一種提取綠原酸的方法
2023-08-22 19:24:41
專利名稱：一種提取綠原酸的方法
技術領域：
本發明涉及一種提取綠原酸的方法，特別涉及一種從朝鮮薊葉中提取綠原酸的 方法。
技術背景朝鮮薊原產地中海沿岸的北非和南歐。作為一種多年生草藥早在古羅馬，古希 臘時就被用作治療消化不良和保肝。朝鮮薊的可食用部分主要為未開放花蕾的花託 和花苞基部。我國目前在雲南，浙江地區有較大面積的栽培。主要以出口花蕾的罐 頭產品。隨著國際貿易的進一步擴大，朝鮮薊的生產面積和加工產量都將進一步提 高。作為副產品的葉片產量也將大大增加， 一株朝鮮薊葉片的產量遠遠高於花球。 而目前的葉片處理或棄掉，或作為飼料。已有的研究表明，葉片中含有較多的多酚 類化合物，以其中的綠原酸含量最高，最高的可達4%以上(以乾重計)，可以達 到甚至超過金銀花或元寶楓及杜仲葉中的綠原酸含量。根據我們的測定，不同品種 的朝鮮薊葉片中的含量不同，不同生長期的葉片中綠原酸含量差異也較大。綠原酸(chlorogenic acid),化學名稱3 — O —咖啡醯奎尼酸。具有抗菌，消炎， 利膽，利尿，降脂，降壓，抗氧化，抗腫瘤等多種功能。最新的研究又表明，綠原 酸在抗愛滋病，治療糖尿病等方面也有一定的療效。目前，已有多項專利申請綠原酸的提取純化.所用主要原料為金銀花，杜仲葉， 另有從牛蒡葉，元寶楓葉等原料中提取。這些專利中使用了較多的有機試劑，如甲 醇(03111946.8;200310111180.2)，氯仿(200510000484.0)，丙酮，石油醚，乙酸 乙酯(專利申請號200510020706.5; 200410035758.5)等，使得提取和純化過程較 為複雜，易引入有機溶劑的殘留。發明內容本發明的目的是提供一種提取綠原酸的方法。本發明所提供的提取綠原酸的方法，可包括下述步驟1) 將朝鮮薊葉片與乙醇溶液混和，在液相中乙醇的體積百分比濃度為60-80% 的條件下提取，收集液相得到提取液；2) 在步驟l)得到的提取液中加入澄清劑，沉澱溶液中的蛋白、鞣質、樹膠雜 質，過濾得到濾液；3) 將步驟2)得到的濾液過以大孔樹脂為填料的層析柱，先用水淋洗至洗脫液 無色，然後以pH值為1-3的乙醇溶液為洗脫劑洗脫，回收含有綠原酸的洗脫液；4) 濃縮步驟3)得到的含有綠原酸的洗脫液得到含有綠原酸的固體，然後用體 積百分濃度為95%以上的乙醇溶液和水分別重懸洗滌3-5次。所述方法中，所述步驟l)中，所述朝鮮薊葉片先經乾燥粉碎後得到朝鮮薊葉 片粉末再與體積百分比濃度為60-80%的乙醇溶液混和提取，或直接與體積百分比濃 度為90-97%的乙醇溶液勻漿提取。所述朝鮮薊葉片先經乾燥粉碎後得到朝鮮薊葉片粉末與所述體積百分比濃度為 60-80%的乙醇溶液混和的比例為lkg: 7-9L;所述朝鮮薊葉片與所述90-97%的乙醇 溶液的比例為lkg: 2-3L。所述朝鮮薊葉片粉末的大小為20-40目。所述方法中，所述步驟2)中，所述澄清劑為ZTC-II型澄清劑。所述方法中，所述步驟2)中，所述ZTC-II型澄清劑中澄清劑A的添加的終質 量百分濃度為1-2%;所述ZTC-II型澄清劑中澄清劑B的添加的終質量百分濃度為2 一4%。所述方法中，所述步驟3)中，所述大孔樹脂優選為粒徑為0.3-1.25mm的苯乙烯型吸附樹脂。所述方法中，所述步驟3)中，所述洗脫劑的pH值用鹽酸溶液調節。所述洗脫 劑中的乙醇的體積百分比濃度為60-80%。所述洗脫劑優選為含0.05M鹽酸的體積 百分濃度為60-80%的乙醇溶液。所述方法中，所述步驟l)，將所述提取後得到的濾渣可重新用體積百分含量 為60-80%的乙醇溶液進行提取，合併兩次提取的液相得到提取液。本發明的方法是使用乙醇(食品級)作為提取劑和純化劑，提取在常溫下進行， 可用生產用萃取罐可用多功能攪拌或勻漿提取罐，生產成本低。本發明的方法使用 一次柱層析純化粗提物，經過醇洗和水洗進行精製後得到的綠原酸提取物中綠原酸 的純度達到90%以上。
圖1為本發明方法的流程圖具體實施方式
下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規方法。 下述實施例中的百分含量，如無特別說明，均為質量百分含量。下述實施例中的方法，如無特別說明，均在常溫下(15-28°C)進行。本發明的方法主要包括下述步驟(流程圖如圖1所示)1、 材料準備朝鮮薊葉片採收，晾乾或通氮烘乾，粉碎成20-40目的粒度的朝鮮薊幹葉片粉末；或者直接採集朝鮮薊鮮葉片備用。2、 提取將步驟1製備的朝鮮薊幹葉片粉末按lkg: 7-9L的比例加入體積百分濃度為60-80%的乙醇溶液，攪拌提取2小時以上(為了節省時間可選擇2-3小時)， 過濾收集濾液即得到提取液；可將濾渣進行第二次提取，第二次提取按朝鮮薊幹葉 片粉末原料與乙醇溶液1 kg : 4-6L的比例在濾渣中加入體積百分濃度為60-80%的 乙醇溶液，回收兩次提取得到的提取液；或者將步驟1製備的朝鮮薊鮮葉片按lkg: 2-3L的比例加入體積百分濃度為 90-97%的乙醇溶液中，勻漿，靜置1一2小時，間歇攪拌2-3次，過濾收集濾液即得 到提取液；可將濾渣進行第二次提取，第二次提取按濾渣與乙醇溶液lkg: 1L的比 例在濾渣中加入體積百分濃度為60~80%的乙醇溶液，回收兩次提取得到的提取液；第二次提取得到的濾液可根據工業生產線的需要，可直接用於下一批原料的第 -次提取，然後再合併提取液。3、 沉降將步驟2得到的提取液濃縮，加入澄清劑B和A，攪拌後沉降，沉降 後，吸取上清液，離心後獲得最終提取液。4、 純化將步驟3得到的提取液加入以大孔吸附樹脂為填料的層析柱，用水淋 洗直至流出液無色為止，然後以含酸0.05M(鹽酸、硫酸、磷酸、乙酸等)的60%-80% 乙醇溶液進行柱層析，收集含綠原酸部分的洗脫液。5、 脫色脫鹽將步驟4得到的含綠原酸部分的洗脫液用lmol/L的碳酸鈉溶液 調節pH值至6.0 — 6.5，濃縮至近幹得到固體。將濃縮得到的固體加入體積百分濃度 為95%的乙醇懸浮，離心獲得沉澱。然後再用水懸浮洗滌進行脫鹽(水洗脫鹽)， 離心得到沉澱，乾燥後得粗產品，約含綠原酸30%。再以水懸浮洗滌再脫鹽、脫去 水溶性色素；以95%乙醇溶液懸浮洗滌脫去脂溶性成分和色素。如此反覆3-4次， 最終產品綠原酸含量在90%以上。以下述具體實施例為例，說明本發明的方法和效果。實施例1、從朝鮮薊葉中提取綠原酸的方法及其效果驗證 按照下述的步驟從朝鮮薊葉中提取綠原酸1、朝鮮薊葉片晾乾或通氮烘乾，粉碎成20-40目的粒度的朝鮮薊幹葉片粉末；稱取10公斤朝鮮薊幹葉片粉末加入卯升體積百分濃度為70。/。的乙醇溶液，攪拌提 取3小時，過濾，收集過濾液得到第一次提取液。將濾渣進行第二次提取，按lkg 朝鮮薊幹葉片粉末4L體積百分濃度為70%乙醇溶液的量加入40升體積百分濃度 為70%乙醇溶液，提取2小時。第二次提取完畢，靜止沉降後吸取上清液，將沉澱 進行IOO目膜過濾得到濾液，合併濾液和上清液得到第二次提取液。合併第一次和 第二次提取的提取液，即得到乙醇提取液。2、 將步驟1得到的乙醇提取液在5(TC減壓濃縮至原液體積的1/4，加入ZTC-II 型澄清劑(天津正天成澄清技術有限公司)的澄清劑B使其終質量百分比濃度為2% 加入，ZTC-II型澄清劑(天津正天成澄清技術有限公司)的澄清劑A使其終質量百 分比濃度為1%，每30分鐘間歇攪拌一次，2小時後，室溫沉降過夜(靜置15小時)， 分離上清液和沉澱，去除沉澱，得到上清液。3、 用粒徑為lmm的ADS-21型大孔樹脂裝層析柱(柱長為100cm，柱體積為 3.0L)，用水洗去除雜質；然後將步驟2得到的上清液按每小時兩個柱體積的速度 過層析柱，直到流出液剛剛檢測到綠原酸為止。然後用水淋洗柱，直至流出液基本 無色。用含0.05M的鹽酸的體積百分濃度為70%的乙醇溶液為洗脫劑進行洗脫綠原 酸，以顏色變深為流出液接收開始，洗脫4-5個柱體積，合併含綠原酸的洗脫液。 以水淋洗層析柱，直至流出液呈中性。4、 將步驟3得到的洗脫液，用lmol/L碳酸鈉溶液調節pH值至6.0 — 6.5，然後 在5(TC，減壓濃縮至近幹(含水質量百分含量為5—10%)，得到固體。然後將得 到的固體用體積百分含量為95%乙醇溶液懸浮充分洗滌，沉降後離心得沉澱物。再 以水懸浮洗滌脫去其中的絕大部分鹽，沉澱物乾燥後得粗產品500克，經過HPLC 測定表明，該粗產品中綠原酸質量百分含量為35%。重複步驟4採用體積百分含量為95%乙醇溶液懸浮洗滌，用水懸浮洗滌，重複 3次乾燥後得到80g白色粉末。經HPLC測定表明最終產品中綠原酸質量百分含量 為93.7%。實施例2、從朝鮮薊葉中提取綠原酸的方法及其效果驗證 按照下述的步驟從朝鮮薊葉中提取綠原酸1、稱取10公斤朝鮮薊鮮葉片加入20升體積百分濃度為95%的乙醇溶液，用搗 碎機勻漿。勻漿後液相的乙醇體積百分濃度為68%，靜置2小時，間歇攪拌2-3次， 過濾，收集過濾液得到第一次提取液。將濾渣進行第二次提取，按lkg濾渣1L體 積百分濃度為70%乙醇溶液的量將濾渣與70%乙醇溶液混和，攪拌機攪拌30分鐘得到第二次提取液。合併第一次和第二次提取得提取液，即得到乙醇提取液。2、 將步驟1得到的乙醇提取液在5(TC減壓濃縮至原液體積的1/4， ZTC-II型澄 清劑(天津正天成澄清技術有限公司)的澄清劑B使其終質量百分比濃度為4y。加 入，ZTC-II型澄清劑(天津正天成澄清技術有限公司)的澄清劑A使其終質量百分 比濃度為2%，每30分鐘間歇攪拌一次，2小時後，室溫沉降過夜(靜置10小時)， 分離上清液和沉澱，去除沉澱，得到上清液。3、 用粒徑為0.8mm的ADS-21型大孔樹脂裝層析柱(柱長為100，柱體積為 3.0L)，用水洗去除雜質；然後將步驟2得到的上清液按每小時兩個柱體積的速度 過層析柱，直到流出液剛剛檢測到綠原酸為止。然後用水淋洗柱，直至流出液基本 無色。用含0.05M的鹽酸的體積百分濃度為80%的乙醇溶液為洗脫劑進行洗脫綠原 酸，以顏色變深為流出液接收開始，洗脫4-5個柱體積，合併含綠原酸的洗脫液。 以水淋洗層析柱，直至流出液呈中性。4、 將步驟3得到的洗脫液，用lM碳酸鈉溶液調節pH值至6.0 — 6.5，然後在 50°C，減壓濃縮至近幹(含水質量百分含量為5 — 10%)，得到固體。然後將得到 的固體用體積百分含量為95%乙醇溶液懸浮充分洗滌，沉降後離心得沉澱物。再以 水懸浮洗滌脫去其中的絕大部分鹽，沉澱物乾燥後得粗產品70克，經過HPLC測定 表明，該粗產品中綠原酸質量百分含量為31.5%。重複步驟4採用體積百分含量為95%乙醇溶液懸浮洗滌，用水懸浮洗滌，重複 3次乾燥後得到10g白色粉末。經HPLC測定表明最終產品中綠原酸的質量百分含 量為93.0%。上述實施例的實驗表明，本發明的方法提取綠原酸的純度達到90%以上。
權利要求
1、一種提取綠原酸的方法，包括下述步驟1)將朝鮮薊葉片與乙醇溶液混和，在液相中乙醇的體積百分比濃度為60-80％的條件下提取，收集液相得到提取液；2)在步驟1)得到的提取液中加入澄清劑，沉澱溶液中的蛋白、鞣質、樹膠雜質，過濾得到濾液；3)將步驟2)得到的濾液過以大孔樹脂為填料的層析柱，先用水淋洗至洗脫液無色，然後以pH值為1-3的乙醇溶液為洗脫劑洗脫，回收含有綠原酸的洗脫液；4)濃縮步驟3)得到的含有綠原酸的洗脫液得到含有綠原酸的固體，然後用體積百分濃度為95％以上的乙醇溶液和水分別重懸洗滌3-5次。
2、 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述步驟l)中，所述朝鮮薊葉 片先經乾燥粉碎後得到朝鮮薊葉片粉末再與體積百分比濃度為60-80%的乙醇溶液 混和提取，或直接與體積百分比濃度為90-97%的乙醇溶液勻漿提取。
3、 根據權利要求2所述的方法，其特徵在於所述步驟l)中，所述朝鮮薊葉 片先經千燥粉碎後得到朝鮮薊葉片粉末與所述體積百分比濃度為60-80%的乙醇溶 液混和的比例為lkg:7-9L;所述朝鮮薊葉片與所述90-97X的乙醇溶液的比例為lkg: 2-3L。
4、 根據權利要求3中任意一項所述的方法，其特徵在於所述朝鮮薊葉片粉末 的大小為20-40目。
5、 根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其特徵在於所述步驟2)中， 所述澄清劑為ZTC-II型澄清劑。
6、 根據權利要求5所述的方法，其特徵在於所述步驟2)中，所述ZTC-II 型澄清劑中的澄清劑A的添加的終質量百分濃度為1 一2%;所述ZTC-II型中的澄清 劑B的添加的終質量百分濃度為2 — 4%。
7、 根據權利要求5或6所述的方法，其特徵在於所述步驟3)中，所述大孔 樹脂為粒徑為0.3 — 1.25mm的苯乙烯型吸附樹脂。
8、 根據權利要求7所述的方法，其特徵在於所述步驟3)中，所述洗脫劑中 的乙醇的體積百分比濃度為60-80%。
9、 根據權利要求8所述的方法，其特徵在於所述步驟3)中，所述洗脫劑的 pH值用鹽酸溶液調節。
10、 根據權利要求9所述的方法，其特徵在於所述洗脫劑為含體積0.05M鹽 酸的體積百分濃度為60-80%的乙醇溶液。
全文摘要
本發明公開了一種提取綠原酸的方法。該方法包括下述步驟1)將朝鮮薊葉片與乙醇溶液混和，在液相中乙醇的體積百分比濃度為60-80％的條件下提取，收集液相得到提取液；2)在提取液中加入澄清劑，沉澱溶液中的蛋白、鞣質、樹膠雜質，過濾得到濾液；3)將濾液過以大孔樹脂為填料的層析柱，先用水淋洗至洗脫液無色，然後以pH值為1-3的乙醇溶液為洗脫劑洗脫，回收含有綠原酸的洗脫液；4)濃縮含有綠原酸的洗脫液得到含有綠原酸的固體，然後用體積百分濃度為95％以上的乙醇溶液、水依次重懸洗滌3-5次。本發明的方法得到綠原酸的純度達到90％以上，生產成本低，得到的產品安全性好。
文檔編號A61K36/185GK101250106SQ20081010286
公開日2008年8月27日 申請日期2008年3月27日 優先權日2008年3月27日
發明者何洪巨, 麗 馮, 唐曉偉, 宋曙輝, 張寶海, 王文琪, 勇 許 申請人:北京市農林科學院