傷寒桿菌抗原多元檢測測試條的製作方法
2023-09-21 16:48:00 2
專利名稱：傷寒桿菌抗原多元檢測測試條的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫用診斷用品領域，特別涉及一種傷寒桿菌抗原多元檢測測試條。
傷寒及甲、乙型副傷寒是由傷寒及甲、乙型副傷寒沙門氏菌引起的急性腸道傳染病，目前是我國及許多發展中國家較為常見的傳染病之一。該病雖屬腸道傳染但腸道表現多屬一般症狀，出現腹瀉症狀者為數不多，近幾年來輕型和亞臨床型病例增多，尤其是小兒與老人的臨床症狀不典型，給臨床早期診療帶來一定困難。因此，實驗室檢測對於確定診斷、檢出帶菌者、追查傳染源，都具有重要意義。傷寒及甲、乙型副傷寒實驗室檢查方法有多種。大多依靠細菌培養和血清學檢查，但細菌培養需時長達5-7天，加之目前由於早期不正規地使用抗生素，致使血培養陽性率下降。經典的血清學檢查為1896年創建的肥達氏(Widal)凝集試驗，系檢測血清中抗體，一直為世界各地廣泛使用，但該實驗存在諸多缺點抗體在發病一周才能產生，陽性率僅為20％，故不能作早期診斷；由於抗生素廣泛使用或因病人免疫機制的缺陷，部分病人抗體效價較低，從而可能導致假陽性影響診斷；傷寒與副傷寒桿菌與其它沙門氏桿菌有共同抗原或因非特異性回憶反應而出現12.2-18.0％的假陽性，故需作間隔5-7天的二次檢查方能診斷，增加了病人的痛苦；流行區和非流行區的診斷標準不一，診斷菌液製備和效價不一，不便於標準化；容易受疫苗注射的幹擾，而且在經細菌學證實的病例中陽性率不高等。
本發明的目的在於提供一種能快速、簡便地診斷出傷寒、甲型副傷寒、乙型副傷寒的傷寒桿菌抗原多元檢測測試條。
為達上述目的，本發明採用如下技術方案傷寒桿菌抗原多元檢測測試條，包括基材、覆蓋於基材上的纖維膜、覆蓋於基材上部的吸水膜，測試條下部纖維膜上吸附有抗傷寒、甲型副傷寒、乙型副傷寒桿菌鞭毛抗原單克隆標記抗體；中部纖維膜上自下而上分布有一條包被有抗鼠IgG的質控線，三條包被有與下部纖維膜上吸附的標記抗體配對性良好的抗傷寒、甲型副傷寒、乙型副傷寒桿菌鞭毛抗原單克隆抗體的檢測線，測試條下部纖維膜及上部吸水膜上覆蓋有覆膜。
標記抗體吸附於固定在測試條下部的纖維膜與覆膜之間的無紡布上；所述下部纖維膜為玻璃纖維膜，中部纖維膜為硝酸纖維膜。
標記抗體標記物為膠金，膠金抗體濃度為(1.0-3.0)×10-3mg/cm2，包被抗體濃度為(2.0-8.0)×10-4mg/cm2。
基材選用PVC板，吸水膜選用吸水棉漿板，覆膜選用醫用不乾膠膜，纖維膜、吸水膜粘附於PVC板上，覆膜粘貼於纖維膜和吸水膜上。
圖1為本發明的結構示意圖。
本發明產品製備過程為；以PVC板為基材、以膠體金做標記物為例，包括①純化單克隆抗體；採用辛酸-硫酸銨法，取1份抗血清和同體積生理鹽水，加入辛酸後高速離心30分鐘，取上清液加入2份飽和硫酸銨溶液，室溫靜置30分鐘，離心取沉澱加入緩衝液稀釋。②製備膠體金採用檸檬酸還原法，在燒杯中加入1000ml蒸餾水，100℃煮沸約5分鐘，再加入1％氯化金溶液1ml和1％檸檬酸三鈉溶液2ml，強力攪拌至溶液呈深紅色，冷至室溫。調PH至8.2。③金標記單抗取100ml調好PH的膠體金溶液，加入一定量標記抗體，攪拌2分鐘後用1％牛血清白蛋白(BSA)終止反應。高速離心50分鐘，取沉澱用PH＝7.4的0.01MPB稀釋至原體積的10％。④金標固化用無紡布吸取此懸浮液，凍幹備用。⑤包被膜製備取包被抗體，調至1mg/ml，包被於硝酸纖維膜上。⑥測試條裝備取基材PVC板，將玻璃纖維膜、凍幹膠金、包被膜、吸水棉漿板按結構示意圖固定粘貼於基材板上，覆蓋上覆膜，切割成一定尺寸即可。
本發明測試條在使用時，將纖維膜一端豎向插入標本樣品，或把標本樣品滴至測試條上面下部纖維膜上。樣品在毛細作用下，沿測試條向吸水膜方向泳動，如果標本樣品中含有傷寒、甲、乙型副傷寒桿菌鞭毛抗原之一、二或三種，它們先與標記抗體(膠金抗體)反應形成標記抗體-抗原複合物。當標本樣品泳動至包被有與膠體金標記抗體配對性良好的包被抗體檢測帶時，其中所含的標記抗體-抗原複合物進一步與包被抗體反應，形成標記抗體-抗原-包被抗體夾心複合物並聚集於檢測線上，顯出一條紅線。有n種抗原包被膜上即顯示n+1條紅線，表明結果為陽性；如僅出現一條紅線(質控線)，表明結果為陰性；如不顯示紅線，則表明測試條已失效。因此，利用本測試條，只需一次加樣，1-10分鐘即可對三種傷寒抗原進行檢測，簡單、方便、快捷。膠金標記抗體與包被抗體配對性良好，因此測試準確度高。
下面通過實施例結合附圖進一步說明本發明實施例1傷寒桿菌抗原多元檢測測試條，包括PVC基材1、粘附於基材上部(本實施例中上、下部以測試條使用時標本樣品泳動方向為準)的吸水棉漿板2、粘附於基材下部的玻璃纖維膜3、粘附於基材中部的硝酸纖維膜4、不乾膠覆膜6粘附於玻璃纖維膜3上靠近基材中間部位，覆膜6與玻璃纖維膜3之間夾持固定有一塊無紡布5。吸水棉漿板3、硝酸纖維膜4、無紡布5和玻璃纖維膜6端面緊密接觸。無紡布5上吸附有抗傷寒、甲、乙型副傷寒桿菌鞭毛抗原膠體金標記的單克隆抗體，膠金抗體濃度為2.0×10-3mg/cm2，中部硝酸纖維膜4上有一條質控線和三條包被抗體線，分別包被有抗鼠IgG和與無紡布上吸附的膠金標記抗體配對性良好的抗傷寒、甲、乙型副傷寒桿菌鞭毛抗原單克隆抗體，抗體濃度為6.0×10-4mg/cm2。
實施例2本實施例中，膠體金標記抗體濃度為1.0×10-3mg/cm2，包被抗體濃度為2.0×10-4mg/cm2，其它同實施例1。
實施例3本實施例中，膠體金標記抗體濃度為3.0×10-3mg/cm2，包被抗體濃度為8.0×10-4mg/cm2，其它同實施例1。
權利要求
1.傷寒桿菌抗原多元檢測測試條，包括基材、覆蓋於基材上的纖維膜、覆蓋於基材上部的吸水膜，本發明特徵在於，測試條下部纖維膜上吸附有抗傷寒、甲型副傷寒、乙型副傷寒桿菌鞭毛抗原單克隆標記抗體；中部纖維膜上自下而上分布有一條包被有抗鼠IgG的質控線，三條包被有與下部纖維膜上吸附的標記抗體配對性良好的抗傷寒、甲型副傷寒、乙型副傷寒桿菌鞭毛抗原單克隆抗體的檢測線，測試條下部纖維膜及上部吸水膜上覆蓋有覆膜。
2.如權利要求1所述的多元檢測測試條，其特徵在於，標記抗體吸附於固定在測試條下部的纖維膜與覆膜之間的無紡布上；所述下部纖維膜為玻璃纖維膜，中部纖維膜為硝酸纖維膜。
3.如權利要求1或2所述的多元檢測測試條，其特徵在於，標記抗體標記物為膠金，膠金抗體濃度為(1.0-3.0)×10-3mg/cm2，包被抗體濃度為(2.0-8.0)×10-4mg/cm2。
4.如權利要求1或2所述的多元檢測測試條，其特徵在於，基材選用PVC板，吸水膜選用吸水棉漿板，覆膜選用醫用不乾膠膜，纖維膜、吸水膜粘附於PVC板上，覆膜粘貼於纖維膜和吸水膜上。
5.如權利要求3所述的多元檢測測試條，其特徵在於，基材選用PVC板，吸水膜選用吸水棉漿板，覆膜選用醫用不乾膠膜，纖維膜、吸水膜粘附於PVC板上，覆膜粘貼於纖維膜和吸水膜上。
全文摘要
傷寒桿菌抗原多元檢測測試條,屬醫用診斷用品領域。包括基材、覆蓋於基材上面的纖維膜、吸水棉漿板。測試條下部纖維膜上面的無紡布中吸附有抗傷寒、甲、乙型副傷寒桿菌鞭毛抗原單克隆標記抗體,中部纖維膜上分布有一條質控線和三條檢測線,分別包被有抗鼠IgG和與標記抗體配對性良好的單克隆抗體。本發明利用層析技術可在一個測試條上用同一份樣品一次加樣即可方便地檢測出傷寒、甲、乙型副傷寒抗原,簡便、快捷、準確。
文檔編號G01N33/569GK1271860SQ9910448
公開日2000年11月1日 申請日期1999年4月23日 優先權日1999年4月23日
發明者彭志剛, 王玉金, 楊書豪, 邊倩茹, 王偉, 田素娟, 楊豔豔, 王玉珠, 朱國珍, 郭潔瑩, 張玉梅, 鄭蓬舉 申請人:鄭州博賽生物技術研究所