氘代核苷衍生物的結晶的製作方法
2023-09-16 17:59:05 2
本發明屬於藥物結晶領域，涉及氘代核苷衍生物的結晶，具體涉及氘代索非布韋的結晶。
背景技術：
：吉利德在收購法莫賽特後，開發並上市了索非布韋(sofosbuvir)，2013年12月，FDA批准索非布韋作為聯合抗病毒治療方案的一部分治療C肝病毒感染；2014年1月，EC批准索非布韋聯合其它抗病毒藥物(利巴韋林和聚乙二醇化幹擾素α)治療基因型1-6慢性HCV感染。索非布韋的治療周期較長，通常需要12周-24周的療程，治療費用極其昂貴，目前全球僅有極少數患者能夠承受該治療並獲益，故仍需治療C肝感染的化合物。中國專利申請CN201410335039.9提供了一類氘代的核苷衍生物，其中實施例2製備的化合物5除了具有與索非布韋類似的體外細胞毒性和抗C肝病毒活性外，其藥代動力學參數更是顯著優於索非布韋，有望降低臨床的使用劑量，從而降低成本以讓更多患者受益。藥用化合物晶型的變化通常導致化合物具有不同的熔點、溶解度、吸溼性、穩定性、生物活性等，這些均是影響藥物製備的難易、儲存穩定性、製劑難易和生物利用度等的重要因素。當化合物存在多晶型時，由於特定多晶型物具有特異性的熱力學性質和穩定性，因此在製備的過程中，了解在各個劑型中應用的化合物的晶型是重要的，以保證生產過程應用相同形態的藥物。因此，保證化合物是單一的晶型或是一些晶型的已知混合物是必要的。在判斷何種多晶型物是優選的時候，必須比較它們的許多性質並且優選的多晶型物是基於許多物理性質做出選擇的。完全可能的是一種多晶型在某些方面如製備的難易、穩定性等被認為是關鍵性的條件下是優選的。在其它情況下，不同的多晶型物可能因更高的溶解度或優良的藥代動力學而優選。藥用化合物的新的多晶型物的發現提供了改善藥物物理特性的機會，即擴展了物質的全部性質，從而可以更好地指導化合物及其製劑的研究，因此本發明提供的式5化合物的多晶型物在藥物的製造及其它應用中有商業價值。技術實現要素：在一方面，本發明提供一種如式5所示化合物的Ⅰ型結晶，使用Cu-Kα輻射，其在X-射線粉末衍射(XRD)圖譜中，在2θ度數約為6.87、7.31、20.90處有衍射峰；典型地在2θ度數約為4.99、6.87、7.31、9.49、18.14、20.90處有衍射峰；進一步典型地在2θ度數約為4.78、4.99、6.60、6.87、7.31、8.22、8.84、9.49、18.14、20.64、20.90、21.97、23.49處有衍射峰。使用Cu-Kα輻射，Ⅰ型結晶的典型的XRD的譜圖具有如下特徵：編號2θ(度)相對強度(％)14.783.924.9911.936.602.146.8743.357.31100.068.224.278.845.889.4913.7918.1411.91020.645.91120.9050.41221.976.31323.494.1在本發明的一個實施方案中，Ⅰ型結晶具有基本上如圖1所示的粉末X-射線衍射圖譜。在本發明的一個實施方案中，Ⅰ型結晶具有基本上如圖2所示的DSC圖譜。再一方面，本發明提供一種Ⅰ型結晶的製備方法，包括：a)將無定形的索非布韋用二氯甲烷溶解；b)從二氯甲烷中分離出Ⅰ型結晶。其中步驟a)中二氯甲烷的量以能完全溶解索非布韋為宜。視需要，可進行攪拌析晶或靜置析晶。在本發明的一個具體實施方案中，在室溫下靜置析晶兩天。視需要，亦可加入少量Ⅰ型結晶的晶種進行析晶。步驟b)中分離得到結晶後，可進一步乾燥。在本發明的一個實施方案中，在50-60℃進行真空乾燥，乾燥時間優選為6-10小時。另一方面，本發明提供一種如式5所示化合物的Ⅱ型結晶，使用Cu-Kα輻射，其在X-射線粉末衍射(XRD)圖譜中，在2θ度數約為6.11、8.21、10.39、12.71、20.85處有衍射峰； 典型地在2θ度數約為6.11、8.21、10.39、10.87、12.19、12.71、13.76、14.11、16.85、17.19、17.70、17.98、18.83、19.39、19.81、20.14、20.85處有衍射峰；進一步典型地在2θ度數約為6.11、8.21、10.39、10.87、12.19、12.71、13.76、14.11、15.90、16.85、17.19、17.70、17.98、18.83、19.39、19.81、20.14、20.85、21.84、25.55、26.96、27.74、28.13處有衍射峰。使用Cu-Kα輻射，Ⅱ型結晶的典型的XRD的譜圖具有如下特徵：編號2θ(度)相對強度(％)16.1196.528.21100310.3955.1410.8714.9512.1914.5612.7155.2713.7614.6814.1114.9915.904.21016.8510.81117.1913.61217.7028.41317.9821.61418.8325.81519.3916.11619.8125.61720.1436.31820.8567.51921.8415.12025.5510.52126.9610.02227.745.32328.1312.9在本發明的一個實施方案中，Ⅱ型結晶具有基本上如圖3所示的粉末X-射線衍射圖譜。在本發明的一個實施方案中，Ⅱ型結晶具有基本上如圖4所示的DSC圖譜。再一方面，本發明提供一種Ⅱ型結晶的製備方法，包括：a)將無定形的索非布韋用乙酸乙酯溶解；b)從乙酸乙酯中分離出Ⅱ型結晶。其中步驟a)中乙酸乙酯的量以能完全溶解索非布韋為宜。視需要，可進行攪拌析晶或靜置析晶。在本發明的一個具體實施方案中，攪拌析晶3小時。步驟b)中分離得到結晶後，可進一步乾燥。在本發明的一個實施方案中，在50-60℃進行真空乾燥，乾燥時間優選為6-10小時。需要說明的是，在XRD中，由結晶化合物得到的衍射譜圖對於特定的晶型往往是特徵性的，其中譜帶(尤其是在低角度)的相對強度可能會因為結晶條件、粒徑和其它測定條件的差異而產生的優勢取向效果而變化。因此，衍射峰的相對強度對所針對的晶型並非是特徵性的，判斷是否與已知的晶型相同時，更應該注意的是峰的相對位置而不是它們的相對強度。在XRD圖譜中通常用2θ角或晶面距d表示峰位置，由於2θ角與入射X射線的波長有關，兩者之間具有簡單的換算關係：d＝λ/2sinθ，其中d代表晶面距，λ代表入射X射線的波長(對於Cu-Ka，)，θ為衍射角。對於同種化合物的同種晶型，其XRD譜圖在整體上具有相似性，表徵峰位置的2θ角誤差一般在±2％之內，例如由於分析樣品時溫度的變化、樣品移動或儀器的標定等，峰的位置可能移動；相對強度誤差可較大，但變化趨勢一致。另外，判斷晶型是否一樣時應注意保持整體觀念，因為並不是一條衍射線代表一個物相，而是一套特定的「d-I/I1」數據才代表某一物相。還應指出的是，在混合物的鑑定中，由於含量下降等因素會造成部分衍射線的缺失，此時，無需依賴高純試樣中觀察到的全部譜帶，甚至幾條譜帶也可能對給定的結晶是特徵性的。又一方面，本發明提供上述Ⅰ型結晶或Ⅱ型結晶的結晶組合物。其中Ⅰ型結晶的結晶組合物是指，組合物中Ⅰ型結晶佔組合物重量的50％以上，優選在80％以上，更優選在90％以上，最優選在95％以上，該組合物中可含有少量化合物5的其他結晶或無定形物，包括但不限於化合物5的Ⅱ型結晶或無定形物。Ⅱ型結晶的結晶組合物是指，組合物中Ⅱ型結晶佔組合物重量的50％以上，優選在80％以上，更優選在90％以上，最優選在95％以上，該組合物中可含有少量化合物5的其他結晶或無定形物，包括但不限於化合物5的Ⅰ型結晶或無定形物。再一方面，本發明提供一種藥物組合物，其包含上述結晶或結晶組合物。任選的，所述藥物組合物還可包括藥學上可接受的輔料。藥學上可接受的輔料是本領域技術人員所公知的，例如參見崔福德主編的《藥劑學》第6版裡面列舉的常用輔料。本發明的藥物組合物可通過多種方式給藥，給藥方式包括但不限於靜脈內、腹膜內、皮下、肌內或口服給藥，優選採用口服給藥的方式。給藥頻率為每天兩次、每天一次、每周一次或兩周一次，優選為每天一次。給藥劑量為每次100-1000mg，優選為每次400mg。在本發明的一個具體實施方案中，所述藥物組合物的劑型為片劑，其包含400mg的索非布韋I型結晶、膠態二氧化矽、交聯羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂、甘露醇和微晶纖維素。在本發明的另一個具體實施方案中，所述藥物組合物的劑型為片劑，其包含400mg的索非布韋Ⅱ型結晶、膠態二氧化矽、交聯羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂、甘露醇和微晶纖維素。又一方面，本發明提供上述結晶、結晶組合物或藥物組合物在製備抗慢性C肝(CHC)的藥物中的用途，尤其是在製備抗基因型1、2、3或4的慢性C肝的藥物中的用途。本發明提供的結晶，不僅純度高，而且穩定性好，滿足藥物製備、生產的要求。附圖說明圖1：化合物5的I型結晶的粉末X-射線衍射圖譜。圖2：化合物5的I型結晶的DSC圖譜。圖3：化合物5的Ⅱ型結晶的粉末X-射線衍射圖譜。圖4：化合物5的Ⅱ型結晶的DSC圖譜。圖5：化合物5的無定形形式的粉末X-射線衍射圖譜。具體實施方式下面將結合實施例對本發明作進一步的說明，可以使本領域技術人員更全面的理解本發明，它們不應該被認為是對本發明範圍的限制，而只是本發明的示例性說明和典型代表。實施例1化合物5的無定形形式的製備參照CN201410335039.9實施例2的方法，以10倍規模製備化合物5，得到化合物5(6.8g)，對其進行粉末X-射線衍射圖譜表徵，為無定形形式，具體參見圖5。實施例2化合物5的Ⅰ型結晶的製備稱取1g實施例1獲得的無定形化合物5，將其用8ml二氯甲烷溶解，靜置兩天，析出固體後抽濾，濾餅50℃真空乾燥8小時。其粉末X-射線衍射圖譜具體參見圖1；其DSC圖譜具體參見圖2。實施例3化合物5的Ⅱ型結晶的製備稱取1g實施例1獲得的無定形化合物5，將其用8ml乙酸乙酯溶解，室溫攪拌3小時，析出固體後抽濾，濾餅50℃真空乾燥8小時。其粉末X-射線衍射圖譜具體參見圖3；其DSC圖譜具體參見圖4。實施例4體外抗肝病毒活性評價實驗方法：化合物進行1:3系列稀釋8個濃度點，雙復孔，加入96孔板中。將HCV-1b複製子細胞懸浮在含10％FBS的培養液中，以每孔8000個細胞的密度種到含有化合物的96孔板中。細胞在5％CO2、37℃條件下培養3天。加入細胞活力檢測試劑，半小時後檢測螢光信號(RFU，細胞活力原始數據)。隨後向每孔細胞中加入螢光素酶發光底物Bright-Glo，5分鐘後用化學發光檢測系統檢測化學發光信號值RLU。分析原始數據RFU和RLU，計算HCV-1b複製子細胞的活力百分比及化合物對HCVGT1b基因型複製子的抑制活性百分比。應用GraphPadPrism軟體對抑制活性和細胞活力百分比數據進行非線性擬合，計算化合物的EC50和CC50。實驗結果：索非布韋、化合物5體外抑制細胞活力的CC50均大於1000nM，對HCVGT1b基因型複製子抑制活性的EC50分別為104.9、119.2nM(見表1)。表1化合物體外細胞毒性與抗C肝病毒活性實施例5大鼠體內的藥代動力學評價實驗方法：9隻雄性SD大鼠隨機分成3組，每組3隻，自由飲水，禁食約16h後分別灌胃給予50mg/kg的索非布韋、化合物5，給藥後保持禁食4小時。分別於給藥後0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、24h於眼眶取血0.1mL，EDTA-K2抗凝，4℃，4000rpm，10min離心分離血漿。採用LC-MS/MS法測定血漿中主要代謝產物GS-331007。本方法使用地西泮作為內標，採用蛋白沉澱法從20μl大鼠血漿中提取出GS-331007和內標，採用反相色譜柱分離GS-331007和內標，並使用串聯四級杆質譜儀的電噴霧離子化方式(ESI)進行定量分析。GS-331007的標準曲線範圍為5.00-5000ng/ml。實驗結果：大鼠分別灌胃給予50mg/kg索非布韋、化合物5後，GS-331007的AUC0-24h分別為4640和6392ng*h/mL，Cmax分別為873和1159ng/mL。以代謝物GS-331007計，化合物5的相對生物利用度分別為137.75％(見表2)。表2大鼠灌胃給予50mg/kg索非布韋、化合物5後GS-331007的藥代動力學參數當前第1頁1 2 3