一種高核酸麵包酵母及其製備方法
2023-09-14 05:31:25
專利名稱：一種高核酸麵包酵母及其製備方法
技術領域：
本發明提供一種麵包酵母及其製備方法，具體涉及一種高核酸麵包酵母及其製備方法。
背景技術：
核酸在醫藥、食品、農業、化妝品等方面的應用越來越廣，從酵母菌細胞內提取核酸已經成為核酸的重要來源。現有的技術方案中主要是以假絲酵母為菌種，進行擴大培養， 收穫酵母菌體，提取核酸。假絲酵母在普通的麵包酵母工廠不能應用，限制性較大。麵包酵母菌種是國際公認的可以直接使用在飼料和食品中的安全菌株。現有技術生產鮮酵母的工藝流程一般通過菌種保藏管、斜面試管、液體試管、三角瓶、卡式瓶、種子罐、流加培養，最後得到商品酵母。其中流加培養一般為二級或三級培養，典型二級培養流程為由種子罐培養得到一代酵母(種子酵母)，分離洗滌後經二級發酵擴大培養得到二代酵母，其中種子酵母擴大培養的時間一般在10小時以上，但是常規方法製備的麵包酵母中核酸含量不高。中國專利申請CN149^64A公開了一種「富核糖核酸啤酒酵母菌體及其製造方法」，該方法製備的酵母菌體中含有相當於菌體重量10%以上的核糖核酸，但是不超過12
重量％。中國專利申請CN101760437A公開了一種「高核酸麵包酵母及其製備方法」，該方法通過控制擴大培養的培養時間等條件，製備得到了含有相當於麵包酵母菌體重量的20 重量％以上的核酸，其中RNA達到了 9. 5%以上。如果能夠進一步提高RNA的含量，那麼將更加能夠滿足市場的需求，節約原材料。
發明內容
本發明所要解決的技術問題本發明所要解決的技術問題在於，提供一種高核酸麵包酵母及其製備方法。本發明的高核酸麵包酵母中RNA的含量更高，能夠節約製備所需原料。該高核酸麵包酵母的製備方法能夠製備得到RNA含量更高的高核酸麵包酵母。另外，本發明還提供一種能夠連續製備得到所述高核酸麵包酵母的製備方法。在本發明中，高核酸麵包酵母所要滿足的條件是，含有相當於麵包酵母菌體重量的20重量％以上的核酸。為了解決上述的技術問題，本發明提供以下的技術方案第一方面，本發明提供一種高核酸麵包酵母，相對於麵包酵母菌體的100重量％， 含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大於12. 0重量％。優選地，其中的RNA大於12. 1重量％。優選地，其中的RNA大於12. 2重量％。第二方面，本發明提供一種高核酸麵包酵母的製備方法，包括麵包酵母菌體的種子罐培養和麵包酵母菌體的擴大培養，a)在擴大培養過程中，在麵包酵母菌體溼重達到100g/L 120g/L之後，加入相對於擴大培養的發酵體系為1%。g/L以上的穀氨醯胺和1%。g/L以上的天冬氨酸；b)繼續擴大培養，直至相對於麵包酵母菌體的100重量％，RNA大於12.0重量％。優選地，在步驟b)中，擴大培養直至相對於麵包酵母菌體的100重量％，RNA大於 12. 1重量％。優選地，在步驟b)中，擴大培養直至相對於麵包酵母菌體的100重量％，RNA大於 12. 2重量％。優選地，在步驟a)中，加入相對於擴大培養的發酵體系的為2%。g/L以上的穀氨醯胺和2%0 g/L以上的天冬氨酸。優選地，在步驟a)中，加入的穀氨醯胺和天冬醯胺的重量比為0.95 1. 05 1. 05 0. 95ο第三方面，本發明提供一種高核酸麵包酵母的製備方法，包括下列步驟Si)種子罐培養；S2)從種子罐中取出一部分的麵包酵母菌體料液，進行擴大培養；S3)在擴大培養過程中，在麵包酵母菌體溼重達到100g/L 120g/L之後，加入穀氨醯胺和天冬醯胺，直至穀氨醯胺和天冬醯胺相對於擴大培養的發酵體系為1%。g/L以上；S4)繼續擴大培養，直至相對於麵包酵母菌體的100重量％，RNA大於12.0重
量％ ；S5)取出擴大培養的發酵體系9. 0 11. 0%的麵包酵母菌體料液，進行分離，得到高核酸麵包酵母；並且在擴大培養的發酵體系中加入與取出的麵包酵母菌體料液大致相等的麵包酵母菌體料液；重複進行步驟S3) S5)。優選地，在步驟S5)中，取出的麵包酵母菌體料液相對於擴大培養的發酵體系為 9. 9 10. 1%，優選為 10. 0%。根據本發明的第一方面的高核酸麵包酵母，由於其中的RNA的含量更高，所以能夠節約製備所需原料。根據本發明的第二方面的高核酸麵包酵母的製備方法，能夠製備得到上述的RNA 含量更高的高核酸麵包酵母。根據本發明的第三方面的高核酸麵包酵母的製備方法，能夠實現連續製備得到上述的RNA含量更高的高核酸麵包酵母。
具體實施例方式為了本領域的技術人員能夠更加直觀和清楚地了解本發明的技術方案，下面以實施例為例對本發明的技術方案做出進一步地解釋和說明。實施例1斜面麵包酵母菌種接種於250mL搖瓶，30°C培養24h後，轉接與IOL的卡氏瓶， 30°C靜置培養48h後再轉接於IOm3的種子罐，在通風為10m3/h、溫度30°C條件下，培養24h 後，再轉接於160m3的大發酵罐進行補料發酵種子培養，發酵時間為20h，然後進行分離洗滌，將分離洗滌的酵母乳接種於160m3的發酵罐，做商品發酵，商品發酵的意思是在發酵階段溼重長到100g/L時，每小時放出IOm3的物料，同時補入糖蜜1.75m3、20%的尿素 1001^，25%磷酸二氫銨8(^、無菌熱水8. 17m3，PH為5.0，溫度為30°C，加入穀氨醯胺0. 天冬氨酸0.3%，進行連續流加培養階段。取樣檢測，RNA為12.3%。其中，mL代表毫升，°C代表攝氏度，h代表小時，L代表升，g代表克，m3代表立方米。在沒有特別說明的情況下，百分比代表質量體積百分比，單位是g/L。實施例2斜面麵包酵母菌種接種於250mL搖瓶，30°C培養24h後，轉接與IOL的卡氏瓶， 30°C靜置培養48h後再轉接於IOm3的種子罐，在通風為10m3/h、溫度30°C條件下，培養24h 後，再轉接於160m3的大發酵罐進行補料發酵種子培養，發酵時間為20h，然後進行分離洗滌，將分離洗滌的酵母乳接種於160立方發酵罐，做商品發酵，商品發酵的意思是在發酵階段溼重長到120g/L時，每小時放出10立方米的物料，同時補入糖蜜1. 90m3、20%尿素 120L，25%磷酸二氫銨96L、無菌熱水7. 89m3，PH為5. 0，溫度為30°C，加入穀氨醯胺0. 3%、 天冬氨酸0. 2%，進行連續流加培養階段。取樣檢測，RNA12. 5%。其中，mL代表毫升，°C代表攝氏度，h代表小時，L代表升，g代表克，m3代表立方米。在沒有特別說明的情況下，百分比代表質量體積百分比，單位是g/L。在本實施例中，RNA檢測方法如下(也可以採用其他的公認的檢測方法來檢測)(1)試劑0. 5N 的 HClO4 ；0. 25N 的 HClO4, N 代表摩爾。(2)設備1.毫克級天平2. 4000rpm 離心機，3.容積至少IOml的離心管4.可在^Onm讀數的分光光度計5. 70°C熱水水浴鍋6. 4°C冷水水浴鍋7. IOml 禾Π Iml 吸液管8. IOOml 容量瓶(3)測試方法如果是酵母乾粉，稱0. 06-0. 15mg酵母加入離心管；如果是18%濃度的酵母乳，則稱0. 4-0. Smg ；如果是3. 5%濃度的液體，則稱1. 5-3. Omgo mg代表毫克。百分比濃度如無特別說明，是指質量百分比濃度。1.加8ml的冷的0. 25N HC104到離心管中。2.將該離心管放入4°C冷水水浴鍋中，保溫15分鐘3. 4000rpm 離心 10 分鐘4.輕輕地倒出浮在表面的物質5.如果是酵母小顆粒，加入5ml的0. 5N HC104.振蕩混勻。6.將該離心管放入70°C水浴鍋中，保溫15分鐘；每3_4分鐘振蕩一次。7. 4000rpm 離心 10 分鐘
8.酵母顆粒溶解後，吸取Iml上清液，加入IOOml的蒸餾水，混勻。9. 260nm測光吸收值，蒸餾水作為空白。10.用待測樣品衝洗比色皿，裝滿比色皿後放入分光光度計。擦淨表面。11.記錄吸光度，重複第11步。兩次測量的平均值。(4)計算，按照下式進行計算
乾酵母中的。/_八=嫩X稀釋度遺0·5χ100 丁附Τ樣品重量χ樣品固形物百分含量其中，樣品重量以毫克計。例如在乾酵母中，假設吸光度是0. 7，乾粉重量為145mg，樣品固形物百分含量是 96%，那麼 ％ RNA 為 7. 8。
權利要求
1.一種高核酸麵包酵母，其特徵在於，相對於麵包酵母菌體的100重量％，含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大於12.0重量％。
2.根據權利要求1所述的麵包酵母，其特徵在於，其中的RNA大於12.1重量％。
3.根據權利要求2所述的麵包酵母，其特徵在於，其中的RNA大於12.2重量％。
4.一種高核酸麵包酵母的製備方法，包括麵包酵母菌體的種子罐培養和麵包酵母菌體的擴大培養，其特徵在於，a)在擴大培養過程中，在麵包酵母菌體溼重達到100g/L 120g/L之後，加入相對於擴大培養的發酵體系為1%。g/L以上的穀氨醯胺和1%。g/L以上的天冬氨酸；b)繼續擴大培養，直至相對於麵包酵母菌體的100重量％，RNA大於12.0重量％。
5.根據權利要求4所述的高核酸麵包酵母的製備方法，其特徵在於，在步驟b)中，擴大培養直至相對於麵包酵母菌體的100重量％，RNA大於12. 1重量％。
6.根據權利要求4所述的高核酸麵包酵母的製備方法，其特徵在於，在步驟b)中，擴大培養直至相對於麵包酵母菌體的100重量％，RNA大於12. 2重量％。
7.根據權利要求4 6中任意一項所述的高核酸麵包酵母的製備方法，其特徵在於，在步驟a)中，加入相對於擴大培養的發酵體系為2%0 g/L以上的穀氨醯胺和2%。g/L以上的天冬氨酸。
8.根據權利要求4 7中任意一項所述的高核酸麵包酵母的製備方法，其特徵在於，在步驟a)中，加入的穀氨醯胺和天冬氨酸的重量比為0.95 1.05 1.05 0.95。
9.一種高核酸麵包酵母的製備方法，包括下列步驟51)種子罐培養；52)從種子罐中取出一部分的麵包酵母菌體料液，進行擴大培養；53)在擴大培養過程中，在麵包酵母菌體溼重達到100g/L 120g/L之後，加入穀氨醯胺和天冬氨酸，直至穀氨醯胺和天冬氨酸相對於擴大培養的發酵體系為1%。g/L以上；54)繼續擴大培養，直至相對於麵包酵母菌體的100重量％，RNA大於12.0重量％ ；55)取出擴大培養的發酵體系9.0 11.0%的麵包酵母菌體料液，進行分離，得到高核酸麵包酵母；並且在擴大培養的發酵體系中加入與取出的麵包酵母菌體料液大致相等的麵包酵母菌體料液；重複進行步驟S3) S5)。
10.根據權利要求9所述的高核酸麵包酵母的製備方法，其特徵在於，在步驟％)中，取出的麵包酵母菌體料液相對於擴大培養的發酵體系為9. 9 10. 1%，優選為10. 0%。
全文摘要
本發明提供一種高核酸麵包酵母及其製備方法。該高核酸麵包酵母，相對於麵包酵母菌體的100重量％，含有20重量％以上的核酸，其中的RNA大於12.0重量％。本發明的高核酸麵包酵母具有更高的RNA含量，能夠提高高核酸麵包酵母的利用率。
文檔編號C12N1/18GK102559522SQ20101061346
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月30日 優先權日2010年12月30日
發明者餘明華, 俞學鋒, 匡金寶, 姚鵑, 朱昌雄, 李知洪, 楊海珍 申請人:安琪酵母股份有限公司