一種植物提取物的用途的製作方法

2023-09-14 05:13:25

專利名稱：一種植物提取物的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種從天物產物中提取的多糖的用途，確切講涉及從蕨麻中提 取的多糖的用途。
技術背景植物提取物因其具有的多種生物活性而受到人們的關注與重視，如主要來 源於植物、動物、菌類等的多糖，具有廣泛的生物活性，已引起醫學界的廣泛 興趣。近年來，隨著分子生物學的發展，人們逐漸認識到多糖與蛋白質、核酸 一樣，是涉及生命活動本質的三類生物大分子之一。對於多糖，醫藥界的興 趣尤為濃厚，至今已報導了一百多種中藥多糖，這些多糖人多具有免疫調節、 抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、延緩衰老、抗感染等多種生理活性，有的已被用 於肝炎、腫瘤、心血管疾病的治療和康復。當前國內對多糖的研究方興未艾， 總的趨勢正如國外科學家預言的那樣，今後數十年將是"多糖時代"。蕨麻是青藏高原特有的藥材，屬薔薇科植物鵝絨委陵菜i^e油7/fl朋"n'w" 丄.，其藥用部位為根，資源較為豐富。它即可以作為藥物用來治病強身,又可以 作為食品以充飢食用，是當地極具開發前景的藥材。蕨麻性平，味甘，健脾益胃，生津止渴，益氣補血，止咳利痰，利溼，亦 有滋補之效；主治脾虛腹瀉，病後貧血,營養不良等症,是藏醫的常用藥材。民間宜 長期作為營養保健品與藥品應用。《中華藏本草》中記載其塊根中含有碳水化合物、蛋白質、脂肪、鞣質、黃酮、甾醇、膽鹼、甜菜鹼、組氨酸等成分。回 晶著"西藏人參果對小鼠抗疲勞及抗缺氧能力的影響"(《營養學報》2003， 25(2):218-219) —文中披露，蕨麻具有較好的補益作用，對小鼠抗疲勞和抗缺氧能力 有一定增強作用，還有很強的抗應激作用。根據有關的文獻披露，蕨麻塊根中有豐富的多糖。在李靈芝，張麗，龔海 英，等著的"蕨麻醇提取物的抗缺氧與抗氧化研究"(中國食品衛生雜誌，2005， 17(4):306-308)、陳炅然，胡庭俊，程富勝，等著的"蕨麻多糖的免疫藥理實驗研 究"《獸藥與飼料添加劑》2005， 1Q(5):1-2.)和胡庭俊，陳炅然，程富勝，等著的"蕨麻多糖對小鼠血清中三種細胞因子水平的影響"(《中國獸醫科技》2005，35(8):653-656 )公開了蕨麻活性成分之 一 的蕨麻多糖(Pofe""〃a araeW"a丄. Polysaccharide, PAP)為，具有提高人體免疫功能、抗疲勞、耐缺氧和止瀉抑菌的 作用。病毒性肝炎是我國的常見病及多發病，由HBV、 HCV感染後導致的慢性肝炎、 肝炎後肝硬化及肝癌，對人民健康危害性極大。目前多採用保肝加抗病毒的方 法進行治療，尚無理想的治療方法。0前的西藥治療費用高，毒副作用大，而 天然藥物及其製劑在治療病毒性肝炎方面顯示出了良好的療效，是一種有效的 治療手段，並且佔據著治療的主要地位。在長期以來，尤其是上世紀70年代之 後，應用中醫中藥治療慢性B肝的研究逐年呈上升趨勢，且取得了良好的療效。 其優點表現在藥物不僅能夠明顯改善患者症狀及生活質量，而且能通過多靶點 作用發揮其保肝、免疫調節、抗纖維化及抗病毒的作用，而且中藥基本上無毒 副反應，醫療成本相對較低。 發明內容木發明提供蕨麻多糖的一種新的用途，即將蕨麻多糖用於製備治療肝臟損 傷或者製備保肝的藥物，以及用蕨麻多糖製備保肝的營養品。根據本發明相關研究表明，蕨麻多糖可以明顯降低急性肝損小鼠血清中的 ALT (丙氨酸氨基轉移酶)、AST (天門冬氨酸氨基轉移酶)值，對急性肝損傷 有治療作用、對病毒、化學品、酒精等各種原因引起的肝損傷有一定的治療作 用和保肝作用。更具體講，本發明所述的蕨麻多糖在製備治療肝損傷藥物的應用是指蕨麻 多糖在製備治療急性肝損傷藥物的應用，如如蕨麻多糖在製備治療各型肝炎引起的肝損傷藥物的應用；或者，蕨麻多 糖在製備治療酒精引起的肝損傷藥物的應用；或者蕨麻多糖在製備治療化學性 肝損傷藥物的應用。以上所述的應用蕨麻多糖所製備的藥物的劑型可以是膠囊、微囊、脂體質、 顆粒劑、片劑、口服液、分散片中的任一種，也可以是注射液。此外，蕨麻多糖還可用於製備保肝的藥物，或者製備保肝的保健品。


圖l為蕨麻多糖提取工藝流程示意。圖2為葡萄糖標準曲線。圖3為受試小鼠正常對照組的肝組織染色病理切片照片。圖4為受試小鼠用0.1MCCU豆油 100 ml/kg，建立肝損傷模型對照組的肝組織染色病理切片照片。圖5為受試小 鼠使用聯苯雙酯的陽性對照組的肝組織染色病理切片照片。圖6為受試小鼠使 用蕨麻多糖200 mg/kg組的肝組織染色病理切片照片。圖7為受試小鼠使用蕨麻 多糖400 mg/kg組的肝組織染色病理切片照片。圖8為受試小鼠使用蕨麻多糖 800 mg/kg組的肝組織染色病理切片照片。
具體實施方式
以下提供本發明提取蕨麻多糖的具體做法和相關試驗，其中所用實驗動物為昆明種小鼠，60隻，體重18 22g，每組10隻，雌雄各半。 由蘭州大學醫學院動物實驗中心提供。所用藥品及試劑分別為 蕨麻產地甘肅甘南。CC14 :上海華東化工學院宏達化工(批號20050621);苯酚山東萊陽雙雙化工有限公司(批號20051205)聯苯雙酯浙江萬邦藥業有限公司生產 (批號20050704); ALT測試盒，購於四川省邁克科技有限責任公司(批號 2400032); AST測試盒，按全國臨床檢驗操作規程配製[5。 主要儀器UV-722G紫外可見分光光度計(上海分析儀器廠)；D-37520型低溫離心機 (德國Kendro公司)；MA110型分析天平(上海第二分析儀器廠)TLD-40B型 離心機(上海安亭科學儀器廠)；KEWEI電熱恆溫水浴鍋(北京科偉永鑫實驗 儀器設備廠)；KDM型控溫電熱套(山東鄄城華魯儀器公司)；MS 2型旋渦混 勻器(廣州儀科實驗室技術有限公司)。 統計學處理以EXCEL2003軟體進行統計分析，對各計量數據進行t檢驗統計處理，所 有數據均以i.士S表示。(一)蕨麻多糖的提取稱取千燥蕨麻，搗碎，加約8倍量的水，置電爐上煎煮1.5h後，將水溶液 過濾，重複3次，將3次所得濾液合併，置蒸發皿中蒸發濃縮至l: 1。將濃縮液置燒杯中，加5倍量95%的乙醇，低溫靜置過夜。將沉澱物置離心管中離心 (3000 r/min,10 min)，棄上清液，再依次分別加入無水乙醇、丙酮、乙醚充分洗 滌後離心(3000 r/min,10 min)，棄上清液。將所得沉澱物置平皿中，待乙醚揮發 完後所得灰色粉末即為蕨麻粗多糖，稱重。得率為2.66%。工藝過程參見附圖1，以及"藏藥蕨麻中多糖的含量測定研究"一文，參見楊樺；賈旭；易紅等《中草藥》,2001, 32(01) ,29-31。(二) 蕨麻多糖含量測定 採用苯酚一濃硫酸法測定蕨麻多糖的含量。精密吸取葡萄糖標準品溶液0.16、 0.20、 0.24、 0.28、 0.32、 0.36、 0.40mL，分置於10mL容量瓶中，加蒸 餾水稀釋至刻度混勻。分別精密吸取2.0mL於lOmL帶塞試管中，另取2.0mL 蒸餾水作空白對照。各管再加入1.0mL苯酚溶液，混勻，迅速加入濃H2S045.0 mL，混勻後放置5 min，置沸水浴中加熱15 min，取出置冷水中冷卻後,於490 nm 處測定吸光度。經過計算得回歸方程為y = 0.042x- 0.6836 R = 0.9906，參見 圖2。精密稱取蕨麻多糖約4 mg於100 ml容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，精 密吸取l.Oml置試管中，按照標準曲線繪製項下方法測定吸光度，根據回歸方 程計算，得蕨麻粗多糖含量為66.3 %。(三) 蕨麻多糖對CCl4致小鼠肝損傷保護作用昆明種小鼠60隻，雄雌各半，按隨機數字表隨機分為6組，每組10隻， 分組及給藥如下生理鹽水0.10/oCCU豆油滿ml/kg 聯苯雙酯200 mg/kg 200 mg/kg 400 mg/kg 800 mg/kg正常對照組 模型對照組 陽性對照組 PAP低劑量組 PAP中劑量組 PAP高劑量組 注以上PAP指蕨麻多糖。 受試小鼠在給藥前和給藥後均稱重。其中第一組 第二組 第三組 第四組 第五組 第六組陽性對照組、受試藥各組小鼠均灌胃(ig)給予相應的藥物，1日1次，其餘各組小鼠均用同等體積生理鹽水灌胃，1日1次，每次100ml/kg。給藥7天，末次給藥1 h後除正常組給予溶媒外， 其餘組均灌胃ig0.1%CCl4100ml/kg，造成急性肝損，禁食,自由飲水。造模24h 後摘眼球取血,全血4"冰箱靜置lh，低溫離心，分離血清(4°C， 4000r/min,10 min)。試劑盒測定血清中ALT (谷丙轉氨酶)、AST (天門冬氨酸氨基轉移酶) 水平。摘取小鼠肝臟及脾臟，並稱重。取小鼠左葉肝臟，10%福馬林固定，石 蠟包埋切片，HE染色後用圖象分析儀對肝臟的形態進行觀察並拍攝病理圖片。 結果實驗結果表明，模型組小鼠的血清ALT、 AST活性明顯高於正常組，與正 常組相比，差異有顯著性(屍< 0.05)，表明造模成功。陽性組對照組血清中的ALT、 AST活性明顯低丁模型對照組，與模型組相比，差異有顯著性(P〈0.05)，說明 實驗方法是可靠的。PAP200、 400、 800mg/kg劑量組均可明顯降低急性肝損小 鼠血清中的ALT、 AST值，與模型組相比，差異有顯著性(屍<0.01)，且有劑量依 賴性，呈負相關，藥物劑量越大，小鼠血清中ALT、 AST的活性越低。PAP各劑 量組還均可明顯降低小鼠體重，與模型組相比，差異有顯著性(P0.05)。 PAP各 劑量組的脾臟係數、肝臟係數與模型組相比，沒有明顯降低，差異無顯著性(屍 〉0.05)。結果見下表。蕨麻多糖對小鼠血清ALT、 AST的影響 (n=10)組別實驗前 實驗後(g/ioog)肝臟係數ALTAST(g/100g)(UI/L)CUI/L)0德±0扁13.768±3.558b119.939±63.323b0.053±0.003263.740土68.678205.436±38.9110.056±0.00762.909±65.777b147.742±44.478a0.046±0.016206.583±31.336a149.406±54.743a0.052±0.00479.558±52.103b143.357:t58.17 4a0.052±0.00452.151±66.604b117.921±65.727b正常對照組 模型對照組 陽性對照組PAP低劑呈組PAP中劑量組PAP高劑量 組18.5±0.7 18.6±0.8 18.5士0.8 19.0±].322.8±U 22.1±0.9 22.2±2.2 20.4±1.7a0.006±0.0010.005±0細注:與模型對照組比，3:屍<0.05， b: / <0.01。肝臟中的轉氨酶ALT、 AST活性是肝細胞損害的敏感指標，是診斷肝膽系 統疾病中應用最廣泛的酶。肝損傷較輕時僅使細胞膜通透性增加，胞漿內ALT 釋放入血；肝細胞受損嚴重時，線粒體內AST才釋放入血。給予CCU後，小鼠 肝細胞明顯受損，大量的ALT、 AST釋放入血，弓I起血清中的ALT、 AST升高。試驗結果表明蕨麻多糖對CC14誘發的肝損傷小鼠血清中的ALT、 AST活性的升高具有明顯的降低作用，其作用機理可能是蕨麻多糖通過穩定細胞膜結構，抑制脂質過氧化過程，維持細胞膜的完整性，從而使ALT、 AST溢出減少，降 低血清中ALT、 AST的活性，進而發揮保肝作用。從各受試小鼠肝組織病理切片可見，參見附圖3至附圖8，正常對照組肝小葉結構完整，中央靜脈周圍及匯管區淋巴未見炎性細胞浸潤。模型組中肝小葉結構存在，中央靜脈周圍肝細胞氣球樣變、灶性嗜酸性變，匯管區及中央靜脈周圍大量淋巴細胞浸潤，表明肝臟已發生病變，產生了肝損傷；聯苯雙酯組(陽性對照)肝小葉結構存在，中央靜脈周圍少量淋巴細胞浸潤，未見其它異常改變；PAP200 mg/kg組，肝小葉結構存在，中央靜脈周圍淋巴細胞明顯減少，未見其它異常改變，表明肝損傷開始好轉；PAP 400 mg/kg組，肝小葉結構存在，中央靜脈周圍灶性淋巴細胞浸潤，未見其它異常改變，肝細胞接近正常；PAP800mg/kg組，肝小葉結構結構清晰，中央靜脈周圍及匯管區未見炎性細胞浸潤，表明肝細胞基本正常；另外，由中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所陳炅然等人完成的"蕨麻 多糖免疫調節作用及其機理研究與臨床應用"項目中，以小鼠、兔、雞為試驗 對象，進行了蕨麻多糖的毒性試驗，證明蕨麻多糖無毒副作用。以上實驗表明蕨麻多糖可以對肝臟進行有效保護，且無毒副作用，安全有 效，可用於製備治療肝臟損傷藥物和製備保肝藥物，也可用於製備保護肝臟的 保健品。
權利要求
1. 蕨麻多糖用於製備治療肝臟損傷藥物的應用。
2. 如權利要求l所述的蕨麻多糖在製備治療肝損傷藥物的應用，其特徵是 蕨麻多糖在製備治療急性肝損傷藥物的應用。
3. 如權利要求l所述的蕨麻多糖在製備治療肝損傷藥物的應用，其特徵是 蕨麻多糖在製備治療各型肝炎引起的肝損傷藥物的應用。
4. 如權利要求l所述的蕨麻多糖在製備治療肝損傷藥物的應用，其特徵是 蕨麻多糖在製備治療酒精引起的肝損傷藥物的應用。
5. 如權利要求l所述的蕨麻多糖在製備治療肝損傷藥物的應用，其特徵是 蕨麻多糖在製備治療化學性肝損傷藥物的應用。
6. 權利要求1_5所述的蕨麻多糖在製備治療肝損傷藥物的應用所製備的 藥物，其特徵是其製劑為膠囊、微囊、脂體質、顆粒劑、片劑、口服液、分散 片中的任一種。
7. 權利要求1—5所述的蕨麻多糖在製備治療肝損傷藥物的應用所製備的 藥物，其特徵是其製劑為注射液。
8. 蕨麻多糖用於製備保肝的藥物。
9. 蕨麻多糖用於製備保肝的保健品。
全文摘要
本發明公開從蕨麻中提取的多糖的用途，即將蕨麻多糖用於製備治療肝臟損傷或者製備保肝的藥物，以及用蕨麻多糖製備保肝的營養品。
文檔編號A61P1/16GK101269086SQ200810099430
公開日2008年9月24日 申請日期2008年5月9日 優先權日2008年5月9日
發明者李小麗, 武新安, 閔光寧, 閔光濤 申請人:蘭州大學