人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白i診斷試紙的製作方法

2023-09-18 04:39:15 1

專利名稱：人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白i診斷試紙的製作方法
技術領域：
人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷試紙技術領域本發明涉及一種人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷試紙，屬於免疫層析快速 檢測領域。
技術背景肌紅蛋白是存在於肌肉組織中的一種亞鐵血紅素蛋白，它在肌肉細胞間傳輸氧氣。由於 分子量較小，當肌肉細胞損傷後，肌紅蛋白迅速釋放到血液中，24小時後，開始在血液中升 高。肌紅蛋白靈敏度很高但不夠特異，所以肌紅蛋白作為心肌梗死早期標誌物之一，具有很 高的陰性排除價值。肌酸激酶同工酶是存在於心肌組織中的一種二聚體酶，參與肌肉組織的新成代謝。當心 肌損傷後，肌酸激酶同工酶釋放到血液中，3-8小時後，開始在血液中升高。肌酸激酶同工酶是最重要的心肌梗死標誌物之~"o肌鈣蛋白由肌鈣蛋^1、 T、 C三亞基構成，它們和原肌球蛋白一起通過調節C^+對橫紋 肌動蛋白ATP酶的活性來調節肌動蛋白和肌球蛋白相互作用。當心肌損傷後，心肌肌鈣蛋白 複合物釋放到血液中，4-6小時後，開始在血液中升高，升高的肌鈣蛋白I能在血液中保持 很長時間(6-10天)，這樣就提供了較長的檢測期。並且心肌肌鈣蛋白I具有高度的心肌特異 性和靈敏度，所以心肌肌鈣蛋白I己成為目前最理想的心肌梗死標誌物。常用的測定方法有放射性免疫法(RIAs)、高壓液相色譜分析法、生化分析儀、蛋白分析 儀及各種診斷試劑盒。這些方法需要特殊防護設備、嚴苛的條件、價格昂貴的儀器和訓練有 素的人員，而且操作費時、樣本存儲困難，不易於推廣應用。發明內容本發明克服了現有技術中存在的一些問題，提供了一種利用快速免疫層析法，定性地檢 測臨床標本(全血/血清/血漿)中人肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶和心肌鈣蛋白I的診斷試紙， 是對急性心肌梗塞檢測的一種輔助手段，僅用於體外診斷。為解決上述技術問題，本發明是通過以下技術方案實現的人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、 顏色顆粒固定墊、樣品吸液層、MAX線組成，底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有 一條人肌紅蛋白單抗試驗線、 一條肌酸激酶同工酶單抗試驗線、 一條心肌^蛋白I單抗試驗 線和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層， 硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板與顏色顆粒固定墊相互交疊連接，在顏色顆粒固定墊上壓有 樣品吸液層。其中顏色顆粒可以是一種金屬膠體顆粒，可包括膠體金顆粒、銀顆粒、鐵顆粒、磁性顆 粒等， 一種標記顆粒，可包括染料顆粒、乳膠顆粒、螢光頓粒等，當釆用磁性顆粒時可實現 半定量或全定量檢測。樣品吸液層由三層材料疊加組成，第一層為一定規格無紡布層、第二層為玻璃纖維層、 第三層為一定規格無紡布層，上述物質均需經過表面活性劑緩衝液浸泡處理，乾燥後備用。檢測時，把試紙的取樣端放入檢測樣本中(液面不得超過MAX線)由於毛細管作用檢測 樣品將沿著試紙條向吸水層端移動，樣品中肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶、心肌鈣蛋白I抗原 可與各自相應標記探針發生特異結合後繼續移動與包被在硝酸纖維素膜上的抗體結合，從而 被抗肌紅蛋白、抗肌酸激酶同工酶、抗心肌鈣蛋白I單克隆抗體識別，即發生雙抗夾心的特 異結合。檢測過程中，當上行液面即滯留於此區域的標記探針將顯示相應的紅色，出現兩條 或以上紅線為陽性，僅出現一條紅線表示為陰性結果。於採用上述技術方案，本發明所提供的人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷 試紙具有這樣的有益效果即特異性強，靈敏度高，易儲存，無須專門技術人員操作，不需要儀器設備，而且結果易讀。

圖1為人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷試紙的主視結構圖。圖2為人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷試紙的俯視結構圖。 圖3為人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷試紙的陽性結果圖。 圖4為人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷試紙的陰性結果圖。 圖中1、吸水板，2、硝酸纖維素膜，3、羊抗鼠多克隆抗體控制線，4、試驗線，5、顏 色顆粒固定墊，6、樣品吸液層，7、底板，8、 MAX線。具體實施例1 合成免疫原口( 1)用^fi學合成方法合成兩種不同結合位點的肌紅蛋白合成免疫原；(2) 用化學合成方法合成兩種不同結合位點的肌酸激酶同工酶合成免疫原；(3) 用化學合成方法合成兩種不同結合位點的心肌鈣蛋白I合成免疫原。2. 單克隆抗體的製備(1) 將製備的兩種不同結合位點的肌紅蛋白合成免疫原免疫BALB/c小鼠。細胞融合建 立瘤株進行篩選，取瘤細胞注射於BALB/c小鼠腹腔，使其產生腹水。提取小鼠腹水 純化篩選，獲得與肌紅蛋白分子不同位點結合的兩種肌紅蛋白單克隆抗體I 、肌紅 蛋白單克隆抗體II;(2) 將製備的兩種不同結合位點的肌酸激酶同工酶合成免疫原分別免疫BALB/c小鼠。 用SP20細胞融合建立瘤株進行篩選，取瘤細胞注射於BALB/c小鼠腹腔，使其產生 腹水。提取小鼠腹水純化篩選，獲得與肌酸激酶同工酶分子不同位點結合的兩種肌 酸激酶同工酶單克隆抗體I 、肌酸激酶同工酶單克隆抗體II;(3) 將製備的兩種不同結合位點的心肌鈣蛋白I合成免疫原分別免疫BALB/c小鼠。用 SP20細胞融合建立瘤株進行篩選，取瘤細胞注射於BALB/c小鼠腹腔，使其產生腹水。 提取小鼠腹水純化篩選，獲得與心肌鈣蛋白I分子不同位點結合的兩種心肌鈣蛋白I 單克隆抗體I、心肌鈣蛋白I單克隆抗體II;3. 顏色顆粒與單克隆抗體的結合把肌紅蛋白單克隆抗體II、肌酸激酶同工酶單克隆抗體II、心肌鈣蛋白i單克隆抗體n標記的顏色顆粒分別吸附到纖維材料上，乾燥後備用。4. 制膜機制膜肌紅蛋白單克隆抗體I 、肌酸激酶同工酶單克隆抗體I 、心肌鈣蛋白I單克隆抗體I包被試驗線，控制線由羊抗鼠多克隆抗體包被。5. 試紙條組合按公知技術組合。6. 使用方法採集全血(靜脈血或指尖血)、血清或血漿。如使用全血標本，請立即使用。不 應將標本在室溫條件下長時間放置。如使用血清/血漿標本進行檢測，應儘快分離出血清或血槳，避免溶血。已經溶血的標本不能使用。靜脈血標本在2-8'C條件下可以保存兩天，不能冷 凍。血清或血漿標本在2-8'C條件下可以保存兩天。如長期保存需冷凍(-2(TC)。避免反覆 凍融。收集樣本在乾淨的樣杯中，將試紙吸液層端插入樣本中，待測樣本界面勿超過診斷試紙 上的"MAX"線，10-15分鐘內觀察結果。顯色區為兩條或以上紅色線，則檢測結果為陽 性；僅出現一條控制線時為陰性；控制線未出現色帶，表明試紙過期或操作不當，請另取 試紙重新檢測。
權利要求1. 一種人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/肌鈣蛋白I診斷試紙，其特徵在於它是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、顏色顆粒固定墊(5)、樣品吸液層(6)、MAX線(8)組成，底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條人肌紅蛋白單抗試驗線(4)、一條肌酸激酶同工酶單抗試驗線(4)、一條肌鈣蛋白I單抗試驗線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，在底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板與顏色顆粒固定墊相互交疊連接，在顏色顆粒固定墊上壓有樣品吸液層。
2. 根據權利要求l所述的人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/肌鈣蛋白I診斷試紙，其特徵在於顏色顆粒是一種金屬膠體顆粒o
3. 根據權利要求2所述的人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/肌鈣蛋白I診斷試紙，其特徵在於金 屬膠體顆粒包括膠體金顆粒、銀顆粒、鐵顆粒、磁性顆粒。
4. 根據權利要求1所述的人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/肌鈣蛋白I診斷試紙，其特徵在於樣 品吸液層由三層材料疊加組成，第一層為一定規格無紡布層、第二層為玻璃纖維層、第三 層為一定規格無紡布層。
5. 根據權利要求1所述的人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/肌鈣蛋白I診斷試紙，其特徵在於所 述的硝酸纖維素膜上包被有兩條線， 一條試驗線， 一條控制線。
6. 根據權利要求1所述的人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/肌鈣蛋白I診斷試紙，其特徵在於顏 色顆粒是一種標記顆粒。
7. 根據權利要求6所述的人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/肌鈣蛋白I診斷試紙，其特徵在於標 記顆粒包括染料顆粒、乳膠顆粒、螢光顆粒。
專利摘要本實用新型涉及一種人肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌鈣蛋白I診斷試紙，為通過快速免疫層析法，定性地檢測臨床標本(全血/血清/血漿)中人肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶和心肌鈣蛋白I的診斷試紙。本實用新型是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、顏色顆粒固定墊、樣品吸液層、MAX線組成，底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條人肌紅蛋白單抗試驗線、一條肌酸激酶同工酶單抗試驗線、一條心肌鈣蛋白I單抗試驗線和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板與顏色顆粒固定墊相互交疊連接，在顏色顆粒固定墊上壓有樣品吸液層。
文檔編號G01N33/577GK201087837SQ20072014093
公開日2008年7月16日 申請日期2007年3月30日 優先權日2007年3月30日
發明者萬志強, 萬志靜 申請人:萬華普曼生物工程有限公司