品系(1/5序列50μl樣品加200μl BBMT培養基，序列稀釋是以多道吸管進行的。
在完成上面BHK-21/C13細胞的兩小時培養後，培養基以加有3%(V/V)FBS的α-MEM培養基代替。現在細胞已可以用各種病毒樣品稀釋液進行感染。將不同稀釋液的等分樣品(50μl)轉入試驗板的合適的孔中。所得感染細胞在37℃保溫2天。然後在每孔中加入50μl 0.15%(V/V)中性紅染料在Hank平衡鹽溶液(pH7.3，Gibco Canada Inc)中的溶液。製備好的試驗板在37℃保溫45分鐘。吸出每孔中的培養基，細胞用200μl Hank平衡鹽溶液洗一次。洗滌後，通過加入100μl 1∶1的0.1M索楞遜(Sorensen)檸檬酸鹽緩衝液(pH4.2)和乙醇的混合物後，染料由細胞中釋出。(索楞檸檬酸鹽緩衝液按下方式製備首先，在1N NaOH水溶液(200ml)中溶解一水檸檬酸(21g)而製備0.1M檸檬酸二鈉溶液，並加入足量的過濾水製成1升。然後，0.1M檸檬酸二鈉溶液(61.2ml)與0.1N HCl水溶液(38.8ml)混合，如需要，將所得溶液的pH調到4.2)。對孔中的混合液進行輕輕地旋渦動作以保證適當的混合。試驗板孔通過分光光度計板閱讀器(spectrophotometer plate reader)在540μm掃描以計算存活細胞數。在這情況下，對各種不同濃度試驗製劑可以測定其病毒生長抑制百分率，以及可以計算出達到50%抑制病毒複製的試驗製劑的濃度，即EC50。
結果下面表Ⅱ給出了按照本實施例細胞培養測定法評估式1的肽所得結果的實例。
表Ⅱ通式1的化合物 EC50μM實施例6的標題化合物 15PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH-(R)- 65CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OHPhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH-(R)- 60CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 56CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(S)-CH{CH2C(O)- 200(吡咯烷代)}C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 50(環戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 30CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe 亮氨醇Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)- 24CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3(1-丙環戊基)氨羰基-Tbg- 40CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)- 30(環戊基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3
實施例12對細胞培養基抑制HSV-2複製中無環鳥苷、實施例6的式1標題肽以及二製劑的結合物的比較下面表Ⅲ說明了按照實施例11的測定方法評估無環鳥苷、實施例6的標題肽以及兩者結合物時所得的結果。
表Ⅲ化合物 EC50評估樣品濃度的範圍 μM無環鳥苷*0.032 to 20 μM 3.5肽**1.23 to 100 μM 19無環鳥苷 0.32 to 20 μM 1.4+2μM 肽無環鳥苷 0.32 to 20 μM 0.9+4μM 肽無環鳥苷 0.32 to 20 μM 0.9+6μM 肽無環鳥苷 0.32 to 20 μM 0.8+8μM 肽無環鳥苷 0.32 to 20 μM 0.42+10μM 肽＊無環鳥苷得自Bourroughs Wellcome Inc.，Kirkland，Quebec，Canada＊＊實施例6的式1標題肽結果表明，在無環鳥苷和式1的肽之間有協同作用，將肽加到無環鳥苷所得的結合物其EC50大大低於單獨無環鳥苷所得的EC50。
無環鳥苷和式1的肽相結合的協同作用可通過對上述結果使用均等興奮方法(isobole method)而進一步說明，參見J.Suhnel，Aritiviral Research，13，23(1990)及其參考文獻。在這方法的使用中所得正結果在所附

圖1中圖示地說明。
實施例13本申請的式1肽的其它實施例綜合於下表Ⅳ和Ⅴ中，包括其特徵的質譜數據以及實施例10測試中的測試結果，即IC50;和實施例11的細胞培養測試的結果，即EC50。
表Ⅳ具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所規定的:
A-B EPr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CMe3679 0.28 14Pr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Et 679 0.24 16Pr2CHNHC(O) NHCH2-(R,S)-CH(Me)Et 665 0.29 50EtPr2CHNHC(O) NHCH2CHEt2679 0.41 42MePr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Et 693 0.36 29Pr2CHNHC(O) NHNHCMe3666 0.22 84Me(CH2=CHCH2)2- NHCH2CMe3691 0.27 30CNHC(O)MePr2CNHC(O) NHCH2CMe3678 0.28 26Pr2CHNHC(O) NHCH2-(cyclohexyl) 691 0.36 47EtPr2CNHC(O) NHCH2CMe3693 16(CH2=CHCH2)2- NHCH2CMe3661 0.37 100CHNHC(O)
表IV(續)具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所規定的:
A-B EBu2CHNHC(O) NHCH2CMe3693 0.53 65Pr2CHNHC(O) NH-(S)-CH(CMe3)CH2OH 695 0.23 48Me2PrCNHC(O) NHCH2CMe3651 0.39 58Pr2CHNHC(O) NHCH2CEt2Me 693 0.34 18Pr2CHNHC(O) NHCMe2CMe3693 0.51 38(CH2=CHCH2)2- NH-(R)-CH(Me)CMe3675 0.32 48CHNHC(O)Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)C(Me)2- 693 0.50 21EtPr2CHNHC(O) cis-NH-(2-甲基- 691 0.67 75環己基)Pr2CHNHC(O) trans-NH-(2-甲基- 691 0.69 60環己基)(R,S)-EtPrCH- NHCH2CMe3651 0.23 35NHC(O)(R,S)-EtBuCH- NHCH2CMe3665 0.26 35NHC(O)Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Et)CMe3693 0.34 10Pr2CHNHC(O) NH-(2,2-二甲基- 706 0.40 24環己基)EtPr2CNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CMe3708 0.41 10Pr2CHNHC(O) NHCH2CMe2Pr 694 0.42 35
表IV(續)具有通式A-B-Tbg-CH2-(R)-CH- FAB/MS IC50EC50(CH2C(O)Me3)C(O)-Asp(cyPn)-E的 (m/z) μM μM式1化合物 (M+H)+其中A-B和E是如下所規定的:
A-B EPr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3694 0.37 14Pr2CHNHC(O) NHCH2CH2CMe3701*0.58 72Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Pr)CMe3707 0.43 15Pr2CHNHC(O) NH-(2,2-二甲基- 691 0.38 31環戊基)Pr2CHNHC(O) NH-N(Me)CMe3680 0.27 110Pr2CHNHC(O) NHCH2CEt3707 0.52 19EtPr2CNHC(O) NH-(R)-CH(Et)CMe3722 0.36 6Pr2CHNHC(O) NH-(R)-CH(Me)CHEt2693 0.33 16Pr2CHNHC(O) NHN(Et)CMe3694 0.22 80*(M+Na)表V通式1的化合物 FAB/MS IC50EC50(m/z) μM μM(M+H)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 673*0.36 39C(O)CHMe2)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH- 679 80(CH2C(O)CH2CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-Leu-OH
表V(續)通式1的化合物 FAB/MS IC50EC50(m/z) μM μM(M+H)+Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 691 0.37 61C(O)-(環己基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 663 0.31 46C(O)-(環丁基)}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 651 0.30 62C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-allyl}-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 653 0.25 46C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Pr}-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2- 679 0.21 33C(O)CMe2Et)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-CMe3Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2- 691 0.24 35C(O)-(1-甲環戊基}C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)-C(O)- 693 0.25 13CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp-(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3Pr2CHNHC(O)-Val-CH2-(R)-CH(CH2- 665 0.22 37C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3＊(M+Na)
權利要求
1.通式1的肽，或其治療上可用鹽，其中A是苯基(低級)鏈烷醯基；在其芳基部分用低級烷基、氨基、滷素、羥基或低級烷氧基單取代的苯基(低級)鏈烷醯基；用苯基或單取代苯基雙取代的低級鏈烷醯基，其中，單取代的基選自低級烷基、氨基、滷素、羥基或低級烷氧基；或者是{苯基(低級)-烷基}氨羰基}；而B是N(CH3)-CHR4(CO)其中R4是低級烷基；或A和B一起形成通式為R5-NH-C(O)的飽和或未飽和的烷基氨羰基，其中R5是(2-10C)-烷基、低級環烷基、1-(低級烷基)-(低級環烷基)、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基或1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基；D是NH-CHR6C(O)，其中R6是低級烷基或用羧基、羥基、巰基或苄氧基取代的低級烷基；R1是低級烷基、低級環烷基、1-(低級烷基)-(低級環烷基)，或NR7R8，其中R7是氫原子或低級烷基而R8是低級烷基，或R7和R8與和它們相連的氮原子一起形成吡咯烷代、哌啶子基、嗎啉代或4-甲基哌嗪代；R2是氫或低級烷基而R3是低級烷基，或者R2是氫而R3是低級烷烯基或苯基-(1-4)烷基，或者R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成低級環烷基；E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基；低級環烷基；以低級烷基或(低級烷基)-(低級環烷基)單取代或雙取代的低級環烷基；或E是NHNR10R11，其中R10是氫或低級烷基而R11是(4-9C)烷基；或者E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基；低級環烷基或(低級環烷基)-(低級烷基)和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是低級烷基。
2.按權利要求1定義的肽，或其治療上可用鹽，其中A是苯基(低級)鏈烷醯基;(4-氨苯基)-(低級)-鏈烷醯基;(4-滷代苯)-(低級)鏈烷醯基，(4-羥苯基)-(低級)鏈烷醯基;｛4-(低級烷氧基)苯基｝-(低級)鏈烷醯基;用苯基、4-滷代苯基或4-(低級烷氧基)苯基雙取代的低級鏈烷醯基，或者苯基(低級)烷基氨羰基;而B是(N-Me)Val，(N-Me)Ile或(N-Me)Tbg;或者A和B一起形成飽和或未飽和的通式為R5-NH-C(O)的烷基氨羰基，其中R5如權利要求1所定義的;D是(S)-2-氨基-3-羥基-3-甲丁酸或(R)-2-氨基-3-巰基-3-甲丁酸的胺基酸殘基或是選自Val、Ile、Tbg和β-EtNva的胺基酸殘基，R1是低級烷基、低級環烷基、1-(低級烷基)-(低級環烷基)、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2和R3如權利要求1所定義的;而E是NHR9，其中R9是(4-9C)烷基;低級環烷基;以低級烷基單取代或雙取代的低級環烷基;或(低級烷基)-(低級環烷基);或E是NHNR10R11，其中R10是氫、甲基或乙基而R11是(4-9C)烷基;或E是NHCH(R12)-Z，其中R12是(4-9C)烷基或(低級環烷基)-甲基而Z是如權利要求1所定義的。
3.權利要求2所定義的肽或其治療上可用鹽，其中A是苯乙醯基、苯丙醯基、(4-氨苯基)-丙醯基、(4-氟苯基)丙醯基、(4-羥苯基)丙醯基、(4-甲氧苯基)丙醯基、2-(苯甲基)-3-苯丙醯基、2-｛(4-氟苯基)甲基｝-3-(4-氟苯基)-丙醯基、2-｛(4-甲氧苯基)甲基｝-3-(4-甲氧苯基)丙醯基或苄氨羰基;B是(N-Me)-Val或(N-Me)-Ile;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環丁基、環戊基、環己基、1-甲環戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或苄基，含有R2和R3的碳原子具有(R)-構型，或R2和R3分別各為甲基或乙基，或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環丁基、環戊基或環己基;而E是NHR9，其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基，1(R)-乙基-2，2-二甲丙基，2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1(R)-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基，順-或反-2-甲環己基、2，2-二甲環己基或環己甲基;或者E是NHR10R11，其中R10是氫、甲基、或乙基而R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-構型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2，甲丙基、2，2-二甲丙基或環己基甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、CONH2或C(O)OR13其中R13是甲基、乙基或丙基。
4.按權利要求2所定義的肽，或其治療上可用鹽，其中A和B一起形成飽和或未飽和的烷基氨羰基，它選自丁氨羰基、1-甲乙基氨羰基、1-甲丙基氨羰基、1-乙丙基氨羰基、1，1-二甲丁基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、1-乙戊基氨羰基、1-丁戊基氨羰基、2-乙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙丁基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基、(1-丙環戊基)氨羰基、(1-丙環己基)氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基、1-甲基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯氨羰基和1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;D是Val、Ile或Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環丁基、環戊基、環己基、1-甲環戊基、NMe2、NEt2、吡咯烷代或嗎啉代;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、1，1-二甲乙基、丙基、2-丙烯基或苄基，而含R2和R3的碳原子有(R)-構型，或R2和R3各分別為甲基或乙基，或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環丁基、環戊基或環己基;而E是NHR9，其中R9是2-甲丙基、2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1，1，2，2-四甲丙基、1-(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2-(R，S)-甲丁基、2，2-二甲丁基、3，3-二甲丁基、1(R)，2，2-三甲丁基、1(R)，3，3-三甲丁基、2-乙丁基、2，2-二乙丁基、2-乙基-1-甲丁基、2-乙基-2-甲丁基、1(R)-乙基-3，3-二甲丁基、2，2-二甲戊基、順-或反-二甲環己基、2，2-二甲環己基或環己基甲基;或者E是NHNR10R11，其中R10是氫、甲基或乙基而R11是1，1-二甲乙基;或E是NHCH(R12)-Z，其中含R12的碳原子有(S)-構型，R12是1，1-二甲乙基、1-甲丙基、2-甲丙基、2，2-二甲丙基或環己甲基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基、乙基或丙基。
5.按權利要求3定義的肽，或其治療上可用鹽，其中A是苯丙醯基、2-(苯甲基)-3-苯丙醯基或苄氨羰基;B是(N-Me)Val;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環丁基、環戊基、環己基或1-甲環戊基;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或苄基而含R2和R3的碳原子有(R)-構型，或R2和R3各分別為甲基或乙基或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環丁基、環戊基或環己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-二甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基，或E是NHCH(R12)-Z，其中含有R12的碳原子有(S)-構型，R12是2，2-二甲丙基而Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基乙基或丙基。
6.按權利要求4所定義的肽或其治療上可用鹽，其中A和B一起形成飽和或未飽和的烷基氨羰基，它選自1-乙丙基氨羰基、1-乙丁基氨羰基、1-丙丁基氨羰基、2-乙戊基氨羰基、1-甲基-1-丙丁基氨羰基、1-乙基-1-丙基氨羰基、1，1-二丙丁基氨羰基(1-丙環戊基)-氨羰基、1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基以及1-乙基-1-(2-丙烯基)-3-丁烯基氨羰基;D是Tbg;R1是1-甲乙基、1，1-二甲乙基、1-甲丙基、1，1-二甲丙基、2，2-二甲丙基、環丁基、環戊基、環己基或1-甲環戊基;R2是氫而R3是甲基、乙基、1-甲乙基、丙基或苄基，含有R2和R3的碳原子有(R)-構型，或者R2和R3各分別為甲基或乙基，或R2和R3與和它們相連的碳原子一起形成環丁基、環戊基或環己基;而E是NHR9，其中R9是2，2-二甲丙基、1(R)，2，2-三甲丙基、1(R)-乙基-2，2-二甲丙基、2，2-二甲丁基或1(R)-乙基-3，3-二甲丁基或E是NHCH(R12)-Z，其中含R12的碳原子有(S)-構型，R12是2，2-二甲丙基和Z是CH2OH、C(O)OH、C(O)NH2或C(O)OR13，其中R13是甲基、乙基或丙基。
7.按權利要求1定義的肽是選自以下PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(環戊基)｝C(O)-Asp-(cyPn)-NHCH2CMe3，PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(吡咯烷代)｝-C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-NH2，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(cyclopentyl)}-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Et2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Me}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(1-丙環戊基)氨羰基-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH｛CH2C(O)-(環戊基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Et，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-(R，S)-CH(Me)Et，EtPr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CHEt2，MePr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHNHCMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHNHCMe3，Me(CH2＝CHCH2)2-CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，MePr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2-(環己基)，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(CH2＝CHCH2)2-CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Bu2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(S)-CH(CMe3)CH2OH，Me2PrCNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CEt2Me，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCMe2CMe3，(CH2＝CHCH2)2-CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)C(Me)2Et，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-cis-NH-(2-甲環己基)，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-trans-NH-(2-甲環己基)，(R，S)-EtPrCH-NHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，(R，S)-EtBuCH-NHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-(2，2-二甲環己基)，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Pr，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Pr)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(2，2-二甲環戊基)，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-N(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CEt3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CHEt2，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHN(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CHMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CH2CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-Leu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(環己基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(環己基)｝-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-allyl}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp{(R)-Pr}-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe2Et)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(1-甲基-環戊基｝C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)-C(O)-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，andPr2CHNHC(O)-Val-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3.
8.一種藥物組合物，它含有抗皰疹病毒有效量的權利要求1中定義的肽，或其治療上可用鹽，以及藥物上或獸醫上可用的載體。
9.一種化妝組合物，它含有權利要求1中所定義的肽或其治療上可用鹽以及生理上可接受的適用於局部使用的載體。
10.一種治療哺乳動物的皰疹病毒感染的方法，包括對哺乳動物以一種抗皰疹病毒有效量的權利要求1所定義的肽或一種其治療上可用的鹽給藥。
11.一種抑制皰疹病毒複製的方法，將病毒與一種皰疹病毒核糖核苷酸還原酶抑制量的通式1的肽或其治療上可用鹽相接觸。
12.一種藥物組合物，含有一種藥物上或獸醫上可用載體，以及有效量的一種抗病毒核苷類似物或其治療上可用鹽和一種權利要求1所定義的核糖核苷酸還原酶抑制肽或其藥物上可用鹽的結合物。
13.按權利要求12的一種藥物組合物，其中核苷類似物是通式2的化合物或其治療上可用鹽
其中R14是氫、羥基或氨基。
14.按權利要求12的藥物組合物，其中抗病毒核苷類似物選自阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羥甲無環鳥苷、依多西啶、布羅瓦維、弗西它平、潘西克羅維、法西克羅維、洛西克羅維。
15.一種治療哺乳動物的皰疹病毒感染的方法，包括對它施用一種有效量的一種抗病毒核苷類似物或其治療上可用鹽和權利要求1的通式1的核糖核苷酸還原酶抑制肽或其治療上可用鹽的結合物。
16.按權利要求15的方法，其中核苷類似物和通式1的肽是按順序地或同時給藥。
17.按權利要求15的方法，其中結合物是局部給藥。
18.按權利要求15的方法，其中抗病毒核苷類似物是選自無環鳥苷、6-脫氧無環鳥苷、2，6-二氨基-9-｛(2-羥乙氧基)甲基｝嘌呤、阿糖腺苷、碘苷、三氟胸苷、羥甲無環鳥苷、依多西啶、布羅瓦維、弗西它平、潘西克羅維、法西克羅維、洛西克羅維。
19.一種治療哺乳動物的皰疹單純性病毒型1或型2感染的方法包括對其施用一種有效量的權利要求8的藥物組合物，其中組合物的通式1的肽選自以下PhCH2CH2C(O)-(N-Me)Val-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMeLeu-OH，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-γMe亮氨醇，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH2CH2CMe3，(1-丙環戊基)氨羰基-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH{CH2C(O)-(cyclopentyl)}-C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NHCH2CMe2Et，EtPr2CHNC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CEt2Me，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CH2CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Pr)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NHCH2CEt3，EtPr2CNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Et)CMe3，Pr2CHNHC(O)-Tbg-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-NH-(R)-CH(Me)CHEt2，andPr2CHNHC(O)-NH-(S)-CH(CMe2Et)C(O)-CH2-(R)-CH(CH2C(O)CMe3)C(O)-Asp(cyPn)-NH-(R)-CH(Me)CMe3.
20.按權利要求1所定義的肽或其治療上可用鹽的肽的製備方法，包括a)按肽、胺基酸或胺基酸殘基的、以及肽的非肽碎片的順序的次序逐步偶合，其中ⅰ)殘基或碎片的反應側鏈基團用適宜的保護基保護以阻止其在該位點上所產生的化學反應，直到逐步偶合完成後最終除去保護基為止;ⅱ)偶合反應物的α-氨基以α-氨基保護基保護，而反應物的游離羧基與第二反應物的游離α-氨基偶合;α-氨基保護基是一種可以選擇性地除去以使在該α-氨基上可以進行其後的偶合步驟;ⅲ)胺基酸殘基或肽片段的C-端羧基是成為保護的C-端功能團，如果有，則要用一合適的保護基保護，該保護基將阻止在該位點上發生的化學反應，直到肽所要的胺基酸順序已裝配後為止;b)在偶合完成後，除去任何保護基，如需要，進行標準轉化以得到權利要求1的肽，並且如必要，將肽轉化成治療上可用鹽。
全文摘要
本文公開了通式為A—B—D—CH
文檔編號C07K5/04GK1096300SQ9310679
公開日1994年12月14日 申請日期1993年6月8日 優先權日1993年6月8日
發明者皮埃爾·L·博蘭尤, 尼爾·莫斯, 羅伯特·德澤爾, 雷蒙德·普蘭特 申請人:比奧·梅加·貝林格爾·英格海姆研究公司