一種從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法
2023-09-10 01:04:35 1
專利名稱：一種從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法
技術領域：
本發明涉及從中藥提取分離五沒食子醯基葡萄糖的方法，特別是採用高速逆流色譜分離 製備五沒食子醯基葡萄糖的方法。
背景技術：
五沒食子醯基葡萄糖是一種具有多種藥理作用的生物活性組分。最近有研究顯示它具有 明顯的抗癌作用和減少糖尿病伴隨的肥胖等功效。這些研究提示五沒食子醯基葡萄糖將可能 成為種具有巨大開發潛力的天然藥物。
有文獻報導(Ren Yulta， et al. J Med Chem. 2006， 49 (9): 2829.)，可以通過化學合成的方法製備 五沒食子醯基葡萄糖。但工藝繁雜、成本昂貴使其應用受到很大限制。本發明人已研究證實 在一些中藥中含有五沒食子醯基葡萄糖，因而從中藥中提取、分離和純化五沒食子醯基葡萄
糖具有廣泛的應用前景。但五沒食子醯基葡萄糖的化學結構複雜，溶解性較差，分離純化較 難。通常從中藥中提取有效成分的方法多採用固相填充柱色譜法進行分離，然而由於在五沒 食子醯基葡萄糖分子中含有多個酚羥基會與固體介質表面產生很強的吸附作用，導致嚴重不 可逆吸附，不僅造成回收率很低，而且分離工藝繁瑣。採用高速逆流色譜分離技術可以提高 樣品的回收率，同時具有操作簡單、重現性好、分離效率高、分離量較大等特點，可以有效 地解決傳統分離方法的缺陷。
發明內容
本發明的目的是提供一種從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法。 為了實現上述目的，採用以下技術方案
(1) 五沒食子醯基葡萄糖的提取
將中藥粉碎，用乙醇-水溶液或丙酮-水溶液為溶劑浸泡中藥粉末並超聲提取，得到的提 取液進行減壓濃縮獲得棕色稠膏；用水溶解該稠膏，再用乙酸乙酯萃取3-5次後，將萃取液 減壓蒸乾，得到五沒食子醯基葡萄糖的粗提物。
(2) 五沒食子醯基葡萄糖的初步純化
將五沒食子醯基葡萄糖的粗提物用高速逆流色譜分離法進行初步分離。收集含五沒食子 醯基葡萄糖的組分，減壓蒸乾溶劑，得到五沒食子醯基葡萄糖的初分物。 .(3)五沒食子醯基葡萄糖的精製
將(2)所得到的五沒食子醯基葡萄糖的初分物用高速逆流色譜分離法再一次進行分離 純化，最終得到高純度的五沒食子醯基葡萄糖單體。
作為提取原料的中藥為白芍、赤芍、五倍子、牡丹皮、黃芩、蘆薈、決明子、地錦草、 第枝核、菊花、紅花、杜仲和大黃等。
所用的乙醇-水溶液或丙酮-水溶液中，乙醇或丙酮的體積百分比為40-60%;並按每克白 芍粉末用5-10ml溶劑的比例進行浸泡。超聲提取的溫度是40-6CTC，超聲時間為1-2小吋。 溶劑濃縮、乾燥的溫度均小於6(TC。
用高速逆流色譜分離純化時，溶劑體系由烷烴-脂肪酸酯-脂肪醇-水組成的體系，其中垸 烴可選用正己烷或環己垸等；脂肪酸酯可選用乙酸乙酯或乙酸甲酯等；脂肪醇可選用甲醇、 乙醇、丙醇、異丙醇或正丁醇等，烷烴-脂肪酸酯-脂肪醇-水的配比為(0.5-2): (8-12): (1-3): 10;採用上相作固定相，下相作流動相的反相洗脫方式。
分別使用兩種不同的溶劑體系，經過高速逆流色譜對粗提物的兩次分離，最終得到高純 度的五沒食子醯基葡萄糖單體。
與柱色譜法相比，採用本發明方法工藝簡單、樣品無損失、目的產物收率高、分離效果
好，可以從白芍中分離純化得到純度在95%以上的五沒食子醯基葡萄糖單體。
具體實施例方式
實施例l用乙醇-水溶液提取粗提物
1. 將白芍粉碎過40目篩，稱取20g白芍粉末，加入100ml乙醇-水溶液(乙醇的體積分 數為50%)浸泡並進行超聲提取。提取溫度為60'C，超聲時間為lh,過濾，保留濾液。 在同樣條件下再次加入乙醇-水溶液，對濾渣再提取，反覆3次，將三次濾液合併。在 50'C下，減壓蒸發濃縮，除去有機溶劑得到棕色稠膏。
2. 加入適量水將稠膏溶解，用水飽和的乙酸乙酯萃取3次，合併乙酸乙酯層萃取液，在 50'C下，減壓蒸發濃縮至蒸乾溶劑，得到五沒食子醯基葡萄糖粗提物。
實施例2用丙酮-水溶液提取粗提物
1. 將赤芍粉碎過40目篩，稱取20g赤芍粉末，加入100ml丙酮-水溶液(丙酮的體積分 數為60%)浸泡並進行超聲提取。提取溫度為6(TC，超聲時間為lh，過濾，保留濾液。 在同樣條件下，再次加入丙酮-水溶液，對濾渣再提取，反覆3次，將三次濾液合併。在 50'C下，減壓蒸發濃縮，除去有機溶劑得到棕色稠膏。
2. 加入適量水將稠膏溶解，用水飽和的乙酸乙酯萃取3次，合併乙酸乙酯層萃取液，在5(TC下，減壓蒸發濃縮至蒸乾溶劑，得到五沒食子醯基葡萄糖粗提物。 實施例3五沒食子醯基葡萄糖粗提取物的初步純化
量取正己垸87ml、乙酸乙酯870ml、甲醇174ml和水870ml，置於2000ml分液漏 鬥中，充分搖勻，靜置分層後，取上相作固定相，下相作流動相。將上相以25ml/min 的流速注入高速逆流色譜儀的色譜柱中。開啟逆流色譜儀至800轉/min，然後以 2.0ml/min的流速泵入流動相，平衡高速逆流色譜系統。用20ml下相溶液溶解200mg 五沒食子醯基葡萄糖粗提物，待體系平衡後，由進樣闊進樣，用紫外一可見檢測器在 280nm下監測洗出液。根據檢測器採集的圖譜，收集含有五沒食子醯基葡萄糖的組分。 在5(TC下，減壓蒸發濃縮至蒸乾溶劑，得到五沒食子醯基葡萄糖初分物，其中五沒食 子醯基葡萄糖含量約為40%。
實施例3五沒食子醯基葡萄糖粗提取物的精製
量取正己垸90ml、乙酸乙酯900ml、甲醇90ml和水900ml，置於2000ml分液漏鬥 中，充分搖勻，靜置分層後，取上相作固定相，下相作流動相。將上相以25ml/min的流 速注入高速逆流色譜儀的色譜柱中。開啟逆流色譜儀至800轉/min，然後以2ml/min的 流速泵入流動相，平衡高速逆流色譜系統。用20ml下相溶液溶解10mg五沒食子醯基葡 萄糖初分物，待體系平衡後，由進樣閥進樣，用紫外一可見檢測器在280nm監測洗出液。 根據檢測器採集的圖譜，收集含五沒食子醯基葡萄糖峰的組分。在5(TC下，減壓蒸發濃 縮至蒸乾溶劑，得到棕色五沒食子醯基葡萄糖固體，經HPLC檢驗，純度為95.8%。
權利要求
1.一種從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法，其特徵在於，步驟如下(1)五沒食子醯基葡萄糖的提取將中藥粉碎，用乙醇-水溶液或丙酮-水溶液為溶劑浸泡中藥粉末並超聲提取，得到的提取液進行減壓濃縮獲得棕色稠膏；用水溶解該稠膏，再用乙酸乙酯萃取3-5次後，將萃取液減壓蒸乾，得到五沒食子醯基葡萄糖的粗提物。(2)五沒食子醯基葡萄糖的初步純化將五沒食子醯基葡萄糖的粗提物用高速逆流色譜分離法進行初步分離。收集含五沒食子醯基葡萄糖的組分，減壓蒸乾溶劑，得到五沒食子醯基葡萄糖的初分物。(3)五沒食子醯基葡萄糖的精製將(2)所得五沒食子醯基葡萄糖的初分物用高速逆流色譜分離法再一次進行分離純化，最終得到高純度的五沒食子醯基葡萄糖單體。
2. 根據權利要求1所述的從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法，其特徵在於.-作為提取原料的中藥為白芍、赤芍、五倍子、牡丹皮、黃芩、蘆薈、決明子、地錦草、荔 枝核、菊花、紅花、杜仲和大黃等。
3. 根據權利要求1所述的從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法，其特徵在於所用的乙醇-水溶液或丙酮-水溶液中，乙醇或丙酮的體積百分比為40-60%;並按每克中藥 粉末用5-10ml的比例進行浸泡。
4. 根據權利要求1所述的從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法，其特徵在於.-超聲提取的溫度是40-6(TC，超聲時間為1-2小時。
5. 根據權利要求1所述的從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法，其特徵在於 在所述步驟中所有減壓濃縮或減壓乾燥的溫度均小於60°C 。
6. 根據權利要求1所述的從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法，其特徵在於 用高速逆流色譜分離時採用上相作固定相，下相作流動相的反相洗脫方式。
7. 根據權利要求1所述的從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法，其特徵在於用高速逆流色譜進行分離的溶劑體系為垸烴-脂肪酸酯-脂肪醇-水組成的體系，其中烷經可選用正己垸或環己垸；脂肪酸酯可選用乙酸乙酯或乙酸甲酯；脂肪醇可選用甲醇、乙醇、 丙醇、異丙醇或正丁醇，垸烴-脂肪酸酯-脂肪醇-水的配比為(0.5-2): (8-12): (1-3): 10。
8. 根據權利要求1所述的從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法，其特徵在於分別選用兩種不同的溶劑體系，經高速逆流色譜兩次分離(第一次為初步純化，第二次為 精製)，得到高純度的五沒食子醯基葡萄糖單體。
全文摘要
本發明公開了一種從中藥中分離製備五沒食子醯基葡萄糖的方法。其包括以下步驟1.提取將中藥粉碎，用乙醇-水溶液或丙酮-水溶液為溶劑浸泡中藥粉末並超聲提取，將得到的提取液減壓濃縮獲得棕色稠膏；用水溶解該稠膏，再用乙酸乙酯萃取3-5次後，將萃取液減壓蒸乾，得到五沒食子醯基葡萄糖的粗提物。2.純化將五沒食子醯基葡萄糖的粗提物溶解，分別使用兩種不同的溶劑體系，經過高速逆流色譜對粗提物的兩次分離，最終得到高純度的五沒食子醯基葡萄糖單體，純度可達95％以上。本發明工藝簡單易行，提取效率高、分離效果好，回收率高，具有很好的推廣應用價值。
文檔編號C07H13/08GK101525357SQ200810008080
公開日2009年9月9日 申請日期2008年3月7日 優先權日2008年3月7日
發明者宋學英, 華 楊, 殷志爽, 橋 王, 潮 王, 王維聰 申請人:首都醫科大學