診斷幽門螺桿菌感染的藥物製劑的製作方法
2023-09-21 19:22:00 4
專利名稱：診斷幽門螺桿菌感染的藥物製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於診斷幽門螺桿菌(Helicobacter pylori)感染的藥物製劑。更具體地，本發明涉及一種發現應用於尿素呼吸試驗的口服劑型，該方法是檢測幽門螺桿菌的無損傷方法。
相關技術描述自從Marshall等成功地分離和培養幽門螺桿菌(下文稱作H.pylori)(Lancet，pp.1273-1275(1983))，肯定和否定的觀點在其病因機理上都已經得到發展。然而，近來，作為胃炎、消化性潰瘍和胃癌發病的主要原因或者輔因子，H.pylori感染已經引起了大量的注意力，上述疾病不僅在日本而且在全世界是主要的上消化道疾病的三聯徵。尤其，NIH Consensus Conference(Bethesda，1994)的建議，即「業已證實為H.pylori感染的消化性潰瘍，無論它是原發還是復發的，需要補充含抗菌劑的抗胃酸分泌藥物治療的根除治療」，在日本引起非常大的轟動，促進有關人士建立診斷H.pylori感染和驗證根除H.pylori的準確和迅速的方法。
檢測胃黏膜H.pylori的技術分成兩大類，即需要內窺鏡檢查(活組織檢查)的損傷類(包括分離物培養的細菌學方法，用於檢測、尿素酶試驗等的組織學或免疫組織學方法)和無損傷類方法。它們之中，從患者精神和身體負擔、方便和安全的觀點，無損傷類是優選的。
當前使用的兩種代表性的無損傷方法是診斷用的血清學方法，它包括測定特定抗H.pylori抗體的血清學水平和包括口服同位素碳標記的尿素並測定呼吸氣體內標記二氧化碳的尿素呼吸試驗(例如，Sand，J.，Gastroenterol，1996，31(suppl)214，pp.44-46；Gastraenteralogy，1997，113，s93-98；Gut，1994，35，pp.723-725；Aliment.Pharmacol.Ther.1997，11，pp.641-649；Gastraenteralogy，1995，109，pp.136-141)。
以上方法之中，基於特定抗體存在的診斷用血清學方法的缺點是，由於即使在根除H.pylori之後宿主血清的抗體陽性狀態至少存在3個月，近似10-15％的試驗受試者產生假陽性反應，就此，它不適於證實細菌消滅。因此，近來廣泛採用尿素呼吸試驗，它不依賴抗體的存在並且是安全和不費時的。這種試驗基於H.pylori產生大量的尿素酶的性質。通常人體不會產生尿素酶，因此，它的測定表明在胃內存在H.pylori，尿素酶的製造者。從而，這種方法採用這種現象，即尿素酶製造者H.pylori位於宿主胃內時，宿主攝取的標記尿素分解並且進一步與胃酸反應，這樣就使標記的尿素轉化成標記的二氧化碳，它在呼吸氣體中呼出(Lancet，pp.174-177(1987))。這種試驗進一步的優點是能夠測試胃部廣泛區域內尿素酶的存在。
然而，這種尿素呼吸試驗的常規步驟包括以液體溶液形式攝取同位素標記的尿素，因此，位於口腔和咽喉的多種產生尿素酶的細菌在給藥之後的早期分解攝取的尿素，從而在診斷H.pylori感染中存在得出假陽性的風險。為了預防這種假陽性反應，必須令試驗受試者接著攝取標記的尿素水溶液立即以水漱滌咽喉以洗去留在口腔內的標記的尿素，或者提前消毒口腔和咽喉。
然而，這類處理不僅對於經受該試驗的試驗受試者，而且對於主治醫師是累贅的。此外，為了獲得準確結果，必須通過延遲呼出氣體收集的時間消除歸因於口腔及其周圍的駐留細菌分解的尿素的檢測幹擾，所來的缺點是延長試驗步驟。
發明概述本發明目的是提供適用於尿素呼吸試驗的改良口服製劑。更具體地，本發明的目的是提供一種藥物製劑，它能夠通過尿素呼吸試驗方便地和無損傷地檢測和診斷胃黏膜H.pylori感染，並完全消除了棲息於口腔、咽喉和除了胃腸道之外的其它組織的生產尿素酶的細菌的影響，從而避免了假陽性試驗的結果。
本發明進一步的目的是提供一種藥物製劑，它能夠迅速檢測H.pylori的存在，而不會有時間滯後。
為了克服前述常規尿素呼吸試驗的缺點，為了開發藥物製劑，本發明的發明人認真探究製劑的體內行為，該製劑在口腔內保持不溶，但是，緊接著進入胃，它迅速溶解以使標記的尿素迅速分散到整個胃。結果，他們發現，可通過如下方法提供顯示這類受歡迎的體內行為的藥學製劑，採用標記尿素的活性物質與賦形劑組分和潤滑劑組分結合以製備核心組合物(core composition)，並且以包衣劑包覆核心組合物物。由此，發明人證實，上述藥物製劑口服給藥至試驗受試者，活性物質到達胃，不受駐留在口腔內的尿素製造細菌的影響，並且在胃內迅速溶解和分散，不受包衣溶解阻滯的支配，因此，這種藥物製劑是適於快速和準確診斷H.pylori感染的極有用的試劑。基於上述發現完成本發明。
因此，本發明涉及適於按照尿素呼吸試驗方案檢測H.pylori感染的、以下(1)-(14)段定義的藥物製劑(1)適用於按照尿素呼吸試驗方案檢測H.pylori感染的包衣製劑，以100重量份的所述核心組合物為基準，包括以0.1-10重量份包衣劑包衣的核心組合物，所述的核心組合物以100重量％的核心組合物為基準，包括19-89重量％的同位素碳標記的尿素、10-80重量％賦形劑組分和0.01-1重量％的潤滑劑組分。
(2)如段(1)定義的包衣製劑，其中以100重量份的核心組合物為基準，包衣劑的比例是0.3-5重量份。
(3)如段(1)定義的包衣製劑，其中以100重量份的核心組合物為基準，包衣劑的比例是0.5-3重量份。
(4)如段(1)定義的包衣製劑，以100重量份的核心組合物為基準，含有25-75重量％的同位素碳標記的尿素、20-70重量％的賦形劑組分和0.05-0.8重量％的潤滑劑組分。
(5)如段(1)定義的包衣製劑，以100重量份的核心組合物為基準，含有30-70重量％的同位素碳標記的尿素、35-65重量％的賦形劑組分和0.1-0.7重量％的潤滑劑組分。
(6)如段(1)定義的包衣製劑，其中以100重量份的同位素碳標記的尿素為基準，核心組合物含有10-450重量份的賦形劑組分和0.01-6重量份的潤滑劑組分。
(7)如段(1)定義的包衣製劑，其中以100重量份的同位素碳標記的尿素為基準，核心組合物含有50-150重量份的賦形劑組分和0.1-5重量份的潤滑劑組分。
(8)如段(1)定義的包衣製劑，其中包衣劑含有水溶性聚合物和增塑劑。
(9)如段(8)定義的包衣製劑，其中水溶性聚合物是至少一種選自支鏈澱粉、糊精、鹼金屬褐藻酸鹽、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素和聚乙烯基吡咯烷酮組成的組的成分。
(10)如段(8)定義的包衣製劑，其中增塑劑是至少一種選自聚乙烯醇、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯、甘油三乙酸酯、濃縮的甘油、丙二醇和聚山梨酯組成的組的成分。
(11)如段(1)定義的包衣製劑，其中，作為賦形劑組分，核心組合物含有至少一種選自乳糖、蔗糖、葡萄糖、澱粉、結晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉(croscarmellose sodium)、低取代羥丙基纖維素、羧甲纖維素鈣、交聚維酮(cropovidone)、羧甲基澱粉鈉、羧甲基澱粉鈣、羧丙基澱粉、聚乙烯基吡咯烷酮和部分預凝膠化澱粉組成的組的成分。
(12)如段(1)定義的包衣製劑，其中，作為潤滑劑組分，核心組合物含有至少一種選自硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣和氫化油組成的組的成分。
(13)如段(1)定義的包衣製劑，其中核心組合物含有乳糖、結晶纖維素和澱粉作為賦形劑組分，硬脂酸鎂作為潤滑劑組分，包衣劑含有羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇、二氧化鈦和滑石。
(14)如段(1)定義的包衣製劑，其中同位素碳標記的尿素是13C-標記的尿素。
本發明進一步涉及下列段(15)或(16)定義的用任何以上定義的包衣製劑檢測H.pylori感染的方法(15)檢測H.pylori感染的方法，包括採用段(1)定義的包衣製劑作為尿素呼吸試驗試劑。
(16)檢測H.pylori感染的方法，它包括給予試驗受試者段(1)定義的包衣製劑的步驟，在給定時間之後收集呼出氣體的步驟，以及測量呼出氣體內同位素標記的CO2與12CO2之比的步驟。
本發明進一步涉及評估H.pylori根除效果的方法，它包括採用任何一種以上定義的包衣製劑，例如該方法的步驟包括給予H.pylori根除治療的患者段(1)至段(14)任一定義的包衣製劑的步驟，在給定時間期限之後收集呼出空氣的步驟，以及測量呼出氣體內同位素標記的CO2與12CO2之比的步驟。
附圖簡要說明
圖1表示實施例3的結果，其中13C標記的尿素片(包衣2重量％)口服給予試驗組(清洗口腔組和未清洗口腔組，每組由H.pylori陰性和陽性受試者組成)，並且監測時程的Δ13C值(‰)(藥物治療之前和之後呼出氣體內13CO2/12CO2濃度比的差(δ13C值))。圖中，實心圓表示H.pylori陰性受試者(清洗口腔組)，空心圓表示H.pylori陰性受試者(未清洗口腔組)，實心菱形表示H.pylori陽性受試者(清洗口腔組)，空心菱形表示H.pylori陽性受試者(未清洗口腔組)。每個曲線表示總的參加試驗人數的平均值±標準誤差。
本發明的詳細說明按照本發明的藥物製劑是用於通過尿素呼吸試驗檢測H.pylori感染的製劑，其特徵在於所述的製劑是包括含有活性組分的核心組合物和包覆核心組合物的包衣材料的包衣製劑。
因此，組成本發明包衣製劑的核心組合物的特徵在於，除了活性組分同位素碳標記的尿素(下文指同位素C標記的尿素)之外，該製劑以本文定義比例含有賦形劑組分和潤滑劑組分。
適用於本發明實踐的同位素C-標記的尿素是以碳同位素標記的尿素用作H.pylori感染檢測的活性組分。作為碳的同位素，穩定的同位素13C和放射性的同位素11C和14C是通常敘及的，並且作為各自同位素標記的尿素，13C標記的尿素和11C標記的尿素或14C標記的尿素通常是敘及的。這些種類的標記的尿素通常用於尿素呼吸試驗，並且所有的均可以常規方式用於本發明。優選地，13C標記的尿素，即以非常穩定的同位素13C標記的尿素可被用作所述的同位素C標記的尿素。
並不特別限制所述同位素C標記的尿素在核心組合物中的配比，由於它的範圍是每100重量％核心組合物19-89重量％。優選的比例是25-75重量％，更優選的比例是30-70重量％。
作為賦形劑組分，各種常規用於藥物製劑生產的賦形劑，尤其是用作片劑賦形劑的那些也可以隨意地用於本發明。具體地，本文提及的有糖，如乳糖、蔗糖、葡萄糖等；水溶性或水膨脹的纖維素衍生物，如結晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈣(CarmelloseCalcium)、交聯羧甲基纖維素鈉等；澱粉或澱粉衍生物，如澱粉、羧甲基澱粉鈉、羥丙基澱粉、部分預凝膠澱粉等；以及包括聚乙烯吡咯烷酮的乙烯基吡咯烷酮，如交聚維酮等等。
這些可獨自使用或以兩種或多種適當組合使用。優選地，賦形劑組合使用。這種情形下，優選使用選自下列三組中至少兩組的賦形劑，這三組是組1.糖，組2.水溶性或水膨脹纖維素衍生物，和組3.澱粉或澱粉衍生物。
這些組分的結合併無特別限制。各組優選組分(選自糖的乳糖；選自水溶性或水膨脹纖維素衍生物的結晶纖維素；以及選自澱粉或澱粉衍生物的澱粉)組合的例子包括乳糖和結晶纖維素或澱粉的組合；結晶纖維素和澱粉的組合；以及乳糖、結晶纖維素和澱粉的組合。優選的賦形劑是乳糖、結晶纖維素和澱粉，並且優選採用它們中的至少兩種組合。組合的模式不受特別限制，但包括乳糖與結晶纖維素或澱粉的組合，結晶纖維素與澱粉的組合，以及乳糖與結晶纖維素和澱粉的組合。
核心組合物內賦形劑組分的製劑配比不受特別限制，以100重量％核心組合物為基準，它在10-80重量％範圍內，優選20-70重量％，更優選地是35-65重量％。也建議所述賦形劑組分的配比以100重量份的同位素C-標記的尿素為基準，通常是10-450重量份，優選50-150重量份。
就潤滑劑組分而言，可隨意採用常規用於藥物產品製備的各種潤滑劑，特別是用作片劑潤滑劑的那些。具體地，以實例敘及的是硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、氫化油等。這些可分別獨立使用或者以兩種或多種的適當結合使用。優選的潤滑劑是硬脂酸鎂。
核心組合物中所述潤滑劑組分的製劑配比不受特別限制，以100重量％的核心組合物為基準，它在0.01-1重量％範圍內，優選0.05-0.8重量％，更優選0.1-0.7重量％。此外，以100重量份同位素C標記的尿素為基準，該潤滑劑組分優選比例通常是0.01-6重量份，優選0.1-5重量份。
除了上述組分之外，組成本發明包衣製劑核的核心組合物可以以其它組分補充，如不幹擾本發明效果量的粘合劑、發泡劑、著色劑、芳香劑、矯味劑、增甜劑等。作為這些額外的組分，可隨意採用常規用於藥物製劑，特別是片劑製備中的物質。
本發明的包衣製劑通過採用至少包括所述同位素C-標記尿素、所述賦形劑組分和所述潤滑劑組分的核[未包衣片(片芯)、未包衣丸、未包衣顆粒]口以包衣劑進行表面包衣製備。
可以用於本發明包衣製劑的包衣劑不受特別限制，但是包括各種常規用於片劑、丸劑和顆粒劑等的包衣劑(薄膜形成劑)。優選的是水溶性包衣劑。
水溶性包衣劑包括選擇性地具有硫酸鹽基團的多糖，例如支鏈澱粉、糊精和鹼金屬褐藻酸鹽(例如，鈉鹽、鉀鹽)等；水溶性纖維素衍生物，例如含有26-33％甲氧基基團的纖維素，如甲基纖維素，以及含有53.4-77.5％或7-12％羥基丙氧基基團的纖維素，如羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素等；水溶性聚乙烯基衍生物，如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇等；腸溶包衣聚合物(enteric polymer)，如羧甲基乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素苯二甲酸酯、乙酸苯二甲酸纖維素酯、醋酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素酯、甲基丙烯酸共聚物、羧甲基乙基纖維素等；胃溶包衣聚合物(gastric polymer)，如聚乙烯乙縮醛二乙基氨基醋酸酯、氨基烷基甲基丙烯酸共聚物E，等；以及持續釋放的聚合物，如乙基纖維素等。這些可以單獨使用或兩種或多種組合使用。
這些水溶性聚合物中，優選的是支鏈澱粉、糊精、鹼金屬褐藻酸鹽(褐藻酸鈉、褐藻酸鉀)、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素和聚乙烯基吡咯烷酮，更優選地是羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素。
用於本發明的包衣劑可以是含有僅僅是單一種類的所述水溶性聚合物或者含有適當組合的兩種或多種聚合物。
本發明中，包括這種水溶性聚合物的包衣劑優選結合增塑劑使用。作為這類增塑劑，可選擇性地使用在包衣組合物中常規使用的增塑劑，特別是多元醇，例如包括macrogol 6000、macrogol 4000等的聚乙二醇，濃縮的甘油，丙二醇、聚乙烯醇等；檸檬酸三乙酯；三乙酸甘油酯；以及如聚山梨酯(例如，吐溫80)的表面活性劑也作為例子被敘及。
這些增塑劑每種都可結合所述的水溶性聚合物使用，或者以兩種或多種結合水溶性聚合物的組合使用。作為優選的增塑劑，聚乙烯醇、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯、三乙酸甘油酯、濃縮的甘油、丙二醇或聚山梨酯是敘及的。它們之中，聚乙二醇是優選的，macrogol 6000是更優選的。
所述水溶性聚合物和所述增塑劑的組合模式不受特別限制，但是可提及的包括一些優選的例子羥丙基纖維素和聚乙二醇、檸檬酸三乙酯或三乙酸甘油酯的組合，以及羥丙基甲基纖維素與聚乙二醇、檸檬酸三乙酯或三乙酸甘油酯的組合。更優選的組合是羥丙基甲基纖維素與聚乙二醇的組合。
適用於本發明的包衣劑可以與著色劑(例如色素或染料)、芳香劑、矯味劑和/或增甜劑一起添加，每種均為不幹擾本發明效果的用量。作為這類製劑添加劑，可自由採用在藥物製劑，尤其在包衣製劑中常規使用的那些。作為著色劑的例子，二氧化鈦、滑石、鐵紅等是敘及的。優選的是二氧化鈦和滑石。著色劑意於給予本發明的包衣製劑希望的顏色，由於它足以滿足需要，因此不用特別限制其用量。通常地，這種著色劑以100重量％的包衣劑為基準，使用比例是1-70重量％，優選5-50重量％。在組合使用滑石和二氧化鈦時，包衣劑中它們的比例是100重量份的二氧化鈦25-175重量份滑石，優選50-150重量份滑石。
以100重量份的核心組合物為基準，用於包覆核心組合物[例如未包衣片(片芯)、未包衣丸、未包衣顆粒]的包衣劑的比例可明智地選擇0.1-10重量份範圍，優選地是0.3-5重量份，更優選0.5-3重量份。如果比例大部分超過10重量份，包衣膜在胃中的溶解阻滯，引起核心組合物分散和溶解的顯著延遲，隨之而來的缺點是無益於迅速診斷。另一方面，如果比例顯然小於0.1重量份，不會排除口腔和咽喉內生產尿素酶的細菌的影響，容易導致假陽性結果產生。
以所述包衣劑包覆核心組合物的方法不受特別限制，根據核心組合物或最終製劑的形式，可以常規方法完成包衣。
本發明的包衣製劑形式不受特別限制，由於施行本發明的操作和結果，可包括片劑、丸劑和顆粒劑等。優選的是片劑和丸劑，片劑是特別優選的。這些形式的包衣製劑可以本領域確定的方法製備。
以片劑的製備作為例子，可通過製備片劑劑型的含有所述至少三種組分(同位素C-標記尿素、賦形劑組分和潤滑劑組分)的核心組合物，並且以所述包衣劑包覆片芯表面以製造本發明的包衣製劑。片芯可通過顆粒壓片法(間接壓片法)生產，該方法包括混合除了潤滑劑組分之外的兩種組分(即，同位素C-標記的尿素和賦形劑組分)，選擇性地加上其它適合的添加劑組分，並且壓縮整個混合物；或者由直接粉末壓片法(直接壓片法)生產，該方法包括混合所述的3種組分，選擇性地加上其它適當的添加劑，均勻和直接壓縮整個混合物。儘管可以如上使用任何一種所述的直接粉末壓片法和所述的顆粒壓片法，直接粉末壓片法是優選的，由於可以調劑制粒步驟。以包衣劑包衣可以以常規方法實施，例如通過採用包衣鍋的方法或者採用流化床包衣設備的方法。
以這樣的方法製備本發明的包衣製劑，每劑量單位含有10-300mg的活性組分同位素C標記的尿素，優選50-150mg。
本發明的包衣製劑用於H.pylori感染檢測。
進一步地，本發明提供採用本發明的包衣組合物檢測H.pylori感染的方法。採用上述本發明的包衣製劑作為常規的適於檢測H.pylori感染的尿素呼吸試驗中尿素呼吸試驗試劑，可以實施這種檢測方法。具體地，在本發明的包衣製劑口服給予試驗受試者之後，收集受試者呼出的氣體，基於包含在呼出氣體內的作為同位素碳標記CO2與12CO2之比，測量的同位素碳標記的CO2的比例，以此檢測H.pylori感染。
這種情形下，不特別限制包衣製劑給藥之後收集呼出氣體的時間。例如，在本發明的包衣製劑給藥之後，隨著時間收集呼出氣體，可以重複測量同位素碳標記的CO2與12CO2之比。然而，由以下描述的實施例3(圖1)的結果理解，H.pylori陽性和H.pylori陰性受試者在本發明的包衣製劑給藥之後的Δ同位素碳標記的C值(‰)中明顯不同(例如，給藥之後每個取樣時間的呼出氣體和片劑給藥之前呼出氣體的13CO2/12CO2之濃度比(δ13C值)的差異)。因此，H.pylori感染能夠通過測量給藥後任何取樣時間的Δ同位素碳C標記的值(‰)檢測。具體地，通常例如在給藥之後5至60分鐘，優選10至30分鐘收集呼出氣體。
為了測量和分析包含於呼出氣體樣品內標記的CO2，可以採用常規的分析方法，例如液體閃爍計數法、質譜分析、磁共振譜等等。由於測量的準確性，優選的是紅外光譜法和質譜分析。
通常地，本發明的包衣製劑優選以水在快速狀態給藥。不特別限制包含於本發明的製劑的劑量形式內的標記尿素的含量。通常選擇和調節的範圍是每劑量單位10至300mg。
同樣，本發明的包衣製劑用於根除治療之後細菌清除效果的評估。因此，本發明提供採用本發明的包衣製劑評估H.pylori根除效果的方法。通過給予已經進行H.pylori根除治療的患者服用本發明的包衣製劑，並且測量包含於患者呼出氣體內同位素標記的CO2的比例作為按照尿素呼吸試驗同位素標記CO2與12CO2之比，實施這種評估。檢測或評估的方法不受特別限制，但是典型的方案包括使已經進行H.pylori根除治療的患者服用本發明的包衣製劑，例如，每劑量單位含有10-300mg13C標記尿素的製劑，用水快速口服，5-60分鐘，優選10-20分鐘之後在呼出氣體包中直接收集呼出氣體，以質譜儀分析該呼出氣體內13CO2/12CO2之比。
實施例以下參考和操作實施例進一步詳細舉例說明本發明，但是不意味著限制本發明的範圍。
參照實施例1表1給出的組成以指明的比例混合，且通過直接壓片法壓縮製備參照實施例1的片劑。按日本藥典(XIII)的指導試驗這些片劑，溶解試驗[方法2(漿法)]採用水作為試驗溶液，浴溫為37±0.5℃，漿速50rpm。測定20和60秒之後溶出尿素(％)的比例。結果亦如表1所示。
表1
上述結果顯示片劑處方至少含有尿素、賦形劑組分(乳糖、結晶纖維素、玉米澱粉)和潤滑劑(硬脂酸鎂)作為片劑組分，該片劑的溶出如此迅速，以致於口服途徑給藥時，它們在口腔內迅速溶解。
實施例1除了用同位素(13C)標記的尿素代替尿素之外，按照參照實施例1使用的同樣處方製備片劑。片芯以羥丙基甲基纖維素/聚乙二醇/二氧化鈦/滑石(6/3/1/1，以重量計)含水組合物包衣，以100重量份的片芯為基準按2重量份包衣比，通過片劑製備中通常採用的包衣方法包衣，以製備備本發明包衣片劑。如參照實施例1，按照日本藥典(XIII)，溶解試驗，方法2(漿法)試驗這些包衣片，採用水作為試驗溶液，浴溫37±0.5℃，漿速50rpm，測定20和60秒以及10分鐘之後溶出的13C尿素的比例(％)。採用的處方和溶解試驗結果如表2所示。
表2
上述結果表明給藥之後20秒未觀察到尿素的釋放，在60秒之後僅有輕微的釋放。因此，很明顯，加水以常規的方式吞咽本發明的包衣片時，該片進入胃，在口腔內無溶解，並且在胃內釋放同位素標記尿素，因此，可檢測胃部H.pylori感染，不會受口腔內的尿素酶幹擾。
實施例2基於實施例1的結果，探究與片芯有關的以重量計的包衣劑的適當比。因此，採用相對於100重量份片芯，以0至20重量份(0，0.1，0.3，0.5，1，2，3，5，10，15和20重量份)範圍與包覆片芯重量比，以與實施例1的方法相同的方法製備包衣溶液，對每種包衣片進行崩解試驗以測量其崩解前的滯後時間和崩解時間。該試驗中使用的包衣片的片芯組成如下所示。
片芯
13C尿素 100.0mg乳糖(Dilactose S，Freund Ind.)34.4mg結晶纖維素(Avicel PH-101，Asahi Kasei)60.0mg玉米澱粉 5.0mg硬脂酶鎂 0.6mg基於100重量份的上述片芯，通過採用含有1或8重量％包衣比的下列組分的包衣溶液，製備含有0.1-20重量份包衣劑的包衣片。
包衣溶液
羥丙基纖維素(TC-5RW，Shin-Etsu6重量份Chemical)Macrogol 6000 2重量份二氧化鈦 1重量份沿石 1重量份(1)崩解時間的測量(崩解試驗)按日本藥典(XIII)、崩解試驗[「用適當包衣劑包覆的片劑」]的指示，採用水作為試驗溶液，浴溫37±2℃，(6試驗片)，試驗如上製備的每種包衣片。在玻璃試管檢測沒有試驗片殘餘物所用時間，或者，如果有任何殘餘物存在，測量可檢出的薄膜或海綿狀物質或者僅僅為柔軟或泥狀物質的時間並記錄為崩解時間。
(2)滯後時間(溶解試驗)的測量如日本藥典(XIII)、溶解試驗[方法2(漿法)]指示，採用水(500ml)作為試驗溶液，浴溫37±0.5℃，漿速75rpm，試驗如上製備的每種包衣片，測量漿開始旋轉至片開始崩解的時間並記錄為滯後時間。
上述試驗產生的包衣片的崩解時間和滯後時間數據如表3所示。
表3
崩解試驗說明，對應0-3重量份包衣比的包衣製劑顯示在崩解時間上很少變動，對應5重量份包衣比的包衣製劑顯示稍後滯後，並且，當包衣比超過10重量份時，包衣製劑崩解花費2分鐘或更長。溶解試驗揭示片芯組合物釋放由0.1重量份的包衣開始阻滯(引入滯後時間)，這種滯後時間隨包衣比增加到0.3重量份或更多而延長，優選不超過0.5重量份。在1-5重量份的包衣比範圍內包衣製劑的滯後時間很少有差異。然而，包衣比超過10重量份時，滯後時間顯著延長，表明延遲了片芯的實際釋放。這些發現表明以100重量份的片芯為基準，包衣劑優選的比例通常是0.1-10重量份，更優選0.3-5重量份，還優選0.5-3重量份，尤其1-3重量份。
實施例3
採用實施例1得到的包衣製劑，進行下列試驗。
在成年男性中通過採用13C尿素溶液進行13C標記的尿素呼吸試驗，選擇14名H.pylori陰性受試者和6名H.pylori陽性受試者，或者總計20名受試者，在這些受試者中進行以下試驗。
首先，將上述20名受試者分成兩組，A組和B組(每組7名H.pylori陰性和3名H.pylori陽性受試者)，採用本發明的包衣製劑對每個受試者進行兩次13C標記的尿素呼吸試驗，相隔7天。A組中，在第一次呼吸試驗時進行口腔清洗(清洗口腔)，但是第二次呼吸試驗並不進行(未清洗口腔)。B組中，第一次呼吸試驗不進行口腔清洗(未清洗口腔)，但是第二次呼吸試驗(清洗口腔)進行。
如下進行呼吸試驗。指示每個受試者攝取包衣製劑加100mL水，呼出氣體在6個時間點被收集入約300mL容量的鋁層壓包(aluminum-laminated bag)，即在攝取片之前和攝取之後5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘和30分鐘時收集。採用自動13CO2尿素呼吸分析器(GC-MS，商品名ABCA-G(Europe Scientific))分析由此收集的呼出空氣。對每個由鋁層壓包轉移至專有減壓取樣管的呼出氣體樣品，測定δ13C值(‰)(每個取樣時間呼出氣體的13CO2/12CO2濃度比)。接著，計算Δ13C值(‰)，它是攝取片劑之前呼出氣體樣品δ13C值(‰)和攝取後每個取樣時間呼出氣體δ13C值(‰)之間的差。
口服給藥之後在各試驗組(清洗口腔組和未清洗口腔組，每組由H.pylori陰性和H.pylori陽性受試者組成)測定Δ13C值(‰)[服用片劑之前呼出氣體和給藥後每個取樣時間呼出氣體的13CO2/12CO2濃度比(δ13C值)之間的差]，結果如圖1所示。圖1中，實心圓表示14名H.pylori陰性受試者(清洗口腔組)的結果，空心圓表示14名H.pylori陰性受試者(未清洗口腔組)的結果，實心菱形表示6名H.pylori陽性受試者(清洗口腔組)的結果，空心菱形表示6名H.pylori陽性受試者(未清洗口腔組)的結果。每個曲線表示總的參加試驗人數的平均值±標準誤差。
(1)存在於口腔和咽喉的細菌的影響由圖1明顯看出H.pylori陰性受試者(由附圖上實心圓和空心圓表示)的試驗結果，當本發明的包衣製劑用作試驗試劑時，省略口腔清洗不會產生由口腔和咽喉細胞的影響而引起Δ13C值的變化。
(2)H.pylori陽性患者中Δ13C值(‰)隨時間變化的類型就能夠在H.pylori陽性受試者(由附圖的實心和空心菱形表示)中檢測到的反應胃內H.pylori尿素酶活性的Δ13C值而論，如上所述在H.pylori陰性受試者(由附圖實心和空心圓表示)的Δ13C值(‰)幾乎未發現變化。因此，很顯然，通過採用本發明的包衣製劑作為診斷試劑，能夠以清楚的區別檢測H.pylori陽性受試者的Δ13C值(‰)和H.pylori陰性受試者的Δ13C值(‰)，因此，可準確地挑選出H.pylori陽性患者和H.pylori陰性患者，更確切地說，能夠準確地診斷H.pylori感染。
從上述結果可以確認，通過用包衣劑以規定的包衣比包覆含有13C-標記尿素和其它組分的未包衣片(片芯)，可完全排除口腔和咽喉內生產尿素酶的細菌的影響，從而可以準確診斷H.pylori感染。
工業實用性H.pylori感染的常規診斷試劑有時給出假陽性結果，由於同位素C標記的尿素試劑粉末溶於水並以水溶液形式給藥，試驗結果往往會受口腔和咽喉中尿素製造細菌的幹擾。因此，為了進行準確的測定，除了別的限制之外，必需在含標記尿素溶液給藥之後立即清洗口腔，或者在給藥至少20分鐘(通過這麼長的時間可減小口腔內駐留細菌的影響)之後在收集的呼出氣體中進行測定。
藉助於本發明的包衣製劑，完全排除駐留在口腔和咽喉中的生產尿素酶的細菌的影響，這樣可使試驗不受以上限制。此外，由於活性組分在胃中的溶解和分散是迅速的，在給藥之後可更早收集呼出氣體並測量標記二氧化碳以進行H.pylori感染的迅速測定是可行的。此外，排除口腔細胞的影響意味著可以更嚴格地和更低地設置作為H.pylori感染標準的截止值，由此進一步地改善檢測準確性和減少檢測需要的時間。因此，本發明的包衣製劑被認為是非常有用的適於用作H.pylori感染診斷試劑的製劑，可以得到更迅速、方便和準確的試驗結果。
權利要求
1.用於按照尿素呼吸試驗方法檢測幽門螺桿菌感染的包衣製劑，其包括以100重量份的核心組合物為基準，以0.1-10重量份包衣劑包衣的核心組合物，所述的核心組合物以100重量％的核心組合物為基準，包括19-89重量％的同位素碳標記的尿素、10-80重量％賦形劑組分和0.01-1重量％的潤滑劑組分。
2.按照權利要求1的包衣製劑，其中以100重量份的核心組合物為基準，包衣劑的比例是0.3-5重量份。
3.按照權利要求1的包衣製劑，其中以100重量份的核心組合物為基準，包衣劑的比例是0.5-3重量份。
4.按照權利要求1的包衣製劑，以100重量％的核心組合物為基準，含有25-75重量％的同位素碳標記的尿素、20-70重量％的賦形劑組分和0.05-0.8重量％的潤滑劑組分。
5.按照權利要求1的包衣製劑，以100重量％的核心組合物為基準，含有30-70重量％的同位素碳標記的尿素、35-65重量％的賦形劑組分和0.1-0.7重量％的潤滑劑組分。
6.按照權利要求1的包衣製劑，其中以100重量份的同位素碳標記的尿素為基準，核心組合物含有10-450重量份的賦形劑組分和0.01-6重量份的潤滑劑組分。
7.按照權利要求1的包衣製劑，其中以100重量份的同位素碳標記的尿素為基準，核心組合物含有50-150重量份的賦形劑組分和0.1-5重量份的潤滑劑組分。
8.按照權利要求1的包衣製劑，其中包衣劑包括水溶性聚合物和增塑劑。
9.按照權利要求8的包衣製劑，其中水溶性聚合物是至少一種選自支鏈澱粉、糊精、鹼金屬褐藻酸鹽、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素和聚乙烯基吡咯烷酮組成的組的成分。
10.按照權利要求8的包衣製劑，其中增塑劑是至少一種選自聚乙烯醇、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯、甘油三乙酸酯、濃縮的甘油、丙二醇和聚山梨酯組成的組的成分。
11.按照權利要求1的包衣製劑，其中，核心組合物含有至少一種選自乳糖、蔗糖、葡萄糖、澱粉、結晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素、羧甲纖維素鈣、交聚維酮、羧甲基澱粉鈉、羧甲基澱粉鈣、羥丙基澱粉、聚乙烯基吡咯烷酮和部分預凝膠化的澱粉組成的組的成分作為賦形劑組分。
12.按照權利要求1的包衣製劑，其中，核心組合物含有至少一種選自硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣和氫化油組成的組的成分作為潤滑劑組分。
13.按照權利要求1的包衣製劑，其中核心組合物含有乳糖、結晶纖維素和澱粉作為賦形劑組分，硬脂酸鎂作為潤滑劑組分，包衣劑包括羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇、二氧化鈦和滑石。
14.按照權利要求1的包衣製劑，其中同位素碳標記的尿素是13C-標記的尿素。
15.一種檢測幽門螺桿菌感染的方法，該方法包括採用權利要求1的包衣製劑作為尿素呼吸試驗試劑。
16.一種檢測幽門螺桿菌感染的方法，它包括給予試驗受試者權利要求1的包衣製劑的步驟，給定時間之後收集呼出氣體的步驟，以及測量呼出氣體內同位素碳標記的CO2與12CO2之比的步驟。
17.一種評估幽門螺桿菌根除治療效果的方法，它包括給予幽門螺桿菌根除治療的病人權利要求1定義的包衣製劑的步驟，給定時間之後收集呼出氣體的步驟，以及測量呼出氣體內同位素碳標記的CO2與12CO2之比的步驟。
全文摘要
按照尿素呼吸試驗方法檢測幽門螺桿菌感染的包衣製劑，它包括至少含有定義比例的同位素C標記的尿素、賦形劑和潤滑劑的核心組合物，以100重量份的核心組合物為基準，該核心組合物以0.1－10重量份的包衣劑包衣。採用這種製劑，排除了駐留於除了胃之外的器官，例如口腔和咽喉內生產尿素酶的細菌的影響，能夠診斷幽門螺桿菌感染，而不會有假陽性試驗的風險，並且具有合理的快速性。
文檔編號A61K49/18GK1489478SQ01809797
公開日2004年4月14日 申請日期2001年5月17日 優先權日2000年5月19日
發明者土屋京子, 岡村章夫, 川崎淳一, 宇野慎一, 野田溫也, 西脅早俊, 一, 也, 俊, 夫 申請人:大塚製藥株式會社, 大 製藥株式會社