一種長期保存蛹蟲草菌種的方法

2023-09-12 18:39:00

一種長期保存蛹蟲草菌種的方法
【專利摘要】本發明涉及菌種保存【技術領域】，具體涉及一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，包括如下步驟：A、菌種培養：在無菌條件下，將蛹蟲草健康菌種接種到滅菌好的PDA斜面培養基上，進行暗培養，待菌絲長滿斜面40%-60%後，進行光培養；B、培養基脫水：將裝有培養物的試管放入乾燥皿，再將乾燥皿置於冰箱中，待斜面培養基脫水至體積剩下20%-30%時，取出試管；C、菌種保存：往試管中緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物1cm以上，震蕩去除培養物表面氣泡，塞入滅菌好的脫脂棉花，用滅菌好的石蠟封口後加蓋滅菌好的pp薄膜，垂直擺放於0℃冰箱保存。本發明能更好地抑制菌種的生理活動，菌種能保存3年以上，且保存後的菌種活力依然較好。
【專利說明】一種長期保存蛹蟲草菌種的方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及菌種保存【技術領域】，具體涉及一種長期保存蛹蟲草菌種的方法。

【背景技術】
[0002]現有的石蠟保存法的一般步驟為:將液體石蠟滅菌，放於37°C恆溫箱中，使水汽蒸發掉備用。再將已分純的待存菌在最適宜的斜面培養基中培養，使得到健壯的菌體，用無菌吸管吸取已滅菌的液體石蠟，注入已長好的斜面培養基上，用量以高出斜面Icm為準，將試管直立，貼上標籤，置4°C下保存。該方法製作簡單，不需要特殊設備，菌種可以保存I年左右不需要經常移種，缺點是保存的時候需要直立放置。
[0003]但對於有些生命力頑強的菌種，如蛹蟲草菌種，現有的石蠟保存法並不適用，因此，有必要研發一種能更好地抑制菌種的生理活動的長期保存方法。


【發明內容】

[0004]為了克服現有技術中存在的缺點和不足，本發明的目的在於提供一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，該方法能更好地抑制菌種的生理活動，相比現有的液體石蠟保存法，經本發明的方法保存的蛹蟲草菌種能保存3年以上，且保存後的菌種活力依然較好。
[0005]本發明的目的通過下述技術方案實現:一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，包括如下步驟:
A、菌種培養:在無菌條件下，將蛹蟲草健康菌種接種到滅菌好的PDA斜面培養基上，進行暗培養，待菌絲長滿斜面40%-60%後，進行光培養；
B、培養基脫水:將裝有培養物的試管放入乾燥皿，再將乾燥皿置於冰箱中，待斜面培養基脫水至體積剩下20%-30%時，取出試管；
C、菌種保存:往試管中緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物Icm以上，震蕩去除培養物表面氣泡，塞入滅菌好的脫脂棉花，用滅菌好的石蠟封口後加蓋滅菌好的pp薄膜，垂直擺放於0°C冰箱保存。優選的，緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物l-3cm。
[0006]本發明通過將菌絲長滿斜面40%_60%後，再進行光培養，可以根據菌絲的生長速度來決定培養時間。本發明通過在石蠟封口後加蓋滅菌好的PP薄膜，能保持試管口的衛生，防止汙染。
[0007]優選的，所述步驟A之前還包括步驟A0、材料準備:將裝有PDA斜面培養基的試管用4層報紙封口，滅菌前在試管的內外各加I層pp薄膜，高溫高壓滅菌後去掉外層的pp薄膜，在超淨臺上晾至常溫，接種後去掉內層的PP薄膜；將脫脂棉花、石蠟和石蠟油滅菌備用。
[0008]本發明通過將裝有PDA斜面培養基的試管用4層報紙封口，其透氣性較好，方便後續培養基的脫水；本發明通過在試管的內外各加I層PP薄膜，能防止PDA斜面培養基在滅菌過程中破損；本發明通過在高溫高壓滅菌後去掉外層的PP薄膜，有利報紙上水分蒸發，保證乾爽，減少汙染。
[0009]優選的，所述步驟A中，暗培養的培養溫度為24°C ±1°C，培養時間為2-3天。
[0010]所述暗培養在乾爽環境下進行，能減少汙染；本發明通過將暗培養的培養溫度控制在24°C ±1°C，培養時間控制在2-3天，有利於菌絲的生長。
[0011]更為優選的，所述步驟A中，暗培養的培養溫度為24°C，培養時間為2天。
[0012]優選的，所述步驟A中，光培養的培養溫度為24°C ±1°C，光照強度為400-6001ux，培養時間為1-2天。
[0013]本發明通過將光照強度控制在400-6001UX，有利於分生孢子的生長；本發明通過將培養時間控制在1-2天，分生孢子數量多，質量好。
[0014]更為優選的，所述步驟A中，光培養的培養溫度為24°C，光照強度為5001ux，培養時間為I天。
[0015]上述一種長期保存蛹蟲草菌種的方法得到的蛹蟲草菌種，所述蛹蟲草菌種的保存時間為3-4年。
[0016]本發明的有益效果在於:本發明的方法採用培養基脫水步驟，能抑制菌種的生理活性，並配合低溫保存，進一步抑制菌種的生理代謝，延長保存時間。本發明的方法能更好地抑制菌種的生理活動，相比現有的液體石蠟保存法，經本發明的方法保存的蛹蟲草菌種能保存3年以上，且保存後的菌種活力依然較好。
[0017]蛹蟲草人工培養中，出發菌種的質量是決定子實體有效成分含量高低的關鍵因素，但蛹蟲草優良菌種在繁殖過程中，退化是難以避免的。因此，篩選獲得優良菌種之後，將之有效保存，並在必要的時候覆活，最大程度發揮菌種的生產性能，將有利於保證優良菌種的供應，促進人工栽培蛹蟲草的規模化和產業化發展。

【具體實施方式】
[0018]為了便於本領域技術人員的理解，下面結合實施例對本發明作進一步的說明，實施方式提及的內容並非對本發明的限定。
[0019]實施例1
一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，包括如下步驟:
A、菌種培養:在無菌條件下，將蛹蟲草健康菌種接種到滅菌好的PDA斜面培養基上，進行暗培養，待菌絲長滿斜面40%後，進行光培養；
B、培養基脫水:將裝有培養物的試管放入乾燥皿，再將乾燥皿置於冰箱中，待斜面培養基脫水至體積剩下20%時，取出試管；
C、菌種保存:在超淨工作檯上往試管中緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物1cm，用小型漩渦振蕩器去除培養物表面氣泡，塞入滅菌好的脫脂棉花，用滅菌好的石蠟封口後加蓋滅菌好的PP薄膜，垂直擺放於0°C冰箱保存。
[0020]所述步驟A之前還包括步驟A0、材料準備:將裝有PDA斜面培養基的試管用4層報紙封口，滅菌前在試管的內外各加I層pp薄膜，高溫高壓滅菌後去掉外層的pp薄膜，在超淨臺上晾至常溫，接種後去掉內層的PP薄膜；將脫脂棉花、石蠟和石蠟油滅菌備用。
[0021]所述步驟A中，暗培養的培養溫度為23°C，乾爽環境下培養2天。
[0022]所述步驟A中，光培養的培養溫度為23°C，光照強度為4001ux，培養時間為2天。
[0023]上述一種長期保存蛹蟲草菌種的方法得到的蛹蟲草菌種，所述蛹蟲草菌種的保存時間為3年。
[0024]實施例2
一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，包括如下步驟:
A、菌種培養:在無菌條件下，將蛹蟲草健康菌種接種到滅菌好的PDA斜面培養基上，進行暗培養，待菌絲長滿斜面45%後，進行光培養；
B、培養基脫水:將裝有培養物的試管放入乾燥皿，再將乾燥皿置於冰箱中，待斜面培養基脫水至體積剩下22%時，取出試管；
C、菌種保存:在超淨工作檯上往試管中緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物
1.5cm，用小型漩渦振蕩器去除培養物表面氣泡，塞入滅菌好的脫脂棉花，用滅菌好的石蠟封口後加蓋滅菌好的PP薄膜，垂直擺放於0°C冰箱保存。
[0025]所述步驟A之前還包括步驟A0、材料準備:將裝有PDA斜面培養基的試管用4層報紙封口，滅菌前在試管的內外各加I層pp薄膜，高溫高壓滅菌後去掉外層的pp薄膜，在超淨臺上晾至常溫，接種後去掉內層的PP薄膜；將脫脂棉花、石蠟和石蠟油滅菌備用。
[0026]所述步驟A中，暗培養的培養溫度為24°C，乾爽環境下培養3天。
[0027]所述步驟A中，光培養的培養溫度為23°C，光照強度為4501ux，培養時間為I天。
[0028]上述一種長期保存蛹蟲草菌種的方法得到的蛹蟲草菌種，所述蛹蟲草菌種的保存時間為3.5年。
[0029]實施例3
一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，包括如下步驟:
A、菌種培養:在無菌條件下，將蛹蟲草健康菌種接種到滅菌好的PDA斜面培養基上，進行暗培養，待菌絲長滿斜面50%後，進行光培養；
B、培養基脫水:將裝有培養物的試管放入乾燥皿，再將乾燥皿置於冰箱中，待斜面培養基脫水至體積剩下25%時，取出試管；
C、菌種保存:在超淨工作檯上往試管中緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物2cm，用小型漩渦振蕩器去除培養物表面氣泡，塞入滅菌好的脫脂棉花，用滅菌好的石蠟封口後加蓋滅菌好的PP薄膜，垂直擺放於0°C冰箱保存。
[0030]所述步驟A之前還包括步驟A0、材料準備:將裝有PDA斜面培養基的試管用4層報紙封口，滅菌前在試管的內外各加I層pp薄膜，高溫高壓滅菌後去掉外層的pp薄膜，在超淨臺上晾至常溫，接種後去掉內層的PP薄膜；將脫脂棉花、石蠟和石蠟油滅菌備用。
[0031]所述步驟A中，暗培養的培養溫度為24°C，乾爽環境下培養2天。
[0032]所述步驟A中，光培養的培養溫度為24°C，光照強度為5001ux，培養時間為I天。
[0033]上述一種長期保存蛹蟲草菌種的方法得到的蛹蟲草菌種，所述蛹蟲草菌種的保存時間為4年。
[0034]實施例4
一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，包括如下步驟:
A、菌種培養:在無菌條件下，將蛹蟲草健康菌種接種到滅菌好的PDA斜面培養基上，進行暗培養，待菌絲長滿斜面55%後，進行光培養；
B、培養基脫水:將裝有培養物的試管放入乾燥皿，再將乾燥皿置於冰箱中，待斜面培養基脫水至體積剩下28%時，取出試管； C、菌種保存:在超淨工作檯上往試管中緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物
2.5cm，用小型漩渦振蕩器去除培養物表面氣泡，塞入滅菌好的脫脂棉花，用滅菌好的石蠟封口後加蓋滅菌好的PP薄膜，垂直擺放於0°C冰箱保存。
[0035]所述步驟A之前還包括步驟A0、材料準備:將裝有PDA斜面培養基的試管用4層報紙封口，滅菌前在試管的內外各加I層pp薄膜，高溫高壓滅菌後去掉外層的pp薄膜，在超淨臺上晾至常溫，接種後去掉內層的PP薄膜；將脫脂棉花、石蠟和石蠟油滅菌備用。
[0036]所述步驟A中，暗培養的培養溫度為23°C，乾爽環境下培養3天。
[0037]所述步驟A中，光培養的培養溫度為24°C，光照強度為5501ux，培養時間為2天。
[0038]上述一種長期保存蛹蟲草菌種的方法得到的蛹蟲草菌種，所述蛹蟲草菌種的保存時間為3.5年。
[0039]實施例5
一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，包括如下步驟:
A、菌種培養:在無菌條件下，將蛹蟲草健康菌種接種到滅菌好的PDA斜面培養基上，進行暗培養，待菌絲長滿斜面60%後，進行光培養；
B、培養基脫水:將裝有培養物的試管放入乾燥皿，再將乾燥皿置於冰箱中，待斜面培養基脫水至體積剩下30%時，取出試管；
C、菌種保存:在超淨工作檯上往試管中緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物3cm，用小型漩渦振蕩器去除培養物表面氣泡，塞入滅菌好的脫脂棉花，用滅菌好的石蠟封口後加蓋滅菌好的PP薄膜，垂直擺放於0°C冰箱保存。
[0040]所述步驟A之前還包括步驟A0、材料準備:將裝有PDA斜面培養基的試管用4層報紙封口，滅菌前在試管的內外各加I層pp薄膜，高溫高壓滅菌後去掉外層的pp薄膜，在超淨臺上晾至常溫，接種後去掉內層的PP薄膜；將脫脂棉花、石蠟和石蠟油滅菌備用。
[0041]所述步驟A中，暗培養的培養溫度為25°C，乾爽環境下培養2天。
[0042]所述步驟A中，光培養的培養溫度為25°C，光照強度為6001ux，培養時間為I天。
[0043]上述一種長期保存蛹蟲草菌種的方法得到的蛹蟲草菌種，所述蛹蟲草菌種的保存時間為3年。
[0044]本發明的方法採用培養基脫水步驟，能抑制菌種的生理活性，並配合低溫保存，進一步抑制菌種的生理代謝，延長保存時間。本發明的方法能更好地抑制菌種的生理活動，相比現有的液體石蠟保存法，經本發明的方法保存的蛹蟲草菌種能保存3年以上，且保存後的菌種活力依然較好。
[0045]上述實施例為本發明較佳的實現方案，除此之外，本發明還可以其它方式實現，在不脫離本發明構思的前提下任何顯而易見的替換均在本發明的保護範圍之內。
【權利要求】
1.一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，其特徵在於:包括如下步驟: A、菌種培養:在無菌條件下，將蛹蟲草健康菌種接種到滅菌好的PDA斜面培養基上，進行暗培養，待菌絲長滿斜面40%-60%後，進行光培養； B、培養基脫水:將裝有培養物的試管放入乾燥皿，再將乾燥皿置於冰箱中，待斜面培養基脫水至體積剩下20%-30%時，取出試管； C、菌種保存:往試管中緩慢注入滅菌好的石蠟油至淹沒培養物Icm以上，震蕩去除培養物表面氣泡，塞入滅菌好的脫脂棉花，用滅菌好的石蠟封口後加蓋滅菌好的pp薄膜，垂直擺放於O °C冰箱保存。
2.根據權利要求1所述的一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，其特徵在於:所述步驟A之前還包括步驟A0、材料準備:將裝有PDA斜面培養基的試管用4層報紙封口，滅菌前在試管的內外各加I層PP薄膜，高溫高壓滅菌後去掉外層的PP薄膜，在超淨臺上瞭至常溫，接種後去掉內層的PP薄膜；將脫脂棉花、石蠟和石蠟油滅菌備用。
3.根據權利要求1所述的一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，其特徵在於:所述步驟A中，暗培養的培養溫度為24°C ± I °C，培養時間為2-3天。
4.根據權利要求1所述的一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，其特徵在於:所述步驟A中，暗培養的培養溫度為24°C，培養時間為2天。
5.根據權利要求1所述的一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，其特徵在於:所述步驟A中，光培養的培養溫度為24°C ±1°C，光照強度為400-6001ux，培養時間為1_2天。
6.根據權利要求1所述的一種長期保存蛹蟲草菌種的方法，其特徵在於:所述步驟A中，光培養的培養溫度為24°C，光照強度為5001ux，培養時間為I天。
7.如權利要求1-6任一項所述的一種長期保存蛹蟲草菌種的方法得到的蛹蟲草菌種，其特徵在於:所述蛹蟲草菌種的保存時間為3-4年。
【文檔編號】C12N1/04GK104450521SQ201410800709
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月22日 優先權日:2014年12月22日
【發明者】鄭貴朝, 葉錦泉, 喻孟君 申請人:東莞市生物技術研究所