使用凝血酶衍生的縮氨酸治療慢性真皮潰瘍的製作方法

2023-09-19 18:21:55

專利名稱：使用凝血酶衍生的縮氨酸治療慢性真皮潰瘍的製作方法
政府的支持這項發明按照合同1R01-GM47572和R44-DK53580全部或部份地得到來自國立健康研究所(National Institutes of Health)的資金支持。政府在這項發明中將具有某種權利。
相關的專利申請這份申請要求2001年7月27日申請的美國專利臨時申請第60/308,198號的利益，在此通過引證將其全部教導併入本文。
本發明的現有技術真皮皮膚潰瘍是特別難以治療的創傷的一個例子，因為它們難以痊癒並因此往往變成慢性創傷。慢性皮膚潰瘍的例子包括由於靜脈疾病(靜脈壅滯潰瘍)、過度的壓力(褥瘡潰瘍)、動脈潰瘍和糖尿病潰瘍產生的那些。
糖尿病潰瘍是特別棘手的。在有糖尿病的七個人中就有一個在他們易受感染的肢體上發展皮膚潰瘍。糖尿病潰瘍的治療往往是長期的、強化的和昂貴的，而且治療失敗是經常的。當前的方法包括清創術、經常更換創傷敷料、特別合腳的鞋、口服或靜脈注射抗生素、完全臥床休息、長期住院治療和外科血管再造。與潰瘍相關的併發症在某些情況下可能需要節肢。所以，存在用於一般地加速慢性真皮皮膚潰瘍痊癒速率的治療的需求，尤其是用於加速糖尿病潰瘍痊癒速率的治療的需求。
本發明的概述現在業已發現，並非通過蛋白水解激活的凝血酶受體的促效藥在加速糖尿病潰瘍痊癒速率方面是有效的。例如，凝血酶肽衍生物TP508，按1.0微克或10.0微克的劑量一星期兩次局部給藥將提高糖尿病潰瘍痊癒的速率，並且提高經歷100％潰瘍癒合的患者的百分比。基於這項發現，在本文中揭示一種促進或加速慢性皮膚潰瘍痊癒的方法。
本發明的一個實施方案是一種促進研究對象身體上的慢性真皮皮膚潰瘍痊癒的方法。該方法包括使慢性真皮皮膚潰瘍接觸有效量的並非通過蛋白水解激活的凝血酶受體的促效藥的步驟。在本文揭示的方法中使用的凝血酶肽衍生物是生產成本低廉的而且在加速慢性真皮皮膚潰瘍痊癒速率方面和在提高潰瘍完全癒合的可能性方面是有效的。它們即使有也只引起微不足道的副作用。
本發明的詳細描述真皮皮膚潰瘍指的是由於痊癒過程中的缺陷無法正常痊癒的組織表面喪失、脈管功能不全或壓力在皮膚上引起的機能損害。能用本發明的方法治療的真皮皮膚潰瘍包括褥瘡潰瘍、糖尿病潰瘍、靜脈壅滯潰瘍和動脈潰瘍。褥瘡創傷指的是起因於在延長的時間周期中施於皮膚的某些區域的壓力的慢性潰瘍。這個類型的創傷往往被叫做褥瘡或壓痛瘡。靜脈壅滯潰瘍起因於來自缺損性血管的血液或其它流體的淤塞。動脈潰瘍指的是在血流不暢的動脈附近的區域中壞死的皮膚。
申請者已揭示某些激發或激活並非通過蛋白水解激活的凝血酶受體(在下文中用「NPAR」表示)的化合物促進或激發慢性真皮皮膚潰瘍的痊癒。激活NPAR的化合物被稱之為NPAR促效藥。NPAR是在大多數細胞表面上存在的高親和力的凝血酶受體。這個NPAR成份對凝血酶、通過蛋白水解被鈍化的凝血酶和凝血酶派生的肽對細胞的高親和力結合有非常大的責任。NPAR似乎作為引起由凝血酶發起的與其蛋白水解活性無關的細胞信號的媒介。這樣的信號的例子是通過相減雜交識別的annexin V和其它分子的向上調整見Sower等人，Experimental CellResearch 247422(1999)。所以，NPAR如同下面描述的那樣以它在細胞表面與凝血酶的高親和力的相互作用和它被凝血酶和凝血酶衍生的肽促效藥的無蛋白水解活性的衍生作用激活為特色。NPAR的激活可以基於分子在有低於致有絲分裂濃度的凝血酶或激活蛋白激酶C的分子存在的情況下添加到纖維原細胞中的時候激活細胞增殖的能力進行化驗，如同在美國專利第5,352,664和5,500,412號中揭示的那樣。這些專利的全部教導在此通過引證被併入本文。NPAR促效藥能藉助這種激活作用或藉助它們與125I-凝血酶競爭與細胞結合的能力予以識別。
NPAR促效藥的一個例子是凝血酶縮氨酸衍生物，即有少於五十種胺基酸、優選少於三十三種胺基酸的多肽並且對與凝血酶原胺基酸508-530(Ala-Gly-Try-Lys-PrAsp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-Phe-ValSEQ IDNO.1)相對應的人類凝血酶的碎片有充份的同源性的多肽，該多肽激活NPAR。在本文中描述的凝血酶縮氨酸衍生物優選具有大約14種到23種胺基酸，更優選具有大約19種到23種胺基酸。非必選的是，在本文中描述的凝血酶縮氨酸衍生物可能是在C-端醯胺化的和/或在N-端醯化的。
在一個實施方案中，被對慢性真皮皮膚潰瘍給藥的凝血酶肽衍生物具有下述胺基酸序列R1-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-R2SEQ ID NO.5。R1是-H或R3-C-(O)；R2是-OH或-NR4R5；R3是-H或C1-C6烷基基團(優選-CH3)；而R4和R5是獨立的-H、C1-C6烷基基團、或和與它們鍵合的氮原子一起取的非芳香族雜環基團，例如這樣的一個哌啶基、嗎啉基、硫茚基或pyrollidinyl(優選R4和R5兩者都是-H)。優選R1是-H，而R2是-NH2；或者R1是-H，而R2是-OH。作為替代，對慢性真皮皮膚潰瘍給藥的凝血酶肽衍生物具有SEQ ID NO.3的胺基酸序列R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-Phe-Val-Met-Lys-Ser-Pre-Phe-R2。R1和R2與前面描述的一樣。然而，它被理解為在凝血酶肽衍生物中的位置1-9和14-23的零、一、二或三種胺基酸可以不同於在SEQ ID NO 5中對應的胺基酸。它也被理解為在凝血酶肽衍生物中的位置1-14和19-33的零、一、二或三種胺基酸可以不同於在SEQ ID NO 3中對應的胺基酸。優選的是，在胺基酸不同於SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.5中對應的胺基酸的凝血酶肽衍生物中的胺基酸是保守置換，而且更優選是高度保守的置換。作為替代，可以用至少有十四種胺基酸的N-封端的凝血酶肽衍生物碎片或至少有十八種胺基酸的C-封端的凝血酶肽衍生物碎片接觸慢性真皮皮膚潰瘍。
「C-封端的碎片」指的是從C-端移開胺基酸或胺基酸區段之後剩餘的碎片。「N-封端的碎片」指的是從N-端移開胺基酸或胺基酸區段之後剩餘的碎片。人們應該理解術語「C-封端的碎片」和「N-封端的碎片」如同前面描述的那樣包括在N-端的醯化和/或在C-端的醯胺化。
肽是當在N-端的胺-NH2作為醯基基團R3-C(O)-NH-(其中R3與前面描述的一樣)衍生出來的時候在N-端醯化的。因此，當R1是R3-C(O)-的時候，N-端是醯基基團；而且當R1是-H的時候，N-端是未被取代的胺。
肽是當在C-端的羧酸-COOH作為氨基化合物-CONR4R5(其中R4和R5與前面描述的一樣)被衍生出來的時候在C-端醯胺化的。因此，當R2是-OH的時候，C-端是羧酸；而當R2是-NR4R5的時候，C-端被醯胺化。
優選供所揭示的方法使用的凝血酶肽衍生物具有SEQ ID NO.2的胺基酸序列R1-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-X1-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-X2-Val-R2。R1和R2與前面描述的一樣。另一種優選供所揭示的方法使用的凝血酶肽衍生物具有SEQ ID NO.4的胺基酸序列R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-X1-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-X2-Val-Met-Lys-Ser-Pre-Phe-R2。X1是Glu或Gln；X2是Phe、Met、Leu、His或Val；而R1和R2與前面描述的一樣。作為替代，在所揭示的方法中也能使用的是這些優選的凝血酶肽衍生物的N-封端碎片，有十四種胺基酸的N-封端碎片，或這些優選的凝血酶肽衍生物的C-封端碎片，至少有十八種胺基酸的C-封端碎片。
TP508是凝血酶肽衍生物的一個例子而且具有SEQ ID NO.5的胺基酸序列，其中R1是-H，R2是-NH2(SEQ ID NO.6)。凝血酶肽衍生物的另一個例子具有SEQ ID NO 5的胺基酸序列，其中R1是-H，R2是-OH(「去除醯胺的TP508」)。能在所揭示的方法中使用的凝血酶肽衍生物的其它例子包括TP508(或去除醯胺的TP508)的N-封端碎片，至少有十四種胺基酸的N-封端碎片，或者TP508(或去除醯胺的TP508)的C-封端碎片，至少有十八種胺基酸的C-封端碎片。
「保守的置換」是用具有相同的淨餘電子電荷和大體相同的大小和形狀的另一種胺基酸置換原有的胺基酸。有脂肪族的或取代脂肪族的胺基酸側鏈的胺基酸當它們的側鏈中的碳和雜原子總數相差不超過大約4的時候具有大體相同的大小。當它們的側鏈中的支鏈數目相差不超過1的時候，它們具有大體相同的形狀。在它們的側鏈中有苯基或取代苯基基團的胺基酸被認為具有大體相同的大小和形狀。下面列出的是五組胺基酸。用來自同一組的另一種胺基酸替代多肽中的胺基酸將導致保守置換組I甘氨酸(glycine)、丙氨酸(alanine)、纈氨酸(valine)、亮氨酸(leucine)、異亮氨酸(isoleucine)、絲氨酸(serine)、蘇氨酸(threonine)、胱胺酸(cysteine)和有C1-C4脂肪族的或羥基取代的C1-C4脂肪族的側鏈的非自然形成的胺基酸(直鏈的或單支鏈的)。
組II穀氨酸(glutamic acid)、天冬氨酸(aspartic acid)和有羧酸取代的C1-C4脂肪族側鏈的非自然形成的胺基酸(無支鏈的或一個分支點)。
組III賴氨酸(lysine)、鳥氨酸(ornithine)，精氨酸(arginine)和有胺或胍基取代的C1-C4脂肪族側鏈的非自然形成的胺基酸(無支鏈的或一個分支點)。
組IV穀氨醯胺(glutamine)、天冬醯胺(asparagine)和有醯胺取代的C1-C4脂肪族側鏈的非自然形成的胺基酸(無支鏈的或一個分支點)。
組V苯基丙氨酸(phenylalanine)、苯基甘氨酸(phenylglycine)、酪氨酸(tyrosine)和色氨酸(tryptophan)。
「高度保守的置換」是用在側鏈中有相同的官能團並且具有幾乎相同的大小和形狀的另一種胺基酸置換原有的胺基酸。有脂肪族的或取代脂肪族的胺基酸側鏈的胺基酸當在它們的側鏈中碳和雜原子總數相差不超過2的時候具有幾乎相同的大小。當它們在它們的旁鏈中有相同的支鏈數目的時候，它們具有幾乎相同的形狀。高度保守的置換的例子包括纈氨酸代替亮氨酸、蘇氨酸代替絲氨酸、天冬氨酸代替穀氨酸和苯基甘氨酸代替苯丙氨酸。非高度保守的置換的例子包括丙氨酸代替纈氨酸、丙氨酸代替絲氨酸和天冬氨酸代替絲氨酸。
「研究對象」優選是人，但也可以是需要治療的動物，例如，陪伴動物(例如，狗、貓等)、家畜(例如，母牛、豬、馬等)和實驗用動物(例如，大鼠、小鼠、豚鼠等)。
在本發明中用來促進慢性皮膚潰瘍痊癒的組合物可以另外包括將凝血酶肽衍生物或NPAR促效藥溶解或懸浮在其中的適合局部部位給藥的藥用載體。藥學可接受的載體的例子舉例來說包括鹽水、氣溶膠、市場上可得的惰性凝膠或得到白蛋白、甲基纖維素或膠原基質補充的液體。代表這種成形物的是軟膏、乳脂和凝膠。軟膏通常是使用油質基本成份(例如，包含諸如白凡士林或礦物油之類不易揮發的油類或碳氫化合物的)或能吸收的基本成份(例如，由諸如無水羊毛脂之類一種或多種能吸收的無水物質組成的)製備的。在形成基本成份之後，按需要的濃度添加活性成分。乳脂通常包括包含諸如臘、凡士林油、礦物油之類通常不易揮發的油、碳氫化合物等等的油相(分散相)和包括水和諸如被添加的鹽之類水溶性物質的水相(連續相)。兩相是藉助使用乳化劑(例如，十二烷基硫酸鈉之類的表面活性劑)和阿拉伯樹膠、膠質粘土、蜂膠之類親水膠體得以穩定的。在乳液形成之時，活性成分按需要的濃度被添加進去。凝膠是由從先前描述過的油質基本成份、水或乳液懸浮基本成份中選定的基本成份組成的。添加到基本成份中的是在基本成份中形成基質將其粘性提高到半固體稠度的膠凝劑。膠凝劑的例子是羥丙基纖維素、丙烯酸聚合物等等。活性成分在先於添加膠凝劑的點按需要的濃度被添加到配方中或者可以在凝膠化程序之後被混合進去。
本發明指向促進慢性真皮皮膚潰瘍痊癒。治療方法「促進痊癒」意味著有這種治療與沒有這種治療相比慢性真皮皮膚潰瘍將更迅速地痊癒。作為替代，治療方法「促進痊癒」意味著與缺乏這種治療時相比慢性真皮皮膚潰瘍完全痊癒的可能性將更大。
「有效量」是與缺乏NPAR促效藥或凝血酶肽衍生物之時相比導致更大的創傷痊癒和增強的內皮細胞、角化細胞和纖維原細胞的生長和繁殖的NPAR促效藥或凝血酶肽衍生物的量。作為替代，「有效量」是與缺乏NPAR促效藥或凝血酶肽衍生物之時相比導致慢性皮膚潰瘍完全痊癒的可能性更大的NPAR促效藥或凝血酶肽衍生物的量。促效藥是在足以實現預期的治療效果的時間周期中持續給藥的。給藥的數量將取決於需要的真皮生長量，研究對象的健康狀況、大小、體重、年齡和性別，慢性真皮皮膚潰瘍的性質(例如，真皮皮膚潰瘍嚴重程度的類型)。通常，直接應用於慢性真皮皮膚潰瘍的NPAR促效藥或凝血酶縮氨酸衍生物的給藥量在每天大約0.1微克和每天大約1毫克之間(優選在每天大約1微克和每天大約100微克之間)。通常，使用足夠的藥用載體或惰性溶劑來覆蓋創傷。
在某些治療慢性真皮皮膚潰瘍的例證中，將一種或多種有藥理活性的附加製劑與凝血酶肽衍生物或NPAR促效藥一起對慢性真皮皮膚潰瘍給藥可能是有利的。例如，感染是一種有任何慢性真皮皮膚潰瘍的跡象。本發明的一個方面是對慢性真皮皮膚潰瘍將抗菌劑、消毒劑或抗生素一起給藥。控制痛苦和炎症也是治療慢性真皮皮膚潰瘍的重要方面。NPAR促效藥和凝血酶肽衍生物也可以與諸如止痛劑之類減輕疼痛的製劑或消炎的製劑一起對慢性真皮皮膚潰瘍給藥。
凝血酶肽衍生物可以是用固相縮氨酸合成(例如，BOC或FMOC)的方法、溶液相合成、或包括上述方法的組合的其它適當的技術合成的。已被建立和廣泛應用的BOC法和FMOC法是在下述文獻中描述的Merrifield，J.Am.Chem.Soc.882149(1963)；Meienhofer，Hormonal Proteins and Peptides，C.H.Li編輯，Academic Press，1983，pp.48-267；Barany和Merrifield，ThePeptides，E.Gross和J.Meienhofer編輯，Academic Press，NewYork，1980，pp.3-285。固相縮氨酸合成的方法是在下述文獻中描述的Merrifield，R.B.，Science，232341(1986)；Carpino，L.A.和Han，G.Y.，J.Org.Chem.，373404(1972)；Gauspohl，H.等人，Synthesis，5315(1992)。這六篇文章的教導在此通過引證被全部併入本文。
下面的不傾向於以任何方式作為限制的例證將被用來舉例說明本發明。
例證方法學-研究設計這項研究是評估用來加速慢性糖尿病潰瘍痊癒的合成的凝血酶縮氨酸TP508的多中心的、隨機化的、加倍盲目的(doubleblind)、三臂階段IIa(three-arm Phase IIa)試驗研究。患者被隨機地分配到三個局部治療組之一中每周塗兩次在鹽水中的1微克TP508、每周塗兩次在鹽水中的10微克TP508、或每周塗兩次鹽水安慰劑。所有的患者都接受由最初的徹底清創手術、傷口清洗、傷口包紮和傷口減壓組成的標準的糖尿病潰瘍護理計劃。創傷在長達20個星期的時間裡或直到傷口癒合都被一星期評估兩次，不分先後。患者如果發生臨床感染或者創傷情況大大惡化就從研究中除名。
在每次創傷評估時(每周兩次)，創傷的周長都被跟蹤，以便確定創傷面積，而且用數位相機給創傷照相。血液化學和血液學測試是在患者登記時和在第5、10、15和20周完成的。射線照相評估是每5周一次，以便研究對下面的骨骼組成的影響。
包括/排除判據年齡從30歲到65歲的男性和女性都被允許參加研究。可能妊娠的女性必須在進入研究之前使用可接受的避孕方法和進行懷孕尿檢。為了在研究中登記，患者的糖尿病病理學除了糖尿病症狀之外還必須藉助血糖和HgbAlC得到臨床證明，患者必須處在相當好的健康狀態。將被治療的潰瘍(研究潰瘍)必須位於膝蓋骨以下，對骨膜(不涉及骨骼或筋腱)的Wagner等級1(創傷必須穿過表皮進入真皮)，等級2或輕微等級3。研究潰瘍的直徑必須介於1.0釐米(0.9cm2面積)和7.0釐米(大約38.5cm2面積)之間。研究潰瘍還必須已經存在最少8周和最多兩年，而且在那個時期沒有痊癒。患者的創傷氧壓(TcP02)按基線測量結果必須大於或等於用熱的氧傳感器實測的20mm Hg。除此之外，要求患者能夠充分理解和服從研究指令、遵守治療制度和任何規定的創傷減壓和提供見多識廣的允諾。
患者的數目(計劃的和分析的)研究是針對總共60個患者登記安排計劃的，每個治療組20個患者。在研究中總共有60個患者登記和治療。在這60個患者當中，12個患者過早地停止研究。四個患者由於傷口感染而停止，兩個由於骨髓炎而停止，一個患者因為截肢而停止，一個患者因為心肌梗塞而停止，兩個患者因非醫學理由從研究中撤出，一個患者由於傷口惡化，一個患者接受了未經允許的藥物治療。沒有停止研究的理由與用藥有關。
療效(I)主要的療效邊界點是實現傷口完全癒合的患者的比例。傷口完全癒合被定義為100％上皮形成，沒有排膿和沒有感染，如同臨床醫生通過視覺檢驗確定的那樣。對治療組之間的比例差異進行比較。次要的邊界點包括達到研究創傷100％癒合的時間、達到80％和50％傷口癒合的時間和在第3、5、10、15和20周傷口癒合的數量(作為從基線傷口大小開始計算的變化百分比)。
療效(II)為了更好地研究療效邊界點，定義三個不同的患者分析組。Intent-To-Treat(ITT)組包括全部接受研究藥物的60個患者並且主要用於安全評估。Per-Protocol組包括滿足預先定義的一組意味著保證與協議高度一致的標準的40個患者。Efficacy組包括滿足在未失去判斷力(unblinding)之前選定的與允許正確評估傷口痊癒最相關的標準的46個患者。主要邊界點和次要邊界點的結果是針對每個患者組描述的。在所有的治療組中都可以看到在主要的邊界點對治療效果有類似的肯定的劑量響應趨勢，在Per-Protocol組中效果最顯著。
主要的邊界點主要的療效邊界點是在20周內實現傷口完全癒合的患者的百分比。下面的表格扼要地列出三個分析組中癒合的主要療效邊界點的結果
PP-Per-Protocol組ITT-Intent-To-Treat組EF-Efficacy組這些結果表明在所有被調查的人口中100％癒合的劑量響應關係，1.0微克治療導致比鹽水安慰劑對照組多4％到15％癒合，10微克治療導致比鹽水安慰劑對照組多13％到24％癒合。明確地說，在Per-Protocol治療組(PP)中，在鹽水安慰劑組中十五分之五或33％痊癒，在1微克治療組中十一分之五或45％痊癒，而在10微克組中十四分之八或57％痊癒。在為了包括比更嚴謹的Per-Protocol中的那些略微小一點和略微大一點的創傷而選定的療效(EF)組中，這種趨勢被再一次看到，在安慰劑組中38％痊癒，在1微克組中53％痊癒，而在10微克組中60％痊癒。差異在Intent To Treat(ITT)組中再一次被注意到，雖然在鹽水安慰劑組中痊癒百分比比較大(48％)，因為這個組包括一些雖然痊癒但是不滿足被定義為用於研究的慢性糖尿病創傷的協議的小的和表面的創傷。
這些結果順利地與Regranex的臨床試驗相比較，從四個受控的隨機的臨床試驗收集的數據表明經過20周83/254或33％用賦形劑安慰劑的創傷痊癒和經過20周122/285或43％用Regranex治療的創傷痊癒(見FOI，FDA Clinical Review ofBLA-96-1408，OMJ Pharmaceuticals，1997年12月9日，第55頁，和http/www.fda.gov/cber/products.becamjl21697.htm，2001年3月5日更新，2001年7月25日存取；在此通過引證將這些出版物的全部教導併入本文)。
次要邊界點次要邊界點包括達到100％癒合的時間、達到80％癒合的時間、達到50％癒合的時間和作為從基線創傷大小開始改變的百分比在第3、5、10、15和20周傷口癒合的數量。Kaplan-Meier生存分析技術被用來考核達到事件邊界點的時間。
在Per-Protocol組中，達到100％癒合的中值時間對於10微克治療組是87天，而對於1微克治療組是122天。達到100％癒合的中值時間在鹽水對照組中經過140天仍未獲得。因此，在這個Per-Protocol組中痊癒時間似乎是相對於安慰劑對照組在10微克治療組中被縮短至少53天。在Per-Protocol組中用於達到100％癒合的時間的Kaplan-Meier分析預測經過14周安慰劑對照組傷口癒合將有30％的可能性，1微克治療組傷口癒合將有大約40％的可能性，而用10微克治療的傷口癒合將有60％以上的可能性。
類似的劑量效果可以在達到80％傷口癒合的中值時間中看到，達到80％癒合的中值時間對於10微克治療組為32天，對於1微克治療組為47天，而對於鹽水對照組為57天。在達到50％傷口癒合的時間方面沒有明顯的劑量效果，達到50％癒合的中值時間在10微克組中是21天，在1微克治療組中是32天，而在鹽水對照組中是28天。
在療效(EF)組中，達到100％傷口癒合的中值時間對於10微克治療組是87天，對於1微克組為116天。達到100％癒合的中值時間在鹽水對照組中沒有獲得。就達到80％傷口癒合的時間而言，中值時間在10微克劑量組中是46天，在1微克劑量組中是49天，而在鹽水對照組中是39天。就達到50％癒合的時間而言，中值時間在10微克治療組中是21天，對於1微克組和鹽水對照組分別是29天和28天。
在Intent-to-Treat組中，達到100％傷口癒合的中值時間對於10微克治療組是87天，對於1微克組是105天，而對於鹽水對照組是102天。就達到80％傷口癒合的時間而言，中值時間在10微克劑量組中是31天，在1微克劑量組中是49天，而在鹽水對照組中是29天。就達到50％癒合的時間而言，中值時間在10微克治療組中是17天，在1微克組和鹽水對照組中分別是29天和17.5天。
這些結果表明對於用TP508治療的患者潰瘍癒合百分比增大，而且指出反映較快的痊癒速率的痊癒中值時間。
雖然這項發明已參照其優選實施方案被具體地展示和描述，但是熟悉這項技術的人將理解在形式和細節方面各種不同的改變可以在不脫離權利要求書所囊括的本發明的範圍的情況下被完成。
權利要求
1.一種促進研究對象身上的慢性真皮皮膚潰瘍痊癒的方法，所述的方法包括如下步驟，即使慢性的真皮皮膚潰瘍接觸有效量的(1)具有胺基酸序列R1-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-Phe-Val-R2(SEQ ID NO 5)的凝血酶肽衍生物，其中R1是-H或R3-C(O)-；R2是-OH或-NR4R5；R3是-H或C1-C6烷基基團；而R4和R5是獨立的-H、C1-C6烷基基團、或者與它們鍵合的氮原子一起取的非芳香族的雜環基團；只要在凝血酶肽衍生物中位置1-9和1 4-23的零、一、二或三種胺基酸不同於在SEQ ID NO 5中對應位置的胺基酸；至少有十四種胺基酸的N-封端的凝血酶肽衍生物碎片；或至少有十八種胺基酸的C-封端的凝血酶肽衍生物碎片。
2.根據權利要求1的方法，其中R1是-H，而R2是-NH2。
3.根據權利要求1的方法，其中R1是-H，而R2是-OH。
4.根據權利要求1的方法，其中慢性真皮皮膚潰瘍是糖尿病潰瘍。
5.根據權利要求1的方法，其中慢性真皮皮膚潰瘍是褥瘡潰瘍、靜脈壅滯潰瘍或動脈潰瘍。
6.根據權利要求4的方法，其中糖尿病潰瘍將接觸(1)凝血酶縮氨酸衍生物具有胺基酸序列R1-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-R2(SEQ ID NO 5)，只要在凝血酶縮氨酸衍生物中在位置1-9和14-23的零、一、二或三種胺基酸是在SEQ ID NO 5的對應位置的胺基酸的保守置換；(2)至少有十四種胺基酸的N-封端的凝血酶縮氨酸衍生物碎片；或(3)至少有十八種胺基酸的C-封端的凝血酶縮氨酸衍生物碎片。
7.根據權利要求6的方法，其中R1是-H，而R2是-NH2。
8.根據權利要求6的方法，其中R1是-H，而R2是-OH。
9.根據權利要求6的方法，其中糖尿病潰瘍將接觸(1)具有胺基酸序列R1-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-X1-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-X2-Val-R2(SEQ ID NO 2)的凝血酶肽衍生物，其中X1是Glu或Gln，而X2是Phe、Met、Leu、His或Val；(2)至少有十四種胺基酸的N-封端的凝血酶肽衍生物碎片；或(3)至少有十八種胺基酸的C-封端的凝血酶肽衍生物碎片。
10.根據權利要求9的方法，其中R1是-H，而R2是-NH2。
11.根據權利要求9的方法，其中R1是-H，而R2是-OH。
12.根據權利要求9的方法，其中糖尿病潰瘍將接觸(1)具有胺基酸序列R1-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-Phe-Val-R2(SEQ ID NO 2)的凝血酶肽衍生物；(2)至少有十四種胺基酸的N-封端的凝血酶肽衍生物碎片；或至少有十八種胺基酸的C-封端的凝血酶肽衍生物碎片。
13.根據權利要求12的方法，其中R1是-H和R2是-NH2。
14.根據權利要求12的方法，其中R1是-H，而R2是-OH。
15.一種促進研究對象身體上的糖尿病潰瘍痊癒的方法，所述方法包括如下步驟，使糖尿病潰瘍接觸有效量的具有胺基酸序列H-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-Phe-Val-NH2(SEQ IDNO.6)的凝血酶肽衍生物。
16.一種促進研究對象身體上的慢性真皮皮膚潰瘍潰瘍的痊癒方法，所述方法包括如下步驟，使慢性真皮皮膚潰瘍接觸有效量的具有胺基酸序列H-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-Phe-Val-NH2(SEQ ID NO.6)的凝血酶肽衍生物。
17.一種促進研究對象身體上的慢性真皮皮膚潰瘍痊癒的方法，所述方法包括如下步驟，使真皮皮膚潰瘍接觸有效量的(1)具有胺基酸序列R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-Phe-Val-Met-Lys-Ser-Pre-Phe-R2(SEQID NO 3)的凝血酶肽衍生物，其中R1是-H或R3-C(O)-，R2是-OH或-NR4R5，R3是-H或C1-C6烷基基團，而R4和R5是獨立的-H、C1-C6烷基基團、或者和與它們鍵合的氮原子一起取的非芳香族的雜環基團，只要在凝血酶肽衍生物的位置1-14和19-33的零、一、二或三種胺基酸不同於在SEQ ID NO 3對應位置的胺基酸；(2)至少有十四種胺基酸的N-封端的凝血酶肽衍生物碎片；或(3)至少有十八種胺基酸的C-封端的凝血酶肽衍生物碎片。
18.根據權利要求17的方法，其中慢性真皮皮膚潰瘍是糖尿病潰瘍。
19.根據權利要求18的方法，其中慢性真皮皮膚潰瘍是褥瘡潰瘍、靜脈壅滯潰瘍或動脈潰瘍。
20.根據權利要求18的方法，其中R1是-H，而R2是-NH2。
21.根據權利要求18的方法，其中R1是-H，而R2是-OH。
22.根據權利要求19的方法，其中糖尿病潰瘍將接觸(1)具有胺基酸序列 R 1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-Phe-Val-Met-Lys-Ser-Pre-Phe-R2(SEQ ID NO 3)的凝血肽酸衍生物，只要在凝血酶肽衍生物的位置1-14和19-33的零、一、二或三種胺基酸是在SEQ ID NO 3的對應位置的胺基酸的保守替換；(2)至少有十四種胺基酸的N-封端的凝血酶肽衍生物碎片；或(3)至少有十八種胺基酸的C-封端的凝血酶肽衍生物碎片。
23.根據權利要求19的方法，其中糖尿病潰瘍將接觸(1)具有胺基酸序列R1-Asp-Asn-Met-Phe-Cys-Ala-Gly-Try-Lys-Pro-Asp-Glu-Gly-Lys-Arg-Gly-Asp-Ala-Cys-X1-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pre-X2-Val-Met-Lys-Ser-Pro-Phe-R2(SEQ ID NO 4)的凝血酶肽衍生物，其中X1是Glu或Gln，而X2是Phe、Met、Leu、His或Val；(2)至少有十四種胺基酸的N-封端的凝血酶肽衍生物碎片；或(3)至少有十八種胺基酸的C-封端的凝血酶肽衍生物碎片。
24.根據權利要求23的方法，其中R1是-H，而R2是-NH2。
25.根據權利要求23的方法，其中R1是-H，而R2是-OH。
26.根據權利要求24的方法，其中X1是Glu，而X2是Phe。
27.根據權利要求1的方法，其中研究對象是陪伴動物、家畜或實驗用動物。
全文摘要
這項發明揭示一種促進研究對象身上的諸如糖尿病潰瘍之類慢性真皮皮膚潰瘍痊癒的方法。該方法包括使慢性真皮皮膚潰瘍接觸有效量的並非通過蛋白水解激活的凝血酶受體的促效藥的步驟。
文檔編號A61P17/02GK1556711SQ02818572
公開日2004年12月22日 申請日期2002年1月16日 優先權日2001年7月27日
發明者達芮爾·H·卡尼, 達芮爾 H 卡尼 申請人:德克薩斯系統大學董事會