一種紅心柯組培苗生根誘導方法與流程

2023-09-12 04:08:30 1

本發明涉及紅心柯無性繁殖技術，尤其是一種紅心柯組培苗生根誘導方法。

背景技術：

紅心柯（Lithocarpus carolinae (Skan) Rehd），系殼鬥科（Fagaceae）柯屬（Lithocarpus）喬木，高約20米，胸徑40釐米，頂部芽鱗三角狀長披針形，當年枝有縱稜，幹後暗黑褐色，二年生枝有散生的皮孔，枝、芽鱗、葉均無毛。葉厚紙質，長圓形，稀倒卵狀長橢圓形，長13-18釐米，寬4-6釐米，頂部尾狀短尖，基部楔尖，中脈在葉面微凸起，或上段平坦，側脈每邊15-20條，直達葉緣的齒端，或近葉緣處急彎向上，漸纖細而隱沒，在脈腋處有星狀小叢毛，葉緣下段全緣，上段鑽齒狀，兩面同色，幹後暗褐色；葉柄長1.5-2釐米。殼鬥每3或5個一簇，成熟殼鬥淺盤狀，高10-15毫米，寬30-40毫米，基部有甚短的柄，殼壁上部較薄，下部厚約2.5毫米，包著堅果下半部，幹後暗褐色，稍油潤，小苞片寬三角形，基部的呈菱形，中央脊肋狀縱向增厚，緊貼，覆瓦狀排列；堅果扁圓形，高24-30毫米，寬40-45毫米，果壁厚6-10毫米，頂部平坦，但中央稍凹陷，暗褐色，無毛，稍有光澤，果臍深2-4毫米，口徑25-30毫米，凹凸不平，中央部分略隆起。果期9-10月。紅心柯產雲南南部至東南部（墨江、屏邊、金平）。生於海拔1500-2000米山地雜木林中。

目前，紅心柯資源仍處於野生分布狀態，但隨著保持植物多樣性的需求，規模化人工栽培紅心柯資源勢在必行。組織培養技術是一種快速無性繁殖技術，選擇紅心柯優良家系或者無性係為材料，通過組織培養方法繁殖苗木，既可以滿足生產上的數量要求，又可保持母本性狀。然而在組培過程中，常常出現生根率低、生根不統一、根係數量少以及根系不粗壯的問題。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種能提高紅心柯組培苗的生根率，根係數量以及根系萌發整齊度的紅心柯組培苗生根誘導方法。

為了實現上述發明目的，本發明的技術方案如下：

一種紅心柯組培苗生根誘導方法，選取增殖繼代紅心柯小苗，先進行預生根培養，然後再進行生根培養，置於適宜環境中培養，獲得帶根組培苗，主要操作步驟如下：

（1）取材：選取經常規組培中壯芽培養35～40d的紅心柯繼代芽，消毒瓶子外表後，在超淨工作檯上的無菌空間內，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，於節下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄，備用；

（2）預生根培養：將步驟（1）修剪後的單芽接種於預生根培養基中,在特定的光溫環境中進行預生根培養；

（3）生根培養：待步驟（2）中的單芽經過30～35d預生根培養後，將單芽轉接入生根培養基，在特定的光溫環境中進行生根培養。

以上所述的預生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+NAA 1.0～2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

以上所述的生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+IAA 1.0～2.0mg/L+ABT2#0.5～2.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

以上所述的改良MS培養基的基本組成為：KNO3 890 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 345 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。

以上步驟（2）和步驟（3）所述的光溫環境為：溫度20±1℃，溼度40～45%，光照強度2000～2500lux，光照15～16h/d。

本發明具有的優點及有益效果如下：

1、本發明採用1/2改良MS培養基作為基本培養基，同時重點調整了與紅心柯生根的相關的微量元素和有機成分，使得培養基更科學，更有針對性，更易促使紅心柯繼代芽生根，效果顯著。

2、本發明在生根誘導前採用低濃度NAA和抗壞血酸（VC）對繼代單芽進行預生根培養，然後再進行生根培養，可使組培苗髮根統一，髮根速度快，根系粗壯且數量較多。

3、本發明在增殖繼代單芽經過30～35d時間預生根培養後轉入生根培養，即可達到預生根培養效果，又避免了小苗在預生根培養階段長出根系而使後期生根培養髮根不整齊。

4、本發明的在特定的光溫條件下進行預生根和生根培養，適應紅心柯組培苗的生長特性，促進苗木的生長。

5、本發明縮短了紅心柯繼代芽生根周期，生根率高，根系多，質量好，生根組培苗移栽成活率高，可實現紅心柯組培產業化育苗，為人工無性系林的建設提供優質種苗，具有較好的經濟效益、社會效益和生態效益。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。

實施例1：

選取經常規組培中壯芽培養35～36d的紅心柯繼代芽，消毒瓶子外表後，在超淨工作檯上的無菌空間內，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，於節下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪後的單芽接種於預生根培養基中,置於溫度20±1℃，溼度40%，光照強度2000lux，光照16h/d的條件下進行預生根培養。其中所述的預生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+NAA 1.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

單芽經過30～35d預生根培養後，將單芽轉接入生根培養基，置於溫度20±1℃，溼度40%，光照強度2000lux，光照16h/d的條件下進行生根培養。所述的生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+IAA 1.0mg/L+ABT2#0.5 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

以上所述的改良MS培養基的基本組成為：KNO3 890 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 345 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。

實施例2：

選取經常規組培中壯芽培養36～37d的紅心柯繼代芽，消毒瓶子外表後，在超淨工作檯上的無菌空間內，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，於節下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪後的單芽接種於預生根培養基中,置於溫度20±1℃，溼度40%，光照強度2500lux，光照15h/d的條件下進行預生根培養。其中所述的預生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+NAA 1.5mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

單芽經過30～35d預生根培養後，將單芽轉接入生根培養基，置於溫度20±1℃，溼度40%，光照強度2500lux，光照15h/d的條件下進行生根培養。所述的生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+IAA 1.0mg/L+ABT2#1.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

以上所述的改良MS培養基的基本組成為：KNO3 890 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 345 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。

實施例3：

選取經常規組培中壯芽培養37～38d的紅心柯繼代芽，消毒瓶子外表後，在超淨工作檯上的無菌空間內，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，於節下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪後的單芽接種於預生根培養基中,置於溫度20±1℃，溼度45%，光照強度2000lux，光照16h/d的條件下進行預生根培養。其中所述的預生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+NAA 2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

單芽經過30～35d預生根培養後，將單芽轉接入生根培養基，置於溫度20±1℃，溼度45%，光照強度2000lux，光照16h/d的條件下進行生根培養。所述的生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+IAA 2.0mg/L+ABT2#1.5 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

以上所述的改良MS培養基的基本組成為：KNO3 890 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 345 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。

實施例4：

選取經常規組培中壯芽培養39～40d的紅心柯繼代芽，消毒瓶子外表後，在超淨工作檯上的無菌空間內，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，於節下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪後的單芽接種於預生根培養基中,置於溫度20±1℃，溼度45%，光照強度2500lux，光照15h/d的條件下進行預生根培養。其中所述的預生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+NAA 2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

單芽經過30～35d預生根培養後，將單芽轉接入生根培養基，置於溫度20±1℃，溼度45%，光照強度2500lux，光照15h/d的條件下進行生根培養。所述的生根培養基其原料含量為：1/2改良MS培養基+IAA 2.0mg/L+ABT2#2.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。

以上所述的改良MS培養基的基本組成為：KNO3 890 mg/L；NH4NO3 810 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 345 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。