長效注射用混懸液及其製備方法

2023-09-12 06:28:55

專利名稱：長效注射用混懸液及其製備方法
技術領域：
本發明涉及長效注射用混懸液，其中包含生理上可接受的，X-衍射呈無定形及結晶的低溶解性的鹽類的具有治療意義的活性肽類，及其製備方法。
在治療中，肽類通常只能在經非胃腸道的注射給藥時才能安全、高效，這是因為經口服給藥它們會被酶降解而破壞，而且經鼻給藥通常只有很少量的藥物能被吸收，而經皮膚給藥根據就不吸收。
由於在生物體內肽類僅有很短的半衰期，肽類的非腸道給藥劑型，例如LHRH類似物，即所說的超興奮劑和LHRH拮抗劑，必須被天天使用以達到所希望的療效，其中包括對LH和FSH抑制劑的兩組物質的使用。
其結果是使男性的睪酮生成量和女性的雌二醇生成量下降到一個特定的值之下。可使用術語化學閹割。
LHRH類似物被理解為超興奮劑如戈舍瑞林(INN)和曲普瑞林(INN)，以及拮抗劑如cetrorelix(INN)antide(INN)或ganirelix(INN)。戈舍瑞林，和戈舍瑞林的合成，公開了Drug of the Future，5(4)1980，p191。布舍瑞林和布舍瑞林的合成公開於Drugs of theFuture，4(3)，1979，p173和Drugs of Today，21，(305)，(1985)。De-capeptyl以及decapeptyl的合成公開於Drugs of the Future，3，(9)，(1978)，p645。Leuprolide和Leuprolide的合成公開於Drugs of theFuture，7(12)，(1982)，p883。
Azaline B公開於GHRH-Analogues-The State ofthe Art(1993)，Parthenon Publishing Groups Ed.，B.Lunenfeld，V.Insler，Pages 13-26。
已有很多人在試圖製備具有持續釋放效果的長效LHRH類似物製劑。例如，GB2 052 258公開了由肽的鋅鹽，芝麻油和硬脂酸鋁製備的含LHRH類似物質持續釋放注射劑。
事實上超興奮劑和拮抗劑的差異在於，對於超興奮劑，反饋機理導致在前幾周的治療中與過高激素釋放，即所說發作，有關的效果，它必須用另外的藥物對抗。相反地，對於拮抗劑，例如，Cetrorelix(INN)，藥理作用立即產生並不存在發作機理。持續降低血液中性激素水平通常用於前列腺癌和乳腺癌的緩和治療中，以抑制依賴於性激素的腫瘤的生長，也可用於治療子宮內膜異位。從化學的角度講LHRH-超興奮劑和拮抗劑為九肽或十肽。
上面提到的一個有效的LHRH拮抗劑是Cetrorelix，胺基酸序列為Ac-Dnal-PpcL-Phe-Dpal-Ser-Tyr-Dcit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2的十肽。它的合成和藥理性質在EP299402中公開。Cetrorelix乙酸鹽已被證明為一生理上可接受的鹽。在臨床前研究和臨床研究中發現Cetrorelix乙酸鹽水溶液必須被每日注射，以使睪酮和雌二醇激素水平降到適當範圍，直至下次注射。雖然慢性病患者和不在醫院治療的患者設計的一星期給一次藥代替每日給藥已走出了第一步，但是，可達到閾劑量的作用持續時間卻不能被延長。
目前使用的LHRH—類似物為每日使用的水溶性鹽的溶液如注射溶液或者每日多次經鼻使用的布舍瑞林乙酸鹽滴鼻劑(Supref-act nasal)或那法瑞林乙酸鹽滴鼻劑，此劑型至今只在美國上市。如以上所述，這些藥劑形式必須被經常地使用。注射劑只能由醫生給藥，而滴鼻劑一天得用藥好幾次。這兩種藥劑形式都很不適合於慢性病的治療。
DE-05 42 23 282.1描述了通過微膠囊法製備Cetrorelix雙經萘酸鹽的持續釋放製劑的方法。植入劑是一種用於長時間間隔給藥的藥劑形式。例如，當植入皮下後，一個包含了戈舍瑞林乙酸鹽的可生物降解的聚(乳酸—乙醇酸)共聚物圓柱可有效地降低睪酮水平(Zoladex depot)。每月注射一次含活性物質亮丙瑞林乙酸鹽的可生物降解的聚合物顆粒的混懸液也可有效地降低這一時期的性激素水平(Enantone MonatsdepotR)。
兩種持續釋放劑型將在下面的專利或專利申請中描述。除用藥間隔這一優點外，它們的明顯的缺點將在下文中列出。
EP 0058 481描述了以ZoladexR商標上市的植入劑的組成與製備。這種劑型的缺點在於使用特需的擠壓機和包裝機生產此種圓柱體劑型的昂貴的工藝，這些機器將此圓柱體劑型插入到特殊設計的套管很厚的注射器中。這種圓柱體直徑為1mm，長度為幾個毫米。當植入患者時引起劇痛和淤血，所以需要一種無疼痛的劑型。
EP 0 052 510描述了例如那法瑞林乙酸鹽的微粒體的組成與製備。在氯化烴存在下將活性物質摻入到聚(乳酸，乙醇酸)共聚物中。因為所用的具有體內所需的生物降解性能的聚合物僅溶於氯化烴中，所以氯化烴在該組合物中的使用是不可避免的。用該方法製備的劑型中包含有大量殘餘溶劑，近似值＝1000ppm，這是其缺點。越來越多的最新研究結果表明，氯化烴有致癌性，根據現行的歐洲藥典(Pharm Europe，Vol 4 No.1，March 1992)規定，現在將原料和劑型中的殘餘溶劑含量限制在＜50ppm。該方法另外的缺點是由於多肽在水相中的損失使實際加入微膠囊的活性物質含量編低，而此步驟在生產中是必不可少的。
為了藥物的安全性，只有用繁瑣的後處理方法才能將殘餘溶劑含量降到該閾值以下。例如，Syntex提出了一種用次臨界CO2降低殘餘溶劑的方法。
DE 4023 134 A1使用了一種如上所述的將肽類摻入聚(乳酸，乙醇酸)共聚物類型的可生物降解的聚合物中的相似方法。在該方法中，使用不溶於水的肽鹽代替肽乙酸鹽混入聚酯中以減少大量活性物質的損失。不溶於水的肽鹽如雙羥萘酸鹽，硬脂鹽和棕櫚酸鹽。如上面描述過的，這一方法存在必須使用致癌烴的缺點，並且存在含有氯代甲烷或氯仿溶劑這些生理上不接受的殘餘溶劑的問題。
EP 145 240包含了其它摻加水溶性肽鹽的方法。在通過複合乳劑將活性物質水溶液混入可生物降解的聚(乳酸、乙醇酸)共聚物的複雜過程中，活性物質有顯著的損失，其缺點還在於使用了氯化烴。
在EP 505 966中，通過含有氯化烴的活性物質一聚合物溶液的噴霧乾燥將布舍瑞林乙酸鹽嵌入聚(乳酸，乙醇酸)共聚物中。反過來說，此方法有使用致癌的氯化烴作溶劑的缺點。
當使用氯化烴時，不僅藥劑中的高殘留溶劑量是其缺點，而且，從生態學角度看，就使用這些溶劑本身而言，產生了氯化烴在生產地的處理問題，而且對工人有危險。
根據WO 92 14449，一些易溶解的肽，如生長激素也進行了混合法製備。例如，將活性物質混合入月桂酸中，熔化，並在冷卻後將此混合物研磨成100μm的顆粒。US 5,137,669在製備LHRH興奮劑持續釋放劑型時使用了同樣的方法，以使這些顆粒以混懸液的形式注射來延緩有效成分的釋放。這兩種製劑的共同因素是需要長時間釋放有效成分的載體物質，並且只能使用繁瑣的工藝生產注射劑。直到今天，檢驗脂肪沉積物的耐藥性，及其可靠度和有效成份的再生釋放還是不可能的。對於脂肪嵌入物，在以包封物形式給藥的部位可產生副作用，這種副作用在長達數年以上的治療中是無法被耐受的。
由於甲磺酸溴麥角環肽，一種活性成份，很難製成緩釋劑型，DE3430852合成了一種新聚酯，如葡萄糖與乳酸和乙醇酸的聚酯，以便達到期望的活性物質的釋放分布型。這種情況下需要進行綜合的，高成本的開發和毒理學試驗以便製備一種有著充足持續作用時間的緩釋劑型，因為很明顯，沒有更簡單，更便宜的劑型能達到同樣的目的。
雙羥萘酸(4，4』-亞甲基—雙(3-羥基-2-萘酸)經常用於藥物制型中以便製備藥物的難溶鹽。這些難溶鹽在體內滯留時間長，可使藥物緩慢釋放(Rompps Chemie-Lexikon，Sttuttgart 1976，p.1007)。
根據權利要求1的本發明的製劑可令人驚奇地在不使用可生物降解的聚合物或脂肪時，產生意外的作用時間延長和療效的提高。不僅僅是由激素抑制時間測得的作用時間的延長，而且還發現腫瘤的生長被抑制到超比例的範圍內。
本發明的製劑也可以用於LHRH興奮劑，如用於Lenprolide布舍瑞林，戈舍瑞林和曲普瑞林。本發明的製劑也可用於韓蛙皮素拮抗劑，生長抑素拮劑劑和GHRH類似物。
按下列程序進行實驗對DM BA(7，12-二甲基苯並[a]-蒽)誘導的Spragne-Daw-ley大鼠乳腺癌的抑制作用方法雌性Spragne-Dawley大鼠(動物飲食Altromin R，任意給水)在50天齡，用胃管經口將溶於1ml橄欖油的20mg 7，12-二甲基苯並[a]—蒽給藥。每星期觸摸動物來監視腫瘤的發展。在誘導後第35天和第70天約90％的大鼠有腫瘤發展，它們適於進行實驗。
用Druckry.H，Steinhoff.D.Nakayama，M，Preussmanp，R，Anger，K(1983)，Experimentelle Beitrage zum Dosis-Problem in derKrebs-Chemotherapia und zur Wirkung von Endoxan，[xperimental.Contributions to the doseproblem in cacer chemotherapy and to themode of action of Endoxan]，Dtsoh.Med.Wschr.88651.的方法測定腫瘤的重量。通過比較觸摸法測定的腫瘤重量和直接稱重法(切除腫瘤之後)測定的腫瘤重量驗證該方法。
相關係數為0.98。當腫瘤的總重量達到約1g後，將動物隨機分組，每組7隻，分為對照組和處理組。
立即對處理組皮下注射試驗藥物。
通過使用亞甲藍染色的陰道細胞塗片的方法測定並通過Jones，T.C，Mohr.U，Hunt，K.D(1972)The genital，System，in Mono-graphs on Pathology of lakaratory animals sponsored by the Intema-tional Life Science Institute(Springer，N.Y.，London)的方法評價動物的激素狀況。
實驗結果於

圖1中列出。未處理的對照組動物的腫瘤重量曲線呈現出無限制的增長。曲線1(*)和2(O)為給以在不同載體中的Cenorelix乙酸鹽而處理的結果。拉長的曲線3顯示雙羥萘酸鹽處理後腫瘤重量急劇降低。
由於在此實驗中僅單劑量給藥治療，腫瘤繼續生長是因為單方藥物治療不能殺死所有腫瘤細胞。
本發明的製劑為十肽Cetrorelix的雙羥萘酸鹽的X-衍射呈無定形的沉澱物。這種沉澱物的水混懸物，可有選擇地含有一些等滲添加劑，比肽的水溶液在動物模型上顯現出明顯的作用延長。令人吃驚地發現，其作用持續時間大約和包含了肽雙羥萘酸鹽的沉澱物於如聚(乳酸，乙醇酸)共聚物的可生物降解的聚合物中的注射用混懸液的作用時間相同。此結果的特別意外在於，如上面提出的，直至今日，只有付出複雜勞動製備的將有效成份混合於可生物降解的聚合物中的緩釋劑型，才能顯現出足夠持久的作用時間。
此發現另外使人驚奇的是，根據J.Pharm Phamavol 47，878-883(1985)，嘧啶甲胺，一種2，4-二氨基嘧啶衍生物，在給小鼠皮下注射後，與它的雙羥萘酸鹽比較，在藥物動力學表現，血漿水平過程和AUC方面沒有顯示出不同。相似地，咪丙嗪鹽酸鹽在口服給藥後沒有顯現出與咪丙嗪雙羥萘酸鹽有什麼不同(Indian Journal ofPhysiology and Pharmacology 25，(4)，331-338(1989)。正如結晶胰島素鋅混懸液用於治療糖尿病，非肽藥物的結晶注射用混懸液，如強的松龍或去炎松，被認為是緩釋劑型。胰島素包含51個胺基酸。後來所述的這些劑型均為晶體。而X-射線衍射分析顯示本發明的劑型為無定型。本發明製劑的粒度均在5μm到200μm之間。粒度在5μm以下的Cetrorelix雙羥萘酚鹽顯示出比本發明製劑差的持續釋放作用。類似地，粒度超過200μm的Cetrorelix雙羥萘酸鹽比本發明的製劑持續釋放作用更差。
本發明的製劑的另一優點是批產物有更高的一致性用本發明的製劑生產出的藥物的質量幾乎沒有改變。
實施例1以肽(按游離鹼計算)和雙羥萘酸的等摩爾比，將含過量鹼的雙羥萘酸水溶液與Cetrorelix乙酸鹽的乙酸溶液合併，出現黃色結晶狀雙羥萘酸沉澱。再加入稀氫氧化鈉溶液使PH值為7-7.5，雙羥萘酸溶解並與十肽成摩爾組成為肽雙羥萘酸2∶1(Mol/Mol)的Cetrorelix雙羥萘酸含水鹽而沉澱。將該沉澱濾出，用水洗滌並乾燥。
實施例2以等摩爾比將Cetrorlix乙酸鹽和雙羥萘酸溶於二甲基乙醯胺並將該溶液滴入水中。將肽雙羥萘酸鹽為2∶1(Mol/Mol)的Cetrorelix雙羥萘酸鹽濾出並乾燥。
實施例3以摩爾比為1∶1.6的比率將Cetrorelix和雙羥萘酸溶於二甲基乙醯胺或其含水混合物中，並將該溶液滴入水中。將黃色沉澱濾出並乾燥。將所得沉澱用70％乙酸成糊，在35℃乾燥並通過80到125μm的篩。
實施例4
以肽∶雙羥萘酸為2∶1的摩爾比將鹼性雙羥萘酸鹽溶液加入肽乙酸鹽的含水乙醇溶液中。將白色沉澱濾出並乾燥。將乾燥的沉澱用50％乙醇潤溼，在真空乾燥箱中乾燥並過篩。白色產物含2∶1肽雙羥萘酸鹽(Mol/Mol)。
實施例5以肽∶雙羥萘酸為1∶1.6的摩爾比將鹼性雙羥萘酸鹽溶液加入肽乙酸鹽的含水乙醇溶液中。將黃色沉澱濾出並乾燥。將乾燥的沉澱用50％乙醇潤溼，在真空乾燥箱中於35℃乾燥並過篩。黃色產物含2∶1肽雙羥萘酸鹽(Mol/Mol)以及過量的雙羥萘酸。
對動物作用期的實驗以0.5mg cetrorelix/kg體重的劑量對雄性大鼠皮下注射沉澱物的混懸液，之後測量肽對睪酮血漿水平的影響。Cetrorelix的影響為降低睪酮水平。作為參考同時對按照DE 4023134 A1製備的含在聚(乳酸，乙醇酸)共聚物中的肽雙羥萘酸鹽的注射混懸液進行測試。通過檢測Cetrorelix乙酸鹽的水溶液確定Cetrorelix的非—持續釋放劑型的作用期。
圖3顯示在對雄性大鼠施用Cetrorelix乙酸鹽(D-20761)水溶液後測得的300小時睪酮水平變化過程。施用6小時後達到對睪酮抑制的效果。24小時後仍可在兩隻動物中測得低於1ng/ml的抑制效果，48小時或兩天後仍可在另三隻動物中測得同樣的抑制效果。
圖2顯示在以相同劑量對四隻動物11-14號施用按實施例1製備的沒有粘性添加劑的Cetrorelix雙羥萘酸鹽(D-20762)混懸液後測得的300小時睪酮水平變化過程。使用6小時後也達到對睪酮抑制的效果，192小時(八天)後有一隻動物睪酮水平升至1ng/ml以上，直到第九天其他三隻動物仍保持抑制效果。
圖4顯示用本發明雙羥萘酸鹽(顆粒大小80μm-125μm)處理後睪酮水平變化過程。
將圖2-3與圖4比較即可看出本發明製劑的優點。
權利要求
1.LHRH類似物的難溶鹽，其特徵在於其顆的粒徑主要在5到200μm之間。
2.LHRH類似物的難溶鹽，其特徵在於其顆粒的粒徑主要在10到150μm之間。
3.LHRH類似物的難溶鹽，其特徵在於其顆粒的粒徑主要在20到125μm之間。
4.根據權利要求1-3之一的難溶鹽，其特徵在於使用雙羥萘酸成鹽。
5.根據權利要求1-4之一的難溶鹽的製藥的用途。
6.根據權利要求1-5之一的鹽，其特徵在於使用Cetrocelix作為LHRH類似物
7.根據權利要求1-5之一的鹽，其特徵在於使用antarelix作為LHRH類似物。
8.根據權利要求1-5之一的鹽，其特徵在於使用ganirelix作為LHRH類似物。
9.根據權利要求1-5之一的鹽，其特徵在於使用antide作為LHRH類似物。
10.根據權利要求1-5之一的鹽，其特徵在於使用A-75998作為LHRH類似物。
11.根據權利要求6-10之一的鹽，其特徵在於使用雙羥萘酸成鹽。
12.Antide雙羥萘酸鹽，其特徵在於其顆粒直徑在10μm到125μm之間。
13.Ganirelix雙羥萘酸鹽，其特徵在於其顆粒直徑在10μm到125μm之間。
14.A-75998雙羥萘酸鹽，其特徵在於其顆粒直徑在10μm到125μm之間。
15.Cetrorelix雙羥萘酸鹽，其特徵在於其顆粒直徑在5μm到200μm之間。
16.Cetrorelix雙羥萘酸鹽，其特徵在於其顆粒直徑在10μm到125μm之間。
17.Cetrorelix雙羥萘酸鹽，其特徵在於其顆粒直徑在20μm到125μm之間。
18.根據權利要求6到17之一的鹽的製藥的用途。
19.肽的難溶鹽，其特徵在於其顆粒直徑在5μm到200μm之間。
20.根據權利要求19的鹽，其特徵在於使用雙羥萘酸成鹽。
21.根據權利要求20的鹽的製藥的用途。
22.生長抑素類似物的難溶鹽，其特徵在於其顆粒的直徑在5μm到200μm之間。
23.根據權利要求22的鹽，其特徵在於使用雙羥萘酸成鹽。
24.根據權利要求23的鹽的製藥的用途。
25.GHRH類似物的難溶鹽，其特徵在於其顆粒的直徑在5μm到200μm之間。
26.根據權利要求25的鹽，其特徵在於使用雙羥萘酸成鹽。
27.根據權利要求26的鹽的製藥的用途。
28.韓蛙皮素類似物的難溶鹽，其特徵在於其顆粒的直徑在5μm到200μm之間。
29.根據權利要求28的鹽，其特徵在於使用雙羥萘酸成鹽。
30.根據權利要求29的鹽的製藥的用途。
全文摘要
顆粒大小為5μm到200μm的LHRH類似物難溶鹽，例如Cetrovelix雙羥萘酸鹽，顯示體內持續釋放的效果。
文檔編號A61P13/00GK1136779SQ94194405
公開日1996年11月27日 申請日期1994年11月25日 優先權日1993年12月9日
發明者J·恩格爾, K·克洛克斯貝思克, T·雷斯曼, P·希爾加德 申請人:Asta藥物股份公司