一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法
2023-09-18 08:38:30
一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法
【專利摘要】本發明公開了一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法，包括下列步驟：1）當試管苗生長有4～5片葉時，將生長有小孢子試管苗的瓶口打開，並放置在培養架上在溫度為24～25℃，光照強度為2500～3000Lx、光照時間12h/d的條件下鍛鍊5～6天後連同試管放置在田間遮陽網棚內，鍛鍊生長2天，使試管苗基本適應外界環境；2）從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養基後在用CS浸根劑浸根30～60秒，將附帶有CS浸根劑的試管苗根部插入畦土中培養生長。該方法首次實現了由常規試管苗2次移栽方法變為1次移栽方法，使甘藍小孢子培養獲得的小孢子苗田間成活率高達98.5%。
【專利說明】一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於植物育種【技術領域】，涉及利用甘藍游離小孢子培養技術獲得小孢子苗後實現小孢子苗成活移栽的方法，尤其是一種甘藍小孢子苗由試管直接移栽田間的方法。
[0002]
【背景技術】
[0003]甘藍是結球甘藍{Bras sc i a oleracea.L, var.capi ta ta L )的簡稱，屬於十字花科蕓薹屬中一種主要蔬菜作物，世界各國都普遍栽培。甘藍游離小孢子培養技術是一種單倍體育種技術，是縮短甘藍育種年限，創製甘藍新資源材料，提高育種效率的一條有效途徑；利用游離小孢子培養技術可使甘藍育種材料快速純化，創製自交系無須連續自交，易克服自交衰退現象；創製一個純系僅需I~2年，能夠極大地縮短新品種育種周期；甘藍小孢子培養技術的成功關鍵是要獲得試管小孢子苗和保證更多的試管小孢子苗移栽田間成活，對於成活苗栽培 長成植株後在冬前必須生長到滿足綠體春化的最小營養體，才能實現抽薹開花結種。
[0004]常規甘藍小孢子培養技術體系中小孢子苗由試管苗到田間成苗要經過2個重要環節，其一是小孢子試管苗移栽到營養缽鍛鍊苗環節，其二是營養缽苗移栽田間成苗環節。甘藍或其它十字花科作物常規試管苗移栽方法中主要存在三大問題(I)兩次移栽易造成小孢子苗根系損傷和延遲緩苗時間；(2)營養缽鍛鍊苗的環境條件通風、保溼等不易控制，對於適宜涼爽溼潤特點的甘藍不利生長，小孢子苗易徒長或老化；(3)營養缽苗移栽田間時苗子根土易脫落，會引起斷根或產生傷口移栽田間易感染病害等；上述諸多問題不同程度致使小孢子苗移栽成活率低，兩次移苗費工費時也影響小孢子苗田間生長時間，導致冬季低溫來臨前部分小孢子植株生長過小，來年未通過春化不能獲得種子增加再生難度。據劉瑩瑩報導(西北農林科技大學學報，2013，Vol41, N0.8)甘藍小孢子試管苗移栽營養缽時移栽成活率為76.9%，營養缽苗定植田間時移栽成活率為92.0% ;蔣武生報導(河南農業大學學報2005，Vol39, N0.4),大白菜小孢子試管苗移栽營養缽鍛鍊苗後，於9月下旬定植田間小孢子苗成活率為90% ;劉雪萍報導(遺傳，2003，25 (4))，油菜小孢子苗移栽營養缽鍛鍊苗後定植田間，遮陽網覆蓋苗成活率87.56%，薄膜覆蓋苗成活率57.7%。如此較低的小孢子苗成活株率，嚴重影響著甘藍或十字花科其它作物單倍體育種效果和雜交種的選育進程。
【發明內容】
[0005]針對上述現有技術中存在的問題與缺陷，本發明的目的在於提供一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法，該方法使甘藍小孢子培養獲得的小孢子苗田間成活率高達98.5%。
[0006]為了實現上述任務，本發明採取如下的技術解決方案:
一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法，其特徵在於，包括下列步驟:
I)試管苗鍛鍊(O室內鍛鍊苗:當試管苗生長有4~5片葉時，將生長有小孢子試管苗的瓶口打開，並放置在培養架上在溫度為24-25°C，光照強度為2500-3000LX、光照時間12h/d的條件下鍛鍊5-6天。
[0007](2)室外鍛鍊苗:將經室內鍛鍊5-6天試管苗連同試管放置在田間遮陽網棚內，鍛鍊生長2天，使試管苗基本適應外界環境。
[0008]2)試管苗移栽:
(1)栽苗地準備:打碎畦土，按照長度10-15釐米、寬度100-110釐米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土。待畦面上的水滲入畦面時用方形鐵鍬輕輕抹平畦面，待用。
[0009](2)獲取試管苗:由遮陽網棚內取來試管苗，選用長把鑷子從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養基待用。
[0010](3)夾苗移栽:
①浸根劑浸根:
衝洗試管苗根部培養基幹淨後，用研製的CS浸根劑浸根30-60秒。
[0011]②夾苗移栽:將附帶有CS浸根劑的試管苗用鑷子夾住苗根部插入畦土中培養生長。
[0012]所述的CS浸根劑的配方為:50%可溼性粉劑多菌靈(Carbendazim) 5-10克+a_萘乙酸鈉(Scdium, a-naphthaleneaceticd) 0.5-1.0毫克溶入1000克水中混合均勻。
[0013]與現有技術相比，本發明的一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法具有以下優點:
1.本發明的一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法首次實現了由常規試管苗2次移栽(試管苗移栽營養缽，營養缽苗移栽田間)方法變為I次移栽(試管苗直接夾苗移栽田間)方法。
[0014]2.本發明研製的甘藍小孢子苗移栽CS浸根劑，配方50%可溼性粉劑多菌靈5-10克+ a-萘乙酸鈉0.5-1.0毫克+1000克水，浸根後小孢子苗移栽田間無病害發生，小孢子苗生長健壯，根系發育快、根系粗壯；克服了常規2次移栽小孢子苗緩苗時間長，發棵慢，根系少而細弱，田間植株發病率高達12.0%以上的缺陷。
[0015]3.本發明方法使甘藍小孢子培養獲得的小孢子苗田間成活率高達98.5%，與前人方法相比較比劉瑩瑩報導提高27.5%，比蔣武生報導提高8.5%，比劉雪萍報導提高10.94%和40.8% ;小孢子苗I次移栽田間無有緩苗或緩苗時間短暫，小孢子苗植株生長旺盛來年植株春化抽薹率比對照提高13.9%和16.4%。
【專利附圖】
【附圖說明】
圖1是實施例甘藍小孢子培養的試管中的小孢子苗；
圖2是實施例經開口鍛鍊後試管中的小孢子苗；
圖3是實施例由試管中取出小孢子苗的過程:
圖4是實施例清洗根部培養基後的小孢子苗；
圖5是實施例1次性夾苗移栽小孢子苗；
圖6是實施例1次性夾苗移栽後的小孢子苗群體。
【具體實施方式】[0016]按照本發明的技術方案，一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法，包括下列步驟:
I)試管苗鍛鍊
(I)室內鍛鍊苗:當試管苗生長有4~5片葉時，將生長有小孢子試管苗的瓶口打開，並放置在培養架上在溫度為24-25°C，光照強度為2500-3000LX、光照時間12h/d的條件下鍛鍊5-6天。
[0017](2)室外鍛鍊苗:將經室內鍛鍊5-6天試管苗連同試管放置在田間遮陽網棚內，鍛鍊生長2天，使試管苗基本適應外界環境。
[0018]2)試管苗移栽:
(I)栽苗地準備:打碎畦土，按照長度10-15釐米、寬度100-110釐米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土。待畦面上的水滲入畦面時用方形鐵鍬輕輕抹平畦面，待用。
[0019]上述所述的田間畦土的配方為:
①材料
田間畦土:不含十字花科作物病菌和害蟲，多為糧田土、豆田土、蔥蒜田土或三年以上未栽培過十字花科作物的田塊土。
[0020]有機肥和化肥:有機肥主要是雞糞、豬糞等質地較為疏鬆、速效氮含量低的糞肥，有機肥必須充分腐熟；化肥為磷酸二胺複合肥。
[0021]②混拌
將搗碎的有機肥3~4kg/m2和化肥磷酸二胺0.1~0.2kg/m2，撒施田間畦內土面，摟鋤並與25~30cm深田土混合均勻並耙平畦面。
[0022](2)獲取試管苗:由遮陽網棚內取來試管苗，選用長把鑷子從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養基待用。
[0023](3)夾苗移栽:
①浸根劑浸根:
衝洗試管苗根部培養基幹淨後，用研製的CS浸根劑浸根30-60秒。
[0024]所述的CS浸根劑的配方為:50%可溼性粉劑多菌靈(Carbendazim) 5-10克+a_萘乙酸鈉(Scdium, a-naphthaleneaceticd) 0.5-1.0毫克溶入1000克水中混合均勻。
[0025]②夾苗移栽:將附帶有CS浸根劑的試管苗用鑷子夾住苗根部插入畦土中培養生長。
[0026]所述的夾苗移栽方法如下:
I?左手拿住小孢子苗的葉部，右手用鑷子夾住小孢子苗根系中下部，按照適宜株行距直接將小孢子苗根部插入到抹平畦面的土中；
II?插入深度為連接根系的莖基部插入畦面0.3-0.5釐米，隨後用鑷子將根莖周圍的空隙用畦土填平，扶正小孢子苗；
II1.夾苗移栽完成後，及時搭建小拱棚(一般在陝西省的10月中旬左右夾苗)覆蓋薄膜，保溫、保溼促其緩苗成活，I周后開始通風直至揭膜，隨後正常栽培管理，促使小孢子苗生長發育，冬前達到滿足春化營養體。
[0027]以下是發明人給出的實施例:需要說明的是，根據實驗證明，本發明不限於這些實施例。[0028]實施例1:
本實施例選用 申請人:所在甘藍育種和生物技術研究室育成的國家審定甘藍品種「綠球66」 一代雜交種(F1)獲得的DH群為實驗材料。
[0029]I)試管苗鍛鍊
(O室內鍛鍊苗:當由「綠球66」F1小孢子培養獲得的DH群試管苗生長有4片葉(圖O時，將試管苗的瓶口打開，並放置在培養架上在溫度為24-25°C，光照強度為2500Lx、光照時間12h/d的條件下鍛鍊6天。
[0030](2)室外鍛鍊苗:將經室內鍛鍊6天試管苗連同試管放置在田間遮陽網棚內，鍛鍊生長2天，使試管苗基本適應外界環境。
[0031]2)試管苗移栽:
(I)栽苗地準備:前茬地為西葫蘆地，施腐熟雞糞4kg/m2和磷酸二胺0.lkg/m2，摟鋤並與25釐米深田土混合均勻，按照長度10釐米、寬度110釐米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土。待畦面上的水滲入畦面時用方形鐵鍬輕輕抹平畦面。
[0032](2)獲取試管苗:由遮陽網棚內取來由「綠球66」匕小孢子培養獲得的DH群試管苗(圖2)，用長把鑷子從試管中取出小孢子苗(圖3)，用清水洗去根部的培養基。
[0033](3)夾苗移栽: ①浸根劑浸根:衝洗乾淨試管苗根部培養基後，用1000克水中含50%可溼性粉劑多菌靈5克+萘乙酸鈉1.0毫克的浸根劑浸根50秒。
[0034]②夾苗移栽:左手拿住試管苗的葉部，右手用鑷子夾住試管苗根系中下部，直接將苗根部移栽插入到抹平畦面的土中，插入深度莖基部插入畦面0.3釐米，隨後用鑷子將根莖周圍的空隙用畦土填平，陝西省10月20日搭建小拱棚正常栽培管理。15天後，統計小孢子再生苗移栽成活率(表1)，比對照提高27.0% ；30天後，統計小孢子苗生長勢(表2)，冬前植株達到11片蓮座葉滿足春化營養體，抽薹率為95.9%，比對照提高16.4%。
[0035]實施例2:
本實施例選用 申請人:所在甘藍育種和生物技術研究室由國外引進甘藍一代雜交種(F1)品種「 GWF1-2 」獲得的DH群為實驗材料。
[0036]I)試管苗鍛鍊
(I)室內鍛鍊苗:當由「GWF1-2」小孢子培養獲得的DH群試管苗生長有5片葉時，將試管苗的瓶口打開，並放置在培養架上在溫度為25°C，光照強度為3000Lx、光照時間12h/d的條件下鍛鍊5天。
[0037](2)室外鍛鍊苗:將經室內鍛鍊5天試管苗連同試管放置在田間遮陽網棚內，鍛鍊生長2天，使試管苗基本適應外界環境。
[0038]2)試管苗移栽:
(I)栽苗地準備:前茬地為西葫蘆地，施腐熟雞糞3kg/m2和磷酸二胺0.lkg/m2，摟鋤並與25釐米深田土混合均勻，按照長度10釐米、寬度110釐米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土。待畦面上的水滲入畦面時用方形鐵鍬輕輕抹平畦面。
[0039](2)獲取試管苗:由遮陽網棚內取來由「GWF1-2」小孢子培養獲得的DH群試管苗，用長把鑷子從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養基獲得無粘帶培養基的試管苗(圖 4)。[0040](3)夾苗移栽:
①浸根劑浸根:衝洗乾淨試管苗根部培養基後，用1000克水中含50%可溼性粉劑多菌靈10克+萘乙酸鈉0.8毫克的浸根劑浸根35秒。
[0041]②夾苗移栽:左手拿住試管苗的葉部，右手用鑷子夾住試管苗根系中下部(圖5)，將苗根部直接移栽插入到抹平畦面的土中，插入深度莖基部插入畦面0.3釐米，隨後用鑷子將根莖周圍的空隙用畦土填平(圖6)，陝西省10月25日搭建小拱棚正常栽培管理。15天後，統計小孢子再生苗移栽成活率(表1)，比對照提高29.0% ；30天後，統計小孢子苗生長勢(表2)， 冬前植株達到12片蓮座葉滿足春化營養體，抽薹率為97.0%，比對照提高13.9%。
[0042]表1甘藍小孢子試管苗到田間移栽方法對苗成活率的影響 表2甘藍小孢子試管苗到田間移栽方法成活植株長勢表現
注:植株病害主要是根腐病和根莖病。
【權利要求】
1.一種甘藍小孢子苗從試管到田間的移栽方法，其特徵在於，包括下列步驟: 1)試管苗鍛鍊 (O室內鍛鍊苗:當試管苗生長有4~5片葉時，將生長有小孢子試管苗的瓶口打開，並放置在培養架上在溫度為24~25°C，光照強度為2500~3000Lx、光照時間12h/d的條件下鍛鍊5~6天； (2)室外鍛鍊苗:將經室內鍛鍊5~6天試管苗連同試管放置在田間遮陽網棚內，鍛鍊生長2天，使試管苗基本適應外界環境； 2)試管苗移栽 (1)栽苗地準備:打碎畦土，按照長度10~15釐米、寬度100~110釐米做畦，摟平畦面，放水澆灌畦土，待畦面上的水滲入畦面時輕輕抹平畦面，待用； (2)獲取試管苗:由遮陽網棚內取來試管苗，從試管中取出小孢子苗，用清水洗去根部的培養基待用； (3)夾苗移栽:衝洗試管苗根部培養基幹淨後，用CS浸根劑浸根30~60秒，將附帶有CS浸根劑的試管苗用鑷子夾住苗根部插入畦土中培養生長； 所述的CS浸根劑由50%可溼性粉劑多菌靈5-10克、+a-萘乙酸鈉0.5-1.0毫、1000克水組成。
【文檔編號】A01P3/00GK103749127SQ201410011546
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月10日 優先權日:2014年1月10日
【發明者】張恩慧, 程永安, 許忠民, 楊安平, 趙曉菲, 範國紅, 王鑫 申請人:西北農林科技大學