快速檢測四環素、金黴素、土黴素與多西環素殘留的四聯膠體金免疫層析試紙條及其製備方法
2023-09-17 03:30:20 1
專利名稱：快速檢測四環素、金黴素、土黴素與多西環素殘留的四聯膠體金免疫層析試紙條及其製備方法
技術領域：
本發明屬於獸藥殘留免疫學快速檢測技術領域。具體涉及四環素類藥物殘留的多聯檢免疫層析快速檢測膠體金試紙條及其製備方法。
背景技術：
四環素類抗生素(TCs)，包括四環素(Tetracycline，TC)、金黴素 (Chlortetracycline, CTC) > ΜΜ (Oxytetracycline, OTC)、多西環素(Doxycycline， D0X)等是放線菌屬所產生的一類鹼性廣譜抗生素及半合成的抗生素，它們均是氫化並四苯的衍生物，具有共同的基本母核，化學結構僅取代基有所不同。在實際工作中，由於隨意加大使用劑量和不遵守休藥期，造成四環素類藥物在動物源性組織中殘留。四環素類藥物長期殘留在動物組織中，導致耐藥菌在人類之間傳播，嚴重損害人體健康。很多國家和國際組織通過建立動物性食品中獸藥殘留的有效檢測方法，來控制藥物殘留問題。如，我國和歐盟對四環素類藥物在動物組織中殘留最高殘留限量(MRL)作了明確規定肌肉、肝臟和腎臟的MRL分別為100 Pg/kg、300 Pg/kg和600 Pg/kg。為了控制獸藥殘留，保障人類健康，有必要建立一種快速、有效的殘留檢測方法對其殘留進行監測。目前在動物性食品中四環素類藥物的分析檢測方法有很多，包括高效液相色譜法、薄層色譜法、液相色譜-質譜聯用法、微生物法、酶聯免疫法。但微生物方法存在檢測時間長、缺乏特異性，容易導致假陽性和假陰性產生。儀器檢測主要存在儀器購置費用昂貴、 樣品前處理複雜、程序繁瑣費時、檢測費用高、不能現場操作等缺陷，所以在生產中應用受到限制。ELISA方法靈敏度高、成本低，在藥物殘留檢測中應用也很廣泛，但該方法需要酶標儀等實驗室設備，分析時間長，在應用中有局限性。近年來，膠體金免疫層析技術(GICA) 與目前普遍採用的標記免疫分析技術相比，具有簡便快速，特異性強、敏感性高，肉眼判斷， 實驗結果易保存，無需特殊儀器設備等優點，因此GICA技術在藥物殘留檢測領域得到了廣泛應用。目前還沒有針對四環素、多西環素、金黴素和土黴素等藥物殘留多聯檢檢測的免疫膠體金試紙條及其製備方法報導。
發明內容
為解決以上技術問題，本發明的目的在於提供一種特異性強、靈敏度高、且操作簡單， 對樣品簡單處理即可同時檢測CTC、0TC、TC和D0X4種四環素類藥物殘留的4聯檢免疫膠體金試紙條。本發明目的之一是這樣實現的
一種快速檢測四環素、金黴素、土黴素與多西環素殘留的四聯膠體金免疫層析試紙條， 包括背板、吸水墊、硝酸纖維膜、結合墊、樣品墊，其特徵在於所述背板上依次連續粘附有吸水墊、硝酸纖維膜、結合墊和樣品墊，所述樣品墊靠結合墊一端搭接在結合墊上，所述吸水墊上表面吸附有手控區封膜，所述樣品墊上表面吸附有樣品端封膜，所述硝酸纖維膜上包被有兔抗鼠的IgG質控線(C)和CTC-BSA、OTC-BSA、TC-BSA、DOX-BSA四條檢測線，CTC-BSA 即(Tl)、OTC-BSA即(T2)、TC-BSA即(T3)、DOX-BSA即(T4)；樣品墊(8)上包被有所述的抗CTC、OTC、TC、DOX藥物單克隆抗體-膠體金標記物。本發明目的之二是這樣實現的
一種快速檢測四環素、金黴素、土黴素與多西環素殘留的四聯膠體金免疫層析試紙條的製備方法，其關鍵在於按如下步驟進行
1)將半抗原CTC、OTC、TC和DOX採用赫夫曼消除反應後，再與牛血清白蛋白偶聯合成偶聯物 CTC-BSA、OTC-BSA、TC-BSA 和 DOX-BSA ；
2)將合成的偶聯物CTC-BSA、OTC-BSA,TC-BSA和DOX-BSA免疫原免疫小鼠，通過細胞融合篩選得到分泌抗CTC、0TC、TC和DOX藥物的單克隆抗體的細胞株，將細胞株注射小鼠腹腔，得到抗CTC、OTC、TC和DOX四株單克隆抗體；
3)用檸檬酸三鈉與氯金酸反應製備膠體金；
4)提取小鼠IgG免疫健康家兔，得到兔抗鼠IgG抗體；
5)將步驟2)製成的抗CTC、OTC、TC和DOX單克隆抗體加入步驟3)製備的膠體金中， 得到抗CTC、OTC、TC和DOX單克隆抗體與-膠體金標記物；
6)將抗CTC、OTC、TC和DOX單克隆抗體與-膠體金標記物包被在背板上；
7)將步驟1)合成01(、011(、11(和0( 與BSA 偶聯合成偶聯物 CTC-BSA、0TC-BSA、TC-BSA 和DOX-BSA包被在硝酸纖維膜得到檢測線四條，分別為Tl、T2、T3和T4 ；
7)將步驟4)製成的兔抗鼠IgG包被在硝酸纖維膜得到質控線(C) ；8)將手控區封膜、 吸水墊、硝酸纖維素膜結合墊、樣品墊和樣品端封膜依次粘貼在背板上。本發明選用樣品區的結合墊包被膠體金標記好的分別抗CTC、OTC、TC和DOX藥物的4株單克隆抗體，測試區的4條檢測線分別為CTC-BSA、OTC-BSA, TC-BSA和D0X-BSA，質控線為兔抗鼠IgG。其反應原理為競爭法將樣品液滴加到試紙條樣品墊上，樣品在毛細管作用下沿試紙條泳動，當泳動至金標墊時，固態化的金標抗單抗迅速溶解釋放，隨樣品一起沿試紙條泳動至檢測線，若樣品中含有CTC、0TC、TC和DOX，CTC,OTC,TC和DOX首先與金標抗CTC、0TC、TC和DOX單抗發生免疫反應，形成免疫複合物，抑制金標抗CTC、0TC、TC和DOX 單抗與檢測線(Tl、T2、T3和T4)包被的CTC-BSA、OTC-BSA, TC-BSA和D0X-BSA偶聯物的結合，使檢測線截獲的金標抗體的量減少，T線顏色變淺，當樣品中CTC、0TC、TC和DOX的量足夠大時，檢測線將無顏色出現，金標單抗穿過檢測線與被包被於C線的兔抗鼠IgG截獲C線出現紅色條帶；反之，若樣品中不含CTC、OTC、TC和DOX，金標抗CTC、OTC、TC和DOX單抗與包被於NC膜上的CTC-BSA、OTC-BSA、TC-BSA和DOX-BSA偶聯物發生特異性免疫反應而被截獲，在檢測線位置(Tl、T2、T3和T4)形成紅色條帶，即陰性結果，部分金標單抗穿過檢測線與被包被於C線的兔抗鼠IgG截獲，形成紅色條帶。有益效果本發明應用免疫學技術篩選出抗CTC、OTC、TC和DOX藥物的單克隆抗體，通過膠體金的製備及膠體金標記條件的探索研究，在應用抗CTC、0TC、TC和DOX藥物單克隆抗體和GICA技術研究建立抗四環素類藥物單克隆抗體快速檢測試紙條，並對其性能進行測定。試紙條檢測範圍較寬，假陽性低，檢測靈敏、準確、可靠，適用於動物可食性組織如肌肉、肝臟和腎臟等組織中CTC、OTC、TC和DOX等四環素類藥物殘留的多聯檢檢測。
圖1為本發明膠體金免疫層析試紙條的結構示意圖；圖2為本發明膠體金免疫層析試紙條檢測結果對比圖。
具體實施方式
實施例1、CTC、OTC、TC/D0X-載體蛋白偶聯物的製備
本發明包被原(CTC、0TC、TC、D0X-BSA)合成方法。分別準確稱取CTC、OTC、TC、DOX各 0. 2mmol溶解在3mL超純水中，然後將4 mL溴水鹼液加入CTC/0TC/TC/D0X溶液中，加熱反應2h，4°C預冷。在4°C避光條件下向上述反應體系中緩慢滴加lmol/L的鹽酸0. 6mL (調pH 至2)，在冰水浴中，邊攪拌邊逐滴加入現配的lmol/L NaNO2 0. 3mL，加完後置於4°C冰箱陰暗處孵育6h。按照20 1摩爾比，將340mg BSA(5X l(T6mol)溶於5mLPBS,將偶氮化CTC慢慢滴入BSA溶液中，加完後在4°C冰箱陰暗處孵育過夜。離心除去沉澱，取上清液用磷酸緩衝液(PBS)透析3d，每6h更換透析液，將所得產物低壓凍幹，於-20°C保存備用。2、抗CTC、OTC、TC、DOX單克隆抗體製備
2. 1動物免疫
用實施例1製備的免疫原(CTC-BSA、OTC-BSA, TC-BSA, D0X-BSA)分別免疫6周齡雌性Balb/c小鼠，每隻小鼠的免疫劑量為100 μδ/0. 2 mL。首次免疫，用無菌0.01 mol/L pH7. 4PBS溶解免疫原，再與等量弗氏完全佐劑混合，完全乳化，頸背部皮下分2 3點注射； 加強免疫，用0.01 mol/L PH7.4PBS溶解免疫原與等量弗氏不完全佐劑混合，充分乳化，小鼠腹腔注射。每次間隔1Γ21 d，第3次免疫後疒10 d開始對免疫小鼠尾靜脈採血，收集血清，用ELISA檢測小鼠血清效價。末次免疫後間隔4周以上，在細胞融合前3、d，分別對腹腔注射CTC、OTC、TC、DOX-BSA抗原100 μδ/0. 2 mL/只，注射後每天注意觀察，保證融合前小鼠狀態良好。2.2 CTC、0TC、TC、D0X 單克隆抗體製備
分離免疫小鼠的脾細胞，並進行勻漿製備免疫睥細胞。取1隻免疫的Balb/c小鼠，從眼眶放血分離血清作為陰性血清，處死。小鼠用75%酒精中浸泡5 min，進行整體消毒。將小鼠四肢固定，然後用鑷子夾住小鼠下腹部皮膚，剪開一小口，再用鑷子撕開皮膚，露出腹膜， 在腹膜上用剪刀(操作時要換一套鑷子和剪刀)剪一小口(在腹部中央)。剪開腹膜(換 1套鑷子和剪刀)，露出脾臟，用鑷子夾住脾臟(再換1套器械)，用剪刀將脾臟外膜剪破， 然後放入事先滅菌的勻漿器中。加適量基礎培養基(RPMI-1640)於勻漿器中，進行研磨，擠壓出脾細胞，取出勻漿器的勻漿棒，再補加適量基礎培養基(RPMI-1640)，靜置2 min，將上層細胞懸液吸取後，放入腹腔巨噬細胞離心管中，重複上述操作1次。1200 r/min離心10 min，除去上清。將IO8個免疫脾細胞與廣2X107個SP2/0骨髓瘤細胞按照1: 10或1: 5 的比例加入50 mL離心管中，進行混勻，然後於1500 r/min水平離心10 min，棄去上清。將離心管倒扣在滅菌的吸水紙上，把管中液體吸乾。用手指或桌面輕輕敲擊管底，讓沉澱的細胞鬆動，再把離心管置於37°C水浴鍋中。在1 min內緩慢將50%PEG 0.8 mL滴入離心管中， 邊加邊輕輕用吸管尖攪拌沉澱細胞。再繼續攪拌30 sec後，靜置1 min，然後慢慢加入40 mL 1640基礎培養基(事先進行37°C預溫)。加基礎培養基方法為第1 min內逐滴滴入 1 mL，第2 min內加2 mL，第3 min內加3 mL，第4 min內加其餘的4 mL，在每次加培養基時需緩慢加入，並輕輕地攪拌培養基，最後將剩餘的1640培養基慢慢加入。1000 r/min離心5 min，除去上清。然後用HAT培養基懸浮混合的細胞，再加入飼養脾細胞。根據需要補加適量的HAT培養基，混合均勻，再將含有飼養細胞的細胞融合液滴加到96孔細胞培養板上，滴加量約為150 μ L/孔。將培養板置於37°C、5%C02飽和溼度培養箱中，進行培養。用建立的間接ELISA篩選陽性細胞克隆。選擇強陽性集落生長的孔，用有限稀釋法進行克隆。 並對其他陽性孔，進行24孔擴大培養，用間接ELISA和間接競爭ELISA對擴大培養孔的上清液進行檢測，對間接ELISA和間接競爭ELISA均為陽性孔的細胞進行液氮冷凍保存。通過融合檢測，並進行3次亞克隆後獲得雜交瘤細胞株。雜交瘤細胞株經過多次傳代、凍存、 復甦，雜交瘤細胞分泌抗體穩定。進行雜交瘤細胞染色體的計數，將每株雜交瘤細胞隨機選擇20個細胞，進行細胞染色體條數的計數，再計算細胞染色體條數的平均值。小鼠脾細胞染色體數為40條，SP2/0細胞的染色體數目平均數為62飛8條，而本試驗獲得的20株雜交瘤細胞染色體數目都在92 103條之間，平均為97. 8條。本雜交瘤細胞染色體數目高於兩親本細胞的染色體數目，說明是兩種細胞的雜交產物。取細胞株細胞分泌的培養上清液，進行1:10稀釋後，用夾心ELISA方法測定抗體亞型，該細胞株分泌的抗體亞型為IgGl。採用辛酸一硫酸銨法對小鼠腹水進行純化。該單克隆抗體可用於製備膠體金。2. 3兔抗鼠IgG抗體的製備
用Balb/C小鼠IgG免疫健康紐西蘭大白兔，製備高效價的兔抗鼠IgG高免血清，採用飽和硫酸銨沉澱法對血清進行粗提，經G-200過柱後得到高純度的兔抗鼠IgG。利用兔抗鼠 IgG作為質控線。3、抗CTC、OTC、TC、DOX單克隆抗體-膠體金標記物的製備膠體金的製備
量取去離子水100 mL，移入500 mL的平底燒瓶中，將燒瓶置於磁力攪拌器的加熱套內， 打開攪拌旋鈕和加熱旋鈕，加熱至沸騰。加入1% HAuC14溶液1.0 mL，繼續加熱2 min，然後按表5-1所示體積一次性迅速加入1%檸檬酸三鈉溶液，繼續加熱。待溶液變為亮紅色或橙紅色後，再繼續加熱攪拌15 min。關掉加熱旋扭，冷卻至室溫，過濾備用。3. 2抗CTC、OTC、TC、DOX單克隆抗體-膠體金標記物的製備與純化
於50 mL的小燒杯中加入30 mL的膠體金，用0. 1 mol/L K2CO3適量調pH達到最佳標記PH值，在攪拌的狀態下，緩慢加入一定量稀釋好的抗CTC、OTC、TC、DOX單克隆抗體，繼續攪拌30 min;加10% BSA使其終濃度為1%，攪拌30 min ;4°C放置2 h後，將以上膠體金標記物分裝，以2 000 r/min離心15 min，取上清，棄去沉澱；以10 000 r/min離心30 min, 棄上清，加入標記洗滌液到原體積；再次以10 000 r/min離心30 min，棄上清，加入標記洗滌液到原體積；以10 000 r/min離心30 min，棄上清，沉澱用1. 0 mL標記洗滌液進行重懸， 然後置4°C冰箱。金標墊的製備
分別剪取規格為20X4 mm的玻璃纖維棉，然後將上述4種金標抗體複合物溶液用 ZX1000噴點平臺系統均勻噴灑於玻璃纖維棉上，置於37 °C乾燥1 h，加入乾燥劑密封保存，後置於4 °C冰箱。硝酸纖維膜(NC膜)的製備
將NC膜置於ZX1000噴點平臺系統上，將濃度為0. 1 mg/mL的完全抗原CTC/0TC/TC/DOX-BSA放於貯存池A，濃度為0. 5 mg/mL的GaMIgG放於貯存池B。將NC膜展平，放上壓條，質控線與檢測線位於膜的中間相距0.5 cm，其距膜的邊距為0.75 cm。開機後，噴點平臺系統將完全抗原CTC/0TC/TC/D0X-BSA和兔抗鼠IgG分別點射於NC膜上，形成4條檢測線和1條質控線，置室溫自然乾燥後，加入乾燥劑密封，置於4 °C保存，備用。檢測試紙條的組裝
將背板、樣品端封膜(9)、結合墊、硝酸纖維膜(4)、吸水墊和手控區封膜(1)組裝到一起。將組裝的半成品試紙條放入試紙條切割機槽內進行切割，然後將製備成品的試紙條註明生產時間和批次，置4 °C保存(密封)。4、檢測CTC/0TC/TC/D0X的免疫膠體金試紙條的使用方法 4. 1組織樣品預處理
將豬肌肉、肝臟、腎臟等待檢組織樣品勻漿，取2 g加入4 mL乙酸乙酯振蕩2 min，室溫3000 r/min離心5 min，取300 μ L上層液體於1. 5 mL離心管中80°C水浴蒸乾(大約 30 min)或在氮氣流下吹乾，用150 μ L稀釋液溶解殘留物。4. 2檢測結果判定
如圖1、圖2所示，一種快速檢測四環素、金黴素、土黴素與多西環素殘留的四聯膠體金免疫層析試紙條，包括背板2、吸水墊3、硝酸纖維膜4、結合墊7、樣品墊8，所述背板2上依次連續粘附有吸水墊3、硝酸纖維膜4、結合墊7和樣品墊8，所述樣品墊8靠結合墊7—端搭接在結合墊7上，所述吸水墊3上表面吸附有手控區封膜1，所述樣品墊8上表面吸附有樣品端封膜9，所述硝酸纖維膜4上包被有兔抗鼠的IgG質控線(C)5和CTC-BSA、0TC-BSA、 TC-BSA、DOX-BSA四條檢測線6。其中質控線(C)5靠近吸水墊3，CTC-BSA、OTC-BSA、TC-BSA、 DOX-BSA四條檢測線6分別為Tl、T2、T3、T4。NC膜上包被有CTC-BSA偶聯物、0TC-BSA偶聯物、TC-BSA偶聯物、D0X-BSA偶聯物和兔抗鼠IgG，分別作為檢測線(T1、T2、T3、T4)和質控線(C)。金標墊上分別塗布有固態化的金標抗CTC、金標抗OTC單抗、金標抗TC單抗和金標抗DOX單抗的混合金標抗體作為示蹤物。將樣品液滴加到試紙條樣品墊上，樣品在毛細管作用下沿試紙條泳動，當泳動至金標墊時，固態化的金標抗單抗迅速溶解釋放，隨樣品一起沿試紙條泳動至檢測線，若樣品中含有 CTC、TC、0TC、D0X首先與金標抗CTC、0TC、TC、D0X單抗發生免疫反應，形成免疫複合物，抑制金標抗 CTC、OTC、TC、DOX 單抗與檢測線(Tl、T2、T3 和 T4)包被的 CTC、OTC、TC、DOX-BSA 偶聯物的結合，使檢測線截獲的金標抗體的量減少，T線顏色變淺，當樣品中CTC、0TC、TC、D0X 量足夠大時，檢測線將無顏色出現，金標單抗穿過檢測線與被包被於C線的兔抗鼠IgG截獲 C線出現紅色條帶；反之，若樣品中不含CTC、OTC、TC、D0X,金標抗CTC、OTC、TC、DOX單抗與包被於NC膜上的CTC、0TC、TC、DOX-BSA偶聯物發生特異性免疫反應而被截獲，在檢測線位置(Tl、T2和T3)形成紅色條帶，即陰性結果，部分金標單抗穿過檢測線與被包被於C線的兔抗鼠IgG截獲，形成紅色條帶。5、本發明CTC/0TC/TC/D0X藥物檢測試紙條的應用、OTC、TC、DOX殘留4聯檢檢測試紙條的靈敏度測定
將CTC、0TC、TC、D0X配成濃度分別為0、5、10、20、40、80 μ§/1的標準品，分別加到試紙條的樣品墊上，測試重複8次，靜置試紙條反應10 min，然後用BioDot-TSR3000讀條儀掃描檢測線的相對光密度值(G/Peak-ROD值)，機讀結果見表1。以不同濃度標準品與空白標準品相對光密度值的百分率(Β/Β0%)為縱坐標，以標準品不同濃度的常用對數值作為橫坐標，繪製檢測試紙條的標準曲線，求回歸方程，進行相關回歸分析，結果見表1。G/Peak-ROD 值進行統計學分析，當G/Peak-ROD值與0 ng/mL的標準品檢測線G/Peak-ROD值(B/BJ為 80%時，為機讀靈敏度，確定試紙條的檢測限。目測檢測方法建立在有紅色質控線出現的情況下，當試紙條與陰性對照試紙條檢測線顏色相似紅色條帶時判為陰性；當試紙條檢測線顏色明顯淺於陰性對照試紙條檢測線顏色時判為弱陽性；當試紙條檢測線位置無紅色條帶出現時判為陽性。在試紙條沒有出現紅色質控線的情況下，說明試紙條已失效，此時不管檢測線顏色的深淺和有無，檢測結果都判為無效，應更換另一批次的試紙條重新檢測。
表1試紙條靈敏度試驗
聯檢殘留檢測試紙條的特異性試驗
以與四條檢測線相對應的藥物CTC、OTC、TC與DOX的交叉反應率為100%，分別計算四環素類藥物殘留四聯檢膠體金免疫層析快速檢測試紙條各檢測線與其它四環素類藥物的交叉反應率見表2。從表中可以看出，四環素類藥物殘留四聯檢膠體金免疫層析快速檢測試紙條與常用四環素類藥物的交叉反應率，說明該試紙條可用於CTC、0TC、TC和DOX等四種四環素類藥物殘留檢測。 表2四環素類藥物殘留四聯檢試紙條與四環素類藥物的交叉反應率
權利要求
1.一種快速檢測四環素、金黴素、土黴素與多西環素殘留的四聯膠體金免疫層析試紙條，包括背板(2)、吸水墊(3)、硝酸纖維膜(4)、結合墊(7)、樣品墊(8)，其特徵在於所述背板(2)上依次連續粘附有吸水墊(3)、硝酸纖維膜(4)、結合墊(7)和樣品墊(8)，所述樣品墊(8 )靠結合墊(7 ) 一端搭接在結合墊(7 )上，所述吸水墊(3 )上表面吸附有手控區封膜 (1)，所述樣品墊(8)上表面吸附有樣品端封膜(9)，所述硝酸纖維膜(4)上包被有兔抗鼠的 IgG質控線(5)和CTC-BSA、OTC-BSA、TC-BSA、DOX-BSA四條檢測線(6)；樣品墊(8)上包被有所述的抗CTC、OTC、TC、DOX藥物單克隆抗體-膠體金標記物。
2.—種權利要求1所述快速檢測四環素、金黴素、土黴素與多西環素殘留的四聯膠體金免疫層析試紙條的製備方法，其特徵在於按如下步驟進行1)將半抗原CTC、OTC、TC和DOX採用赫夫曼消除反應後，再與牛血清白蛋白偶聯合成偶聯物 CTC-BSA、OTC-BSA、TC-BSA 和 DOX-BSA ；2)將合成的偶聯物CTC-BSA、OTC-BSA,TC-BSA和DOX-BSA免疫原免疫小鼠，通過細胞融合篩選得到分泌抗CTC、0TC、TC和DOX藥物的單克隆抗體的細胞株，將細胞株注射小鼠腹腔，得到抗CTC、OTC、TC和DOX四株單克隆抗體；3)用檸檬酸三鈉與氯金酸反應製備膠體金；4)提取小鼠IgG免疫健康家兔，得到兔抗鼠IgG抗體；5)將步驟2)製成的抗CTC、OTC、TC和DOX單克隆抗體加入步驟3)製備的膠體金中， 得到抗CTC、OTC、TC和DOX單克隆抗體與-膠體金標記物；6)將抗CTC、OTC、TC和DOX單克隆抗體與-膠體金標記物包被在背板上；7)將步驟1)合成01(、011(、11(和0( 與BSA 偶聯合成偶聯物 CTC-BSA、0TC-BSA、TC-BSA 和DOX-BSA包被在硝酸纖維膜(4)得到檢測線(6)四條，分別為Tl、T2、T3和T4 ；7)將步驟4)製成的兔抗鼠IgG包被在硝酸纖維膜(4)得到質控線(5);8)將手控區封膜(1)、吸水墊(3 )、硝酸纖維膜(4 )結合墊(7 )、樣品墊(8 )和樣品端封膜(9 )依次粘貼在背板(2)上。
全文摘要
本發明公開了一種快速檢測四環素、金黴素、土黴素與多西環素殘留的四聯膠體金免疫層析試紙條及其製備方法，硝酸纖維膜(4)上包被有兔抗鼠的IgG質控線和CTC-BSA、OTC-BSA、TC-BSA、DOX-BSA四條檢測線；樣品墊上包被有的抗CTC、OTC、TC、DOX藥物單克隆抗體-膠體金標記物。本發明應用免疫學技術篩選出抗CTC、OTC、TC和DOX藥物的單克隆抗體，通過膠體金的製備及膠體金標記條件的探索研究，在應用抗CTC、OTC、TC和DOX藥物單克隆抗體和GICA技術研究建立抗四環素類藥物單克隆抗體快速檢測試紙條，並對其性能進行測定。試紙條檢測範圍較寬，假陽性低，檢測靈敏、準確、可靠，適用於動物可食性組織如肌肉、肝臟和腎臟等組織中CTC、OTC、TC和DOX四環素類藥物殘留的多聯檢檢測。
文檔編號G01N33/532GK102288753SQ201110119780
公開日2011年12月21日 申請日期2011年5月10日 優先權日2011年5月10日
發明者樂濤, 何亮, 何紅秋, 魏啟明 申請人:重慶市科學技術研究院