栓塞治療肝腎腫瘤的Fe的製作方法
2023-09-19 09:43:20
專利名稱：栓塞治療肝腎腫瘤的Fe的製作方法
技術領域：
本發明屬於磁性微球治療腫瘤的藥品及製備方法，特別涉及經動脈導向栓塞治療肝腎腫瘤的磁性微球混懸液及製備方法。
背景技術：
肝癌起病隱匿，多數患者診斷時已屬中、晚期，加之肝病背景和手術復發率高等多方面的因素，致使肝癌的外科手術切除率較低。故大部分肝癌患者都採取非手術治療。目前，有肯定療效的非手術療法中，肝動脈栓塞術已成治療中晚期肝癌的主要手段。但一般的栓塞劑在栓塞腫瘤血管的同時，還引起部分正常血管的栓塞，這對肝癌患者的肝功能無疑是一巨大打擊。
開發和研製性質優良的栓塞劑是腫瘤介入治療的重要課題。目前，研製的栓塞劑種類繁多、性質各異，研究的主要方向是在保證栓塞作用的同時，尚具有化療、放療、免疫增強、靶向定位的功能。用Fe3O4微粒作為永久性末梢栓塞劑，經過基礎實驗和臨床研究，證明具有較好的栓塞效果，並且Fe3O4微粒在阻斷血流的同時，其磁場尚能對腫瘤細胞起到一定的抑制作用；但存在難以選擇性進入栓塞靶區等不足。碘化油作為親腫瘤性的載體能攜帶抗癌藥物選擇性進入腫瘤組織內，具有良好的導向性和一定的栓塞作用，但由於血流的不斷衝刷和組織細胞的清除等作用，使其栓塞作用不夠徹底、持久。我們對前期的動物實驗進行研究表明，粒徑為250μm的Fe3O4微粒與碘化油混懸液對兔腎動脈有良好的栓塞效果。在此基礎上，本發明進一步通過臨床研究觀察混懸液在肝癌介入栓塞治療中的效果。
發明內容
本發明的目的是將Fe3O4微粒懸浮於碘化油中注入載瘤動脈，利用碘化油的導向性和Fe3O4微粒的持久栓塞作用，兩者優勢互補、共同發揮作用，使栓塞更加準確、徹底、持久，達到對腫瘤組織更佳的治療效果並最大限度地降低對正常組織的損傷。
為實現上述目的，本發明提供了一種栓塞治療肝腎腫瘤的Fe3O4微粒與碘化油混懸液，它由50μm～300μm非限定規格的Fe3O4微粒與碘化油按85～110mg∶1ml比例充分混合製成。所述Fe3O4微粒直徑為50μm、150μm、200μm、250μm、300μm，其中，粒徑大於200μm的微粒效果較好。
本發明還提供了上述混懸液的製備方法，其特徵在於研磨塊狀Fe3O4為50μm～300μm非限定規格微粒，經高溫、高壓和環氧—烷消毒後與碘化油按80～110mg∶1ml比例反覆抽吸，充分混合。
所述的Fe3O4微粒系用300～1000目篩網篩分獲得粒徑為50μm、150μm、200μm、250μm、300μm微粒。所述的Fe3O4微粒與碘化油混懸液與化療藥物均勻混合為行栓塞治療或灌注化療藥物，其中，Fe3O4微粒與碘化油混懸液劑量為4～18ml，化療藥物常為絲裂黴素(MMC)10～20mg、氟脲嘧啶(5-FU)500～1000mg、順鉑(CDDP)50～100mg或羥基喜樹鹼20～30mg的2～3聯用藥。
本發明產生的有益效果顯示雜在以下方面一、兔腎動脈栓塞作用。
用紐西蘭大白兔股動脈穿刺，插管至右側兔腎動脈進行成組對照實驗，分別觀察病理學改變。血管造影和病理學結果表明，栓塞效果實驗組優於對照組。對病理學檢查表明，實驗組栓塞部位Fe3O4微粒與碘化油存留存在明顯正相關關係(P＜0.005，列聯繫數r＝0.76)；實驗組和對照組栓塞腎密度變化，在栓後1周時差異無顯著性(P1＞0.05)，栓後2周、4～6周時差異存在顯著性(P2＜0.05、P3＜0.05)；而實驗組動物血清鐵、肝、腎功能在栓後各時間段與栓前相比較差異無顯著性(P＞0.05)。
故此，兔腎動脈栓塞作用和導向作用結論為1.250μm的Fe3O4微粒與碘化油相混合，栓塞過程中兩者具有同步、同向的特性，是混懸液發揮導向性栓塞的基礎。2.粒徑為250μm的S-Fe3O4-Lp對兔腎動脈有良好的栓塞效果，可栓塞腎的小、微動脈；栓塞部位Fe3O4微粒與碘化油的存留存在明顯正相關關係，並能使碘化油長期存留於栓塞部位。
二、臨床實驗檢測對比數據及統計效果。
1、病人資料在行肝動脈栓塞化療的1086例中晚期肝癌病例中，抽取資料較齊全的132例，其中男125例，女7例；年齡23～76歲，平均年齡55歲。以上全部病例行AFP、B超、CT、血管造影檢查或經手術和病理證實，符合1999年第四屆全國肝癌學術會議制定的肝癌診斷標準。按栓塞劑的不同，將其分為4組(1)四氧化三鐵微粒與碘化油混懸液組，簡稱Suspensionof tri-iron tetroxide microspheres and Lipiodol，STML組，42例；(2)四氧化三鐵微粒組，簡稱tri-iron tetroxide microspheres，TM組，30例，作為對照；(3)碘化油-明膠組，簡稱Lipiodol andGelatin sponge，LG組，30例，作為對照；(4)碘化油組，簡稱Lipiodol，Lp組，30例，作為對照。表1為四組病例間相關臨床特徵。
表1四組病例間相關臨床特徵
2、混懸劑及製備 採用機械研磨取得直徑為250μm Fe3O4微粒，經高溫、高壓和環氧一烷消毒後備用。使用時，將製備好的顆粒直徑為250μm的Fe3O4微粒與碘化油按100mg∶1ml比例反覆抽吸，充分混合製成STML。
3、設備 數字減影血管機，矩陣1024×1024，採集速率1～3幀/秒；全身螺旋CT機，層厚10mm、層距10mm；病理資料圖像分析儀；圖像處理軟體。
4、方法4.1 治療方法採用Seldinger技術穿刺，置入Yasilo或RH管，經腹腔動脈造影。明確診斷、了解肝腫瘤血管解剖情況，排除無動靜脈瘻後，置導管端於靶血管內，在電視監視下，行化療栓塞治療。
4.1.1 STML組將化療藥物與STML混合均勻行栓塞治療或灌注化療藥物後推注STML行栓塞治療，其中STML劑量為4～18ml。
4.1.2 TM組將單純四氧化三鐵微粒和化療藥物混合製成混懸液行栓塞治療或灌注化療藥物後推注單純四氧化三鐵微粒行栓塞治療，其中四氧化三鐵微粒劑量為6～12mg。
4.1.3 Lp組將碘化油和化療藥物充分混合製成混懸液進行栓塞，其中碘化油的劑量為5～20ml。
4.1.4 LG組將碘化油和化療藥物充分混合製成混懸液行遠端末梢血管栓塞，然後輔以明膠海綿行近端血管栓塞，其中碘化油的劑量為5～20ml。
化療藥物為絲裂黴素(MMC)10～20mg、氟脲嘧啶(5-FU)500～1000mg、順鉑(CDDP)50～100mg、羥基喜樹鹼20～30mg等。常為2～3聯用藥。
4.2 檢測方法 4組均於術前行CT、USG、肝、腎功能和血清鐵濃度、AFP檢查，並完善其他相關檢查。術後通過定期複查AFP、肝腎功、血清鐵濃度、CT、肝區平片和再次介入治療時行肝動脈造影，觀察治療效果。
4.2.1 DSA 觀察STML組和LG組栓後5～10ain和再次治療時(1～3mo.)肝動脈造影表現，比較兩種栓塞劑早期、遠期栓塞效果和側枝循環形成情況。
4.2.2 CT 栓後1w及再次治療時(1～3mo.)複查CT(層厚10mm，間距10mm，零角度肝區掃描)，觀察STML組栓塞劑沉積的形態、栓塞區CT值變化，了解STML沉積情況；觀察STML組和Lp組栓後腫瘤大小變化，比較兩組栓塞治療效果；觀察STML組和TM組栓後栓塞劑在肝臟非腫瘤區停留劑量，比較兩種栓塞劑的導向性。
4.2.3 平片 栓後5～10min及再次治療(1～3mo.)前攝肝區平片，測量栓後腫瘤區和非腫瘤區密度。觀察STML組和Lp組栓後腫瘤區密度變化，比較兩種栓塞劑沉積情況；觀察STML組栓後腫瘤區和非腫瘤區密度，了解STML的導向性。
4.2.4 血生化 栓後2w內複查肝、腎功能、血清鐵濃度。觀察STML組和TM組栓塞前後血生化指標，了解化療藥和栓塞劑的毒副作用；栓後2w內複查AFP，觀察STML組和Lp組中AFP異常病例的AFP變化，比較兩種栓塞劑治療效果。
4.2.5 病理 栓後外科手術切除的病理標本行X線平片攝影；分別取腫瘤區、腫瘤邊緣、腫瘤邊緣正常組織，用10％福馬林溶液固定後送病檢(石蠟包埋、HE染色)，觀察STML組和TM組栓後組織學變化及栓塞劑滯留情況，比較兩種栓塞劑的栓塞效果和導向性。
4.2.6 隨訪 通過信函、電話、預約等方式定期隨訪，了解STML組栓後患者生存情況。
5、統計學方法實驗數據採用t檢驗、X2檢驗、確切概率法、協方差分析、Kaplan-Meire生存率法。
本發明與對照組臨床實驗生化效果1 栓塞作用1.1 腹部平片 在X線透視下，經導管推注STML，STML可順利通過3～6F導管。與Lp類似，STML以油珠或油柱的方式流向腫瘤血管分支，由遠端向近端逐漸沉積，血流速度逐漸減緩直至停滯。腫瘤內充滿栓塞劑，與周圍肝臟組織相比呈高密度影。
STML組和Lp組栓後腫瘤區密度變化，結果見表2。
表2 STML和Lp栓後腫瘤區密度變化(Mean±Std.，單位μ)時間\密度STML Lp栓後10min185.23±11.91(8例)163.35±15.26(6例)栓後1～3mo. 161.99±28.24(8例)93.54±19.66(6例)
P值P1＞0.05 P2＜0.01注內數字為觀察病例數1.2 CT1.2.1 栓塞劑沉積情況 STML組栓後1w CT示栓塞劑在腫瘤區呈均勻片狀、斑片狀或斑點狀高密度影，與周圍肝實質界線清楚。栓後1～3mo.複查CT，STML組栓塞劑沉積良好，較前無明顯變化變化。
根據栓塞劑的分布形態和沉積量，將STML的沉積情況分為四型(1)完全型栓塞劑在瘤體內密實沉積，沉積量＞80％；(2)簇集型在瘤體內局部無栓塞劑沉積，沉積量50％～80％；(3)缺損型在瘤體內栓塞劑部分填充，沉積量20％～50％；(4)稀少型栓塞劑在瘤體內無或稀疏，沉積量＜20％。
STML組栓後栓塞劑沉積類型，見表3。
表3 STML組栓後栓塞劑沉積類型(例)時間\類型 稀少型 缺損型 蔟集型完全型合計栓後1w 2(8.3％) 4(16.7％)7(29.2％) 11(45.8％)24栓後1～3mo.4(12.5％)6(18.8％)10(31.2％)12(37.5％)32合計 610 172356注Row Mean Scores Differ＝0.465，P值＞0.05STML組栓後1w、栓後1～3mo.腫瘤區CT值變化情況，見表4。
表4 STML組栓後1w、1～3mo.腫瘤區CT值變化表(單位Hμ)時間\CT值 Mean±Std.(9例)配對t檢驗栓後1w 611.64±363.69 t＝2.004栓後1～3mo.569.42±316.52 P＞0.05注內為病例數1.2.2 腫塊體積變化 按公式「腫瘤體積＝〔(最大徑)×(最小徑)2〕/2」計算腫瘤體積。按公式「腫瘤縮小率＝(1-栓塞後最後一次複查時腫瘤體積/栓塞前腫瘤體積)×100％」計算腫瘤縮小率(％)。根據腫瘤縮小率將治療效果分為，顯效腫瘤縮小＞50％；有效腫瘤縮小50％～25％穩定腫瘤縮小＜25％無效腫瘤無縮小或反而增大。
至栓後最後一次複查時，STML組和Lp組栓塞治療效果見表5。
表5 STML組和Lp組栓塞治療效果(單位例)組別\療效無效 穩定 有效 顯效 合計STML 2(6.3％) 11(34.4％)12(37.5％)7(21.8％)32Lp 6(37.5％)5(31.3％) 2(12.5％) 3(18.7％)16合計 8161410 48注Row Mean Scores Differ＝4.087 p＜0.051.3 血管造影
1.3.1 腫瘤血管變化 栓後5～10min造影STML組和LG組腫瘤血管均消失，主幹存留呈「殘根」狀(STML組肝段血管分支多可存留，LG組肝段血管分支存留較少)，周圍正常血管通暢。
栓塞後1～3mo.造影STML組和LG組腫瘤血管閉塞或較栓前明顯減少，僅部分病人腫瘤血管較栓前增多，兩組栓後腫瘤血管變化見表6。
表6栓塞後1～3mo.造影腫瘤血管變化情況 注Row Mean Scores Differ＝6.567，P＜0.051.3.2 側枝循環 栓塞後1～3mo.複查，STML組與LG組均有病例出現側枝循環，見表7。
表7栓塞後1～3mo.STML組與LG組側枝形成情況 注x2檢驗，P＞0.051.4 血AFP STML組和Lp組中栓前AFP異常升高(＞400μg/L)的肝癌患者栓後AFP變化，見表8。
表8 STML組和Lp組術前AFP＞400μg/L的肝癌患者栓後AFP下降情況組別降至正常或下降＞50％下降＜50％合計STML14(73.7％) 5(26.3％) 19Lp 5(35.7％) 9(64.3％) 14合計19 1433注x2＝4.758，P＜0.051.5 病理 STML組中有6例、TM組中有5例於栓塞術後1w～3mo.行外科手術切除，標本HE常規染色。
1.5.1 大體肉眼觀 STML組栓後手術大體標本見瘤結節向肝表面隆起，表面有散在出血點，切面腫瘤呈黃色、泥沙樣壞死，與周圍組織界限清楚，觸之有沙石感。
本發明基於以上分組統計分析，結論如下1.STML組栓後腫瘤血管閉塞或明顯減少，STML組和LG組栓後1～3mo.造影腫瘤血管變化存在顯著性差異(P＜0.05)；兩組栓後側枝形成無顯著性差異(P＞0.05)；
2.CT示STML組栓後栓塞劑沉積良好，栓後1w及再次治療時STML沉積形態、栓塞區CT值變化無顯著性差異(P＞0.05)；STML組栓後腫瘤明顯縮小，STML組和Lp組栓後腫瘤大小變化存在顯著性差異(P＜0.05)；CT示STML能選擇性進入腫瘤內，STML組和TM組栓後栓塞劑在肝臟非腫瘤區停留存在顯著性差異(P＜0.05)；3.平片示STML組栓後栓塞劑沉積良好，STML組和Lp組再次治療時腫瘤區密度存在顯著性差異(P＜0.05)；平片示STML能選擇性進入腫瘤內，STML組栓後腫瘤區和非腫瘤區密度存在顯著性差異(P＜0.05)；4.血生化示STML和TM組栓後肝腎功能有輕度變化，經對症治療後回到正常水平，STML組和TM組栓塞前後肝功能均存在顯著性差異(#P＜0.01、※P＜0.05)；STML組和TM組栓後肝功能存在顯著性差異(*P＜0.01)；兩組栓塞前後血清鐵無顯著性差異(ΔP＞0.05)；5.病理示STML 能選擇進入腫瘤組織，STML組和TM組栓後腫瘤壞死無顯著性差異(P＞0.05)；栓後腫瘤區栓塞劑停留無顯著性差異(P1＞0.05)；腫瘤邊緣、腫瘤邊緣正常組織存在顯著性差異(P2＜0.01、P3＜0.01)；6.採用Kaplan-Meire預期生存率法計算，STML栓塞治療肝癌6個月生存率為92.31％，12個月生存率為60.30％，24個月生存率40.48％。
研究證實本發明是一種較為理想的永久性栓塞劑，具有以下優點1.良好的栓塞效果，栓塞更完全、徹底；可栓塞末梢至肝段分支各級腫瘤血管，栓後腫瘤血管不易再通，側支循環難於建立；2.良好的導向性；3.栓塞肝癌，療效明顯，肝功能損傷小，無明顯毒副反應；4.安全可靠、取材方便、製作簡單、釋放容易、價格適中、便於隨訪的優點，是一種優良的選擇性末梢混合栓塞劑，適宜於臨床應用。
說明書附1為STML栓塞治療肝癌的Kaplan-Meire預期生存率法示意圖。
如圖所示12個月預期生存率為60.30％，24個月預期生存率40.48％。
具體實施例方式
與本發明技術方案主題相一致的實施例有以下方式一、栓塞兔腎動脈。
取粒徑為250μm的Fe3O4微粒按100mg∶1ml與碘化油混合，於體外用3～6F導管推注，觀測混懸液通過情況；用具有合格證的紐西蘭大白兔15隻進行成組對照實驗，採用兔股動脈穿刺，插管至右側兔腎動脈，實驗組(10隻)用粒徑250μm的STML栓塞，對照組(5隻)用碘化油栓塞。實驗組動物於術後3天、1周、2周、4周、6周、8周；對照組動物於術後3天、1周、2周、4周、6周分別行血管造影觀察栓塞效果；X線平片觀察栓塞腎密度變化；測肝、腎功能及血清鐵濃度；兩組實驗動物於上述時間段處死取雙側腎臟、心肌、肺、肝組織做病理學切片，觀察病理學改變。
二、臨床治療。
採用機械研磨取得直徑為250μm Fe3O4微粒，經高溫、高壓和環氧一烷消毒後備用。使用時，將製備好的顆粒直徑為250μm的Fe3O4微粒與碘化油按100mg∶1ml比例反覆抽吸，充分混合製成STML。
治療方法於術前行CT、USG、肝、腎功能和血清鐵濃度、AFP檢查，並完善其他相關檢查。
採用Seldinger技術穿刺，置入Yasilo或RH管，經腹腔動脈造影。明確診斷、了解肝腫瘤血管解剖情況，排除無動靜脈瘻後，置導管端於靶血管內，在X線電視監視下常規化療藥物後，推注STML4～18ml行栓塞治療。
也可以化療藥物與STML混合均勻行栓塞治療或灌注化療藥物。
術後通過定期複查AFP、肝腎功、血清鐵濃度、CT、肝區平片和再次介入治療時行肝動脈造影，觀察治療效果。
用矩陣1024×1024，採集速率1～3幀/秒，數字減影血管機，觀察栓後5～10min和再次治療時(1～3mo.)肝動脈造影表現，比較兩種栓塞劑早期、遠期栓塞效果和側枝循環形成情況。
用層厚10mm、層距10mm，全身螺旋CT機，栓後1w及再次治療時複查(1～3mo.)，零角度肝區掃描，觀察STML組栓塞劑沉積的形態、栓塞區CT值變化，了解STML沉積情況；觀察栓後腫瘤大小變；觀察STML在肝臟非腫瘤區停留劑量及栓塞導向性。
栓後5～10min及再次治療(1～3mo.)前攝肝區平片，測量栓後腫瘤區和非腫瘤區密度。觀察STML栓後腫瘤區密度變化，栓塞劑沉積情況；觀察STML組栓後腫瘤區和非腫瘤區密度，了解STML的導向性。
栓後2w內複查肝、腎功能、血清鐵濃度。觀察STML栓塞前後血生化指標，了解化療藥和栓塞劑的毒副作用；栓後2w內複查AFP，觀察STML中AFP異常病例的AFP變化，分析栓塞劑治療效果。
栓後外科手術切除的病理標本行X線平片攝影；分別取腫瘤區、腫瘤邊緣、腫瘤邊緣正常組織，用10％福馬林溶液固定後送病檢(石蠟包埋、HE染色)，觀察STML栓後組織學變化及栓塞劑滯留情況，分析栓塞劑的栓塞效果和導向性。
病例介紹病例一男，60歲，CT檢查發現原發性結節型肝癌一月餘入院。術前肝功能檢查ALT 239μ/L、AST 346μ/L。治療置管於腹腔幹注入5-Fu1000mg+MMC10mg灌注化療後，超選擇插管至肝右葉上段腫瘤血管，注入STML 7ml行栓塞治療。肝右葉下段腫瘤血管未行栓塞治療。栓後1w複查肝功能ALT 221U/L、AST 324U/L。栓後1w、2mo.、5mo.複查CT和DSA，示肝右葉上段腫瘤內STML沉積良好，腫瘤血管閉塞，無側枝循環建立，腫瘤進行性縮小；肝右葉下段腫塊較前增大。再行第二次STML栓塞治療，1w後複查CT，見右葉下段腫瘤內栓塞劑沉積良好。
病例二男，48歲，外院CT示原發性肝癌入院。造影示融合巨塊型肝癌。治療注入Lp12ml+MMC 10mg+5-Fu 1000mg混懸液行化療栓塞。栓後造影示栓塞劑沉積良好，腫瘤血管消失。2個月後複查DSA腫瘤區僅有少量碘化油存留，原栓塞腫瘤血管再通，腫瘤未見明顯縮小。再次注入CDDP 50mg+MMC 10mg+5-Fu 1000mg行灌注化療，後注入STML16ml栓塞。AFP從栓前的2716μg/ml降為栓後的156.6μg/ml；栓塞前後血清鐵分別為20.1μmol/L、18.2μmol/L(正常值10.7-26.9μmol/L)。STML栓後3mo.、5mo.、10mo.複查DSA和肝區平片示STML沉積良好，腫瘤進行性縮小，腫瘤血管較前明顯減少。
病例三女，48歲，直腸癌切除術後18mo.，B超發現肝臟右後葉轉移性病灶。治療置管至肝右動脈，注入羥基喜樹鹼30mg+MMC 10mg+5-Fu 1000mg後，注入STML7ml行栓塞治療。栓塞前後血清鐵分別為13.4μmol/L、21.9μmol/L。
病例四男，41歲，CT發現肝臟佔位性入院，肝動脈造影示肝右葉原發性肝癌。治療插管至肝右動脈，注入羥基喜樹鹼30mg+MMC 4mg+5-Fu 1000mg+STML7ml行化療栓塞治療。栓後1w行手術切除，病理檢查見腫瘤組織大片壞死，STML沉積於遠端末梢到近端主幹各級血管。
權利要求
1.栓塞治療肝腎腫瘤的Fe3O4微粒與碘化油混懸液，其特徵在於50μm～300μm非限定規格的Fe3O4微粒與碘化油按85～110mg∶1ml比例充分混合製成。
2.根據權利要求1所述的栓塞治療肝腎腫瘤的Fe3O4微粒與碘化油混懸液，其特徵在於Fe3O4微粒粒徑為50μm、150μm、200μm、250μm、300μm，其中，臨床治療粒徑大於200μm。
3.栓塞治療肝腎腫瘤的Fe3O4微粒與碘化油混懸液的製備方法，其特徵在於研磨塊狀Fe3O4為50μm～300μm非限定規格微粒，經高溫、高壓和環氧一烷消毒後與碘化油按80～110mg∶1ml比例反覆抽吸，充分混合。
4.根據權利要求3所述的栓塞治療肝腎腫瘤的Fe3O4微粒與碘化油混懸液的製備方法，其特徵在於Fe3O4微粒系用300～1000目篩網篩分獲得粒徑為50μm、150μm、200μm、250μm、300μm微粒。
5.根據權利要求3所述的栓塞治療肝腎腫瘤的Fe3O4微粒與碘化油混懸液的製備方法，其特徵在於Fe3O4微粒與碘化油混懸液與化療藥物均勻混合為行栓塞治療或灌注化療藥物，其中，Fe3O4微粒與碘化油混懸液劑量為4～18ml，化療藥物常為絲裂黴素(MMC)10～20mg或氟脲嘧啶(5-FU)500～1000mg或順鉑(CDDP)50～100mg或羥基喜樹鹼20～30mg的2～3聯用藥。
全文摘要
栓塞治療肝腎腫瘤的Fe
文檔編號A61K45/00GK1634133SQ20041007951
公開日2005年7月6日 申請日期2004年10月18日 優先權日2004年10月18日
發明者袁曙光, 閻東, 顧亞律, 郭立, 王家平, 程新寶, 李迎春, 普成榮, 韓正林 申請人:昆明醫學院