一種注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉及其製備方法

2023-09-21 19:24:25 1

專利名稱：一種注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉及其製備方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，涉及一種注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉及其製備方法。
背景技術：
單唾液酸四己糖神經節苷脂是含唾液酸的神經鞘脂，可以加速受損神經細胞的修復，促進神經細胞的生長和再生，改善神經傳導等，主要用於中樞和周圍神經系統病症的修復和治療，被認為是目前臨床上治療脊髓損傷(SCI)最有效的藥物之一，目前已經有進口注射水針上市，有效成分為單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉(GMl)。GMl在臨床上主要通過外周途徑長時間大劑量反覆給藥治療SCI。外源性單唾液酸四己糖神經節苷脂雖然具有脂溶性可以穿過血腦屏障，但是藥代動力學研究證實，注射入體內後GMl主要通過肝臟攝取，中樞神經系統內含量很少，只有20%左右進入腦、脊髓等部位發揮作用，而且中樞神經系統中GMl含量要在給藥後8至16個小時才達高峰，臨床上常加大使用頻率以維持所需的藥物濃度，但隨之而來的是不良反應的增多與病人順應性的降低，限制了其臨床應用良好藥效的發揮。近年來的研究顯示，GMl通過蛛網膜下腔途徑少量給藥是治療SCI的一種有效方法。GMl普通製劑隨著代謝消耗，單次給藥不能長時間維持其在局部的有效濃度，而且GMl臨床用量大(20-100mg/60kg/日)，反覆多次進行蛛網膜下腔穿刺給藥必然會增加感染機會，不值得推薦。因而，對GMl緩釋製劑的研究具有非常重要的意義。微球是指藥物分散或被吸附在高分子、聚合物基質中而形成的微粒分散體系，可以將藥物包裹在可生物降解的載體材料中，藥物隨著載體材料的溶蝕逐漸釋放，可以使體內藥物濃度長時間維持一定的水平，起到長效緩釋的作用，減少用藥次數，增加病人順應性。乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)具有良好的生物相容性和可降解性，是用於製備緩釋微球的生物可降解聚合物材料，目前已經被FDA批准用於皮下注射用微球。蔣濤等在《單唾液酸四η己糖神經節苷脂的PLGA微球的製備》(《醫藥導報》2006年4月第25卷第4期，第335 337頁)中公開的GM-I-PLGA微球的製備工藝，其形態規則，粒徑約(19. 3±8. 5) μ m，載藥量只有4. 7%。在姜慶斌《GM-1-PLGA微球的製備及其體外釋藥評價》(2010年4月17日，山東大學碩士學位論文)所公開的技術方案中，GMl微球的載藥量只有17%。從已公開的文獻中可以得知，現有技術製備的GM-I-PLGA微球的載藥量很低，要想達到有效治療窗，給藥時需要給與較大劑量，皮下注射時病人會有異物感，降低了依從性和舒適度
發明內容

本發明通過大量的試驗優選了 GMl微球製劑的組分配比，優化了製備工藝，提供了一種注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉，該製劑為皮下注射微球，由O. 05 O. 15重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉(GM-I)、0. I O. 5重量份的明膠和I 10重量份的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)組成。
本發明對單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉的含量進行了優選，優選地，上述注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉含有O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉(GM-I)。本發明對明膠的含量進行了優選，優選地，上述注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉含有O. 3重量份的明膠。本發明對聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)的含量進行了優選，優選地，上述注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉含有5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)。本發明對聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)的分子量進行了優選，優選地，上述聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)的分子量為6000 35000，更優選分子量為6000。本發明對聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)中丙交酯與乙交酯的比例進行了優選，優選 地，上述聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)中丙交酯與乙交酯的比例為50/50或65/35或75/25，更優選丙交酯與乙交酯的比例為75/25。本發明還優化了一種注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉的製備方法將處方量的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉和明膠溶於2 6體積份的水中，溶解並混勻作為內水(Wl)相；將處方量的聚乳酸-羥基乙酸溶解於30 60體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5 10重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的500 1000份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min，3000 6000r/min保持4h揮去二氯甲烷，10000r/min高速離心，使用注射用水洗滌3 7次後分裝，冷凍乾燥即得。在微球製劑中有效成分的載藥量不應過低，否則對患者給藥時，注射微球的量過大，會給患者造成疼痛等不必要的副作用；相反如果載藥量過大，在對患者給藥時，藥物突釋較為嚴重，容易造成藥物過量。本發明人通過大量試驗研究得知，油相中聚乳酸羥基乙酸濃度的增加可以提高油相的黏度，減少單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉向外水相的流失，提高了載藥量和包封率，但當其濃度達到一定水平後，再提高濃度反而會降低載藥量，本發明在微球製備過程中對水相(包含內水相和外水相)與油相中的各組分配比以及水相與油相的體積比、初乳與聚乙烯醇溶液體積比進行了優選，提高了微球的包封率，載藥量提高至60. 8 72. 6%。製備所得的微球粒徑若是過小，難以維持長時間的藥效，同時有可能阻塞毛細血管，影響微循環，而粒徑過大，初期釋放太慢，達不到治療有效血藥濃度，聚乙烯醇溶液濃度提高可以增加外水相的黏度，使微球更加容易形成球狀，明顯改善了該製劑的微球形態。通過本發明所製備得到的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉微球跨距I 5，平均粒徑5 50 μ m,優選粒徑15 23 μ m,如此既可以使本微球達到緩釋的效果，又能保證注射入體內後不影響血液循環。本發明製備所得的製劑還需要使用注射用水洗滌3 7次，以便去除微球表面的聚乙烯醇，減少了聚乙烯醇對人體的危害；同時本發明的微球製劑使用注射用水洗滌後，不需要添加賦形劑，直接分裝凍幹即得。本發明所公開的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉，是一種皮下注射微球，通過優選處方中的組分配比，優化製備方法，促使有效成分單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉隨著載體材料聚乳酸羥基乙酸的溶蝕降解逐漸釋放，可以長時間維持有效濃度，起到長效緩釋作用，增加了患者順應性。通過本發明所製備得到的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉微球跨距I 5，平均粒徑5 50 μ m，優選粒徑15 23 μ m,包封率> 85. 7%,且最高達到93. 2% ;載藥量> 60.8%，最高達到72.6%，體外釋放度試驗表明在開始I小時內的釋放量低於30%，微球的體外釋放時間可持續14天，單次給藥量明顯減少，降低了異物感，改善了病人的生活質量，避免了每日給藥的缺陷。通過本發明製備的微球注射劑，重現性好，包封率及載藥量高、藥物釋放持續而穩定，可以長時間維持有效血藥濃度，解決了常規製劑帶來的血藥濃度波動的問題。


圖I、GMl微球體外累積釋放曲線
具體實施例方式為了更好的說明本發明，通過實施例進一步闡述本發明，但是並不因此將本發明限制在所述的實施例中。實施例I、注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶於4體積份的水中，溶解並混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量6000)溶解於40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次後分裝,冷凍乾燥即得。實施例2、注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶於4體積份的水中，溶解並混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量20000)溶解於40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次後分裝,冷凍乾燥即得。實施例3、注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉
將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶於4體積份的水中，溶解並混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量35000)溶解於40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將評1相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次後分裝,冷凍乾燥即得。實施例4、注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶於4體積份的水中，溶解並混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為65/35，分子量6000)溶解於40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將評1相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次後分裝,冷凍乾燥即得。實施例5、注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉
將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶於4體積份的水中，溶解並混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為50/50，分子量6000)溶解於40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次後分裝,冷凍乾燥即得。實施例6、注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉將O. 05重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉、O. I重量份的明膠溶於2體積份的水中，溶解並混勻作為內水(Wl)相；將I重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量6000)溶解於30體積份的二氯甲烷中作為油
(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 3000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌3次後分裝,冷凍乾燥即得。實施例7、注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉將O. 15重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉、O. 5重量份的明膠溶於6體積份的水中，溶解並混勻作為內水(Wl)相；將10重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量6000)溶解於60體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將10重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的1000份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 6000r/min保持4h揮去二氯甲烷，10000r/min高速離心，使用注射用水洗滌7次後分裝，冷凍乾燥即得。實施例8.注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉的理化性質和釋放行為試驗8. I微球形態測定凍幹所得微球用注射用水分散後，通過光學顯微鏡及攝像系統觀察微球的形態並計算微球粒徑。8. I. I微球形態本發明所製成的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉微球表面光滑或有少量小孔。8. I. 2微球粒徑跨距在I 5之間，大部分分布在5. O 50. O μ m範圍內，表明微球粒徑分布均勻。實施例1-7所製備得到的微球粒徑的具體檢測數據見表I。8. 2包封率測定包封率(EE)是指微球中的藥物量佔總投藥量的百分率。包封率低，則藥物的損失大，成本增加，所以包封率是微球最重要的指標。本發明通過離心沉澱微球後，將上清液與微球洗液合併，將合併液過O. 45 μ m的微孔濾膜，通過HPLC法測定GMl的含量，通過以下公式計算包封率包封率％ =[(投入藥物總量-上清液體含藥量)/投入藥物總量]X 100%實施例1-7所製備得到的微球包封率測定的具體數據見表I。8. 3微球載藥量載藥量(DL)是指微球中所含藥物的重量百分率，是評價微球質量的重要指標，直 接關係到製劑的產業化和臨床應用。載藥量通常按下式計算載藥量(％ )=(微球中藥物含量/微球重量)*100%在本發明中，我們實驗具體方法為將合併液過O. 45 μ m的微孔濾膜，通過HPLC法測定GMl的含量，通過以下公式計算微球的載藥量載藥量％=(體系中投入藥物總量-合併液中藥物量/微球質量)*100%實施例1-7所製備得到的微球載藥量的具體數據見表I。表5微球形態與包封率
權利要求
1.一種注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉，其特徵在於它由O. 05 O. 15重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉、O. I O. 5重量份的明膠和I 10重量份的聚乳酸-羥基乙酸組成。
2.根據權利要求I所述的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉，其特徵在於它含有O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉。
3.根據權利要求I所述的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉，其特徵在於它含有O.3重量份的明膠。
4.根據權利要求I所述的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉，其特徵在於它含有5重量份的聚乳酸-羥基乙酸。
5.根據權利要求I所述的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉，其特徵在於聚乳酸-羥基乙酸的分子量為6000 35000。
6.根據權利要求5所述的聚乳酸-羥基乙酸，其特徵在於聚乳酸-羥基乙酸的分子量為 6000。
7.根據權利要求I所述的聚乳酸-羥基乙酸，其特徵在於聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為50/50、65/35或75/25。
8.根據權利要求7所述的聚乳酸-羥基乙酸，其特徵在於聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25。
9.一種注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉的製備方法，其特徵在於將權利要求I所述的單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉和明膠溶於2 6體積份的水中，溶解並混勻作為內水相；將權利要求I所述的聚乳酸-羥基乙酸溶解於30 60體積份的二氯甲烷中作為油相；將5 10重量份的聚乙烯醇溶解於80°C的500 1000份的注射用水中作為外水相；將內水相緩慢滴入到油相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min後，冷卻到10°C，作為初乳，並加入到外水相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 3000 6000r/min保持4h揮去二氯甲烷，10000r/min高速離心，使用注射用水洗滌3 7次後分裝，冷凍乾燥即得。
全文摘要
本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及一種注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉及其製備方法。本發明的注射用單唾液酸四己糖神經節苷脂鈉包含GM1、明膠和PLGA。通過本發明製備的微球注射劑，重現性好，包封率高，提高了載藥量，藥物釋放持續而穩定，單次給藥量明顯減少，降低了異物感，可以長時間維持有效血藥濃度，避免了每日給藥的缺陷，改善了病人的生活質量，解決了常規製劑帶來的血藥濃度波動的問題。
文檔編號A61K9/08GK102641281SQ201110043830
公開日2012年8月22日 申請日期2011年2月19日 優先權日2011年2月19日
發明者馮中, 張麗萍, 石其德, 趙志全, 趙震震 申請人:山東新時代藥業有限公司