一種苦碟子有效成分組合物的製備、質量控制方法和用途的製作方法

2023-09-18 05:56:10

專利名稱：一種苦碟子有效成分組合物的製備、質量控制方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明提供了一種苦碟子有效成分組合物，還涉及該組合物的製備方法以及該組合物的用途，屬於中藥技術領域。
背景技術：
抱莖苦蕒菜，俗稱苦碟子、滿天星等，為菊科苦蕒菜屬抱莖苦蕒菜[Ixeris Sonchifolia(Bge)Hance]的兩年生乾燥地上部分，主產於我國東北、華北等地。《衛生部藥品標準內蒙古分冊》記載，抱莖苦蕒菜味苦、辛，性涼，具開胃，解毒，接骨，去痞作用，用於不思飲食，解毒，骨折，牙痛。民間主要用於治療闌尾炎、扁桃體炎、無名腫痛等症。對苦碟子藥材及製劑的研究近幾年有了很大的發展，據文獻報導苦碟子含有黃酮、 腺苷、內酯等化學成分。藥理研究表明總黃酮和有機酸是其中的主要活性成分，化學研究表明以苦碟子中菊苣酸(chicoric acid)和木犀草素-7_0_β-D-葡萄糖醛酸苷 (luteolin-7-Ο-β -D-glucuronide)含量較高，具有多種藥理活性。現有的對於苦碟子的提取方法一般是溶劑提取法，該法一方面具有的普遍問題是有機溶劑用量大，種類多，對環境有較大的影響，且其操作步驟繁瑣，在提取物中存在一定的殘留量，而且多數具有一定的毒性。另一方面對於上述兩個有效成分的提取沒有針對性， 使菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷提取量較低，並且二者較難在同一個條件下提取完全，沒有進行有效的提取純化處理，發揮二者良好的治療作用。目前研究苦碟子有效成分的提取方法可歸納為以下幾種1、先用水或醇提取，將回收溶劑後的提取物混懸於水中，分別用氯仿、醋酸乙酯、 正丁醇提取，劃分成幾個提取部分。再用矽膠柱或高效液相半製備柱層析、分離成單組分物質。上述方法是實驗室研究單一黃酮成分的常用分析方法，不適合醫藥工業化生產，並且， 該方法僅能在實驗室的條件下，將木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷提取出來，菊苣酸的提取量較低。2、申請號2005100^836. 1的發明專利「木犀草素-7_0_ β-D吡喃葡萄糖醛酸苷及其提取方法和用途」，公開了從抱莖苦蕒菜藥材中提取分離木犀草素-7-0-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷的一種方法，先後採用鈣-硫法得到粗黃酮提取物，再經過矽膠柱層析法和HPLC分離製備，得黃色無定型粉末。該製備方法僅僅適合實驗室分析型工藝，獲得的產品數量為毫微克級，且操作複雜，產品收率低，成本大，不適合工業化生產。3、申請號200610072744. X的發明專利申請「苦碟子總黃酮及其製備方法和含它的凍乾粉針與質量控制方法」。公開了苦碟子提取物的製備方法，採用反覆醇液調酸調鹼處理法，由於木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷在鹼性溶液中不穩定，易發生氧化和開環反應，且苦碟子中的菊苣酸在酸性溶液中不易析出，致使收率低，大量活性成分流失。同時，該專利雖然提供了提取物木犀草素7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷含量僅為8%左右，這一含量既未達到靜脈注射用二類原料藥的標準，即80%以上。4、申請號200410078168. 0的發明專利「一種含有抱莖苦蕒菜提取物的製劑及其製備方法」，公開了一種含總黃酮成分不少於80，其中黃酮木犀草素7-0-葡萄糖醛酸不少於M，腺苷不少於0. 18的抱莖苦蕒菜提取物及製劑，採用的是提取液加絮凝劑或直接進行柱層析，一方面絮凝工藝操作複雜，產品收率低，且易帶入非藥物性雜質，另一方面，簡單的水或醇處理的提取液進行柱層析，雜質含量多，影響分離效果，致使生產負荷大，而且成品含量低。再有就是此方法不利於菊苣酸的提取。

發明內容
本發明的目的之一是克服上述已有技術的不足致使苦碟子提取物中有效成分含量低，提供一種苦碟子有效成分組合物。本發明的另一個目的是提供該組合物的製備方法和在配製苦碟子注射液，用於冠心病、心絞痛、心梗和腦梗的治療方面的用途。本發明的又一個目的是提供菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷在含量測定苦碟子有效成分組合物和苦碟子藥材質量控制中的用途。本發明的創新性優勢在於以下三個方面1、酶法在苦碟子藥材前處理中的應用。苦碟子中的有機酸和黃酮類成分的提取常以水、乙醇等作為溶劑提取。水浸提成本低，但提取率也低；而用乙醇等有機溶劑提取成本高。由於苦碟子中的有機酸和黃酮類成分幾乎都被以纖維素為主體的細胞壁所包圍，這些細胞間尚有原果膠粘結，因此，本發明應用複合酶液對苦碟子進行酶解前處理，然後再進行提取，可以大大提高苦碟子中有機酸和黃酮類成分的得率。2、超臨界流體萃取法提取苦碟子中有機酸和黃酮類成分。基於上述背景技術中所述的現有提取方法及不足，本發明採用超臨界流體萃取技術，而使用的超臨界流體是二氧化碳，因其無毒、不燃燒、對大部分物質不反應、價廉等特點，在超臨界狀態下，CO2流體兼有氣液兩項的雙重特點，既具有與氣體相當的高擴散係數和低粘度，又具有與液體相近的密度和物質良好的溶解能力。此法萃取能力增強，提取率高，超臨界(X)2萃取溫度低，能較完好地保存苦碟子中有機酸和黃酮類成分不被破壞，提取時間快，生產周期短等特點。酶法與超臨界流體萃取法的有力結合，可以大大的加強有效成分的提取率。3.採用波長切換法，對苦碟子中菊苣酸和木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷進行含量測定。在通常情況下，利用高效液相色譜法測定樣品時需要經過一系列複雜的提取和純化程序，且大都是在恆定波長下進行檢測，對單組份體系而言，在恆定波長下進行測定是行之有效的。但在對多組分體系進行測定時，由於各組分的最大吸收波長不盡相同，加之繁瑣的提取前處理過程會使待測物質有一定的損失，因此利用恆定波長很難全面檢出多組分體系中各組成分的真實含量，為了提高多組分體系檢測的靈敏度並客觀地反應多組分中被測組分的真實含量，應儘可能的在各物質的最大吸收波長下進行測定。本發明採用波長切換的方法，可以實現菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷在各自的最大吸收處，在同條件下被測定。本發明所提供的苦碟子有效成分組合物的製備方法如下
1.取苦碟子藥材，用烘箱在65_70°C條件下烘乾，粉碎至40目備用，再加1倍量的水(質量)，置微波爐中經微波處理5min，經微波處理的物料加入一定量的複合酶，使物料充分酶解，然後將酶解物乾燥粉碎後投入(X)2萃取釜中；2.超臨界CO2萃取將95%乙醇和大於99. 99%液態CO2按1 99-20 80比例關係混合，經熱交換器達到超臨界狀態，再通入萃取釜，萃取壓力為10-45MPa、萃取溫度為 35-95 °C、萃取時間為2-4h ；3.將提取液進行濃縮，濃縮液經AB-8樹脂柱吸附後，30 %乙醇洗至無色，取醇洗液進行濃縮；4.過濾，濾液調pH值4-5，靜置，沉澱，過濾；5.所得濾液經聚醯胺樹脂柱吸附，用30%乙醇洗脫，洗至無色後，再用60%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，乾燥，即得。所述的製備方法，其特徵在於步驟1中的複合酶主要是0. 2mg/mL的纖維素酶和0. lmg/mL果膠酶，加入量範圍為 1-5% ο步驟3中濾液用鹽酸調pH值4-5 ；步驟5中聚醯胺樹脂柱型號為60-80目。
具體實施例方式實施例1取苦碟子藥材500g，用烘箱在65_70°C條件下烘乾，粉碎至40目備用，再加1倍量的水(質量)，置微波爐中經微波處理5min，經微波處理的物料加入一定量的複合酶，使物料充分酶解，然後將酶解物乾燥粉碎後投入萃(X)2取釜，進行超臨界(X)2萃取將95 %乙醇和大於99. 99%液態CO2按20 80混合，經熱交換器達到超臨界狀態，再通入萃取釜，萃取壓力為32MPa、萃取溫度為60°C、萃取時間為池。將提取液進行濃縮，濃縮液經AB-8樹脂柱吸附後，30 %乙醇洗至無色，取醇洗液進行濃縮。過濾，濾液調pH值4-5，靜置，沉澱，過濾。所得濾液經聚醯胺樹脂柱吸附，用30%乙醇洗脫，洗至無色後，再用60%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，乾燥，得提取物。提取物中菊苣酸佔提取物質量的40%，木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷佔提取物的45 %。實施例2取苦碟子藥材500g，用烘箱在65_70°C條件下烘乾，粉碎至40目備用，再加1倍量的水(質量)，置微波爐中經微波處理5min，經微波處理的物料加入一定量的複合酶，使物料充分酶解，然後將酶解物乾燥粉碎後投入萃(X)2取釜，進行超臨界(X)2萃取將95 %乙醇和大於99. 99%液態CO2按20 80混合，經熱交換器達到超臨界狀態，再通入萃取釜，萃取壓力為32MPa、萃取溫度為60°C、萃取時間為池。將提取液進行濃縮，濃縮液經AB-8樹脂柱吸附後，30 %乙醇洗至無色，取醇洗液進行濃縮。過濾，濾液調pH值4-5，靜置，沉澱，過濾。所得濾液經聚醯胺樹脂柱吸附，用30%乙醇洗脫，洗至無色後，再用40%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，乾燥，得提取物。提取物中菊苣酸佔提取物質量的42%，木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖醛酸苷佔提取物的39 %。本發明所製備的苦碟子有效成分組合物，可與藥效學允許的藥物賦形劑組合製備成製劑。其特徵在於主要包括液體製劑和固體製劑。固體製劑主要包括片劑、膠囊劑(含軟膠囊)、滴丸劑。液體製劑包括口服液體製劑和注射液體製劑。另外，也可用於現代苦碟子注射液的製備。本發明所製備的苦碟子有效成分組合物，成分主要由菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷組成，選擇二者作為該提取物的質量控制指標，在同一個色譜條件下利用波長切換法同時測定二者含量，方法簡便，重現性好，與以往的單一條件測定單個成分相比，提高工作效率，能更好地控制組合物和藥材的質量。1.儀器與試藥SHIMAZU LC-10AT VP高效液相色譜儀(島津公司)，乙腈、磷酸為色譜純，其他試劑均為分析純。菊苣酸(北京恆元啟天化工技術研究所，純度98%以上，批號20100302)木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷(瀋陽雙鼎藥業研發實驗室自製，純度98% 以上)2.色譜條件用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相A為乙腈，B為0.5%磷酸溶液(ml/ ml)，按表1進行梯度洗脫；流速為1. Oml/min ；柱溫為40°C ；波長切換程序為0min-327nm， 15min-348nm。表1梯度洗脫程序表
權利要求
1.一種苦碟子有效成分組合物的製備，其特徵在於包括下述工藝步驟(1)取苦碟子藥材，用烘箱在65-70°C條件下烘乾，粉碎至40目備用，再加1倍量的水， 置微波爐中經微波處理5min，經微波處理的物料加入一定量的複合酶，達到物料充分酶解， 然後將酶解物乾燥粉碎後投入萃取釜中；(2)超臨界CO2萃取將95%乙醇和大於99.99%液態CO2按1 99-20 80比例關係混合，經熱交換器達到超臨界狀態，再通入萃取釜，萃取壓力為10-45MPa、萃取溫度為 35-95 °C、萃取時間為2-4h ；(3)將提取液進行濃縮，濃縮液經AB-8樹脂柱吸附後，30%乙醇洗至無色，取醇洗液進行濃縮；(4)過濾，濾液調pH值4-5，靜置，沉澱，過濾；(5)所得濾液經聚醯胺樹脂柱吸附，用30%乙醇洗脫，洗至無色後，再用60%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，乾燥，即得；苦碟子有效成分組合物中菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷的含量不少於 80%。
2.如權利要求1所述的苦碟子有效成分組合物的製備方法，其特徵在於步驟(1)中的複合酶主要是O.aiig/mL的纖維素酶和0. lmg/mL果膠酶，其加入量範圍為 1-5% ο步驟⑵中濾液用鹽酸調pH值4-5 ；步驟(3)中聚醯胺樹脂柱型號為60-80目。
3.如權利要求1所述的一種苦碟子有效成分組合物的製備質量控制方法製得的苦碟子有效成分組合物質量控制方法是指波長切換法同時測定菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷在苦碟子注射液和苦碟子藥材中的含量；其中測定方法為(1)對照品溶液的製備精密稱取菊苣酸、木犀草素-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷對照品適量，分別置於IOmL棕色容量瓶中加甲醇溶解，製得濃度分別為0. 40mg/mL和0. 80mg/mL的對照品儲備液，備用；精密吸取菊苣酸對照品儲備液5mL和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷對照品儲備液5mL置同一棕色IOmL容量瓶中，搖勻，製得對照品混合液；(2)供試品溶液的製備取樣品，提取或稀釋至適當濃度，用0.45μπι的微孔濾膜濾過， 作為供試品溶液；(3)色譜條件色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相 A為乙腈，流動相B為體積比0. 5%磷酸溶液進行梯度洗脫，梯度洗脫程序見表。流速度為 1. Oml/min ；柱溫為40°C ；波長切換程序為0min-327nm，15min-348nm ；理論塔板數按菊苣酸和木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖醛酸苷峰計算均應不低於3000 ；梯度洗脫程序表
4.如權利要求1所述的苦碟子有效成分組合物的用途，其特徵是用於配製現代苦碟子注射液，用於冠心病、心絞痛、心肌梗塞和腦梗塞的治療。
全文摘要
本發明公開了一種苦碟子有效成分組合物的製備、質量控制方法和用途。本發明公開的苦碟子有效成分組合物主要由菊苣酸和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷組成，其二者含量不少於80％。該組合物的提取方法是先經酶法進行前處理，再採用超臨界流體萃取法，所得的萃取物分別經AB-8樹脂柱和聚醯胺樹脂柱進行分離、純化、濃縮、乾燥即得。另外，本發明還涉及在配製現代苦碟子注射液，用於冠心病、心絞痛、心梗和腦梗治療方面的用途，以及在含量測定苦碟子注射液有效成分組合物和苦碟子藥材質量控制中的用途。
文檔編號A61K36/28GK102362883SQ20111032865
公開日2012年2月29日 申請日期2011年10月26日 優先權日2011年10月26日
發明者胡爽, 馬佔芝 申請人:瀋陽雙鼎科技有限公司