一種治療、預防心腦血管疾病的水溶性紅花提取物及其口服製劑的製作方法

2023-09-17 22:27:25 5

專利名稱：一種治療、預防心腦血管疾病的水溶性紅花提取物及其口服製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種預防、治療心腦血管疾病的水溶性紅花提取物及其口服製劑。
腦血管疾病是危害人類生命與健康的常見病和多發病，具有發病率高、致殘率高、死亡率高和復發率高的特點，是中老年人致死、致殘的主要疾病。在人類各種疾病死因的排列順序中，腦血管病一直位於前列，成為人類死亡的主要原因之一。近年來，隨著我國人們生活水平的不斷提高，老齡人口的增多，腦血管疾病發病率呈逐年上升趨勢。
紅花葯用已有上千年的歷史。《綱目》記載，紅花具「活血，潤燥」，《新修本草》記載，紅花能「治口噤不語，血結」，《藥性考》記載，紅花能「生新破瘀」，治「口噤風癱」。
我國自70年代以來對紅花的化學成分進行了廣泛的研究，其中主要有黃酮類、木脂素類、多炔類等，多數研究證明，紅花的主要有效成分存在於其水溶性部位，為多種水溶性黃酮類化合物的混合物，具有活血化瘀的生理活性。近年來，國內學者對紅花水溶性部位的藥理作用進行了深入研究，發現其在擴冠、降壓、抗血栓、抗凝血、活血化瘀、耐缺氧、免疫抑制等方面都有明顯的藥理功效。紅花水溶性部位對ADP誘導的血小板聚集有明顯的抑制作用及解聚作用，對大鼠有較好的抗凝血作用，並隨著劑量的增加而增強，紅花水溶性部位對血栓的形成有非常顯著的抑制作用；紅花水溶性部位可影響腦缺血性缺氧後的喘息延續時間。大量的藥理實驗證明，紅花水溶性部位是紅花治療腦血栓形成及其後遺症的重要物質基礎之一。
原料藥材紅花Carthamus tinctorius L.收載於《中華人民共和國藥典二000年版》(一部)。現代臨床上，紅花單味製劑「紅花注射液」收載於國家藥品標準WS3-B-3825-98，用於治療閉塞性腦血管疾病，冠心病，脈管炎等，經多年的臨床應用，其療效肯定，它們有用50％紅花注射液15ml(含生藥75g)加入10％葡萄糖500ml中靜脈滴注；10％紅花注射液2ml加10％葡萄糖2ml混合注射用於治療缺血性腦血管疾病、治療腦動脈硬化症，但該品種為傳統的中藥注射劑，多為粗提物，基礎物質不明確，且成分複雜，缺乏對其質量進行有效控制的方法，由於該製劑為溶液形式，也難以確保其中的有效成分的穩定性。
國內雖然也公開了一些有關紅花提取物專利，但多是一些成分不明確的粗提物，在用藥方面仍然存在著同樣上述的技術缺陷。
從傳統紅花中藥研製開發出療效確切，毒副作用小，質量可控，使用方便的紅花中藥劑型，具有可行性和必要性。
本發明提供一種含有水合紅花黃色素A和水合紅花光色素B的水溶性紅花提取物，其中水合紅花黃色素A和水合紅花黃色素B在該紅花提取物中的重量百分含量為50％-100％，優選重量百分含量範圍為65％-100％；其中，在該紅花提取物中水合紅花黃色素A和水合紅花黃色素B之間的比例為1∶(0.1-2)。
我們在單味紅花臨床應用的基礎上，對紅花的有效部位水溶性成分進行了深入的研究，從乾燥花中提取到了含有水合紅花黃色素A和水合紅花黃色素B水溶性紅花提取物。
本發明提取物可以通過常規的提取方法獲得，也可採用本發明提取方法，但優選採用本發明提取方法獲得，其中本發明提取方法為取乾燥紅花60-100℃下用水提取2-4次，用水量為10-30倍，每次提取的時間為30-90分鐘，合併濾液，濾液減壓濃縮至密度為1.00-1.25，加乙醇至醇濃度為60％-90％，於4℃下沉澱24小時，過濾；濾液於60℃減壓回收乙醇，加至10倍水稀釋後上處理好的弱極性大孔吸附樹脂，上樣量(相當於生藥量)與樹脂用量的比例為1∶(0.5-2)(w/v)，用20％-50％乙醇洗2-5個柱體積，收集洗脫液。洗脫液上樣於處理好的聚醯胺柱，上樣量相當於生藥量與樹脂用量的比例為(2-4)∶1(w/v)，先用20％-50％乙醇洗脫2-4個柱體積，棄去；繼續用80％-95％乙醇溶液洗脫3-5個柱體積，收集洗脫液於60℃減壓回收乙醇，乾燥即得。
本方法最佳為取乾燥紅花，加水在80℃下提取3次，第一次加20倍水下提取60分鐘，第二次加1 5倍水提取60分鐘，第三次加1 5倍水提取60分鐘，合併提取液；提取液濾過，濾液減壓濃縮至密度為1.05(80℃)，加乙醇至醇濃度為80％，於4℃下沉澱24小時，濾過；濾液於60℃減壓回收乙醇，加至10倍水稀釋後上處理好的DM-130大孔吸附樹脂，上樣量(相當於生藥量)與樹脂用量的比例為1∶1(w/v)，用30％乙醇洗脫3個柱體積，收集洗脫液。洗脫液上樣於處理好的聚醯胺柱，上樣量相當於生藥量與樹脂用量的比例為2.8∶1(w/v)，先用30％乙醇洗脫3個柱體積，棄去；繼續用95％乙醇溶液洗脫4個柱體積，收集洗脫液於60℃減壓回收乙醇，乾燥即得。
將有效劑量的本發明提取物和藥學上接受的口服藥物載體可做成片劑、膠囊、顆粒劑，其中優選為膠囊劑和顆粒劑。
做成膠囊時，本發明紅花提取物在膠囊藥物中的重量百分比應為2％-80％，其餘為填充劑、70％乙醇溶液和適量橘子香精。
本發明膠囊劑藥物具體的組方和製備方法為紅花提取物50g、澱粉100g、糊精50g、90％乙醇溶液適量、微粉矽膠適量。
稱取處方量的紅花提取物、澱粉、糊精過80目篩混勻兩次，加入90％乙醇溶液混合制軟材，軟材以手握成團，用手指按壓裂開為佳，過24目篩擠壓制溼顆粒，50℃鼓風乾燥箱中乾燥，顆粒近幹時取出過20目篩整粒，繼續烘製一段時間至幹，總共約烘製一小時左右，將烘乾的顆粒稱重，按0.8％(W/W)加入微粉矽膠，先與顆粒中的細粉混合均勻，再加入顆粒中混合均勻，顆粒填裝入膠囊即得。
做成顆粒劑時，本發明提取物在顆粒劑藥物中的重量百分含量為2％-68％，其餘為填充劑、適量90％乙醇溶液和適量微粉矽膠。
本發明顆粒劑藥物的具體組方和製備方法為紅花提取物100g、蔗糖1000g、乳糖400g、檸檬酸7.5g、70％乙醇溶液適量、橘子香精適量。
蔗糖粉碎過80目篩，將蔗糖和乳糖放入60℃烘箱中乾燥3小時，稱取處方量的蔗糖和乳糖過80目篩混勻兩次，然後按等量倍增法加入紅花提取物，混合均勻，檸檬酸溶於部分70％乙醇溶液，加入固體粉末中制軟材，視軟材的乾濕程度再酌加適量70％乙醇製成適宜軟材，過16目篩擠壓制溼顆粒，50℃鼓風乾燥箱中乾燥，顆粒近幹時取出過14目篩整粒，繼續烘製一段時間至幹，總共約烘製一小時左右，顆粒的分級將烘乾的顆粒分別過一號篩和四號篩，棄去不能通過一號篩的粗顆粒和通過四號篩的細粉，噴灑香精顆粒置於包衣鍋內滾動，橘子油香精溶於無水乙醇中(1％)，通過噴槍將其噴入。然後將顆粒放入密閉容器中，密封12小時，分裝、即得。
藥理毒理研究結果表明，本發明提取物口服給藥和已有紅花葯物提取物相比體內吸收良好，可明顯減少大腦中動脈栓塞模型腦缺血區壞死面積，抑制體外血栓的形成，延長凝血時間；毒理實驗表明，紅花提取物療效顯著、毒副作用小；另外本發明基礎物質明確、有效成分質量穩定可控、而且服用方便、吸收好。
紅花水溶性提取物的製備實施例1取乾燥紅花，加水在80℃下提取3次，第一次加20倍水下提取60分鐘，第二次加15倍水提取60分鐘，第三次加15倍水提取60分鐘，合併提取液；提取液濾過，濾液減壓濃縮至密度為1.05(80℃)，加乙醇至醇濃度為80％，於4℃下沉澱24小時，濾過；濾液於60℃減壓回收乙醇，加至10倍水稀釋後上處理好的DM-130大孔吸附樹脂，上樣量(相當於生藥量)與樹脂用量的比例為1∶1(w/v)，用30％乙醇洗脫3個柱體積，收集洗脫液。洗脫液上樣於處理好的聚醯胺柱，上樣量相當於生藥量與樹脂用量的比例為2.8∶1(w/v)，先用30％乙醇洗脫3個柱體積，棄去；繼續用95％乙醇溶液洗脫4個柱體積，收集洗脫液於60℃減壓回收乙醇，乾燥即得，測定。
實施例2取乾燥紅花，加水在70℃下提取2次，第一次加20倍水下提取60分鐘，第二次加15倍水提取60分鐘，第三次加15倍水提取60分鐘，合併提取液；提取液濾過，濾液減壓濃縮至密度為1.00(80℃)，加乙醇至醇濃度為60％，於4℃下沉澱24小時，濾過；濾液於60℃減壓回收乙醇，加至10倍水稀釋後上處理好的DM-130大孔吸附樹脂，上樣量(相當於生藥量)與樹脂用量的比例為1∶0.8(w/v)，用25％乙醇洗脫2個柱體積，收集洗脫液。洗脫液上樣於處理好的聚醯胺柱，上樣量相當於生藥量與樹脂用量的比例為2∶1(w/v)，先用25％乙醇洗脫2個柱體積，棄去；繼續用80％乙醇溶液洗脫3個柱體積，收集洗脫液於60℃減壓回收乙醇，乾燥即得，測定。
實施例3取乾燥紅花，加水在90℃下提取4次，第一次加20倍水下提取60分鐘，第二次加15倍水提取60分鐘，第三次加15倍水提取60分鐘，合併提取液；提取液濾過，濾液減壓濃縮至密度為1.20(80℃)，加乙醇至醇濃度為90％，於4℃下沉澱24小時，濾過；濾液於60℃減壓回收乙醇，加至10倍水稀釋後上處理好的DM-130大孔吸附樹脂，上樣量(相當於生藥量)與樹脂用量的比例為1∶2(w/v)，用40％乙醇洗脫4個柱體積，收集洗脫液。洗脫液上樣於處理好的聚醯胺柱，上樣量相當於生藥量與樹脂用量的比例為4∶1(w/v)，先用30％乙醇洗脫4個柱體積，棄去；繼續用95％乙醇溶液洗脫5個柱體積，收集洗脫液於60℃減壓回收乙醇，乾燥即得，測定。
口服製劑的製備實施例4 顆粒劑的製備紅花提取物100g、蔗糖1000g、乳糖400g、檸檬酸7.5g、70％乙醇溶液適、橘子香精適量，蔗糖粉碎過80目篩，將蔗糖和乳糖放入60℃烘箱中乾燥3小時，稱取處方量的蔗糖和乳糖過80目篩混勻兩次，然後按等量倍增法加入紅花提取物，混合均勻，檸檬酸溶於部分70％乙醇溶液，加入固體粉末中制軟材，視軟材的乾濕程度再酌加適量70％乙醇製成適宜軟材，過16目篩擠壓制溼顆粒，50℃鼓風乾燥箱中乾燥，顆粒近幹時取出過14目篩整粒，繼續烘製一段時間至幹，總共約烘製一小時左右，顆粒的分級將烘乾的顆粒分別過一號篩和四號篩，棄去不能通過一號篩的粗顆粒和通過四號篩的細粉，噴灑香精顆粒置於包衣鍋內滾動，橘子油香精溶於無水乙醇中(1％)，通過噴槍將其噴入。然後將顆粒放入密閉容器中，密封12小時，分裝、即得。
實施例5 膠囊劑的製備紅花提取物50g、澱粉100g、糊精50g、90％乙醇溶液適量、微粉矽膠適量；稱取處方量的紅花提取物、澱粉、糊精過80目篩混勻兩次，加入90％乙醇溶液混合制軟材，軟材以手握成團，用手指按壓裂開為佳，過24目篩擠壓制溼顆粒，50℃鼓風乾燥箱中乾燥，顆粒近幹時取出過20目篩整粒，繼續烘製一段時間至幹，總共約烘製一小時左右，將烘乾的顆粒稱重，按0.8％(W/W)加入微粉矽膠，先與顆粒中的細粉混合均勻，再加入顆粒中混合均勻，顆粒填裝入膠囊即得。
實驗例1.紅花提取物膠囊對大鼠局部腦缺血損傷的影響1.1材料受試樣品紅花提取物膠囊，按實施例5製備。規格200mg(含紅花提取物原料50mg)/粒，臨用前用生理鹽水配製成所需濃度的溶液。
陽性對照藥尼莫地平片，中日合資河北東龍藥業有限公司，規格25mg/片，批號000703，批准文號冀衛藥準字(1995)第040128號，用前以生理鹽水配成1.8mg/ml的混懸液。
陽性對照藥腦得生咀嚼片，山東綠葉製藥股份有限公司，規格1.1g/片，批號20010426，批准文號國藥準字Z20000073，用前以生理鹽水配成125mg/ml的混懸液。紅四氮唑美國Sigma公司產品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。數位相機Olympus公司實驗動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東綠葉製藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200106005號。
1.2方法與結果動物隨機分為假手術組(i.g.NS)，模型對照組(i.g.生理鹽水)，尼莫地平組(i.g.Nim，12mg/kg)，腦得生組(i.g.NDS，1g/kg)，SF小劑量組(i.g.SF，10mg/kg)，SF中劑量組(i.g.SF，20mg/kg)，SF大劑量組(i.g.SF，40mg/kg)，每組10隻。禁食12小時後，各組動物分別灌胃相應藥物，給藥體積1ml/100g。2小時後，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離左側頸總動脈，夾閉頸內、頸總動脈，頸外動脈近心端及遠心端結紮，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內動脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長度5.0cm)由頸外動脈插入至顱內，遇輕微阻力時停止，插入深度約為2cm。結紮頸外動脈開口，並打開頸總動脈動脈夾，消毒縫合傷口，造成左側大腦中動脈缺血模型；假手術組僅進行左側頸總動脈、頸內動脈、頸外動脈的分離(以上實驗均在23℃～25℃進行)。24小時後按文獻方法及標準觀察並記錄大鼠的行為障礙(1)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計為0分，如手術對側前肢出現腕屈曲計為1分，肘屈曲計為2分，肩內旋計為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內旋者，計為4分。(2)將動物置於平地面上，分別推雙肩向對側移動，檢查阻力。如雙側阻力對等且有力，計為0分，如向手術對側推動時阻力下降者，根據下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計為1，2和3分。(3)將動物雙前肢置一金屬網上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計為0分。同樣根據手術對側肌張力下降程度不同計為1，2和3分。(4)動物有不停地向一側轉圈者，計為1分。根據標準評分，滿分為11分，分數越高，表示動物行為障礙越嚴重。行為評分後處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦幹，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經染色後呈紅色，梗塞組織呈白色，染色後照相，用中國航空航天大學病理圖像分析軟體求梗塞面積比。數據用X±S表示，以組間t檢驗進行統計學處理。
結果顯示，缺血24小時後，大鼠表現出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現明顯的灶狀缺血區，達到全腦的25％左右；給予不同劑量的SF，動物行為障礙有不同程度的減輕，大鼠腦缺血區也有明顯好轉，且呈劑量依賴性(表1)。
表1 花提取物膠囊對大鼠局部腦缺血損傷的影響(n＝10，X±S)組別 行為障礙 缺血面積(％)假手術組 0 0模型對照組 10.10±1.37 24.26±4.13NDS組 7.30±2.67**19.90±3.02*Nim組 6.90±2.33**13.09±7.11**SF大劑量組 7.20±1.93**12.27±4.73**SF中劑量組 7.50±3.03*18.41±2.84*SF小劑量組 8.80±2.44△21.06±3.20△與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，△P＞0.05.1.3結論紅花提取物膠囊可明顯改善腦缺血大鼠的行為障礙，縮小缺血區範圍，對缺血性腦損傷有明顯的保護作用。
試驗例2.紅花提取物膠囊對大鼠體內血栓形成的影響2.1 材料受試樣品紅花提取物膠囊，按本發明實施例5製備。規格200mg(含紅花提取物原料50mg)/粒，臨用前用生理鹽水配製成所需濃度的溶液。
陽性對照藥腦得生咀嚼片，山東綠葉製藥股份有限公司，1.1g/片，批號20010426，批准文號國藥準字Z20000073，用前以生理鹽水配成125mg/ml的混懸液。
普通級Wistar大鼠，雄性，體重230g～250g，山東綠葉製藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200106005號。
2.2 方法與結果2.2.1 對動—靜脈旁路血栓形成的影響[3]動物隨機分為空白組(i.g.生理鹽水)，腦得生組(i.g.1g/kg)，SF小劑量組(i.g.SF 10mg/kg)，SF中劑量組(i.g.SF 20mg/kg)，SF大劑量組(i.g.SF 40mg/kg)，每組10隻。禁食12小時後，各組動物分別灌胃相應藥物，2小時後，水合氯醛麻醉(350mg/kg，i.p.)，分離右側頸總動脈及左頸外靜脈，在聚乙烯管中放入一根長5cm已稱重的七號絲線。以含肝素鈉(50U/ml)的生理鹽水溶液充滿聚乙烯管，聚乙烯管的一端插入左頸外靜脈，另一端插入右頸總動脈。打開夾閉血管的動脈夾，使血流從右總頸動脈流經聚乙烯管後，返回左頸外靜脈。開放血流15min後迅速取出絲線稱重，減去絲線重量即得血栓溼重。數據用X±S表示，組間t檢驗進行統計學處理。結果顯示，NDS組、SF大、中劑量組血栓重量明顯低於空白對照組(表2)。
表2 紅花提取物膠囊對大鼠動—靜脈旁路血栓形成的影響(X±S)組別 血栓溼重 抑制率(％)空白對照組 26.09±4.21NDS組15.43±5.15**40.86SF大劑量組 13.01±6.81**50.13SF中劑量組 16.25±3.91**37.72SF小劑量組 20.51±9.79△21.38與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；△P＞0.05。
2.2.2對大鼠靜脈血栓形成的影響動物隨機分為空白組(i.g.生理鹽水)，腦得生組(i.g.NDS 1g/kg)，SF小劑量組(i.g.SF 10mg/kg)，SF中劑量組(i.g.SF 20mg/kg)，SF大劑量組(i.g.SF40mg/kg)，每組10隻。禁食12小時後，各組動物分別灌胃相應藥物，2小時後，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，開腹分離下腔靜脈，於左腎靜脈下方用粗絲線結紮下腔靜脈，縫合腹部。6小時後重新開腹，在結紮處下方2cm處夾閉血管，剖開管腔，取出血栓，稱重。數據用X±S表示，組間t檢驗進行統計學處理。結果顯示NDS組、SF大、中劑量組血栓重量明顯低於空白對照組(表3)。
表3 紅花提取物膠囊對大鼠靜脈血栓形成的影響(X±S)組別血栓溼重抑制率(％)
空白對照組 29.91±17.16NDS組 14.01±5.76*53.16SF大劑量組 9.17±6.65**71.48SF中劑量組 15.77±4.26*47.29SF小劑量組 23.36±11.20△21.90與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；△P＞0.05。
2.3 結論紅花提取物膠囊呈劑量依賴性抑制大鼠體內動—靜脈旁路血栓及靜脈血栓的形成。
試驗例3.紅花提取物膠囊對小鼠凝血時間的影響3.1材料受試樣品紅花提取物膠囊，山東省天然藥物工程技術研究中心提供，為橙黃色的粉末，易溶於水。批號20010329，規格200mg(含紅花提取物原料50mg)/粒，臨用前用生理鹽水配製成所需濃度的溶液。
陽性對照藥腦得生咀嚼片，山東綠葉製藥股份有限公司，1.1g/片，批號20010426，批准文號國藥準字Z20000073；用前以生理鹽水配成100mg/ml的混懸液清潔級級昆明種小鼠，雄性，體重18.g～22g，山東綠葉製藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200106003號。
3.2方法與結果昆明種小鼠60隻，隨機分為空白組(i.g.生理鹽水)，腦得生組(2g/kg)，SF小劑量組(i.g.SF 20mg/kg)，SF中劑量組(i.g.SF 40mg/kg)，SF大劑量組(i.g.SF 80mg/kg)，每組12隻。禁食12小時後，各組動物分別灌胃相應藥物，給藥體積2ml/100g；2小時後，眼眶取血，用玻片法測定凝血時間。數據用X±S表示，組間t檢驗進行統計學處理。
結果顯示紅花提取物膠囊大、中劑量組凝血時間明顯長於空白對照組(表4)。
表4 紅花提取物膠囊對小鼠凝血時間的影響(X±S)組別 凝血時間空白對照組 67.00±21.21NDS組 89.17±17.43**SF大劑量組 112.75±42.03**SF中劑量組 94.08±35.68*SF小劑量組 81.92±24.84△
與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；△P＞0.05。
3.3結論紅花提取物膠囊明顯延長小鼠凝血時間，且呈劑量依賴性。
試驗例4.紅花提取物膠囊對大鼠血液流變性的影響4.1材料受試樣品紅花提取物膠囊，山東省天然藥物工程技術研究中心提供，為橙黃色的粉末，易溶於水。批號20010329，規格200mg(含紅花提取物原料50mg)/粒，臨用前用生理鹽水配製成所需濃度的溶液。
陽性對照藥腦得生咀嚼片，山東綠葉製藥股份有限公司，1.1g/片，批號20010426，批准文號國藥準字Z20000073，用前以生理鹽水配成125mg/ml的混懸液。
普通級wistar大鼠，雄性，體重350～430g，山東綠葉製藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200106005號。LBY-N6A血液流變學測試儀北京普利生公司產品。
4.2方法與結果動物隨機分為空白組(i.g.生理鹽水)，腦得生組(i.g.NDS 1g/kg)，SF小劑量組(i.g.SF 10mg/kg)，SF中劑量組(i.g.SF 20mg/kg)，SF大劑量組(i.g.SF40mg/kg)，每組10隻。禁食12小時後，各組動物分別灌胃相應藥物，2小時後，水合氯醛麻醉(350mg/kg，i.p.)心臟採血5ml/只，以0.5％肝素抗凝，用血液流變學測試儀測定全血粘度、血漿粘度等指標。數據用X±S表示，組間t檢驗進行統計學處理。
結果顯示，紅花提取物膠囊大、中劑量均可降低大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積(表5)。
表5 紅花提取物膠囊對大鼠血液流變學的影響(X±S)全血粘度(mPa.s)血漿粘度 紅細胞壓積組別低切變率 中切變率高切變率 (mPa.s) (％)空白對照組5.19±0.47 6.38±0.59 13.45±1.05 1.60±0.20 0.53±0.05腦得生組 4.33±0.20**5.31±0.26**11.52±0.53**1.43±0.03*0.47±0.06*SF大劑量組4.31±0.46**5.27±0.58**11.45±1.09**1.46±0.04*0.46±0.04*SF中劑量組4.55±0.57*5.58±0.73*12.10±1.47*1.40±0.20*0.53±0.06△SF小劑量組4.93±0.38△6.05±0.47△12.90±0.80△1.46±0.15△0.52±0.05△與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，△P＞0.05。
結論紅花提取物膠囊可降低大鼠全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積。
試驗例5、1材料藥物紅花提取物膠囊，按實施例5製備，規格200mg(含紅花提取物50mg)/粒。臨用前用生理鹽水配製成所需濃度的溶液。
動物清潔級昆明種小鼠，雄性，體重18.g～22g，雌雄各半，山東綠葉製藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號魯動質字200106003號。Wistar大鼠，170-200g，雌雄各半，由山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號魯動字200106005號。
儀器張力傳感器(JZ100型)、壓力傳感器(YP200型)均為河北高碑店新航機電設備有限公司生產。PowerLab多導生理記錄儀，澳大利亞ADI-Instrument公司生產。單道心電圖機，FX-2111型，北京福田電子醫療儀器有限公司。
2方法與結果2.1紅花提取物膠囊對小鼠一般行為的影響取小鼠40隻，按體重隨機分為4組，每組10隻，雌雄各半，空白對照組(給予生理鹽水)，紅花提取物膠囊高(160mg/kg)、中(80mg/kg)、低(40mg/kg)劑量組，灌胃給藥。給藥容積為0.4ml/20g體重，給藥後立即至2小時觀察小鼠的一般行為改變[1]。
結果顯示紅花提取物膠囊高、中、低3個劑量對小鼠耳殼血管及毛色無明顯影響，無瞳孔擴大和縮小，無豎毛，無眼裂增大或縮小現象，步態、肌力正常，無翻正反射消失現象，說明紅花提取物膠囊對小鼠一般行為無影響。
2.2 紅花提取物膠囊對小鼠機能協調的影響按文獻[1]法稍作改良，將小鼠置於與水平面成70°角的光滑板上，對小鼠進行篩選，取不跌落小鼠40隻，按體重隨機分為4組，分組及給藥同上。灌胃給藥，分別於給藥後30min、60min、90min、120min、150min、180min觀察各組小鼠的跌落率(以連續放3次，跌落2次者為陽性)，並與陰性對照組進行x2檢驗比較(表6)。
表6 紅花提取物膠囊對小鼠機能協調的影響(n＝10)組別 劑量0min給藥後不同時間跌落率(％)
(mg/kg) 30min 60min 90min 120min 150min 180min生理鹽水 等容量 0 0 0 0 0 0 0氯丙嗪10 0 80**90**100**70**70**40160 0 0 0 0 0 0 0紅花 80 0 0 0 0 0 0 0提取物40 0 0 0 0 0 0 0*P＜0.05，**P＜0.01，與生理鹽水組比較結果顯示氯丙嗪組小鼠在30min-150min之間有明顯的跌落，紅花提取物膠囊高、中、低3個劑量組小鼠跌落率均為零，說明紅花提取物膠囊對小鼠機能協調無影響。
2.3紅花提取物膠囊對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉的協同作用取小鼠40隻，按體重隨機分為4組，雌雄各半，陰性對照組(給予等容量生理鹽水)，紅花提取物膠囊高(160mg/kg)、中(80mg/kg)、低(40mg/kg)三個劑量組，灌胃給藥後2小時腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg，以翻正反射消失為睡眠指標，觀察各組在注射戊巴比妥鈉30min內的睡眠鼠數(翻正反射消失達1min以上者為陽性)，並與陰性對照組進行X2檢驗(表7)。
表7 紅花提取物膠囊對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉的協同作用(n＝10)組別劑量(mg/kg)睡眠鼠數(只)生理鹽水-- 01600紅花提取物膠囊 80 040 0結果顯示紅花提取物膠囊高、中、低3個劑量組的小鼠未出現睡眠現象，與陰性對照組相比較無顯著差異；說明紅花提取物膠囊與小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉無協同作用。
2.4 紅花提取物對麻醉大鼠心血管系統及呼吸系統的影響取大鼠40隻，雌雄各半，隨機分為4組，每組10隻，分別為空白對照組(給予生理鹽水)、紅花提取物高(80mg/kg)、中(40mg/kg)、低(20mg/kg)3個劑量組。藥物用生理鹽水溶解，給藥體積均為1ml/kg。動物稱重，灌胃，腹腔注射20％烏拉坦麻醉(1.2g/kg)。分離一側頸總動脈，作動脈插管，將動脈插管的另一端連接到裝有三通閥的壓力傳感器上，壓力信號經傳感器輸入PowerLab多導生理記錄儀。將針形電極分別插入動物的右前肢、左下肢及右下肢皮下，將心電信號輸入FX-2111心電圖機。在劍突穿線並連於張力傳感器，將胸廓張力信號通過傳感器輸入PowerLab多導生理記錄儀。分別於給藥後10min、20min、30min、60min、120、180min記錄麻醉大鼠的平均動脈壓(MAP)、收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)、P-P(s)、P-R(s)、QRS(s)、Q-T(s)、T、呼吸頻率和呼吸幅度。實驗數據以X±S表示，各組與空白組進行組間T檢驗。
結果顯示與空白組相比，紅花提取物膠囊(80mg/kg，40mg/kg，20mg/kg)對麻醉大鼠平均動脈壓、收縮壓和舒張壓、心率、心電以及呼吸頻率和呼吸幅度均無明顯影響；說明紅花提取物膠囊對麻醉大鼠心血管系統及呼吸系統無影響；3試驗結論紅花提取物膠囊160mg/kg，80mg/kg，40mg/kg(相當的原料藥量)灌胃給藥對小鼠的一般行為和協調運動無明顯影響，對小鼠腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉無協同作用，表明該藥高、中、低3個劑量對小鼠精神神經系統無明顯影響。紅花提取物膠囊80mg/kg，40mg/kg，20mg/kg灌胃給藥對麻醉大鼠心血管、和呼吸系統無明顯影響。
權利要求
1.一種治療心腦血管疾病的水溶性紅花提取物，其特徵為該提取物中含有重量百分含量為50％-100％紅花黃色素A和紅花黃色素B。
2.據權利要書1所述的紅花提取物，其特徵為該提取物中含有重量百分含量為65％-100％紅花黃色素A和紅花黃色素B。
3.根據權利要書1或2所述的紅花提取物，其特徵為該提物中紅花黃色素A紅花黃色素B＝1∶0.1-2。
4.根據權利要求1所述的紅花提取物取乾燥紅花60-100℃下提取2-4次，每次提取的時間為30-90分鐘，合併濾液，濾液減壓濃縮至密度為1.00-1.25，加乙醇至醇濃度為60％-90％，於4℃下沉澱24小時，濾過；濾液於60℃減壓回收乙醇，加至10倍水稀釋後上處理好的弱極性大孔吸附樹脂，上樣量(相當於生藥量)與樹脂用量的比例為1∶(0.5-2)(w/v)，用20％-50％乙醇洗2-5個柱體積，收集洗脫液。洗脫液上樣於處理好的聚醯胺柱，上樣量相當於生藥量與樹脂用量的比例為(2-4)∶1(w/v)，先用20％-50％乙醇洗脫2-4個柱體積，棄去；繼續用80％-95％乙醇溶液洗脫3-5個柱體積，收集洗脫液於60℃減壓回收乙醇，乾燥即得
5.根據權利要求4所述的紅花提取物，其特徵為該提取物通過以下方法獲得取乾燥紅花，加水在80℃下提取3次，第一次加20倍水下提取60分鐘，第二次加15倍水提取60分鐘，第三次加15倍水提取60分鐘，合併提取液；提取液濾過，濾液減壓濃縮至密度為1.05(80℃)，加乙醇至醇濃度為80％，於4℃下沉澱24小時，濾過；濾液於60℃減壓回收乙醇，加至10倍水稀釋後上處理好的DM-130大孔吸附樹脂，上樣量(相當於生藥量)與樹脂用量的比例為1∶1(w/v)，用30％乙醇洗脫3個柱體積，收集洗脫液。洗脫液上樣於處理好的聚醯胺柱，上樣量相當於生藥量與樹脂用量的比例為2.8∶1(w/v)，先用30％乙醇洗脫3個柱體積，棄去；繼續用95％乙醇溶液洗脫4個柱體積，收集洗脫液於60℃減壓回收乙醇，乾燥即得。
5.含有權利要求1所述的紅花提取物口服製劑，其特徵為片劑、膠囊、顆粒劑。
6.據權利要求5所述的口服製劑，其特徵為該提取物的劑型為膠囊和顆粒劑。
7.根據權利要求6所述的口服製劑，其中該提取物在該膠囊劑藥物中的重量百分含量為2％-80％，其餘為填充劑和適量的70％乙醇溶液及橘子香精。
8.根據權利要求7所述的口服製劑，其中該膠囊劑的組方和製備方法為紅花總黃酮50g、澱粉100g、糊精50g、90％乙醇溶液適量、微粉矽膠適量；稱取處方量的紅花總黃酮、澱粉、糊精過80目篩混勻兩次，加入90％乙醇溶液混合制軟材，軟材以手握成團，用手指按壓裂開為佳，過24目篩擠壓制溼顆粒，50℃鼓風乾燥箱中乾燥，顆粒近幹時取出過20目篩整粒，繼續烘製一段時間至幹，總共約烘製一小時左右，將烘乾的顆粒稱重，按0.8％(W/W)加入微粉矽膠，先與顆粒中的細粉混合均勻，再加入顆粒中混合均勻，顆粒填裝入膠囊即得。
9.根據權利要求6所述的口服製劑，其中該提取物在顆粒劑藥物中的重量百分含量為2％-68％，其餘為填充劑和適量90％乙醇溶液及微粉矽膠。
10.根據權利要求8所述的口服製劑，其中該顆粒劑的組方和製備方法為紅花總黃酮100g、蔗糖1000g、乳糖400g、檸檬酸7.5g、70％乙醇溶液適、橘子香精適量，蔗糖粉碎過80目篩，將蔗糖和乳糖放入60℃烘箱中乾燥3小時，稱取處方量的蔗糖和乳糖過80目篩混勻兩次，然後按等量倍增法加入紅花總黃酮，混合均勻，檸檬酸溶於部分70％乙醇溶液，加入固體粉末中制軟材，視軟材的乾濕程度再酌加適量70％乙醇製成適宜軟材，過16目篩擠壓制溼顆粒，50℃鼓風乾燥箱中乾燥，顆粒近幹時取出過14目篩整粒，繼續烘製一段時間至幹，總共約烘製一小時左右，顆粒的分級將烘乾的顆粒分別過一號篩和四號篩，棄去不能通過一號篩的粗顆粒和通過四號篩的細粉，噴灑香精顆粒置於包衣鍋內滾動，橘子油香精溶於無水乙醇中(1％)，通過噴槍將其噴入。然後將顆粒放入密閉容器中，密封12小時，分裝、即得
11.一種含有權利要求1所述的紅花提取物的藥物用途，其特徵為製備治療、預防動脈硬化、冠心病、腦血栓、腦缺血、心絞痛、心肌梗塞心腦血管疾病的藥物用途。
全文摘要
本發明公開了一種紅花水溶性提取物及其製備方法，本發明水溶性提取物中水合紅花黃色素A和水合紅花黃色素B的含量大於50％以上；並公開了含有該提取物的口服製劑以及它們的製備方法，本發明提取物口服製劑具有紅花提取物療效顯著、毒副作用小，而且有效成分質量穩定可控、吸收好、服用方便。
文檔編號A61P9/10GK1429830SQ0113866
公開日2003年7月16日 申請日期2001年12月29日 優先權日2001年12月29日
發明者李桂生, 張達磊, 馬成俊, 田京偉, 王振華, 劉珂, 傅風華, 劉志峰 申請人:山東綠葉製藥股份有限公司