用於在廣譜、未分化或混合臨床應用中治療的組合物和方法

2023-09-17 18:20:25

用於在廣譜、未分化或混合臨床應用中治療的組合物和方法
【專利摘要】本公開提供了用於被動免疫的改進組合物和方法。在實施方案中，提供了包含在載體基質中的特異性多克隆抗體的協同組合的組合物。本公開提供了用於在廣譜、未分化或混合臨床應用中治療腹瀉和腸道感染的有效的經濟性組合物和方法。
【專利說明】用於在廣譜、未分化或混合臨床應用中治療的組合物和方
法
[0001]相關申請案
[0002]本申請以除美國以外的所有指定國家的 申請人:美國公司PanTheryx, Inc,及美國居民Timothy W.Starzl的名義在2011年11月21日作為PCT國際專利申請提交，並且要求2010年11月23日提交的美國臨時申請第61/416，667號的優先權，該臨時申請以引用的方式完整地併入本文。
【技術領域】
[0003]本公開提供了用於被動免疫的組合物和方法。在實施方案中，提供了包含特異性多克隆抗體與載體基質的協同組合的組合物。本公開提供了用於在廣譜、未分化或混合臨床應用中治療病原感染的有效且經濟的組合物和方法。在一個實施方案中，提供了用於治療腹瀉和腸道感染的組合物和方法。
[0004]發明背景
[0005]抗體、免疫球蛋白和其他生物免疫因子(這裡統稱為抗體)，無論是天然存在的還是它們的合成類似物，都是人和動物的已知治療劑。抗體通過結合(經由非共價力)在抗體上的抗原結合位點與稱為抗原決定簇或表位的抗原的一部分之間而起作用。抗體能夠具有高度特異性。例如，在生產的推動下，單克隆抗體領域已大量開發出特異性和精確性越來越高的結合特性。然而，這種高特異性可導致過度受限的結合屬性，其中功能上相同的因子或抗原不與免疫試劑或免疫治療劑相同地反應。另一方面，通常被認為在獲得結合特異性上發生錯誤或失敗的交叉反應性是抗原與針對相似但不同抗原產生的抗體之間的反應。受控制的交叉反應性可建設性地用來擴寬抗體的結合範圍。
[0006]在哺乳動物中初乳已自然演變，專門為了向胃腸道並通過胃腸道以非常濃縮的低體積形式遞送其組分至新生兒。已知初乳含有諸如IgA、IgG，和IgM的抗體。初乳的其他組分包括乳鐵蛋白、溶菌酶、乳過氧化物酶、補體，和富含脯氨酸的多肽(PRP)。還在初乳中發現許多細胞因子(控制免疫系統的運作的小信使肽)，包括白介素、腫瘤壞死因子、趨化因子，及其他。初乳還含有許多生長因子，如胰島素樣生長因子I和II，轉化生長因子α、β I和β 2，成纖維細胞生長因子，表皮生長因子，粒細胞-巨噬細胞刺激生長因子，血小板源性生長因子，血管內皮生長因子，及集落刺激因子-1。
[0007]初乳中的抗體和輔因子可通過母乳餵養給接受者提供被動免疫力。抗體和輔因子通常從母體被傳遞至新生兒，並提供對抗病原體的第一層保護。生長因子還刺激腸道的發育和修復。
[0008]一種可通過使用被動免疫力根治的病狀為腹瀉。腹瀉主要由攝入的病原體引起。根據世界衛生組織(WH0)，全球88%的腹瀉病例可歸因於不安全的水、衛生設施不足或不夠衛生。這些病例導致每年約150萬人死亡，大多數是兒童死亡。(Pruss-Urstun等人，Safer water，better health:costs，benefits and sustainability of interventionsto protect and promote world health.World Health Organization, Geneva,2008.ISBN9789241596435)。
[0009]全球特別關注的是發展中國家的感染性腹瀉情況，其是尤其兒科人群的巨大的持續的發病率和死亡率的原因。例如，根據2009年聯合國人類發展報告(United NationsHuman Development report),印度是世界上嬰兒死亡率最高的國家之一。例如,全球性非營利性組織救助兒童會(Save the Children)報告印度每15秒就有一名兒童死亡，並且這些死亡的90 %是由諸如腹瀉的可預防疾病引起。WHO推薦通過使用輪狀病毒疫苗和麻疹疫苗、用肥皂洗手、改善飲用水供應和全社區衛生來預防腹瀉；然而，這些措施不能有效地治療該疾病。
[0010]在世界許多地方，小兒腹瀉的標準治療方案包括抗生素與口服補液療法的合併施用。出於許多原因，抗生素是處方藥。抗生素在病毒感染的治療上無效。例如，估計輪狀病毒導致全球五歲以下兒童中所有因腹灣入院的病例的約40% (Weekly EpidemiologicalRecord, vol.83, n0.47, 2008年11月21日)。抗生素使用不當可促進細菌耐藥菌株。相反，感染可能由耐藥的細菌菌株引起。甚至在最好的情況下，合適的抗生素的使用也可能需要數天來減輕腹瀉症狀的嚴重程度。
[0011]抗生素的另一個缺點是，施用可導致存在於胃腸道中的病原細菌和良性細菌都遭到破壞，這可進一步導致內毒素脂多糖的釋放。(Holzheimer，Thesignificance of endotoxin release in experimental and clinical sepsis insurgical patients—evidence for antibiotic-1nduced endotoxin release ?Infection.1998Mar-Apr ;26 (2):77-84)。這些內毒素具有許多不良的全身作用，包括發熱、白細胞計數的變化、彌散性血管內凝血、低血壓、休克和死亡、吸收不良；事實上,相當小劑量內毒素的直接注射也會導致大多數哺乳動物死亡。Todar K.Bacterial Endotoxin.Textbook of Bacteriology.2008.textbookofbacteriology.net。
[0012]根據WHO，推薦將口服補液療法和鋅與包括母乳餵養在內的持續餵養一起用於治療兒童腹灣。鋅糖眾或加鋅口服補液溶液(0RS,40mg/L)通常以每天約15mg至30mg的劑量使用。鋅廉價，但功效不太高。鋅糖漿僅導致急性腹瀉的持續時間減少25%，以及治療失敗或死亡減少 40%。(Bhutta 等人 Therapeutic effects of oral zinc in acuteand persistent diarrhea in children in developing countries:pooled analysis ofrandomized controlled trials.The American Journal of Clinical Nutrition.2000 ；72(6):1516-22)。一項研究評價加鋅(40mg/L) ORS在1，219名患有急性腹瀉的兒童中的功效和安全性。與僅接受標準ORS的對照組的臨床結果相比，加鋅ORS組的臨床結果得到適度改善。在該項研究中，鋅-ORS組的大便總次數低於對照組的總次數。沒有觀察到對腹瀉持續時間或長時間腹?寫風險的顯著影響。(Bahl R,Bhandari N, Saksena Μ,等人Efficacyof zinc-fortified oral rehydration solution in6-to35-month_old children withacute diarrhea.J Pediatr2002 ； 141:677-82)。
[0013]已知抗生素無法有效地治療諸如輪狀病毒感染的病毒感染。其他幹預的效力有限。另外，用於判別腹瀉原因的合適的診斷工具並不總是容易獲得或負擔得起。
[0014]顯然，需要治療未分化腹瀉的迅速、有效且經濟的替代方案。仍然需要用於在廣譜、未分化或混合臨床應用中治療腹瀉和腸道感染的有效且經濟的組合物和方法。發明概要
[0015]本公開提供了被動免疫的組合物和方法，其中將諸如特異性免疫球蛋白的特異性結合分子與載體基質組合以提供用於管理微生物的經口或黏膜施用的組合物；所述組合物和方法包括治療或預防病原感染或不期望菌株。在實施方案中，將所述組合物施用給非新生兒受試者。
[0016]在一個實施方案中，本公開提供了用於施用給非新生人以管理微生物的組合物，所述組合物包含至少一種來源於動物的適應性免疫系統的特異性結合分子，或其片段，其中特異性結合分子選自免疫球蛋白、抗體、肽、可變淋巴細胞受體、轉移因子，或它們的混合物；以及載體基質，其包含非人哺乳動物的先天免疫系統的兩種或更多種組分，其中所述基質可選自或來源於初乳、乳、血清、血漿、唾液、淋巴液、黏膜，或淚液的組分；其中所述基質和特異性結合分子來源於不同的物種。
[0017]在優選的實施方案中，載體基質包含牛初乳。在另一個實施方案中，所述基質包含選自以下的先天免疫系統組分:溶菌酶、磷脂酶、防衛素、調理素、補體系統組分、溶素、富含蛋白質的肽(PRP)、(PRPs)、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、細胞因子、白介素、趨化因子、幹擾素、TNF-α、纖連蛋白、白細胞、白血細胞、吞噬細胞、巨噬細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞、多形核細胞、樹突狀細胞、肥大細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、自然殺傷細胞(NK)、淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK)、防衛素、彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、髓過氧化物酶，和NADPH氧化酶。
[0018]在各種實施方案中，所述組合物包括藥學上可接受的載體。在其他實施方案中，所述組合物包括食品級載體。在實施方案中，所述組合物可經由經口遞送、鼻遞送、眼遞送或其組合來施用。
[0019]在其他實施方案中，所述組合物不包括以外源方式添加的聚合物、共聚物、脂質體、水凝膠或纖維蛋白。在其他實施方案中，所述組合物不包括微球體或微膠囊。在又一個進一步實施方案中，所述組合`物不包括以外源方式添加的抗原。
[0020]在進一步的實施方案中，特異性結合分子特異性地與病原體、病原體相關毒素、病原體相關粘附元件、不期望的菌株，或其組合結合。在一方面，病原體包含人或獸的引起胃腸炎的腸道或胃腸道病原體。在各種方面，病原體或不期望菌株選自由以下組成的組:空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)、沙門氏菌屬(Salmonella)、腸道血清型傷寒沙門氏菌(Salmonella enterica serovar Typhi)、痢疾志賀氏菌(Shigella dystenteriae)、類志賀鄰單胞菌(Plesiomonas shigelloides)、大腸埃希氏菌(Escherichia coli)[包括(EPEC)腸致病性大腸埃希氏菌、(ETEC)產腸毒素大腸埃希氏菌、(EaggEC)腸聚集性大腸埃希氏菌、(EIEC)腸侵襲性大腸埃希氏菌，及(EHEC)出血性大腸埃希氏菌]、艱難梭菌(Clostridium dificile)、小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersiniaenterocolitica)、霍亂弧菌(Vibrio cholerae)01 > 弧菌 0139、非-01 弧菌、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、艱難梭菌(Clostridium difficile)、腸肝螺桿菌(enterohepatic Helicobacter)(包括幽門螺桿菌(Helicobacter pylori))、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、輪狀病毒、冠狀病毒、諾羅病毒(norovirus)、杯狀病毒(calicivirus)、腸道腺病毒(enteric adenovirus)、巨細胞病毒(cytomegalovirus)、星狀病毒(astrovirus)、肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)、流感嗜血桿菌(H.1nfIuenzae)、淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)、帶狀抱疫病毒(herpeszoster virus)、鍵刀菌屬某些種(Fusarium spp.),及棘阿米巴屬某些種(Acanthamoebaspp)。
[0021 ] 在具體方面,病原體相關毒素包含內毒素或外毒素。
[0022]在另一個具體方面，病原體相關粘附元件包含粘附素、鈣粘素、纖毛、傘毛(fimbrillae)、病毒粘附結構，或其組合。
[0023]在各種實施方案中，所述組合物以對於治療或預防未分化腹瀉、旅行者腹瀉、輪狀病毒腹瀉、毒素介導的腹瀉、霍亂、艱難梭菌(C.difficile)感染、痢疾、傷寒熱、消化性潰瘍有效或對於管理胃腸道菌群有效的量經口施用。在另一個方面，有效量的所述組合物賦予受試者被動免疫力。
[0024]在另一個實施方案中，本公開提供了通過以下步驟製備本公開組合物的方法:(a)從動物獲取至少一種與特異性抗原結合的特異性結合分子或其片段，其中特異性結合分子選自免疫球蛋白、抗體、肽、可變淋巴細胞受體、轉移因子，及它們的混合物；(b)獲取至少一種載體基質，其包含至少兩種從非人動物獲得的選自由以下組成的組的組分:酶、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、非特異性免疫球蛋白、細胞因子、白血細胞、補體組分、幹擾素，和纖連蛋白；
(c)製備載體基質的固體形式及特異性結合分子或其片段的固體形式；以及(d)將載體基質的固體形式與特異性結合分子或其片段的固體形式混合。
[0025]在另一個實施方案中，本發明提供了用於製備賦予免疫力的組合物的方法。所述方法包括(a)獲取至少一種外源來源的特異性靶向免疫因子；(b)製備所述至少一種外源來源的特異性靶向免疫因子的粉末化形式；(C)獲取至少一種外源來源的載體基質，任選地將外源來源的載體基質與用於支撐外源來源的特異性靶向免疫因子並與其相互作用的試劑混合物混合；(d)製備所述`至少一種外源來源的載體基質的粉末化形式；以及(e)將步驟(b)的粉末化形式與步驟(d)的粉末化形式混合，從而獲得賦予被動免疫力的組合物。在一方面，賦予被動免疫力的組合物包括劑量受控制劑。在各種方面，賦予被動免疫力的組合物包括藥學上可接受的載體。在各種方面，賦予被動免疫力的組合物不包括聚合物、共聚物、脂質體、水凝膠，或纖維蛋白。在各種方面，賦予被動免疫力的組合物不包括微球體或微膠囊。在各種方面，賦予被動免疫力的組合物不包括免疫原或抗原。
[0026]本發明包括以下區別性屬性中的至少一種:(a)它使得基質、特異性因子，和針對指定或目標疾病的激活事件能夠被個性化設計；(b)它使得能夠獲得可就效果作出調整或調節的多種組分混合物的劑量受控制劑；(C)它使得能夠獲得提供超過可在自然系統中獲得的正常生理水平的指定組分的劑量受控制劑；(d)它使用複雜的多組分多通路相互作用創建模擬天然免疫系統反應的系統效果；(e)它使得能夠創建預先調節或強化的被動免疫反應，其可以其強化狀態施用，並隨後被存在的靶病原體、毒素、疾病狀態，或症候群激活；(f)它使得能夠製備具有定義的特異性或廣譜效果，從而滿足特定目標疾病狀態或症候群的需要或使用產品的實踐環境的需要的製劑；以及(g)它使得能夠製備可被靶向用於預防以及用於治療幹預的製劑。
[0027]在另一方面，通過調節所述組合物中諸如多克隆抗體的特異性結合分子的量，可製備劑量受控制劑。[0028]在優選的實施方案中，所述至少一種特異性結合分子包含來源於經免疫的雞的IgY。在其他具體方面，IgY包含對至少產腸毒素大腸埃希氏菌某些種、大腸埃希氏菌K99菌毛粘附因子、產氣莢膜梭菌毒素(Clostridium perfringens toxoid)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)、輪狀病毒,和冠狀病毒有特異性的IgY池。
[0029]在另一個實施方案中，將所述組合物外用施用至黏膜。
[0030]在另一個實施方案中，病原體包含引起陰道炎的病原體。在各種方面，病原體選自由以下組成的組:加德納菌屬某些種(Gardnerella spp.)、淋病奈瑟氏菌、沙眼衣原體、支原體屬某些種(Mycoplasma spp.)、空腸彎曲桿菌、陰道滴蟲(Trichomonas vaginalis)、I型皰疫病毒、2型皰疫病毒、白色念珠菌(Candida albicans)、光滑念珠菌(Candidaglabrata)、熱帶念珠菌(Candida tropicalis)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)和克柔念珠菌(Candida krusei)。
[0031]在另一個實施方案中，病原體為A組鏈球菌屬細菌。
[0032]在另一個實施方案中，病原體包含引起結膜炎的病原體，其選自由以下組成的組:金黃色葡萄球菌(S.aureus)、肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)、流感嗜血桿菌(H.1nfluenzae)、淋病奈瑟氏菌、沙眼衣原體、腺病毒、單純性皰疹、帶狀皰疹病毒、腸道病毒、鐮刀菌屬某些種、念珠菌屬某些種(Candida spp.)和棘阿米巴屬某些種。
[0033]在另一個實施方案中，本公開組合物可用作用於施用給有相應需要的受試者的營養組合物，所述受試者患有導致特殊飲食需要的疾病，例如小兒腹瀉、克羅恩氏病(Crohn’sdisease)和潰瘍性結腸炎。
[0034]附圖簡述
[0035]圖1示出實施例1A組 合物的兩個現場試驗組與陰性對照在五天內的平均每日大便頻率的比較。在試驗組I (η = 29)和試驗組2 (η = 31)中，實施例1A組合物與抗生素和口服補液鹽(ORS) —起每日施用一次，持續三天。在陰性對照組(η = 28)中，僅施用抗生素和0RS，而沒有施用本公開組合物。
[0036]圖2示出圖1中的這三個組在相同的五天內的平均每日大便硬度,其分為1-5級別(I =正常，5 =液體)。
[0037]圖3示出圖1中的這三個組在相同的五天內的平均醫師評估的健康狀況，其分為1-5級別(I =正常，5 =病情嚴重)。
[0038]圖4示出三個現場研究(試驗)測試組在五天內的平均每日大便頻率。試驗組I和2及陰性對照如針對圖1所描述的。在試驗組3(η = 140)中，將實施例1B組合物與抗生素和ORS —起施用給患者。
[0039]圖5示出圖4中的這四個組在相同的五天內的平均每日大便硬度，其分為1-5級別(I =正常，5 =液體)。
[0040]圖6示出圖1中的這四個組在相同的五天內的平均醫師評估的健康狀況，其分為1-5級別(I =正常，5 =病情嚴重)。
[0041]圖7示出試驗組I和2、陰性對照、試驗組3在五天內的平均每日大便頻率，試驗組3被分成6個亞組(ES204A):與4g初乳在一起的2g噴霧乾燥的卵施用3天；(ES204B) --與4g初乳在一起的2g噴霧乾燥的卵施用2天；(MT204A)與4g初乳在一起的2g熱乾燥的卵施用3天；(MT304A)與4g初乳在一起的3g熱乾燥的卵施用3天；(MS204A)與4g初乳在一起的2g噴霧乾燥的卵施用3天；(MS304A)與4g初乳在一起的3g噴霧乾燥的卵施用3天。
[0042]圖8示出圖7中的這些組在相同的五天內的平均每日大便硬度，其分為1-5級別(I =正常，5 =液體)。
[0043]圖9示出圖7中的這些組在相同的五天內的平均醫師評估的健康狀況，其分為1-5級別(I =正常，5=病情嚴重)。
【具體實施方式】
[0044]定義
[0045]如本文使用的術語「預防(prevention) 」、「預防(prevent) 」、「預防(preventing) 」、「預防(prophylaxis) 」是指在疾病狀態或病狀的臨床表現出現之前開始，以便預防或減輕該疾病狀態或病狀的此種臨床表現的作用過程(例如施用本公開的化合物或藥物組合物)。此種預防和抑制不需絕對有用。
[0046]如本文使用的術語「治療(treatment) 」、「治療(treat) 」和「治療(treating) 」是指在疾病狀態或病狀的臨床表現出現之後開始，以便消除或減輕該疾病狀態或病狀的此種臨床表現的作用過程(例如施用化合物或藥物組合物)。此種治療不需絕對有用。
[0047]如本文使用的術語「需要治療」是指護理者(caregiver)作出的患者需要治療或將從治療中獲益的判斷。這種判斷是基於多種因素作出的，所述因素在護理者的專業技能範圍內，但是包括對患者因可用本公開的方法、化合物或藥物組合物治療的病狀患病或將要患病的了解。
[0048]如本文使用的術語「需要預防」是指由護理者作出的患者需要預防或將從預防中獲益的判斷。這種判斷是基於多種因素作出的，所述因素在護理者的專業技能範圍內，但是包括對患者因可用本公開`的方法、化合物或藥物組合物預防的病狀將要患病或可能患病的了解。
[0049]如本文使用的術語「個體」、「受試者」或「患者」是指任何動物，包括鳥類或哺乳動物，例如小鼠、挪威大鼠、棉鼠、沙鼠、豚鼠、倉鼠、其他嚙齒類動物、家兔、狗、貓、豬、牛、綿羊、山羊、馬，或靈長類動物，以及人。該術語可具體指定雄性或雌性或兩者，或者排除了雄性或雌性。在一方面，患者為成人。在另一方面，患者為非新生人類嬰兒。在另一方面，患者為人類幼兒、兒童或青少年。
[0050]術語「新生兒」或初生兒是指在出生後的第一個28天內的嬰兒。術語「非新生兒」是指年齡超過28天的動物。
[0051]如本文使用的術語「有效量」是指單獨使用或作為藥物組合物一部分使用的藥劑的量，所述量能夠對疾病狀態或病狀的任何症狀、方面或特徵產生任何可檢測的陽性效果。此種效果不必絕對有益。
[0052]如本文使用的術語「包括」在範圍上是非限制性的，因此除了所列的那些要素之外，另外的要素也被認為是可能的；這個術語在任何情況下都可理解為「包括但不限於」。
[0053]術語「免疫」、「主動地免疫(actively immunize) 」、「主動地免疫(activelyimmunizing)」和「主動免疫」是指通過使受試者暴露於抗原，例如來源於諸如但不限於病毒或細菌的微生物的抗原來有目的地免疫受試者；此種暴露可以通過使受試者暴露於完整生物體、減毒生物體、所述生物體的一部分、一種或多種存在於生物體上的抗原，或前述的組合來進行。
[0054]術語「被動地免疫(passivelyimmunize) 」、「被動地免疫(passivelyimmunizing) 」,和「被動免疫」是指向受試者提供針對抗原，例如，來源於諸如但不限於病毒或細菌的微生物的抗原的抗體，而不必在受試者中引發對所述生物體的免疫反應。被動免疫提供了即時保護，但受試者沒有因此形成記憶細胞。
[0055]如本文使用的術語「被動免疫力」是指通過將抗體轉移至受試者而獲得的人工獲得性免疫力。術語「卵」或「卵產品」均表示禽類來源的完整帶殼卵(常規、經免疫或其他)或從其獲得的任何產品或部分。
[0056]術語「免疫卵」或「免疫卵產品」均表示從被維持在免疫狀態的產卵動物獲得的完整的卵或從其獲得的任何產品或部分。
[0057]術語「抗原」是指可在生物體，尤其動物中誘導免疫反應的實體或其片段。該術語包括免疫原及其負責抗原性或抗原決定簇的區域。
[0058]術語「多克隆抗體」是指這樣的抗體，其為來源於用抗原或其抗原性功能衍生物(antigenic functional derivative)免疫的動物血清的非勻質抗體分子群。對於多克隆抗體的生產,可通過注射抗原來免疫各種宿主動物。可使用各種佐劑增強免疫反應,這取決於宿主物種。
[0059]術語「單克隆抗體」也是本領域公認的，是指在實驗室中由單個克隆大量生產的且僅識別一種抗原的抗體。單克隆抗體通常通過將正常短命的產抗體B細胞與諸如癌細胞的快速生長的細胞(有時稱為「永生」細胞)融合而製備。由此產生的雜交細胞或雜交瘤快速繁殖，建立產生大量抗體的克隆。「單克隆抗體」是針對特定抗原或表位的基本上勻質的抗體群體。它們可用任何通過連續培養細胞系產生抗體分子的技術來製備。單克隆抗體可用本領域技術人員已知的方法獲得。參見，例如，Kohler，等人，Nature256 =495-497,1975，及美國專利第4，376，110號。
[0060]術語「晶狀」是指已通過結晶，如通過分批結晶純化的抗體，如單克隆抗體。可使用晶狀抗體以便產生小體積的高度濃縮形式。(Yang等人,2003, Crystallline antibodiesfor subcutaneous delivery.PNAS100(12):6934-6939)。
[0061]術語「非分化腹瀉」是指腹瀉的致病物未被診斷出。
[0062]術語「抗體片段」包括任何合成或經遺傳工程改造的蛋白質，它們像抗體一樣通過與特異性抗原結合從而形成複合物來起作用。例如，抗體片段包括分離的片段，由重鏈和輕鏈可變區組成的「Fv」片段；重組單鏈多肽分子，其中輕鏈和重鏈可變區通過肽連接體連接(「8斤￥蛋白」)；及由模擬高變區的胺基酸殘基組成的最小識別單位。抗體片段包括抗體的一部分，如F (ab' ) 2、F(ab) 2、Fab'、Fab、Fv、sFv等。不論結構如何,抗體片段均與被完整抗體所識別的相 同的抗原結合。
[0063]術語「轉移因子」是指由胺基酸組成的大約5000道爾頓的免疫分子，其導致抗原特異性細胞-介導的免疫力，主要遲髮型超敏反應並導致產生淋巴因子以及自身結合至抗原。(Kirkpatrickl993, Structural nature and functions of transfer factors.Ann.N.Y.Acad.Sc1.685:362-368.)
[0064]術語「可變淋巴細胞受體」是指在諸如七鰓鰻和盲鰻的無頜脊椎動物中被發現的淋巴細胞來源的分子。這些動物具有大量可變淋巴細胞受體，其僅由少數基因產生並且以與抗體結合的方式類似的方式、以相同的特異性程度與病原抗原結合。(Alder等人，2005，Diversity and function of adaptive immune receptors in a jawless vertebrate.Science，310 (5756):1970-1973)。
[0065]術語「細胞受體」是指B-細胞受體的配體結合半族，即一種同種型(例如，IgD、IgM、IgE)的膜結合的免疫球蛋白分子。除存在完整膜結構域之外，這些與它們的分泌形式相同。
[0066]在諸如抗體、抗體片段、可變淋巴細胞受體或轉移因子的特異性結合分子(也稱為特異性靶向免疫因子)的特性的上下文中，術語「特異性結合」是指優先與存在於不同抗原的均質混合物中的特定抗原結合的能力。在某些實施方案中，特異性結合相互作用將能夠辨別樣品中期望和不期望的抗原(例如，「靶」和「非靶」抗原)，在一些實施方案中辨別能力超過約10至100-倍或更高(例如，超過約1000-或10，000-倍)。在一些實施方案中，與非共用表位相比較，特異性結合分子可特異性地與微生物的不同物種或菌株之間共用的表位結合。在某些實施方案中，當抗體與抗原特異性地結合成抗體-抗原複合物時它們之間的親和力的特徵在於Kd(解離常數)小於10_6M、小於10_7M、小於10_8M、小於10_9M、小於ΙΟ,Μ、小於10-ηΜ，或小於約KT12M或更低。
[0067]術語「先天免疫系統」或非特異性免疫系統是指以非特異性方式保護宿主不被其他生物體感染的細胞、分子組分和機制。先天免疫系統的細胞和分子組分以通用方式識別病原體並對病原體作出反應，但與適應性免疫系統不同，它不賦予受試者持久或保護性免疫力。先天免疫系統對感染立刻作出防衛反應。脊椎動物具有第二層保護，即由先天反應激活的適應性免疫系統。
[0068]術語「適應性免疫系統」是指識別抗原並對其作出反應，例如從而消除、制壓或阻止病原體生長的高度特化的系統細胞和過程。由於體細胞超突變(加速的體細胞突變過程)和V(D)J重組(抗原受體基 因片段的不可逆的遺傳重組)，該系統具有高度的適應性。適應性免疫力還稱為獲得性免疫力並且創建免疫記憶。適應性免疫反應是病原體和抗原特異性的反應，而暴露和最大反應之間存在滯後時間。適應性免疫反應基於克隆識別的原理，以致於致敏淋巴細胞在初次暴露於抗原後，要麼分化成免疫效應細胞，要麼形成擴充的記憶細胞池，所述記憶細胞通過發動放大且更迅速的反應來響應於在相同抗原中的二次暴露。
[0069]術語「動物」是指動物界定義。
[0070]所有代詞意欲被給予最廣泛的含義。除非另外說明，否則女性代詞包括男性，男性代詞包括女性，單數代詞包括複數，並且複數代詞包括單數。
[0071 ] 如本文使用的數值範圍意欲包括包含在該範圍內的每一個數值和數值子集，無論是否具體公開。進一步地，這些數值範圍應當被解讀為提供對針對該範圍中的任何數值或數值子集的權利要求的支持。例如，公開的I至10應被解讀為支持2至8、3至7、5至6、I至9、3.6至4.6,3.5至9.9等等的範圍。
[0072]本文引用的所有專利、專利公布和同行評審的出版物(即，「參考文獻」)明確地以引用的方式併入本文，引用程度如同每篇單獨的參考文獻均被具體單獨地指出以引用的方式併入。如果本公開與併入的參考文獻衝突，則以本公開為準。
[0073]實施本公開的方式[0074]本公開提供了可用於管理不期望菌株或病原微生物的組合物和方法。
[0075]本發明的一個實施方案基於用於製備包埋或容納在載體基質中的基於抗體的靶向製劑的方法，其中所述抗體使用受控形式的對多個相關靶抗原簇的交叉反應性，並且其中載體基質含有支撐體和增強抗體效果的輔因子。此類抗體/基質製劑的實用性可包括在致病物類別已知或被懷疑，但確切或具體的致病物未知或未遭懷疑的狀況下或在多個(混合)致病物有活性的環境下提供廣譜的治療幹預。
[0076]已開發以這種方式使用抗體的新途徑，其利用抗體的特異性和交叉反應的性質，並然後進一步利用載體基質內的組分產生多組分原位免疫反應。在這個實施方案中，抗體被設計用於與代表結構相關的抗原簇的數個密切相關的表位中的所有表位結合。這些抗原在其他方面可顯著不同，並且可起源於不同來源、生物體或物種。
[0077]本發明的一個實施方案涉及載體基質內的特異性結合分子(免疫因子，例如抗體)的方法，其中特異性結合分子對一類相關抗原有特異性並且特異性地與該類別的不同成員實例交叉反應。相關的靶抗原簇存在結構相似度，而不考慮作為抗原來源的生物體或病原體。結構相似性可導致稱為「交叉反應性」的現象(反應性分子與除預期抗原以外的抗原的空間結合)。交叉反應性經常是無意的，並且在大多數情況下被視為錯誤和非特異性的來源。然而，在這個實施方案中，交叉反應性的範圍和程度由限制並引導它的表達以提供期望特性的各種方式控制。
[0078]用來自抗體從其中被收穫的來源的食物的風險因素相當(例如，風這種治療賦予患者被動免疫力。所述治療的性質使得相關風險因素與食險因素將與食用卵和一瓶乳的風險因素類似)。這是一種有效的治療，其毒性小於當前可用替代幹預的毒性。
[0079]本發明基於這一開創性的發現:外源來源(含有從不同於待治療動物的動物獲得的組分)的載體基質與外源來源(外源獲得或對應於與從不同於待治療動物的動物獲得的免疫因子)的特異性靶向免疫因子的聯合使用可用來向有需要的受試者中傳輸和引入有效的多參數免疫力。
[0080]在一方面，本公開提供了組合物，其包含:a)非新生人有效量的至少一種從動物獲得並且特異性地與抗原結合的特異性結合分子或其片段，其中特異性結合分子選自免疫球蛋白、抗體、肽、可變淋巴細胞受體、轉移因子，及它們的混合物；以及，b)載體基質，其包含至少兩種從非人動物獲得的選自由以下組成的組的組分:酶、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、非特異性免疫球蛋白、細胞因子、白血細胞、補體組分、幹擾素，和纖連蛋白，其中所述至少一種特異性結合分子和所述載體基質的至少兩種組分從不同動物獲得。
[0081]在另一方面，本公開提供了製備所述組合物的方法，其包括(a)從動物獲取至少一種與特異性抗原結合的特異性結合分子或其片段，其中特異性結合分子選自免疫球蛋白、抗體、肽、可變淋巴細胞受體、轉移因子，及它們的混合物；(b)獲取至少一種載體基質，其包含至少兩種從非人動物獲得的選自由以下組成的組的組分:酶、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、非特異性免疫球蛋白、細胞因子、白血細胞、補體組分、幹擾素，和纖連蛋白；(c)製備載體基質的固體形式及特異性結合分子或其片段的固體形式；以及(d)將載體基質的固體形式與特異性結合分子或其片段的固體形式混合。
[0082]在又一個方面，本公開組合物可用於治療或預防微生物感染。在實施方案中，微生物感染包括由以下引起的微生物感染:空腸彎曲桿菌、沙門氏菌屬、腸道血清型傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、類志賀鄰單胞菌、大腸埃希氏菌、腸致病性大腸埃希氏菌、產腸毒素大腸埃希氏菌、腸聚集性大腸埃希氏菌、腸侵襲性大腸埃希氏菌、出血性大腸埃希氏菌、艱難梭菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、霍亂弧菌01、弧菌0139、非-Ol弧菌、副溶血性弧菌、嗜水氣單胞菌、產氣莢膜梭菌、腸肝螺桿菌、幽門螺桿菌、金黃色葡萄球菌、克雷伯氏菌屬、輪狀病毒、冠狀病毒、諾羅病毒、杯狀病毒、腸道腺病毒、巨細胞病毒，和星狀病毒。在實施方案中，所述組合物可用於治療或預防諸如以下的病狀:未分化腹瀉、旅行者腹瀉、輪狀病毒腹瀉、毒素介導的腹瀉、霍亂、艱難梭菌感染、痢疾、傷寒熱、消化性潰瘍、陰道炎，或者用於胃腸道菌群管理。
[0083] 在具體實施方案中，採用本公開組合物和方法治療或預防腹瀉。存在多種引起腹瀉的生物體，包括病毒、細菌、寄生蟲和原蟲。例如，在印度，細菌感染的主要病因包括大腸埃希氏菌某些種、產腸毒素大腸埃希氏菌、腸粘附性大腸埃希氏菌、氣單胞菌屬某些種、空腸彎曲桿菌、志賀氏菌屬某些種、弧菌屬某些種、霍亂弧菌01、副溶血性弧菌、沙門氏菌屬某些種、金黃色葡萄球菌、艱難梭菌、產氣莢膜梭菌，和小腸結腸炎耶爾森氏菌。次要病因包括艱難梭菌(毒素A或B)，病毒性腹瀉的主要病因是由輪狀病毒所致的感染；但是還已知杯狀病毒、星狀病毒、諾瓦克病毒，和腺病毒也導致腹瀉。病毒性腹瀉的次要病因包括腸道腺病毒、單純抱疫病毒和病毒性肝炎。(John B.Sullivan和Gary R.Krieger, ClinicalEnvironmental Health and Toxic Exposures,第 2 版，Lippincott Williams &ffilkins,2001，第 1040 頁)。
[0084]還已知患病率存在區域性和季節性差異。例如，在印度，Pranam，一項研究報告輪狀病毒造成平均15-25%的兒童腹瀉病例。產腸毒素大腸埃希氏菌造成總腹瀉病例的10%至20%，其中腸致病性大腸埃希氏菌造成約1%至5%的病例。空腸彎曲桿菌感染造成約10%至15%的兒童腹瀉病例，而志賀氏菌屬造成估計5%至15%的兒童腹瀉病例。霍亂弧菌造成約5%至10%的病例。沙門氏菌屬(非傷寒)造成約I %至5%的病例。原蟲感染主要由隱孢子蟲(5-15% )引起。約20%至30%的病例未鑑定出病原學病因。(Fricker，Children in the Tropics,Putting an end to diarrheal diseases,1993-N0.204:1-66)
[0085]印度不同地區將細菌性兒童腹瀉病例歸因於具有不同流行程度的不同的病原體。例如，印度奧裡薩邦的一項研究在866種培養陽性樣品中發現，大腸埃希氏菌某個種(75.5% )、致病性大腸埃希氏菌(13.2% )、氣單胞菌屬某些種(2% )、志賀氏菌屬某些種(4.5% )、霍亂弧菌01 (17.3% )、霍亂弧菌0139(1% )及沙門氏菌屬某些種(0.7% )0find-health-articles.com/rec_pub_18806340_incidenceo
[0086]由於病因多種多樣，因此需要治療未分化腹瀉的有效、廣譜，經濟且安全的方法。大多數兒童腹瀉病例似乎由細菌和病毒感染引起，但是需要抗生素和抗病毒藥劑的替代物。
[0087]A.組合物
[0088]本公開的一方面涉及可用於治療、預防或管理微生物菌群的組合物。在實施方案中，所述組合物可用於治療病原感染，尤其胃腸道的病原感染。
[0089]在實施方案中，本公開提供了包含以下的組合物:
[0090]a)非新生兒有效量的至少一種從動物獲得並且特異性地與抗原結合的特異性結合分子或其片段，其中特異性結合分子選自免疫球蛋白、抗體、肽、可變淋巴細胞受體、轉移因子，及它們的混合物；以及，
[0091]b)載體基質，其包含至少兩種從非人動物獲得的選自由以下組成的組的組分:酶、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、非特異性免疫球蛋白、細胞因子、白血細胞、補體組分、幹擾素，和纖連蛋白，其中所述至少一種特異性結合分子和所述載體基質的至少兩種組分從不同動物獲得。
[0092]特異性結合分子
[0093]本公開的組合物和方法提供了從動物獲得並且特異性地與抗原結合的特異性結合分子或其片段。特異性結合分子包括抗體、抗體片段、肽、可變淋巴細胞受體、轉移因子，及它們的混合物。
[0094]抗體
[0095]抗體、免疫球蛋白和其他生物免疫因子(統稱為抗體)，無論是天然存在的還是它們的合成類似物，都是人和動物的已知治療劑。
[0096]抗體通過結合(經由非共價力)在抗體上的抗原結合位點與稱為抗原決定簇或表位的抗原的一部分之間而起作用。抗體能夠具有高度特異性。例如，在生產的推動下，單克隆抗體領域已大量開發出特異性和精確性越來越高的結合特性。然而，這種高特異性可導致過度受限的結合屬性，其中功能上相同的因子或抗原不與免疫試劑或免疫治療劑相同地反應。另一方面，通常被視為錯誤或失敗的交叉反應性是抗原與針對相似但不同抗原產生的抗體之間的反應。受控的交叉反應性可建設性地用來擴寬抗體的結合範圍。
[0097]本公開的一個實施方案基於用於製備包埋或容納在載體基質中的基於抗體的靶向製劑的方法，其中所述抗體使用受控形式的對多個相關靶抗原簇的交叉反應性，並且其中載體基質含有支撐體和增強抗體效果的輔因子。此類抗體/基質製劑的實用性可包括在致病物類別已知或被懷疑，但確切或具體的致病物未知或未被懷疑的狀況下或在多個(混合)致病物有活性的環境下提供廣譜的治療幹預。已開發以這種方式使用抗體的新途徑，其利用抗體的特異性和交叉反應的性質，並然後進一步利用載體基質內的組分產生多組分原位免疫反應。在這個實施方案中，抗體被設計用於與代表結構相關的抗原簇的數個密切相關的表位中的所有表位結合。這些抗原在其他方面可顯著不同，並且可起源於不同來源、生物體或物種。
[0098]對於本公開的目的，抗體可以是單克隆、來源於任何動物的多克隆、片段、嵌合、人源化或任何其他形式，並且抗體可以為任何同種型:例如IgA、IgD、IgE、IgG和IgM(胎盤哺乳動物)、IgY(雞)，或其他，可以為雙特異性或雙功能，或多特異性或多功能抗體或其片段。在實施方案中，特異性結合分子可選自以下三大類中的一類:哺乳動物單克隆抗體、哺乳動物多克隆抗體和禽類多克隆抗體；或從它們獲得的保留與病原體組分結合的能力的任何片段。
[0099]本發明的一個實施方案是其在生產廣譜治療劑中的用途。 一種生產這類反應性製劑的方法涉及生產從經適當免疫的動物中收穫的多克隆抗體，並且其中然後將此類抗體包埋在載體基質中。多克隆抗體(或抗血清)為來源於不同B細胞系的抗體。它們通常整體地(en-mass)從經免疫的動物的血清、乳、初乳、卵，或生物流體中收穫。它們是針對特異性抗原分泌的免疫球蛋白分子的混合物，或識別一系列不同表位的一組抗原的混合物。單一抗原(結合至不同表位)可以具有多種抗體，或者由於交叉反應性，單一抗體可以結合至多種抗原。多克隆抗體可從已免疫接種或接種來自靶組分的抗原的動物中獲取，所述動物例如牛、綿羊、馬、山羊、豬、家兔、雞、鴨、鵝，或火雞。所述抗體可從例如由經接種動物產生或來源於經接種動物的組織、血清、乳或卵中收穫。這與單克隆抗體相反，單克隆抗體是相同的單特異性抗體；由一種類型的免疫細胞產生，所述免疫細胞全部是單一母細胞的克隆。
[0100]本發明中使用的抗體可以從血清、血漿、初乳、乳、卵，或其他合適的生物來源的流體，或者從細胞培養基、上清液等中收集。本發明中使用的抗體可經任何合適的方式處理用於製備製劑和使用，所述方式包括但不限於，分離、血漿去除法、乾燥工藝、凍幹、巴氏殺菌，和保鮮法。本發明中使用的抗體可以用各種方式加以處理、濃縮、分離，或純化，這取決於它們的最終預期用途。
[0101]通過將抗體混合物改變成適合於各種實施方案的抗體混合物，本公開提供了適合於治療或預防其他胃腸道感染的組合物和方法，所述其他胃腸道感染例如霍亂、艱難梭菌、痢疾、傷寒沙門氏菌(傷寒熱)，和幽門螺桿菌(消化性潰瘍)。
[0102]在一個實施方案中，優選通過例如多次皮下(SC)或腹膜內(ip)注射相關抗原和任選的佐劑來在動物中製備抗體。在一方面，使相關抗原(尤其當使用合成肽時)與待免疫物種中的免疫原性蛋白質綴合可能是有用的。例如，可使用雙功能或衍生化試劑，例如磺基琥珀醯亞胺馬來醯亞胺基苯甲醯酯(通過半胱氨酸殘基綴合)、N-羥基琥珀醯亞胺(通過賴氨酸殘基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2,或R N = C = NR(其中R和R為不同的烷基)使抗原與鑰孔戚血藍蛋白(KLH)、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白，或大豆胰蛋白酶抑制劑綴合。用抗原、免疫原性綴合物或如本文所描述的衍生物免疫動物。在其他實施方案中，抗體可以是合成或半合成抗體，例如如在噬菌體展示文庫中獲得或作為人源化或嵌合抗體製備的抗體。
[0103]與傳統上用於抗體生產的哺乳動物相比，鳥類(如產卵雞)作為抗體生產者具有很高的成本效益。禽類抗體具有優於哺乳動物抗體的生物化學優勢。當施用給哺乳動物受試者時，哺乳動物與鳥類之間的 免疫學差異導致在免疫學測定中具有增大的敏感性和減弱的背景；以及具有高特異性且不存在互補的免疫效果。與哺乳動物抗體相反，禽類抗體不會通過主要或經典途徑激活人補體系統，它們也不會與類風溼因子、人抗小鼠IgG抗體、葡萄球菌蛋白A或G，或細菌和人Fe受體反應。然而，禽類抗體可以激活非炎性替代途徑。因而，禽類抗體提供了優於哺乳動物抗體的許多優勢。
[0104]在優選的實施方案中，特異性分子為在已接種病原體組分之一或病原體組分混合物的母雞的卵中製備的多克隆抗體。各種特異性抗原製劑也可以用於接種。在接種後，母雞產生卵黃中含有大量特異性IgY免疫球蛋白，且白蛋白中含有少量IgM和IgA免疫球蛋白的卵。因此，卵是大量經濟地生產的高特異性且穩定的抗體的優良來源。在一個實施方案中，使用雞生產禽類抗體；但可以替代地使用火雞、鴨、鵝、鴕鳥等。在一方面，通過如本文所描述的本領域中已知的任何方法給母雞接種。例如，可以肌肉內或皮下注射抗原。在禽類中，優選的供注射用肌肉是胸肌。可使用的其他施用方法包括皮下注射、靜脈內注射、腹膜內注射、皮內、直腸栓劑、氣溶膠或經口施用。
[0105]優選通過免疫並以固定的時間間隔反覆加強施用合適劑量而在靶動物中誘導並維持特定免疫狀態。在1-12個月的時間內，時間間隔優選為1-8周間隔。劑量在約0.01-5毫克抗原之間選擇。在一方面，對於給母雞的每一次接種，劑量為0.01mg至1.0mg抗原，優選100mg、200mg、250mg、300mg、400mg、500mg或750mg抗原。免疫接種的總次數可以選自12個月內1、2、3、4、5，或6次。通常，首次接種在第I天執行，加強免疫接種在第10天內和第20天執行。通過用例如ELISA監測卵中的特異性抗體濃度，或滴度，從而在需要時給母雞再接種疫苗。對於母雞，典型的皮下劑量體積選自約0.2mL至1.0mL,0.3mL至0.7mL，或0.5mL。然而，至關重要的是，加強施用不能導致免疫耐受性。此過程在本領域中是熟知的。
[0106]可以使用其他接種維持程序或程序的組合，例如，用於初次免疫的肌肉內注射與用於加強注射的靜脈內注射的組合。進一步的程序包括同時施用微膠囊化的和液體的免疫原，或用於初次免疫的肌肉內注射，和通過以微膠囊方式經口施用或腸胃外施用的加強劑量。初次免疫和加強免疫的數種組合是本領域技術人員已知的。
[0107]也稱為藥物載體或關於此的功能等價物的佐劑可以包括在免疫溶液/疫苗組合物中以增強動物的特異性免疫反應。大量佐劑已被描述並且用於在實驗動物中產生抗體，所述實驗動物例如小鼠、大鼠、家兔和雞。在此種情況下，副作用容限相當高，因為主要目的是獲得強抗體反應。
[0108]關於本公開的佐劑可以按照其來源分組，其為礦物質、細菌、植物、合成產物，或宿主產物。在這種分類法下，第一組為礦物質佐劑如鋁化合物。與鋁鹽一起沉澱的抗原或者與預形成的鋁化合物混合或吸附到預形成的鋁化合物上的抗原已被廣泛地用來增強動物和人的免疫反應。在一個實施方案中，免疫組合物中的佐劑起源於細菌。可純化和合成起源於細菌的佐劑(例如胞壁醯二肽、脂質A)，並且已克隆出宿主介體(白介素I和2)。數種起源於細菌的活性組分的佐劑的已知化學純化包括:百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、脂多糖、弗氏完全佐劑(Freund ' s Complete Adjuvant, FCA)和弗氏不完全佐劑(Freund ' sIncomplete Adjuvant) (Difco Laboratories, Detroit, Mich.)及 Merck 佐劑 65 (Merckand Company, Inc., Rahway, N.J.)。在具體方面,在本公開的免疫組合物中採用弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑。另外，根據本發明的合適的佐劑為例如Titermax Classical佐劑(SIGMA-ALDRICH)、ISCOMS, Quil A、ALUN，參見美國專利第 58767 號和第 5，554，372 號，月旨質A衍生物、霍亂毒素衍生物、HSP衍生物、LPS衍生物、合成肽基質、GMDP，及其他以及與免疫刺激劑組合(美國專利第5，876，735號)。百日咳博德特氏菌在本發明的背景中作為佐劑是感興趣的，因為它具有通過作用於T淋巴細胞群體調節細胞介導的免疫力的能力。弗氏完全佐劑是大多數實驗研究中的標準。可向免疫接種組合物中加入礦物油以便保護抗原免受快速分解代謝。
[0109]許多其他類型的材料可用作根據本公開的免疫原性或免疫組合物中的佐劑。它們包括諸如皂苷的植物產品、諸如殼多糖的動物產品及許多合成化學物。
[0110]通過肌肉內途徑免疫的雞可在免疫後的第28天時在它們的卵中產生高特異性抗體水平，並且在超過200天的時間內繼續產生特異性抗體，從而使得可在很短的時間例如少於4-5周的時間內獲得抗體製劑。卵含有濃度高達約50毫克/卵至約100毫克/卵的IgY抗體。可從單個卵中獲取超過IOOmg純化的IgY。一個卵黃中的抗原特異性抗體的百分比可高達約 2 % 至 10 %。(daSilva 等人，IgY:A promising antibody foruse in immunodiagnostic and in immunotherapy.Veterinary Immunol.1mmunopath.，135(2010):173-180)。[0111]一隻具有高產卵菌株的雞每月可產生約20個卵。卵重量約33至約77克，由於殼而佔全卵的約10.5%。卵黃佔全卵重量的約31%。乾燥後，可從72個卵製得約Ikg乾燥全卵粉末。因此，在這種算法中，可從一個卵得到約13.9g乾燥全卵。在另一方面，可從一個免疫卵得到IOg至約15g乾燥全卵。在另一方面，本公開的免疫卵每個卵40mL至55mL，每個卵具有約l_2mg/mL總IgY。在另一方面,本公開的免疫卵每個卵含有約0.01mg/mL至
0.05mg/mL特異性IgY。因此，在一方面，在加工後，例如來自用例如混合抗原製劑免疫的雞的一個乾燥的全免疫卵含有約80mg至IlOmg總IgY和約6mg至IOmg總混合的抗原特異性IgY。
[0112]可通過免疫學領域技術人員已知的許多方法確定是否已在產卵動物中引發免疫反應。這些方法的實例包括酶聯免疫吸附測定(ELISA)、對針對刺激抗原的抗體的存在的測試，及設計用於評價宿主的免疫細胞對抗原作出反應的能力的測試。誘導免疫反應所需的免疫原的最低劑量取決於所用的免疫接種程序，包括所使用的佐劑類型和所使用的一種(多種)免疫原的製劑，以及用作宿主的產卵動物的類型。
[0113]在一個實施方案中，採用適合於卵商業化生產的母雞生產多克隆抗體。可採用任何適合於卵生產的雞品種。可選擇，例如，Rhode Island Reds、White Leghorns> BrownLeghorns、Lohmann Brown hens、性連鎖雜交組合(sex-linked hybrid crosses),或其他適合於大卵尺寸、大體積卵生產且便於操作的品種。在一方面，針對標準疾病(例如沙門氏菌屬、禽流感或新城疫病毒(Newcastle virus)等)，在雞為小雞的時候對其進行接種。在一方面，可給任何年齡的雞接種。按照根據用於產生穩定連續生產流的最終產品的量和時間安排預先確定的時間表給母雞接種，所述接種在該母雞將要達到產卵期(對於雞為約15-19周)，或此前或此後的任何預選時間進行。通常，在約2至4周的適當時間的隔離和馴化後，每組將進入使用包含抗體期望的特異性抗原的各種抗原或免疫組合物的接種程序。
[0114]在一個實施方案中，卵收集自經接種的雞並以全卵形式加以加工。將卵儲存在冷藏條件下直至收集足夠的卵`以準備一批卵。使來自預定組的雞的成批卵破裂，將內容物與殼分離，混合內容物並優選對其進行巴氏殺菌以消除來自雞的病原微生物的潛在汙染。
[0115]在一方面，對免疫卵產品進行巴氏殺菌。在衛生的設施中加工卵產品。用自動化設備將帶殼卵加工成免疫卵產品，所述自動化設備將帶殼卵從卵託上移出，洗滌殼並給殼消毒，並將卵打碎。任選地，將卵白與卵黃分離。任選地過濾液體卵產品，任選地將其與其他成分混合，並然後在進行另外的加工之前將其冷凍。由此產生的卵產品液體然後接受毀壞性處理如巴氏殺菌，或者將其加熱成乾燥形式。在美國，1970Egg Products InspectionAct (ΕΡΙΑ)要求所有發放用於食用的卵產品必須經過巴氏殺菌處理。
[0116]在巴氏殺菌後，使用標準商業方法，如使用環境或熱空氣的噴霧乾燥、熱乾燥、冷凍乾燥，或凍幹來乾燥全部的卵內容物。在一方面，乾燥經巴氏殺菌的液體卵的合適方法將對卵中的抗體和分子組分的損害減至最低，從而產生具有高營養價值並且能夠賦予被動保護的產品。
[0117]在一方面，測試乾燥卵以確定總滴度或抗體水平。使用標準測試程序，例如ELISA、FIA(螢光免疫測定)、RIA(放射免疫測定)等。在另一方面，將該批次與來自具有其他平均生產水平的雞的組的批次混合，導致形成含有標準量抗體的生產批(lot)。經乾燥的含有特異性多克隆抗體的卵在調配成本公開組合物之前可於室溫下儲存在密封容器中。在實施方案中，經乾燥的卵材料以全卵形式使用，而沒有被分離出來。在實施方案中，整個乾燥的卵材料含有每個卵至少5mg特異性IgY。
[0118]在另一個實施方案中，分離出IgY。分離IgY的第一步驟是將水溶性蛋白質與脂蛋白分離。水溶性蛋白質構成卵黃中總蛋白質的42.4% (Osuga等人，"Egg Proteins:InFood Proteins，J.R.Whitaker and S.R.Tannenbaum eds.，AVI Pub.C0., Westport, Conn.(1977))。
[0119]許多方法已用於從卵黃中分離和純化出免疫球蛋白(Martin等人，CanJ.Biochem.Physiol.35:241 (1957) ；Martin 等人，Can.J.Biochem Physiol.36:153(1958) ；Jensenius 等人，J.1mmunol.Methods46:63(1981) ；Bade 等人，J.Tmmunol.Methods72:421 (1984) ；Polson 等人，Tmmunol.1nvest.14:323(1985) ；Hassl 等人，J.Tmmunol.MethodsllO:225 (1988))。Hatta等人(Agric.Biol.Chem.54:2531 (1990))使用食品級天然樹膠(例如，角叉菜膠)除去作為沉澱的卵黃脂蛋白並回收來自卵黃的水溶性組分中的IgY。從雞卵黃中回收抗體的方法是本領域中熟知的。數種方法可用於從卵黃中提取 IgY,並且可利用商業提取試劑盒(van RegenmorteI,Μ.H.V.(1993).Eggs as proteinand antibody factories.1n Proceedings of the European Symposium on the Qualityof Poultry Meat,pp.257-263.Tours, France:INRA)。
[0120]在另一個實施方案中，空間特異性結合分子可以為對病原體組分有特異性的單克隆抗體。
[0121]單克隆抗體可使用最初由Kohler等人，Nature.256:495(1975)描述的雜交瘤方法製備，或者可通過重組DNA方法(U.S.4,816,567)製備。在雜交瘤方法中，如上面所描述的那樣免疫小鼠或其他合適的宿主動物如倉鼠，從而引出產生或能夠產生特異性地與用於免疫的蛋白質結合的 抗體的淋巴細胞。替代地，可體外免疫淋巴細胞。在免疫後，分離出淋巴細胞，然後使用合適的融合劑如聚乙二醇使所述淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，從而形成雜交瘤細胞(Goding, Monoclonal Antibodies !Principles and Practice,P p.59-103 (Academic Press,1986))。
[0122]測定雜交瘤細胞在其中生長的培養基是否產生了針對所述抗原的單克隆抗體。優選地，通過免疫沉澱法或通過體外結合測定如放射免疫測定(RIA)或酶聯免疫吸附測定(ELISA)確定雜交瘤細胞所產生的單克隆抗體的結合特異性。單克隆抗體的結合親和力可以例如通過Munson等人Anal.Biochem..107:220(1980)中所描述的Scatchard分析測定。
[0123]通過常規抗體純化程序，例如親和色譜法(例如使用蛋白質A或蛋白質G-瓊脂糖凝膠)或離子交換色譜法、羥基磷灰石色譜法、凝膠電泳、透析等，將亞克隆分泌的單克隆抗體適當地從培養基、腹水液，或血清中分離出來。
[0124]使用常規程序(例如，通過使用能夠特異性地與編碼鼠科動物抗體重鏈和輕鏈的基因結合的寡核苷酸探針)，容易將編碼單克隆抗體的DNA分離出來並進行測序。雜交瘤細胞用作此種DNA的優選來源。一旦所述DNA被分離出來，就可將其置入表達載體中，然後將表達載體轉染進宿主細胞如大腸埃希氏菌細胞、猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，或不另外產生抗體蛋白的骨髓瘤細胞中，從而獲得在重組宿主細胞中的單克隆抗體的合成。有關編碼所述抗體的DNA在細菌中的重組表達的綜述包括Skerra等人，Curr.0pinion inTmmunol.,5:256-262 (1993)及 PltlCkthun.Tmmunol.Revs.130:151-188 (1992)。[0125]在進一步的實施方案中，可從使用McCafferty等人，Nature.348:552-554(1990)中所描述的技術產生的抗體噬菌體文庫中分離出單克隆抗體或抗體片段。Clackson等人Nature.352:624-628(1991)和 Marks 等人，J.Mol.Biol.，222:581-597(1991)分別描述了使用噬菌體文庫分離鼠科動物和人抗體。後續出版物描述了通過鏈改組生產高親和力(nM範圍)人抗體的方法(Marks等人，Bio/Technology.10:779-783 (1992))，以及作為構建非常大的曬菌體文庫的策略的組合感染和體內重組(Waterhouse等人，Nuc.Acids.Res.21:2265-2266 (1993))。因而，這些技術是用於分離單克隆抗體的傳統單克隆抗體雜交瘤技術的可行替代方案。
[0126]可對編碼所述抗體的DNA進行修飾，以產生嵌合或融合抗體多肽，例如通過如下方式進行修飾:將人重鏈和輕鏈恆定結構域(C1^PCJ序列替換為同源鼠科動物序列(美國專利第 4，816，567 號；以及 Morrison 等人，Proc.Natl Acad.Sc1.USA, 81:6851 (1984))，或者通過使免疫球蛋白編碼序列與非免疫球蛋白多肽(異源多肽)的全部或部分編碼序列融合。非免疫球蛋白多肽序列可替換抗體的恆定結構域，或者將它們替換抗體的一個抗原結合位點的可變結構域從而形成嵌合二價抗體，其包含對抗原有特異性的一個抗原結合位點和對不同的抗原有特異性的另一個抗原結合位點。
[0127]用於製備特異性結合蛋白的免疫用抗原
[0128]選擇用於免疫的抗原可為細菌、病毒、原蟲、真菌、寄生蟲、細胞，或動物的免疫系統將對其作出反應的任何其他物質。在一方面，通過使用佐劑來增強抗原的免疫原性。
[0129]在一方面，給動物接種含有病原體組分、抗原，或免疫原的免疫接種組合物、接種劑或疫苗。在一方面，病原體組分或特異性抗原可獲自或來源於諸如American TypeCulture Collection (ATCC)的商業來源。在另一方面，病原體組分可分離自野生型菌株。在另一方面，病原體組分或不期望菌株存在於混合抗原製劑中。來源於各種不期望菌株或病原體組分的任何抗原或抗原組合都可用於免疫組合物中。
[0130]在一方面，針對靶抗原簇的共同或被保存組分或區域選擇接種劑、抗原或免疫原，而忽略相關抗原簇的各個成員的可變或區別性組分或區域。該方法涉及製備合適的免疫原，所述免疫原的特點是誘導與所述表位的期望實例交叉反應但不與其他表位反應的抗體的產生，還涉及給生產細胞或生物體接種所述免疫原或使其暴露於所述免疫原以便導致產生抗體，所得抗體被包埋在合適的載體基質中用於施用。可以開發出這類製劑，其使用根據這種方法產生的抗體混合物提供寬範圍的對一個以上的靶抗原簇的覆蓋。例如，在兩個不相關抗原簇與疾病或病狀關聯並且期望創建單一製劑來根治這種疾病或病狀的情況下，可使用這種同時提供兩個寬範圍的反應性結構域的方法製備兩種抗體、免疫球蛋白，或生物免疫因子的混合物。這個實施方案的一個實例是用於生產特異性地與結構上相關的毒素的簇反應的抗毒素抗體。
[0131 ] 在一個實施方案中，利用這種途徑製備具有廣泛反應性的針對來自任何革蘭氏陰性細菌(大腸埃希氏菌、沙門氏菌屬、志賀氏菌屬，及其他腸桿菌科、假單胞菌、莫拉克斯氏菌(Moraxella)、螺桿菌(Helicobacter)、寡養單胞菌(Stenotrophomonas),及其他)的脂多糖(LPS)(內毒素)的抗體，或例如具有廣泛反應性的針對AB5毒素(包括彎曲桿菌腸毒素、霍亂毒素、熱不穩定腸毒素((LI^PLT-1I)(大腸埃希氏菌)、百日咳毒素、志賀毒素(志賀氏菌屬)、志賀樣毒素(或維羅毒素(verotoxin))的抗體。[0132]在優選的方面，這些示例性抗毒素抗體具有與產生毒素的物種無關的效果。在另一方面，所產生的抗體是中和抗體，其能夠中和或滅活靶毒素的生物活性。此種廣譜中和抗體可用來幹預這樣的病理病例(例如某些類型的腹瀉)，其中介導症狀的毒素是被靶向的簇(在這些實例中，AB5或LPS)之一，而不需要了解哪一種生物體是致病物。進一步地，如果製備含有臨床有效量的抗AB5抗體和抗LPS抗體的混合物，則所述製劑可用來幹預其中活性毒素為AB5或LPS或二者的病例。
[0133]這種方法可擴展到包括任何數量(在這個實例中)的毒素簇，以及擴展到包括針對其他毒素樣反應(例如病毒毒素樣現象)的介體的廣譜中和抗體，從而(在這個實例中對)腹瀉創建可廣泛適用的幹預，其中可在不了解感染病因的情況下管理症狀和病理，或者其中存在多個感染病因。在一方面，本公開提供了包含組合在載體基質中的抗毒素抗體的協同組合的組合物。
[0134]在一些實施方案中，本發明的方法和組合物用於多種病原體或致病物，所述多種病原體或致病物包括而不限於，霍亂毒素(霍亂弧菌)、大腸埃希氏菌(包括產腸毒素大腸埃希氏菌(ETEC))、志賀氏菌屬、沙門氏菌屬、彎曲桿菌、艱難梭菌、寄生蟲(例如，賈第鞭毛蟲病(Giardia)、溶組織內阿米巴(Entamoeba histolytica)、隱孢子蟲病(Cryptosporidiosis)、環孢子蟲),及腹?寫病毒(例如，輪狀病毒)。
[0135]在進入胃腸道後，包括但不限於諸如大腸埃希氏菌的細菌的許多病原體結合(粘附)至上皮、黏膜，或其他組織並且被包埋在胃腸道組織如腸壁中。在結合至胃腸道中的組織後，病原體複製，從而導致毒素濃度增加，所述毒素濃度的增加直接由於毒素的產生所引起，或者間接由於免疫系統作用所致的病原體細胞的裂解增加所引起。抑制病原體結合至胃腸道組織的能力促進在大小足以引起病變和其他症狀的集落形成之前病原體的更有效的活動化、消化和排洩。通過阻斷將`被用於粘附至胃腸道的病原體上的受體和配體的類別(包括但不限於粘附素、鈣粘素、纖毛、傘毛和/或病毒粘附結構)，可阻止對胃腸道組織的粘附或將對胃腸道組織的粘附減至最低，從而最終導致來自利用這種作用模式的病原體的病理顯著減輕。
[0136]在各種實施方案中，病原體選自人或獸的引起胃腸炎的腸或胃腸道病原體中的一種或組合。在各種方面，病原體選自由以下組成的組:空腸彎曲桿菌、沙門氏菌屬、鼠傷寒沙門氏菌、腸道血清型傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、類志賀鄰單胞菌、大腸埃希氏菌[包括(EPEC)腸致病性大腸埃希氏菌、(ETEC)產腸毒素大腸埃希氏菌、(EaggEC)腸聚集性大腸埃希氏菌、(EIEC)腸侵襲性大腸埃希氏菌，及(EHEC)出血性大腸埃希氏菌]、小腸結腸炎耶爾森氏菌、霍亂弧菌01、弧菌0139、非-01弧菌、副溶血性弧菌、嗜水氣單胞菌、產氣莢膜梭菌、艱難梭菌、腸肝螺桿菌(包括幽門螺桿菌)、金黃色葡萄球菌、克雷伯氏菌屬、輪狀病毒、冠狀病毒、諾羅病毒、杯狀病毒、腸道腺病毒、巨細胞病毒，和星狀病毒。在另一方面，病原體相關的毒素包括內毒素或外毒素。在另一方面，病原體相關的粘附元件包括粘附素、?丐粘素、纖毛、傘毛、病毒粘附結構，或其組合。
[0137]在各種方面，病原體組分、免疫原或抗原可來源於，例如，輪狀病毒、冠狀病毒；C型產氣莢膜梭菌；大腸埃希氏菌(細胞)；大腸埃希氏菌的產腸毒素菌株，及來自大腸埃希氏菌的腸毒素；具有K99、K88、987P，或F41菌毛粘附因子抗原的任何細菌；由大腸埃希氏菌和鼠傷寒沙門氏菌(一般為革蘭氏陰性細菌)造成的內毒素(或LPS)。在具體的方面，給母雞接種來源於一、二、三、四、五、六、七，或八種，或許多種病原微生物的抗原或毒素。
[0138]在一方面，當抗原來源與經免疫接種的動物的免疫系統之間的距離增加時，免疫反應更加強有力。
[0139]在具體實施方案中，給第一群雞接種第一混合抗原製劑。在一方面，給第二群雞接種第二混合抗原製劑，其含有與第一混合抗原製劑不同的一組抗原。在另一方面，給第三群雞接種第三混合抗原製劑。在進一步的方面，給第四群雞接種第四混合抗原製劑。雖然不意欲限制本發明的範圍，但據信用不同抗原免疫不同雞群以便避免抗原過載(antigenoverload)是有利的。
[0140]收集來自每個雞群的卵，任選地針對特異性和/或總IgY進行滴定，任選地進行分離和/或純化,並分開加工以製備乾燥粉末。在另一方面,將來自第一和第二雞群；第一、第二和第三雞群；或第一、第二、第三和第四雞群的乾燥粉末狀卵與載體基質摻混或包裝在一起以製備本公開組合物。在一方面，第一抗原製劑包含牛輪狀病毒(血清型G6和G10)、牛冠狀病毒、具有K99菌毛粘附因子的大腸埃希氏菌的產腸毒素菌株，和C型產氣莢膜梭菌。混合抗原製劑罐中可任選地加入佐劑以增強免疫反應。
[0141]在另一方面，第二抗原製劑包含由C型產氣莢膜梭菌及產生熱不穩定毒素或具有K99、K88、987P或F41粘附因子的大腸埃希氏菌的產腸毒素菌株產生的β毒素
[0142]在一方面，第三抗原製劑包含大腸埃希氏菌和鼠傷寒沙門氏菌。JVAC降低由大腸埃希氏菌和鼠傷寒沙門氏菌引起的內毒素血症的發病率和嚴重程度。常常與它們的內毒素相關聯的是大腸桿菌乳腺炎及與內毒素血症關聯的其他革蘭氏陰性疾病。
[0143]在另一方面，通過本領 域中已知的任何方式製備抗原。例如，來自野生型來源，如罹患例如大腸埃希氏菌腹瀉的動物的細胞。可將分離的細胞在例如胰酪腖大豆肉湯培養基(Trypticase Soy Broth, TSB)中於37°C下培養過夜,並通過離心濃縮。可將由此產生的沉澱物用含有0.4%甲醛的PBS緩衝液重懸並在37°C下溫育用於滅活。可通過離心除去甲醛。將沉澱物重懸在PBS中並用作抗原。在一方面，在接種前用等體積的佐劑使抗原乳化。
[0144]在另一個實施方案中，抗原選自引起結膜炎的那些病原生物體。已知的致病病原體描述於Gambotto等人的US2008/0031903中，其以引用的方式併入本文。
[0145]流行性角膜結膜炎(EKC)是世界各地可見的致衰弱的眼部傳染病。該疾病主要由腺病毒，尤其血清型8、19和37引起。血清型3、4和11也牽涉到一些EKC流行病。該疾病影響所有年齡組，具有高度傳染性，在學校、學校、遊泳池、兒科部和營地迅速傳播。目前根據症狀來治療，因為沒有有效的治療方法。需要開發有效的抗病毒外用藥劑來治療該病變及預防流行病。
[0146]結膜炎也可由許多另外的細菌、病毒、真菌和原蟲劑引起，包括但不限於:金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟氏菌、沙眼衣原體、腺病毒、單純性皰疹、帶狀皰疹病毒、腸道病毒、鐮刀菌屬物種、念珠菌屬物種和棘阿米巴屬物種。某些病毒感染如腺病毒感染可用抗病毒藥品如西多福韋(cidofovir)治療。通常,藥品具有副作用，例如與西多福韋關聯的眼部和腎臟副作用。藥品還面臨其他後勤問題(logistical issue)，包括穩定性、生產成本等。因此，需要治療眼部感染的廉價、容易獲得、被廣泛接受的穩定藥品。
[0147]在一方面，本公開提供了治療結膜炎或紅眼病的組合物，其包含組合在如下面所描述的載體基質中的針對這些病原體的多克隆抗體。該抗體如本文所描述的那樣生產。[0148]在另一個實施方案中，抗原選自引起陰道炎的那些病原生物體。該感染可能是細菌、真菌(酵母)，或寄生蟲引起的。細菌性陰道炎可由例如加德納菌屬某些種、淋病奈瑟氏菌、沙眼衣原體(Chlamydiaceae trachomatis)、支原體屬某些種、空腸彎曲桿菌引起。寄生蟲性陰道炎可由例如陰道滴蟲引起。病毒性陰道炎可由例如I型或2型皰疹病毒引起。念珠菌性陰道炎是由念珠菌屬酵母樣真菌引起。現已記載了超過170種酵母樣真菌。白色念珠菌(C.albicans)是85_90%的婦女的念珠菌性陰道炎的最常見的致病物。在其他念珠菌物種當中，光滑念珠菌(C.glabrata) (5-10% )、熱帶念珠菌(C.tropicalis) (3-5% )、近平滑念珠菌(C.parapsilosis) (3-5% )和克柔念珠菌(C.krusei) (1-3% )也具有臨床意義。這些病原體中的任一種均可選作如本文所描述的多克隆抗體生產的抗原來源。
[0149]念珠菌性外陰陰道炎經常由許多誘病因素引起，所述誘病因素例如長期無節制地使用抗生素、皮質類固醇、細胞抑制劑、口服避孕藥、放射治療、嚴重的傳染性疾病、內分泌紊亂、免疫缺陷狀態等。廣譜抗生素的處方不僅抑制病原細菌，而且還抑制陰道黏膜上的腐生菌:乳酸桿菌和雙歧桿菌。結果，陰道PH增大(趨向鹼性範圍)，並且自我清潔過程遭到擾亂。此外，念珠菌能使用一些抗生素作為營養底物。因而，在女性生殖器官內出現對念珠菌的活躍增生有利的條件。在一方面，本公開提供了治療陰道炎的組合物，其包含組合在如下所描述的載體基質中的針對一種或多種所述病原體的多克隆抗體。
[0150]在具體方面，包含在載體基質中的特異性多克隆抗體混合物的本公開組合物提供了治療細菌、病毒、真菌或寄生蟲性陰道炎的廣譜方法。在另一方面，本公開組合物可用來治療有相應需要的受試者的未分化陰道炎。
[0151]其他特異性結合分子
[0152]本公開的組合物和方法包括其他特異性結合分子，其包括轉移因子、可變淋巴細胞受體和細胞受體。轉移因子是由胺基酸組成的大約5000道爾頓的免疫分子，其導致抗原特異性細胞-介導的免疫力，主要遲髮型超敏反應並導致產生淋巴因子以及自身結合至抗原(Kirkpatrickl993, Str uctural nature and functions of transfer factors.Ann.N.Y.Acad.Sc1.685:362-368.)。可變淋巴細胞受體是在諸如七鰓鰻和盲鰻的無頜脊椎動物中被發現的淋巴細胞來源的分子。這些動物具有大量可變淋巴細胞受體，其僅由少數基因產生並且以與抗體結合的方式類似的方式、以相同的特異性程度與病原抗原結合。(Alder等人，2005, Diversity and function of adaptive immune receptors in a jawlessvertebrate.Science,310 (5756): 1970-1973)。
[0153]載體基質
[0154]本公開提供了治療或預防受試者的病原感染的組合物。所述組合物包含與載體基質組合的諸如多克隆抗體的特異性結合分子。雖然不意欲限制本發明的範圍，但是載體基質的使用有著雙重目的。首先，為了保護例如在經口施用後在其預期功能環境中，以及在非新生受試者胃腸道內的抗體；並且進一步為了提供組分，例如先天免疫系統的組分，以與用於管理感染的抗體協同反應。
[0155]術語「載體基質」或保護性/反應性基質是指任何底物、化合物、製劑，或補充附加劑(不論是天然或合成的)，其含有合適比例和濃度的元件、輔因子或其他組分以便提供繁殖、促進、支持或增強原位免疫型反應、級聯，或反應所需的元件。這些元件可不同地促進分裂和成熟反應、組裝物和複合物的形成、耗竭和吸附功能，供應必需的元件、生物製劑，或化合物，並為活性元件或組分提供保護功能。載體基質可含有或不含內源性抗體(免疫因子)，所述內源性抗體(免疫因子)可能對靶抗原有或沒有特異性。
[0156]在一個實施方案中，載體基質基質選自或來源於，從非人哺乳動物獲得的血清、血漿、初乳、乳、唾液、淋巴液、粘液(mucous)，或淚液。
[0157]天然存在的載體基質的實例為初乳。在哺乳動物中初乳已自然演變，專門為了向胃腸道並通過胃腸道以非常濃縮的低體積形式遞送其組分至新生兒。哺乳動物在產後立即產生初乳，或「最初的乳」。抗體和輔因子從母體被傳遞至新生兒，並提供對抗病原體的第一層保護。生長因子還刺激腸道的發育和修復。
[0158]初乳含有許多免疫互補因子(immuno-complimentary factor)。它們包括幹擾素、免疫球蛋白(包括IgG和分泌型IgA)、多形核白細胞、巨噬細胞和淋巴細胞。初乳還含有富含脯氨酸的多肽或PRP，其是一種T細胞激活劑。已知，初乳與乳相比具有高的免疫球蛋白含量。已知哺乳動物的初乳含有諸如IgA、IgG和IgM的抗體。IgA通過腸上皮被吸收，穿過血液，並被分泌到其他I型黏膜表面上。注意到牛初乳含有6%至20%的免疫球蛋白，主要IgG1和IgG2。在一方面,全牛初乳用作載體基質。
[0159]初乳還有助於調節腸道環境，使其對外來病原體不利。初乳含有乳鐵蛋白，乳鐵蛋白是一種防止細菌和病毒獲得複製所需的鐵的鐵結合蛋白。初乳還選擇性地使某些益生菌種增殖，所述益生菌種又有助於抵禦感染。它是兩種主要生長因子，轉化生長因子(TGF) α和β的唯一天然來源，以及胰島素生長因子I和2的來源。這些因子促進組織修復和發育。初乳也是刺激腸壁細胞生長 和擴充的肝細胞生長因子的來源。初乳被天然地設計用作胃腸道環境中的載體基質。合成形式的載體基質也包括在本公開中。由天然和合成組分構成的載體基質也包括在本公開中
[0160]初乳含有非常豐富的蛋白質、維生素A和氯化鈉，但所含有的碳水化合物、脂質和鉀的量比常乳低。初乳中的最相關的生物活性組分為生長因子和抗微生物因子。初乳中的抗體提供被動免疫力，而生長因子刺激腸道的發育。它們被傳遞至新生兒並且提供對抗病原體的第一層保護。初生兒獲得來自母體的被動免疫力。
[0161]初生兒具有非常小的消化系統，並且初乳以非常濃縮的低體積形式遞送其營養素。新生兒胃腸道特別容易接受來自初乳的免疫力的被動轉移。出生時，由於殘留在胃裡的羊水，胃內的pH值在6-8的範圍內。胃的pH然後在24至48小時內下降至pH為1.5至
3。因此，初生兒的GI條件有利於被動免疫。另外，新生兒和早產兒的胃排空時間延長，在
6-8個月的年齡時達到成人值。初乳中的抗體和輔因子可在某些情況(例如，母乳餵養)下對接受者提供被動免疫力；這對於新生兒而言尤其適用。非新生嬰兒、兒童、青少年和健康成人的胃腸道是對於免疫球蛋白的經口施用較為不利的環境。
[0162]初乳的其他免疫組分包括先天免疫系統的主要組分，如乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、溶菌酶、乳過氧化物酶、補體，和富含脯氨酸的多肽(PRP)。還在初乳中發現許多細胞因子(控制免疫系統運作的小信使肽)，其包括白介素、腫瘤壞死因子、趨化因子，以及其他。初乳還含有許多生長因子，如胰島素樣生長因子I和II，轉化生長因子α、β I和β 2，成纖維細胞生長因子，表皮生長因子，粒細胞-巨噬細胞刺激生長因子，血小板源性生長因子，血管內皮生長因子，及集落刺激因子-1。
[0163]在一方面，載體基質包含初乳的兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種，或六種或更多種，或七種或更多種非免疫球蛋白組分。在另一方面，載體基質包含已經過加工從而除去大部分免疫球蛋白的初乳。在實施方案中，載體基質包含至少兩種從非人動物獲得的選自由以下組成的組的組分:酶、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、非特異性免疫球蛋白、補體系統的組分、細胞因子、白血細胞、補體組分、幹擾素，和纖連蛋白，其中所述至少一種特異性結合分子和所述載體基質的至少兩種組分是從不同動物獲得的。
[0164]在另一方面，基質包含選自以下的兩種或更多種試劑:溶菌酶、磷脂酶、防衛素、調理素、富含脯氨酸的多肽(PRP)、β-溶素、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、細胞因子、白介素、趨化因子、幹擾素、TNF-α、纖連蛋白、富含脯氨酸的多肽、胰島素樣生長因子I型、胰島素樣生長因子2型、血小板衍生生長因子、表皮生長因子、成纖維細胞血小板生長因子、轉化生長因子α、轉化生長因子β、神經生長因子、瘦素(Ieptin)、白細胞、白血細胞、吞噬細胞、巨噬細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞、多形核細胞，及樹突狀細胞、肥大細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、自然殺傷細胞(NK)、淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK)、包括防衛素的陽離子蛋白、包括彈性蛋白酶的蛋白水解酶、組織蛋白酶G、髓過氧化物酶、NADPH氧化酶組分，或它們的組合。在另一方面，基質包括來自先天免疫系統的試劑的混合物。在優選的方面，載體基質包含非超免疫牛初乳。
[0165]母牛為它們的初生牛犢產生牛初乳。在許多乳牛群中，不允許牛犢吃乳；而是給它們餵初乳，後來用瓶，然後用桶餵乳。初乳被收集並被加工用於商業用途。包括初乳的各種組合物和製備初乳的工藝已公開於美國專利US5，846，569、US6, 410, 058、US6, 475，511，和US6, 521,277中，該美國專利的內容以引用的方式完整地併入本文。乾燥牛初乳可商購獲得。在一個具體方面，載體基質是市售的乾燥牛初乳。
[0166]牲畜養殖者/飼養員通常將他們的動物的初乳儲備入庫。在他們自己的房舍產生的初乳被認為優於來自其他來源的初乳，因為它是由已暴露於在房舍內產生的病原體(並因而產生針對所述病原體的抗體)的動物產生的。一般來說，來自暴露於相關病原體的動物的初乳將具有優良的免疫 特性。
[0167]除了在對乳糖或其他組分不耐受或過敏的情況下之外，牛初乳及其組分供人食用是安全的。牧草餵養的母牛的牛初乳含有對許多人病原體有特異性的免疫球蛋白，所述人病原體包括大腸埃希氏菌、微小隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum)、弗氏志賀氏菌(Shigella flexneri)、沙門氏菌屬、葡萄球菌屬，和輪狀病毒，這取決於它們在這些病原體中的天然暴露。在開發抗生素之前，初乳是用於對抗感染的免疫球蛋白的主要來源。
[0168]超免疫初乳是通過用特異性病原體免疫母牛來提升天然牛初乳的功效的一種嘗試。這種途徑是有希望的，因為產生針對初始激發所使用的特異性病原體或抗原的抗體。然而，對抗原的反應的變化、生物變異性，和低初乳產率限制了它的臨床和商業實用性。
[0169]在一方面，本公開提供了包含初乳的組合物，所述初乳不是超免疫初乳或者不含可測量或顯著量的對病原體組分或靶抗原組分有特異性的抗體。在另一方面，本公開提供了組合物，其中載體基質含有先天免疫系統的各種組分，而不含顯著量的特異性或非特異性抗體。
[0170]在一個實施方案中，可對初乳進行加工以除去大部分免疫球蛋白，所述加工例如通過以分批或柱格式使抗體吸收到親和樹脂(例如，蛋白G或蛋白A瓊脂糖凝膠；或蛋白A或蛋白G瓊脂糖)中，並保留洗脫液用於進一步加工來進行。免疫球蛋白也可以通過在Sephadex G-200或DEAE Sephadex A-25離子交換色譜法上的凝膠過濾色譜法除去。(Lloydand Soulsby, Immunology, The role of IgA immunoglobulin in the passive transferof protection to Taenia taeniaeformis in the mouse.34,939-945)這些過程可米用本領域中已知的各種方法和技術以柱或分批格式運行。
[0171]在一個具體實施方案中，載體基質包括初乳。在一方面，採用市售初乳作為支撐性/反應性基質。在優選的方面，市售牛初乳是僅從最先擠出的初乳生產的附聚且速溶化、經巴氏殺菌的全脂全初乳粉。在另一方面，在低壓和低溫下加工初乳，並使用間接蒸汽對其進行噴霧乾燥以維持最大生物活性。在另一方面，市售初乳來自不含抗生素的來源。在另一方面，針對多種病原體對初乳進行微生物學分析，發現其是陰性或低於可接受水平。在各種其他方面，針對諸如硝酸鹽、黃麴黴素、硝基呋喃、二惡英、三聚氰胺和重金屬的其他汙染物進行初乳測定，發現其是陰性或低於規定的水平。
[0172]在一個實施方案中，本發明可由數種經超免疫的來源的初乳組成，所述數種經超免疫的來源各靶向不同的抗原簇或類別，其中將該初乳混合以提供廣譜的抗體製劑。
[0173]在另一個實施方案中，載體基質包含重構或人造黏膜分泌物，如淚液、鼻或支氣管粘液、宮頸粘液、精漿、汗水、血漿或唾液。已知體液含有變化量的數種組分。(Schenkels等人，Biochemical composition of human saliva in relation to other fluids, Crit.Rev.0ral Biol.Med.，1995，6 (2):161-175)。唾液含有粘蛋白、酸性 PRP、α-澱粉酶、鹼性PRP、鹼性PRG、分泌型IgA、胱抑素、富酪蛋白(statherin)、IgG、腮腺外糖蛋白(EP-GP)、VEGh(脂鈣蛋白(Iipocalin))、組胺素(histatin)、溶菌酶、激肽釋放酶(kallikrein)、乳鐵蛋白、乳過氧化物酶、結合咕啉(haptocorrin)、β -微精液蛋白、IgM、白蛋白，及Zn- α 2-糖蛋白。在一方面，載體基質包含兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種、六種或更多種，或七種或更多種體液組分。
[0174]淚液(Tear fluid)或淚液(lachrymal fluid)具有許多與唾液的組分相同的組分，並且具有特別高的濃度的分 泌型IgA、VEGh、溶菌酶，和乳鐵蛋白。在一方面，含有諸如氯化鈉等鹽作為主要成分的人造淚液，或如本文領域中已知的含有羥乙基纖維素、硫酸軟骨素或透明質酸或黃原膠的滴眼劑(US7，875，271，其以引用的方式併入本文)中添加有兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種如所描述的體液組分，並且用作如本文所描述的純化的多克隆抗體的載體基質。在一方面，組合物可用來治療眼部的微生物感染如紅眼病。
[0175]宮頸粘液含有粘液素、α -澱粉酶、溶菌酶、乳過氧化物酶、白蛋白和β -微精液蛋白。該基質通過將這些組分中的兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種組合來形成，該基質作為載體基質與通過本公開方法製備的空間特異性結合分子如抗細菌或抗真菌多克隆抗體一起形成組合物。
[0176]在一方面，本公開提供了組合物，其包含能夠固定水或在水中可溶脹的樹膠，含有與纖維素組合的羧甲基澱粉作為滲透劑，並且在與水接觸時幾乎瞬間膠凝且很容易適用於陰道施用。包含本公開抗體/基質組合物的片劑可以例如包含如US4，808，415中公開的羧甲基澱粉和纖維素，該專利以引用的方式併入本文。在具體的方面，將抗細菌和抗真菌多克隆抗體組合在基質中並進行調配以提供陰道病的廣譜治療。在一方面，所述組合物用來治療陰道細菌感染，如滴蟲感染或真菌性陰道病，如念珠菌感染。[0177]唾液是存在於口腔中的由唾液腺產生的黏膜分泌物。唾液提供保護功能，如組織塗層、潤滑、溼潤，和牙齒再礦化。唾液也可利用免疫活性，抗細菌、抗病毒和抗真菌活性提供宿主防禦功能。唾液還利用消化酶、食團形成和味覺提供消化活動。唾液含有各種蛋白質如組胺素，及唾液所特有的酸性富含脯氨酸的蛋白質。唾液還含有存在於其他體液中的蛋白質如溶菌酶、粘液素、富酪蛋白和免疫球蛋白。唾液含有起源於血漿的諸如白蛋白和Ζη-α-2-糖蛋白的蛋白質。已知牛唾液的治療價值。(Varshney等人，1997, Therapeuticvalue of bovine saliva in wound healing:a histomorphological study.，IndianJ.Biol.Mayl997，35(5):535-7)。在一方面，唾液組分可能可用於例如牙膏或漱口水，或其他用於經口黏膜施用的製劑中。
[0178]支氣管粘液含有粘液素、α -澱粉酶、鹼性富含脯氨酸的多肽(PRP)、胱抑素、富酪蛋白、EP-GP、溶菌酶、β-微精液蛋白，和白蛋白。在一方面，本公開提供了包含空間特異性結合分子和載體基質的組合物，所述載體基質包含兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種唾液組分或支氣管分泌物組分。在一方面，具有載體基質的組合物將與根據本公開製備的空間特異性結合分子如抗-A組鏈球菌多克隆抗體一起包裝成乾燥形式。在一方面，乾燥製劑在例如鹽水溶液中重構，並作為治療鏈球菌性咽喉炎的咽喉部噴霧劑施用。
[0179]可製備在其他使用環境中起作用的，例如用於霧化(吸入)、眼部、外用或其他製劑的其他載體基質。
[0180]在具體實施方案中，特異性結合分子和載體基質來源於不同物種。在進一步的方面，特異性結合分子和載體基質都來源於非人物種。在另一方面，特異性結合分子來源於非人哺乳動物。在另一方面，載體基質來源於非人哺乳動物。
[0181]製劑和組合物
[0182]在一個實施方案中，從經接種動物的血漿、血清，或血液、初乳、卵，或其他組分，或人造生產系統(如細胞培養物)中收穫抗體，然後加以純化或處理，並將其添加到諸如初乳的載體基質中。將允許的組合物用作用於例如抗體製劑的經口施用的遞送介質。這種途徑可提供以這種方式可靠地按比例縮放抗體生產用於調配，以便控制用於商業用途的滴度、一致性和連續可用性的有效方式。在一個實施方案中，從經接種動物的卵中收穫抗體，並可對該抗體進行純化或處理或將其保留在卵材料中，並將其添加到牛初乳中。
[0183]明顯需要針對許多胃腸道病原體的低成本且有效的治療，經口施用的抗體是這個角色的候選者。除了已表現出功效之外，經口施用的抗體通常不具有免疫原性。它們通常被認為有很好的耐受性，無不良副作用的報導，並且相對而言沒有與可比的攝入食品不同的反應。值得注意地，含有經口施用的抗體的數種產品已接受FDA的GRAS(—般認為安全(Generally Recognized as Safe))認證。
[0184]本發明的一個實施方案是廣譜治療性或預防性抗毒素製劑，其由根據這種方法生產的包埋在載體基質中的廣譜中和抗體混合物組成，目的是允許跨越導致毒素介導的腹瀉的廣泛範圍的未知或未診斷病狀有效施用。
[0185]本發明的一個實施方案是包埋在載體基質中的廣譜治療性或預防性抗病原體製劑，其含有根據這種方法生產的廣譜抗病原體抗體的混合物。
[0186]本發明的一個實施方案是包埋在載體基質中的廣譜治療性或預防性抗粘附製劑，其含有根據這種方法生產的廣譜抗粘附抗體的混合物。[0187]本發明的一個實施方案是包埋在載體基質中的廣譜治療性或預防性製劑，其含有根據這種方法生產的廣譜抗毒素、抗病原體和抗粘附素抗體的混合物。
[0188] 使用基於天然食物的產品的一個重要限制是製劑局限於天然過程所允許的結果。本發明允許選擇性地添加顯著地高於正常情況下可在自然界獲得的生理水平的水平的特異性抗體和一般免疫因子(製劑)。本發明還允許以確保對靶疾病、病原體或物質產生更高的特異性的方式增加各種因子的權重。
[0189]在一個實施方案中，包含特異性結合分子的製劑是乾燥固體(卵粉末)製劑。將粉末狀製劑密封在任選地具有惰性氣體層的密封包中。該製劑可在室溫下在冷藏或冷凍溫度下儲存延長的時間。在其他實施方案中，將乾燥組合物調配成用於經口施用的膠囊或片劑。在另一個實施方案中，將製劑壓製成咀嚼片劑。
[0190]本發明的另一個實施方案涉及用於調配組合物的藥物可接受的稀釋劑，其中所述藥物可接受的稀釋劑選自由以下組成的組:單獨的乳糖、甘露醇、山梨醇、微晶纖維素、蔗糖、檸檬酸鈉、磷酸二鈣，或具有類似性質的任何其他成分，或其合適的組合；選自由以下組成的組的粘合劑:單獨的黃芪膠、阿拉伯膠、甲基纖維素、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、澱粉或具有類似性質的任何其他成分，或其合適的組合；選自由以下組成的組的賦形劑:單獨的瓊月旨、碳酸鈣、碳酸鈉、矽酸鹽、藻酸、玉米澱粉、馬鈴薯木薯澱粉、澱粉羥乙酸鈉(primogel)或具有類似性質的任何其他成分，或其合適的組合；選自由以下組成的組的潤滑劑:單獨的硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或steorotes、滑石、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉或具有類似性質的任何其他成分；選自由以下組成的組的助流劑:單獨的膠體二氧化矽或具有類似性質的任何其他成分，或其合適的組合；選自由以下組成的組的甜味劑:例如單獨的蔗糖、糖精或具有類似性質的任何其他成分，或其合適的組合；選自由以下組成的組的調味劑:單獨的薄荷、水楊酸甲酯、橙風味劑、香草風味劑，或任何其他藥學上可接受的風味劑，或其合適的組合；選自由以下組成的組的潤溼劑:單獨的鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯或任何其他藥學上可接受的潤溼劑，或其合適的組合；選自由以下組成的組的吸收劑:單獨的高嶺土、膨潤土或任何其他藥學上可接受的吸收劑，或其合適的組合；選自由以下組成的組的延遲劑:單獨的蠟、石蠟或任何其他藥學上可接受的延遲劑，或其合適的組合。
[0191]在另一方面，對於非新生人的每日劑量由量化特異性抗體的任何方法標準化。在一方面，通過使用ELISA評價製劑中特異性抗抗原抗體的濃度來使所述組合物的劑量標準化。在一方面，對於治療病原感染有效的經口組合物的一次劑量含有約0.0OOlmg至20mg、0.0Olmg至15mg、0.01mg至10mg、0.05mg至5mg、0.1mg至Img混合的抗原特異性結合分子。
[0192]術語「固體形式」是指特異性結合分子的乾燥形式，或載體基質的乾燥形式，或包含乾燥的特異性結合分子和載體基質的固體劑型如粉末、壓製片劑、錠劑，或膠囊。在一方面，固體劑型用於經口施用。在一方面，粉末是用於配製混懸液的製劑。在一方面，將粉末狀乾燥免疫卵和粉末狀乾燥初乳包裝在密封包中。緊接在經口施用前，將包的內容物懸浮或溶解在約液體中並將其經口施用。
[0193]在一方面，所述組合物也可以以用於施用的液體形式提供。
[0194]在一方面,一次劑量含有lg、2g、3g、4g、5g、5g、6g或7g乾燥免疫卵和lg、2g、3g、4g、5g、5g、6g或7g乾燥牛初乳。在一方面，乾燥劑型的一次劑量含有3g乾燥免疫卵產品和4g乾燥牛初乳。在一方面，乾燥劑型的一次劑量含有2g乾燥免疫卵產品和4g乾燥牛初乳。在一方面，乾燥劑型的一次劑量含有4g乾燥免疫卵產品和4g乾燥牛初乳。在另一方面，將單劑量包的內容物溶解在約2盎司水中並將其經口施用。
[0195]用於經口使用的製劑也可以被製備成錠劑、咀嚼片劑，或者被製備成硬明膠膠囊，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如馬鈴薯澱粉、乳糖、微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合，或者被製備成軟明膠膠囊，其中活性成分與水或油介質，例如，花生油、液體石蠟或橄欖油混合。使用以上在片劑和膠囊中提及的成分，以常規方式，使用例如混合器、流化床裝置或噴霧乾燥設備，可製備粉末和顆粒劑。
[0196]在各種實施方案中，本公開製劑相對於現有技術提供了多種優點。在一方面，包含抗原特異性IgY和牛初乳載體基質的本公開製劑具有在感興趣抗原被識別後能在約6周的短時間內製備完成的優勢。這允許雞免疫接種方案的易再現性和標準化。在一個具體方面，將不同群雞各自用單一混合抗原製劑免疫接種，並然後進行組合從而獲得用於治療病原感染的廣譜組合物。在一個具體方面，將三群雞用分開的混合抗原製劑免疫接種，然後匯集從而製備用於在不需要了解致病微生物病原體的情況下治療未分化腹瀉的廣譜組合物。這種方法的優點是，需要時，可根據特定的發作、區域或季節調整組合物中的抗原特異性抗體的混合物。最終，在實施方案中，為了快速製備和長期儲存，不需要將特異性結合分子從全乾燥卵中分離出來。
[0197]在另一方面，本公開組合物對於經口施用治療非新生兒的病原感染是有效的。非新生兒胃腸道的酸性非常強，並且比新生兒的吸收能力小，如本文所描述的。在本公開的實例中，所述組合物對於治療6個月至5歲的非新生兒童的未分化腹瀉是有效的。在另一方面，本公開組合物對於治療或預防成人的旅行者腹瀉是有效的。載體基質是用於與抗原特異性結合分子組合的保護性和反應性基質。在另一方面，本公開組合物以臨施用前配製成混懸液的粉末狀固體形式提供。在一方面，經懸浮或重構的劑型的優點是，它們對於嬰兒和兒童來說非常美味，甚至當嬰兒和兒童遭受病原感染的症狀時。這具有使罹患病原感染的受試者容易施用和攝入全劑量的優點。
[0198]在另一方面，在病原感染的治療或預防中，本發明組合物可用於施加廣譜被動免疫力。在一方面，對雞的低 水平的免疫可足以製備具有有效量的抗抗原特異性結合分子的組合物，從而在與載體基質一起施用時產生有效的廣譜製劑。
[0199]病原感染的治療或預防
[0200]本公開組合物包含包埋在載體基質中的特異性結合分子。在合適的載體基質內，所述組合物可以適合於其特定免疫原性或者生物學或免疫學反應特徵的任何方法施用，所述方法包括經口、靜脈內、頰、鼻、黏膜、皮膚施用或其他方法。具體實施方案涉及本公開組合物的經口施用。
[0201]在各種實施方案中，所述組合物作為預防性或治療性組合物施用。在各種方面，所述組合物包括藥學上可接受的載體。在各種方面，所述組合物不包括聚合物、共聚物、脂質體、水凝膠，或纖維蛋白。在各種方面，所述組合物不包括微球體或微膠囊。在各種方面，所述組合物不包括免疫原或抗原。本發明組合物可經由經口遞送、鼻遞送、眼遞送(ophthalmic delivery)、眼部遞送(ocular delivery)、黏膜遞送或其組合施用。
[0202]本發明的一個實施方案使用經口施用。已證明，在人和動物系統中，抗體、免疫球蛋白和其他生物免疫因子的經口(攝入)施用可對胃腸道系統的疾病、胃腸道系統中的疾病、與胃腸道系統相關的疾病，或受胃腸道系統影響的疾病的病程、嚴重程度和持續時間產生可測量影響。
[0203]將廣譜抗體的混合物包埋在諸如初乳的載體基質內用於經口施用。初乳起到向抗體製劑提供協同的保護和功效屬性的作用。可在載體內使用抗體的任何組合，包括但不限於抗病原體、抗毒素和抗粘附素抗體的組合。
[0204]在一方面，本公開組合物用來治療罹患各種病原感染的患者。所述用於經口施用的組合物和製劑可一天施用一次、兩次、三次或四次，持續2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12個連續日，以治療病原感染。在一方面，所述組合物每天施用兩次，持續五天，以治療病原感染。在另一個具體方面，所述組合每天施用一次，持續三個連續日，以有效治療非新生兒童的未分化腹瀉，或治療非新生兒童或成人的旅行者腹瀉。在另一方面，所述組合物可定期施用以預防病原感染。
[0205]在通過向黏膜外用施用治療黏膜病原感染的組合物的情況下，所述組合物可每天施用二至六次，持續3至12天。
[0206]在優選的實施方案中，本公開提供了對於治療非新生人的未分化腹瀉有效的組合物。所述組合物利用有效的多克隆抗體生產策略(給雞接種，通過卵收穫抗體)產生靶向於數種腹瀉病理致病物的高特異性抗體。在具體實施方案中，所述組合物包含在載體基質中的特異性多克隆抗體，所述載體基質為市售牛初乳。
[0207]在優選的實施方案中，本公開提供了有效治療未分化小兒腹瀉的經濟性組合物。所述組合物包含多克隆抗體(主要為IgY)的混合物，所述多克隆抗體為對大腸埃希氏菌、沙門氏菌屬某些種、輪狀病毒、革蘭氏陰性菌、由病原體產生的毒素，及使病原體能夠附著並定殖於胃腸道中的粘附素有特異性的多克隆抗體。
[0208]在具體方面，所述組合物包含同等重量的來自經不同抗原或不同混合抗原製劑接種的三個雞群中的每一個雞群的乾燥免疫卵產品，將其與特定重量的市售乾燥非超免疫牛初乳組合包裝。在一方面，將0.5g至3g、0.7g至2.0g、1.0g、1.3g，或1.5g來自每個雞群的乾燥免疫卵產品添加到單劑量包中。優選將1.0g或1.3g每種免疫卵產品添加到單劑量包中。在另一方面，將 Ig 至 5g、2g 至 4g、l.5g、2.0g、2.5g、3.0g、3.5g、4.0g、4.5g 或 5g 乾燥初乳添加到同一個包中。
[0209]使用前，將包或藥囊中的內容物混合在大約2盎司淨化水或一些其他經口用液體中。將全部經重構的製劑經口施用給受試者。所述組合物可每天施用一至四次，持續二至十天。在具體實施方案中，所述組合物每天施用一次，持續3個連續日。本公開提供了通過每天一次持續二、三或四天地施用本公開組合物來治療未分化小兒腹瀉的方法。
[0210]在一方面，將本公開組合物作為抗生素治療的輔助治療。在這個方面，所述組合物可每天施用一次，持續前三個治療日。在另一方面，本公開組合物與口服補液溶液(ORS) —起施用。在另一方面，本公開組合物與口服鋅製劑聯合施用。在另一方面，將本公開組合物作為抗生素治療的輔助物施用，以防止對抗生素有耐藥性的特定病原生物體過度生長。如實施例中詳細描述的，所述組合物和方法有效地使未分化小兒腹瀉的症狀迅速消退，導致大便量、大便頻率和腹瀉持續時間顯著減少，以及醫生報告的健康狀況顯著改善。
[0211]在一個替代實施方案中，本公開組合物用來治療旅行者腹瀉。TD的發病通常發生在旅行的第一周內，但可能發生在旅行時的任何時間，甚至發生在回家之後。風險的最重要的決定因素是旅行者的目的地。高風險的目的地是拉丁美洲、非洲、中東和亞洲的發展中國家。處於特別高的風險中的人包括青年成人、經免疫抑制的人、患有炎症性腸道疾病或糖尿病的人，及帶有H-2阻滯劑或抗酸劑的人。大多數TD病例突然開始。該疾病通常導致大便的頻率、量和重量增加。大便硬度發生改變也是常見的。通常，旅行者每天經歷四至五次拉稀或水樣排便。其他常見的伴隨症狀為噁心、嘔吐、腹瀉、腹部絞痛、腹脹、發熱、尿急，和全身乏力。
[0212]傳染物是TD的主要病因。細菌性腸道病原體導致大約80%的TD病例。在所調查的國家中分離的最常見致病物是產腸毒素大腸埃希氏菌(ETEC)。ETEC導致水瀉，伴隨絞痛和低熱，或不發熱。除ETEC和其他細菌性病原體之外，多種病毒和寄生性腸病原體也是潛在的致病物。
[0213]在一方面，作為旅行者腹瀉的抗生素治療的替代方案或輔助治療，向受試者施用本公開組合物，每天一次，持續三個連續日。有限的現場研究證據揭示，在施用第一劑量的24或48小時內腹瀉症狀得到改善。替代地，在第I天每天兩劑量地施用本公開組合物，接著在第2和3天施用單一劑量。在一方面，以替代的每日或每周方案，或以減少的劑量的方案施用本公開組合物以預防旅行者腹瀉。
[0214]在另一個替代實施方案中，例如，在施用益生菌之前，使用本公開組合物作為管理受試者胃腸道菌群的「益生元」。如本文所使用，術語「益生元」是指允許胃腸道微生物區系的組成和/或活性二者發生特定變化，其對受試者的健康狀態和健康提供益處。在一方面，所述組合物可用於管理胃腸道菌群以便減少或消除一種或多種不期望的細菌菌株。在一方面，為管理胃腸道菌群而調整抗抗原免疫球蛋白組成以便減少或消除一種或多種不期望的細菌菌株。在另一方面，所述組合物用作傳統益生元的輔助物。在進一步的方面，本公開組合物進一步包含可溶性纖維。在進一步的方面，所述組合物單獨地用於管理菌群。
[0215]在另一方面，本公 開提供了管理受試者的胃腸道菌群的方法，其包括以下步驟:施用本公開組合物以減少或消 除一種或多種不期望的細菌菌株，接著施用益生菌以引入一種或多種期望的細菌菌株。在另一方面，本公開組合物作為抗生素治療的輔助物施用，以防止對抗生素有耐藥性的特定病原生物體過度生長。
[0216]實施例1.治療腹瀉的組合物
[0217]腹瀉是由包括細菌、病毒、原蟲和寄生蟲感染在內的廣泛範圍的病因引起的症狀。細菌性腹瀉由多種生物體引起，所述多種生物體包括各種形式的大腸埃希氏菌、沙門氏菌屬、霍亂弧菌和副溶血性弧菌、志賀氏菌屬、彎曲桿菌、耶爾森氏菌及其他。病毒性小兒腹瀉常常由輪狀病毒引起，也可能由數種其他病毒引起。
[0218]據了解，腹瀉存在多種致病生物體。這些致病生物體可組織成公共簇，其產生結構上相關的毒素，針對這些毒素可產生一系列廣譜中和抗體，所述抗體在被混合成具有臨床有效滴度的製劑時可用作毒素介導的腹瀉的廣譜的非生物體依賴性的治療幹預。
[0219]簡言之，通過給雞接種抗原來製備對腹瀉的致病生物體有特異性的抗體。收集免疫卵，並對全卵進行巴氏殺菌和噴霧乾燥從而獲得粉末化形式。將市售牛初乳混合成粉末化形式。將這兩種粉末相繼添加到單劑量包中，密封，並以乾燥形式分配用作口服製劑。在施用前，將粉末狀口服製劑與少量水混合，然後口服食用。
[0220]這種治療賦予患者被動免疫力，如本文的實施例中所證明的。所述治療的性質使得相關風險因素與食用來自抗體從其中被收穫的來源的食物的風險因素相當(例如，風險因素將與食用卵和一瓶乳的風險因素類似)。這是一種有效的治療，其毒性小於當前可用替代藥物的毒性。[0221]實施例1A.單獨地給雞接種來源於以下5種大腸埃希氏菌菌株的純化的抗原:四種含有大腸埃希氏菌粘附菌毛抗原F41、97P、F19和K99的ATCC菌株，和一種來源於乳的野生型大腸埃希氏菌。僅給每隻雞接種一種抗原。每周給雞接種一次，持續三周。初次接種使用弗氏佐劑，隨後在第二次和第三次接種時使用弗氏不完全佐劑。每次接種注射兩針，在左和右胸脯注射。將卵分開安置，收集卵，進行瞬時巴氏殺菌並噴霧乾燥。將五種抗體製劑中的每一種以等份混合。將乾燥的卵粉末抗大腸埃希氏菌抗體製劑冷凍儲存約2年。
[0222]給第二群雞接種含有輪狀病毒、冠狀病毒和大腸埃希氏菌抗原的混合抗原製劑。如上那樣執行相同的接種、收集和卵加工方案。將乾燥的卵粉末抗腹瀉抗體製劑冷凍儲存
1.5年。使用ELISA表徵抗體製劑。
[0223]將I克每種乾燥的抗大腸埃希氏菌抗體製劑和乾燥的抗腹瀉抗體製劑與3克或4克市售乾燥的全脂牛初乳一起包裝在單劑量包中。
[0224]實施例1B.單獨地給三群雞接種以下不同混合抗原製劑中的一種:含有輪狀病毒(血清型G6和G10)、冠狀病毒、具有K99菌毛粘附因子的產腸毒素大腸埃希氏菌，和C型產氣莢膜梭菌類毒素及佐劑的第一抗原製劑；含有具有K99、K88、987P或F41粘附因子的大腸埃希氏菌的產腸毒素菌株的第二製劑；以及含有各種大腸埃希氏菌內毒素及佐劑的第三混合抗原製劑。三群雞的每一群僅接受單一混合抗原製劑。收集卵，清洗，將其打碎，進行巴氏殺菌並噴霧乾燥或熱乾燥從而製得三種乾燥的免疫卵產品。任選地通過ELISA評價乾燥卵產品的特異性IgY活性。將同等重量的三種乾燥免疫卵產品中的每一種與3g或4g乾燥初乳組合在單一劑量包中。如下所描述，每一單劑量包採用總重量為2g、3g，或4g的乾燥免疫卵產品。在一方面，市售乾燥初乳沒有表現出對疫苗抗原的特異性活性。
[0225]實施例1C.免疫接種雞用於IgY生產
[0226]以下免疫方案是由Gallus Immunotech, Inc.方案修改而來的，並且可用於製備IgY多克隆抗體。在免疫之前任選地收集幾個卵用作基線對照。如果採用針對牛或豬的混合抗原製劑，則在施用前將它以1: 2、1: 4、1: 8，或1: 16稀釋。在第O天，給雞注射0.02至0.5mg抗原和弗氏完全佐劑。可皮下或肌肉內注射到母雞胸部組織的多個部位中。抗原/佐劑混合物的總體積可為約lmL，其中佐劑佔該體積的二分之一至三分之二。通常，在第14、21和28天，使用弗氏不完全佐劑和約初始量一半的量的抗原重複免疫。通常，可在約第30天檢測卵中的特異性抗體。對於持續很久的抗體生產，每隔幾個月給予母雞一次加強免疫。在加工和/或純化IgY之前，卵可冷藏儲存。在一方面，在加工和/或純化之前，卵可冷藏保存長達一個月或長達兩個月。在另一方面，使用合適量的抗原，以類似方式在鴨、鵝、鴕鳥、鵪鶉、火雞卵中製備IgY。
[0227]實施例2.攝入抗體治療艱難梭菌
[0228]在一個實施方案中，本發明方法和組合物用來治療艱難梭菌，艱難梭菌是一種天然存在於大多數人身體中的細菌。艱難梭菌的群體水平受到腸道的其他天然菌群的控制。當因另一種醫學病狀而施用的抗生素使腸道天然菌群耗盡，從而使得艱難梭菌群體能夠不受抑制地繁殖時，患者常常罹患艱難梭菌感染。雖然許多艱難梭菌菌株可用專用抗生素治療，但越來越多的艱難梭菌菌株對抗生素治療產生耐藥性。這導致患者需要很長的恢復時間且恢復困難，並且甚至在某些情況下可能威脅生命。用所攝入的賦予被動免疫力的抗體中和艱難梭菌群體的過程能夠控制艱難梭菌群體水平，從而使得天然的腸道菌群平衡能夠恢復。
[0229]與由輪狀病毒和革蘭氏陰性菌引起的抗腹瀉製劑中的情況一樣，所調配的包埋在載體基質中以特異性地與艱難梭菌或其毒素結合的抗體是一種有效的治療途徑。這種製劑可用來治療持續感染，或防止此種感染發生。因此，所述治療可單獨地施用，或與抗生素同時施用。這種治療不僅有利於患者從艱難梭菌發作中恢復，而且可以作為預防藥施用給處於患艱難梭菌的高風險中的患者。
[0230]中和艱難梭菌的抗體以在載體基質(用於「激活」腸道內的抗體以及提供有用的二次免疫、保護或營養的蛋白質和酶的混合物)中的形式被攝入。在一個實施方案中，通過給動物注射或接種抗原或抗原組合來生產抗體，所述抗原或抗原組後可包含或不包含在混合抗原製劑中，(潛在地與佐劑組合以引發較強的免疫反應)。
[0231]在一方面，抗原獲自或來源於艱難梭菌抗原或毒素。在另一方面，抗原組合含有一種或多種來源於艱難梭菌的抗原或毒素，及一種或多種另外的病毒抗原。在另一方面，抗原組合含有一種或多種來源於艱難梭菌的抗原或毒素，及一種或多種另外的細菌抗原或毒素。在另一方面，抗原組合含有一種或多種來源於艱難梭菌的抗原，及一種或多種另外的原蟲抗原。在另一方面，抗原組合含有一種或多種來源於艱難梭菌的抗原，及一種或多種另外的真菌抗原。
[0232]所述抗體然後可獲自、分離自，或來源於動物產品，如動物的乳、卵或初乳，或者直接從動物，例如血清、血漿中收穫。在具體方面，給母雞接種抗原、抗原組合或疫苗，並且從全卵或卵黃中獲取抗體，或者從經接種雞的全卵或卵黃中取出或純化出抗體。在另一方面，所述抗體為多克隆抗體。
[0233]這種組合物旨在幫助治療艱難梭菌感染,或者是對抗艱難梭菌感染的預防藥。例如，該物質包含包埋在載體基質(例如初乳)中的特異性地靶向艱難梭菌的抗體。收穫後，將所述抗體粉末化。也可以將載體基質粉末化。然後可將這兩種粉末充分混合，或分開添加至單劑量包或小瓶中，並以乾燥形式分配。在優選的施用方法中，該物質將經口通過攝入施用。為了食用，臨食用前將該粉末狀物質與少量液體如水、乳、果汁，或電解質溶液混合，並將按醫生的指示服用。也考慮了其他遞送方法。
[0234]艱難梭菌感染的現行治療集中在抗生素療法上。然而，在強力抗生素是感染病因的情況下，以及在已形成對抗生素的耐藥性的情況下，目前幾乎沒有替代治療。本發明實施方案試圖通過利用天然免疫機制而不是有毒的抗生素來中和艱難梭菌。它的優點是，在減少艱難梭菌群體水平的同時允許腸道中天然存在的菌群生長。
[0235]將抗體組合包埋在載體基質中從而增強抗體功效，這種方法在當前沒有被任何艱難梭菌疾病治療所使用。本發明方法賦予患者被動免疫力。所述治療的性質使得相關風險因素與食用來自抗體從其中被收穫的來源的食物的風險因素相當(例如，風險因素將與食用卵和一瓶乳的風險因素類似)。這是一 種有效的治療，其毒性小於當前可用的替代藥物的 毒性。
[0236]在一方面，獲取、純化並分離出所選的抗體，並將其製備成粉末化形式。在另一方面，沒有純化或分離出所選的抗體，而將其作為完整的產品加工。例如，對從經接種雞獲得的全卵內容物進行加工，例如進行巴氏殺菌，並將其製備成粉末化形式，而不需另外的純化步驟。也將激活酶/蛋白質混合物(例如，包括初乳)製備成粉末化形式。將這兩種粉末充分混合併以乾燥形式分配用作口服製劑。施用前，將粉末狀口服製劑與少量水混合，然後食用。
[0237]這種治療賦予患者被動免疫力。所述治療的性質使得相關風險因素與食用來自抗體從其中被收穫的來源的食物的風險因素相當(例如，風險因素將與食用卵和一瓶乳的風險因素類似)。這是一種有效的治療，其毒性小於當前可用的替代藥物的毒性。
[0238]實施例3.攝入抗體治療幽門螺旋桿菌
[0239]幽門螺旋桿菌是一種革蘭氏陰性菌，其可棲息於胃區中。一般認為，幽門螺旋桿菌與十二指腸潰瘍和胃潰瘍以及可能與胃癌關聯。幽門螺旋桿菌可通過鑽進具有較為中性的PH環境的上皮細胞表面粘液層中而逃脫胃腔內的酸性環境。幽門螺旋桿菌可產生用於結合至上皮細胞的膜相關脂質或碳水化合物的粘附素。幽門螺旋桿菌在胃區內的定殖可導致慢性胃炎，慢性胃炎是一種長期胃炎症。消化性潰瘍的主要病因是幽門螺旋桿菌感染。
[0240]獲取所選擇的針對幽門螺旋桿菌的抗體，並將其製備成粉末化形式。也將激活酶/蛋白質混合物(例如，包括初乳)製備成粉末化形式。將這兩種粉末充分混合，或分開添加至單劑量包或小瓶中，並以乾燥形式分配用作口服製劑。施用前，將粉末狀口服製劑與少量水混合，然後食用。
[0241]這種治療賦予患者被動免疫力。所述治療的性質使得相關風險因素與食用來自抗體從其中被收穫的來源的食物的風險因素相當(例如，風險因素將與食用卵和一瓶乳的風險因素類似)。這是一種有效的治療，其毒性小於當前可用的替代藥物的毒性。
[0242]實施例4.臨床研究-在未分化腹瀉中的功效
[0243]由於致病生物體的範圍廣泛、用於指導治療方案的診斷測試的數量有限，有效廣譜地治療腹瀉是一個重大的挑戰。對於嚴重腹瀉的病例，現行標準幹預包括普遍地施用抗生素和口服補液鹽(ORS)。然而，這種途徑的功效有限，並且促進耐抗生素細菌菌株的形成。
[0244]實施例4A.現場研究(試驗)I和2
[0245]執行臨床研究來評價實施例1A製劑在治療未分化腹瀉或加速未分化腹瀉的消退中的耐受性和功效。第一項開放單中心非比較性研究總共錄入63位6個月至5歲的兩種性別的小兒腹瀉兒科患者。該研究比較了測試組A，「試驗組I」與對照組B的臨床結果，其中測試組A，「試驗組I 」接受與抗生素和ORS —起施用的實施例1A 口服製劑，而對照組B僅接受抗生素和0RS。在追蹤研究中，第二測試組AA，「試驗組2」錄入33位患者以在不同季節性條件下測試實施例1A製劑。
[0246]所有參與的小兒患者都表現出如由主治醫生評估的「危急的」或「嚴重的」腹瀉特徵(4或5級)，其採用5分級別(參見表1)。沒有針對小兒腹瀉的致病物或病因學作出診斷鑑別。排除了排米泔水樣便或排血便的患者。另外，排除了已知對乳、雞或卵產品過敏的患者。
【權利要求】
1.一種組合物，其包含: a)非新生人有效量的至少一種從動物獲得並且特異性地與抗原結合的特異性結合分子或其片段，其中所述特異性結合分子選自免疫球蛋白、抗體、肽、可變淋巴細胞受體、細胞受體、轉移因子，及它們的混合物；以及， b)載體基質，其包含至少兩種從非人動物獲得的選自由以下組成的組的組分:酶、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、非特異性免疫球蛋白、細胞因子、白血細胞、補體組分、幹擾素，和纖連蛋白，其中所述至少一種特異性結合分子和所述載體基質的所述至少兩種組分從不同動物獲得。
2.根據權利要求1所述的組合物，其中所述載體基質包含選自由以下組成的組，獲自、分離自或來源於以下的基質:血清、血漿、初乳、乳、唾液、淋巴液、黏膜液，和淚液。
3.根據權利要求1或權利要求2所述的組合物，其中所述載體基質的所述至少兩種組分選自由以下組成的組:溶菌酶、磷脂酶、防衛素、調理素、非特異性免疫球蛋白、富含脯氨酸的多肽(PRP)、補體系統組分、β_溶素、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、細胞因子、白介素、趨化因子、幹擾素、TNF-α、纖連蛋白、白細胞、白血細胞、吞噬細胞、巨噬細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞、多形核細胞、樹突狀細胞、肥大細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、自然殺傷細胞(NK)、淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK)、彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、髓過氧化物酶、NADPH氧化酶，及它們的組合。
4.根據權利要求1至3中的任一項所述的組合物，其中所述抗原包含病原體、病原體相關毒素、病原體相關粘附元件、不期望的菌株，或它們的組合。
5.根據權利要求4所述的組合物，其中所述病原體包含人或獸的引起胃腸炎的腸或胃腸道病原體。
6.根據權利要求4所 述的組合物，其中所述病原體選自由以下組成的組:空腸彎曲桿菌、沙門氏菌屬、腸道血清型傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、類志賀鄰單胞菌、大腸埃希氏菌、腸致病性大腸埃希氏菌、產腸毒素大腸埃希氏菌、腸聚集性大腸埃希氏菌、腸侵襲性大腸埃希氏菌、出血性大腸埃希氏菌、艱難梭菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、霍亂弧菌01、弧菌0139、非-01弧菌、副溶血性弧菌、嗜水氣單胞菌、產氣莢膜梭菌、腸肝螺桿菌、幽門螺桿菌、金黃色葡萄球菌、克雷伯氏菌屬、加德納菌屬某些種、淋病奈瑟氏菌、沙眼衣原體、支原體屬某些種、空腸彎曲桿菌、陰道滴蟲、I型皰疹病毒、2型皰疹病毒、白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和克柔念珠菌、A組鏈球菌屬某些種、輪狀病毒、冠狀病毒、諾羅病毒、杯狀病毒、腸道腺病毒、巨細胞病毒、星狀病毒、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟氏菌、帶狀皰疹病毒、鐮刀菌屬某些種，及棘阿米巴屬某些種。
7.根據權利要求4所述的組合物，其中所述病原體相關毒素包含內毒素或外毒素。
8.根據權利要求4所述的組合物，其中所述病原體相關粘附元件包含粘附素、鈣粘素、纖毛、傘毛、病毒粘附結構，或它們的組合。
9.根據權利要求1至8中的任一項所述的組合物，其中所述組合物包含對於治療或預防未分化腹瀉、旅行者腹瀉、輪狀病毒腹瀉、毒素介導的腹瀉、霍亂、艱難梭菌感染、痢疾、傷寒熱、消化性潰瘍有效，或對於管理胃腸道菌群有效的量。
10.根據權利要求9所述的組合物，其中所述未分化腹瀉是小兒未分化腹瀉。
11.根據權利要求1至8中的任一項所述的組合物，其中所述組合物包含對於賦予受試者被動免疫力有效的量。
12.根據權利要求1至11中的任一項所述的組合物，其中所述特異性結合分子為抗體或其片段。
13.根據權利要求12所述的組合物，其中所述抗體或其片段選自多克隆抗體或單克隆抗體。
14.根據權利要求12所述的組合物，其中所述抗體為IgG。
15.根據權利要求12所述的組合物，其中所述抗體為IgY。
16.根據權利要求12至15中的任一項所述的組合物，其中所述抗體為多克隆抗體。
17.根據權利要求1至16中的任一項所述的組合物，其中所述載體基質為初乳。
18.根據權利要求17所述的組合物，其中所述初乳為牛初乳。
19.根據權利要求1至18中的任一項所述的組合物，其中所述特異性結合分子為固體形式。
20.根據權利要求19所述的組合物，其中所述特異性結合分子為晶狀。
21.根據權利要求1至20中的任一項所述的組合物，其中所述載體基質為固體形式。
22.根據權利要求1至20中的任一項所述的組合物，其進一步包含藥學上可接受的稀釋劑、粘合劑、賦形劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、潤溼劑，或吸收劑。
23.—種製備根據權利要求1至22中的任一項所述的組合物的方法，其包括 (a)從動物獲取至少一種與特異性抗原結合的特異性結合分子或其片段，其中所述特異性結合分子選自免疫球蛋白、抗體、肽、細胞受體、可變淋巴細胞受體、轉移因子，及它們的混合物； (b)獲取至少一種載體基質，其包含至少兩種從非人動物獲得的選自由以下組成的組的組分:酶、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、非特異性免疫球蛋白、細胞因子、白血細胞、補體組分、幹擾素，和纖連蛋白； (c)製備所述載體基質的固體形式及所述特異性結合分子或其片段的固體形式；以及 (d)將所述載體基質的所述固體形式與所述特異性結合分子或其片段的所述固體形式混合。
24.根據權利要求23所述的方法，其中所述特異性結合分子或其片段含有非新生人有效量的所述特異性結合分子或其片段。
25.根據權利要求23或24所述的方法，其中所述基質包含選自由以下組成的組的基質:初乳、乳、血清、血漿、唾液、淋巴液、黏膜液，和淚液。
26.根據權利要求23至25中的任一項所述的方法，其中所述載體基質的所述至少兩種組分選自由以下組成的組:溶菌酶、磷脂酶、防衛素、調理素、非特異性免疫球蛋白、富含脯氨酸的多肽(PRP)、補體系統組分、β_溶素、乳鐵蛋白、轉鐵蛋白、細胞因子、白介素、趨化因子、幹擾素、TNF-α、纖連蛋白、白細胞、白血細胞、吞噬細胞、巨噬細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞、多形核細胞、樹突狀細胞、肥大細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、自然殺傷細胞(NK)、淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK)、彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、髓過氧化物酶、NADPH氧化酶，及它們的組合。
27.根據權利要求1至22中的任一項所述的組合物，其用於管理哺乳動物中的微生物的病原菌株或不期望菌株。
28.根據權利要求27所述的組合物，其中所述哺乳動物為人。
29.根據權利要求28所述的組合物，其中所述人不是新生兒。
30.根據權利要求27至29中的任一項所述的組合物，其中所述病原微生物選自由以下組成的組:空腸彎曲桿菌、沙門氏菌屬、腸道血清型傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、類志賀鄰單胞菌、大腸埃希氏菌、腸致病性大腸埃希氏菌、產腸毒素大腸埃希氏菌、腸聚集性大腸埃希氏菌、腸侵襲性大腸埃希氏菌、出血性大腸埃希氏菌、艱難梭菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌、霍亂弧菌01、弧菌0139、非-01弧菌、副溶血性弧菌、嗜水氣單胞菌、產氣莢膜梭菌、腸肝螺桿菌、幽門螺桿菌、金黃色葡萄球菌、克雷伯氏菌屬、加德納菌屬某些種、淋病奈瑟氏菌、沙眼衣原體、支原體屬某些種、空腸彎曲桿菌、陰道滴蟲、I型皰疹病毒、2型皰疹病毒、白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和克柔念珠菌、A組鏈球菌屬某些種、輪狀病毒、冠狀病毒、諾羅病毒、杯狀病毒、腸道腺病毒、巨細胞病毒、星狀病毒、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟氏菌、帶狀皰疹病毒、鐮刀菌屬某些種，及棘阿米巴屬某些種。
31.根據權利要求1至22中的任一項所述的組合物，其可用作用於施用給有相應需要的受試者的營養組合物，其中所述受試者患有導致特殊飲食需要的疾病，其中所述疾病選自由以下組成的組:小兒 腹瀉、克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎。
【文檔編號】A61K39/395GK103533958SQ201180065699
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2011年11月21日 優先權日:2010年11月23日
【發明者】蒂莫西·W·斯塔茲爾 申請人:潘瑟裡克公司