一種對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木黴菌肥及其應用的製作方法
2023-08-13 17:04:31 1
本發明涉及一種有機菌肥，更具體的說涉及一種對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木黴菌肥及其應用。
技術背景
有機菌肥是將一種或多種有益微生物植入有機物中製備而成的一種新型肥料，多效有機菌肥的有機物既是肥力的基礎，又是有益微生物的培養基質。這種新型肥料兼具促生長、抗病、改善土質、無農殘等多重優點，目前已在國內外得到大量應用，且取得了顯著效果。
木黴(trichodermapers.exfr.)屬於半知菌亞門、絲孢綱、絲孢目的黏菌種類，廣泛存在於土壤、根際、葉面、種子和球莖等生態環境中。木黴菌落生長迅速，呈不定型棉絮狀或緻密叢束狀。其表面的顏色多呈綠色。菌絲有隔分枝。厚垣孢子有或無。分生孢子梗是菌絲的短側枝。側枝上對稱或互生分枝，形成2級和3級分枝。分枝角度為銳角或近於直角，在分枝末端形成瓶狀小梗。分生孢子多為卵圓形。無色或綠色，簇生於小梗頂端。
自1932年weindling發現木素木黴(t.lignorum)寄生於多種植物病原真菌後，木黴菌作為一類生防菌顯示出巨大的應用潛力。許多研究者觀察到在藻類、半知菌、子囊菌和擔子菌中有木黴寄生物。木黴菌能寄生的植物病原菌包括絲核菌屬(rhimetonia)、小核菌(selerolium)、核盤菌屬(sclerotinia)、長蠕孢屬(helminth)、鐮刀菌屬(fusarium)、毛盤孢屬(colletotriehum)、輪枝孢屬(yerticillium)、黑星菌屬(venturia)、內座殼屬(endothia)、腐黴屬((pythium)、疫黴屬(phytophlhora)、聞座殼屬(diaporthe)和黑星孢屬(fusicladium)等。因此，木黴具有抗病害作用；由於它能產纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、幾丁質酶和蛋白酶等酶類化合物，又能合成核黃素、生產抗生素、轉化甾族化合物，所以它是重要工業製劑的生產菌；木黴具有很強的分解纖維素能力，有利於作物對土壤養分的吸收利用，具有促進植物生長的作用；木黴還能降解農藥，改善土質；且對環境無危害性。目前發現的木黴多種多樣，包括侵佔木黴(t.aggressivum)、棘孢木黴(t.asperellum)、深綠木黴(t.atroviride)、黃綠木黴(t.aureoviride)、短密木黴(t.brevicompactum)、蠟素木黴(t.cerinum)、綠孢木黴(t.chlorosporum)、橘綠木黴(t.citrinoviride)、緻密木黴(t.compactum)、頂孢木黴(t.fertile)、鉤狀木黴(t.hamatum)、哈茨木黴(t.harzianum)、交織木黴(t.intricatum)康寧木黴(t.koningii)、擬康寧木黴(t.koningiopsis)、長枝木黴(t.longibranchiatum)、長毛木黴(t.longipile)等。總之，木黴是研發有機菌肥的優質菌種之一。
以綠色木黴為主要成分的利江牌微生物肥(綠色木黴)，是利江實業公司研製而成的一種木黴微生物肥料。該菌肥對黃瓜、芹菜、油菜等都有顯著的增產作用，並且能夠促進早熟，改善作物品質，還可抑制病蟲害的發生。
浙江大學研發的以哈茨木黴發酵液為主要成分的微生物多效有機菌肥，對作物增產效果顯著，並於1997年通過省級鑑定，獲肥料登記和國家專利。所登記的高效微生物態氮由哈茨木黴深層發酵液經去渣減壓濃縮精製而成。其產品經過大田試驗，發現與使用傳統的尿素、廄肥相比，對白菜的增產效果明顯，且使用簡單，在蔬菜上具有廣闊的應用前景。
浙江大學生物技術研究所研製推廣的威綠達(virida)菌肥以綠色木黴為主，毛殼菌、枯草芽孢桿菌為輔混配製成，主要應用於綠色蔬菜生產、旱地作物、草地保護，也可以作花卉肥料。該生物製劑以城市生活垃圾為培養基質生產而成，它既含有作物生長所需的有機和無機成分，又具有防病促進生長的作用，並且可以改良土壤，是一種多功能的生物菌肥。
可見，以木黴為主要成分的微生物肥料具有多種效果，而且符合當今農產品生產綠色環保無公害無農殘及可持續發展的要求，具有廣闊的市場前景。
青蒿artemisiaannual.,又名黃花蒿,是菊科一年生藥用草本植物。是傳統中藥材，其提取物青蒿素對腦瘧疾和氯喹瘧疾具有高效低毒的抗瘧性能,who已經認定複方青蒿素成藥為目前最安全有效的抗瘧藥。目前青蒿素主要從青蒿植株中提取。青蒿原料主要來自人工栽培，因生產中長期大量施用化肥，導致土壤酸化，環境汙染。亟待尋找綠色環保無農殘的肥料進行替代。而我們分離出一株哈茨木黴h2菌株的液體發酵菌絲體對青蒿幼苗生長具有顯著的促生作用。因此，用該菌株製作菌肥，可減少乃至完全替代青蒿幼苗生長時期化肥的施用，從而達到保護土壤和環境的目的。
技術實現要素：
為了解決青蒿幼苗生產中出現的化肥施用過多的問題，本發明提供了一種對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木黴菌肥，所述哈茨木黴菌肥為哈茨木黴h2菌株的菌絲體懸浮液，哈茨木黴h2菌株的特徵核苷酸序列為th101特異序列。
所述哈茨木黴菌h2菌株從羊肚菌栽培菌袋汙染黴菌中分離得到。
對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木黴菌肥的製備方法，包括以下步驟：
1)從多包羊肚菌栽培菌袋汙染黴菌中分離出4株哈茨木黴菌；
2)從4株哈茨木黴菌中篩選出生長最旺盛h2菌株，作為哈茨木黴菌肥生產菌株
3)土豆200g切碎煮汁，汁水去渣後，加葡萄糖20g，定容至1升，高溫滅菌製成培養液；
4)在培養液中接種篩選出的哈茨木黴h2菌株試管種，25℃，135rpm，黑暗，振蕩培養，約5-7天，液體中長滿菌球後停止培養；
5)濾出菌球，攪拌機勻漿，加清水製作菌絲體懸浮液，每1ml菌懸液含有不低於0.5g菌絲體，得到哈茨木黴菌肥。
上述對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木黴菌肥在青蒿幼苗種植中的應用。
本發明的有益技術效果是：化肥造成土壤板結，汙染水體，且會影響藥材的品質；哈茨木黴菌肥具有改善土質的作用，可提高藥材品質；微生物肥不含重金屬，且對重金屬汙染的土壤有修復作用；化肥降低作物根際菌群多樣性，增加病害發生率。哈茨木黴菌肥具有較強抑制病原菌的作用，可降低作物病害發生率；菌肥和化肥復配可提高化肥的利用效率，而單施化肥造成養分的流失和固定，利用率越來越低；採用菌肥生產過程無汙染，可利用廢物，耗能較低。化肥生產過程汙染嚴重，且高耗能耗資源。
具體實施方式
實施例1健壯哈茨木黴菌株的篩選
從羊肚菌菌袋汙染黴菌中分離出的4株哈茨木黴菌株接種於pda平板培養基中央，25℃，黑暗培養,每隔24h測量其菌落直徑,每個處理設3次重複。結果如表1所示。
表1不同哈茨木黴菌株菌落生長速度
從表1可見，哈茨木黴h2菌株生長速度最快，選取作為菌肥生產菌株，其菌株的特異性核苷酸序如核苷酸序列表th101特異序列所述。
實施例2哈茨木黴菌肥對青蒿幼苗的促生效果考察
1哈茨木黴菌肥製備
土豆200g切碎粒，煮汁過濾，濾液加葡萄糖20g，加水至1升，裝1升三角瓶，300-400ml/瓶。高溫高壓滅菌。接種實施例1篩選得到的哈茨木黴h2菌株試管種，25℃，135rpm，黑暗，振蕩培養。約5-7天，液體中長滿菌球後，停止培養。濾出菌球，攪拌器勻漿後加清水製作菌絲體懸浮液。
2菌肥施用
3月在育苗格中培養青蒿苗，間苗後留1株/格。4月下旬，青蒿苗長至15-20釐米左右時，施用步驟1製作的菌肥。在苗根際打洞，施用菌懸液約5ml/株，蓋土。部分幼苗在5月初第二次施用哈茨木黴菌肥。以施用氮磷鉀複合肥100mg/株和施用清水為對照。50-60株/處理。施肥約25天後，統計苗的各項生長指標，比較不同處理的效果，結果如表2。
表2哈茨木黴菌肥對青蒿幼苗生長的影響
從以上結果可以看出，施用菌肥相對於清水對青蒿幼苗有顯著的促生長作用，且其增產效果和施用複合肥沒有顯著差別。施用兩次菌肥和一次菌肥的產量沒有顯著性差別，這一特點可節約肥料和人工。可見哈茨木黴菌肥可作為青蒿的苗肥，全部代替或部分代替化肥。
sequencelisting
重慶市中藥研究院
一種對青蒿幼苗有促進作用的哈茨木黴菌肥及其應用
2017
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th101特異序列
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