一種雙黃連注射液的製備方法及其成分檢測方法

2023-12-02 23:46:21

專利名稱：一種雙黃連注射液的製備方法及其成分檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種雙黃連注射液的製備方法及其成分檢測方法，屬於中藥領域。
背景技術：
雙黃連注射液載於衛生部藥品標準中藥成方製劑第十一冊(WS3-B-2104-96)，是由金銀花、黃芩和連翹三味藥組成。用於外感風熱引起的發熱、咳嗽、咽痛。適用於病毒及細菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃體炎、咽炎等。方中金銀花甘寒，芳香疏散，善清肺經熱邪，為君藥；黃芩苦寒，善清肺火及上焦實熱；連翹苦微寒，散上焦風熱，有清熱解毒之功，為臣藥。三藥使用，共奏辛涼解表，清熱解毒之功。
專利文獻99106224.8公開了一種精製雙黃連注射液的生產工藝，包括1.將金銀花及連翹生藥煎煮；2.所得濾液濃縮後加入乙醇；3.溶液靜置；4.回收乙醇，加去離子水，調pH；5.靜置，超濾膜過濾，濃縮；6.向濃縮液中加入乙醇；7.靜置，回收乙醇；8.溶液過濾，得到浸膏；9.將上述浸膏、常規方法得到的黃芩甙粉及注射用水混合，加熱煮沸；10.微孔濾膜過濾，得到雙黃連注射液。其中，金銀花有效成分-綠原酸遇高溫易破壞，所以採用金銀花及連翹共提，金銀花的收率較低。
而且現有雙黃連注射液質量標準中對金銀花、黃芩和連翹三味藥均進行了定性鑑別，但只建立了黃芩的含量測定方法；而其處方成分金銀花為君藥、連翹為臣藥，在處方中也起重要作用，是反映藥物內在質量的重要指標成分，因而發明人認為在該質量標準的基礎上應該增加其他2種成分的含量測定方法，彌補原質量控制方法的不足，提高產品質量的控制水平，保證產品的療效。

發明內容
本發明的目的是提供一種雙黃連注射液的製備方法。
本發明的另一目的是提供雙黃連注射液的成分檢測方法，該方法提高了產品質量的控制水平，保證產品的療效。
為了實現本發明目的，本發明的一種雙黃連注射液的製備方法，由如下步驟製備1)金銀花濃浸膏的製備稱取金銀花，加4～16倍水於60～85℃保溫浸泡30～180分鐘，浸泡2～3次，分次過濾，收取濾液濃縮至相對密度1.15～1.25(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入乙醇至含醇量75～80％，靜置12～24小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味，並濃縮至相對密度1.12～1.23(80±5℃測)；待冷至40℃以下，加入膏重2～6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12～24小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.15～1.25(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入乙醇，至含醇量達到80～85％，靜置12～24小時，取上清液調pH值8.0～10.0，靜置24～36小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.12～1.23(80℃±5℃測)，得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的製備稱取連翹，水煎3次，第一次，加入4～12倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.0～3.0小時，過濾；第二、第三次各2～8倍量水，煮沸1.0～2.0小時，合併藥液濃縮至相對密度1.15～1.25(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入乙醇至含醇量75～80％，沉澱12～24小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重2～6倍量的純化水，攪拌，靜置12～24小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.15～1.25(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加乙醇，使含醇量達到80～85％，靜置12～24小時，取上清液調pH值8.0～10.0，靜置24～36小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.12～1.23(80±5℃測)，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的製備取黃芩片，加入2～12倍量水，至少煎煮2次，每次1～3小時，過濾，合併濾液，濃縮至生藥量3～6倍，靜置1～3小時後濾取上清液調pH值至1.0～3.0，70～80℃保溫1～3小時，靜置12～20小時，濾過，沉澱加5～10倍量水，調節pH值至6.0～8.0，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過濾，濾液調pH值至1.0～3.0，60～70℃保溫30～60分鐘，靜置12～20小時，濾過，沉澱用乙醇洗至pH值為6.0～8.0，回收乙醇，離心得沉澱物；取沉澱物加入1～3倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，浸潤4～10小時，再加入4～8倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，攪拌2～10分鐘後，調pH值至6.0～7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸30～60分鐘，待冷卻至60～80℃後，用乙醇過濾，濾液調pH值至1.0～3.0，60±5℃保溫30～60分鐘，靜置4～10小時，棄去上清液，沉澱物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽乾，乾燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的製備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷，將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋，混勻後加入黃芩苷攪拌，溶解得雙黃連濃配液；絹布過濾，微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15～30分鐘並冷卻至70℃以下，調pH值6.8～7.5，定容至全量，攪拌均勻，進行粗濾，粗濾後的藥液冷卻至10～40℃，精濾，灌裝，115～118℃滅菌30分鐘，即得。
其製備方法優選的為1)金銀花濃浸膏的製備稱取金銀花，第一遍加入10倍量水，於80℃保溫浸泡1小時，第二遍加入10倍量水，於80℃保溫浸泡40分鐘，分次過濾，收取濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入90％以上乙醇至含醇量75％，靜置12小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到85％，靜置12小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值8.5～9.0，靜置24小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的製備稱取連翹，第一遍加入8倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.5小時，過濾；第二、第三遍各6倍量水，煮沸1.0小時，合併藥液濃縮至密度1.18～1.22(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入90％以上乙醇至含醇量75％，沉澱12小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到85％，靜置12小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值8.5～9.0，靜置24小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的製備取黃芩片，加入8倍量水，煎煮2小時，過濾，加入6倍量水，煎煮1小時，合併濾液，濃縮至生藥量4～5倍，靜置1小時後濾取上清液用2mol/L鹽酸調pH值至1.0～2.0，80℃保溫1小時，靜置12小時，濾過，沉澱加6～8倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調節pH值至6.5～7.5，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過濾，濾液用2mol/L鹽酸調pH值至1.0～2.0，60℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，沉澱用乙醇洗至pH值為6.5～7.5，回收乙醇，離心得沉澱物；取沉澱物加入2倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，浸潤4小時以上，再加入4倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，攪拌2分鐘後緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調pH值至6.5～7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸30分鐘，待冷卻至60～80℃後，加入藥液體積0.5倍量的90％以上乙醇，趁熱過濾，濾液用10％HCl調pH值至1.5～2.0，60±5℃保溫30分鐘，靜置4小時以上，棄去上清液，沉澱物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽乾，乾燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的製備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋，混勻後加入黃芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過濾，微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘並冷卻至70℃以下，調pH值6.8～7.5，定容至全量，攪拌均勻，進行粗濾，粗濾後的藥液冷卻至10～40℃，精濾，灌裝，115～118℃滅菌30分鐘，即得。
本發明雙黃連注射液的成分檢測方法，該方法包括黃芩、金銀花與連翹中任意兩種或三種成分的含量測定。
本發明的雙黃連注射液的成分檢測方法，包括所述的黃芩、金銀花和連翹的含量測定(1)黃芩的含量測定 照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比40-60∶0.5-2∶60-40的甲醇-冰醋酸-水為流動相，優選為48∶1∶52；檢測波長為276nm，理論板數按黃芩苷峰計算不低於1000。
對照品溶液的製備 精密稱取黃芩苷對照品，加40～60％甲醇或乙醇製成每1ml含0.2mg的溶液，優選採用50％甲醇或乙醇，即得。
供試品溶液的製備 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加40～60％甲醇或乙醇稀釋至刻度，優選採用50％甲醇或乙醇，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標法計算含量，即得。
本品每1ml含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計，為6.0～12.0mg。
(2)金銀花 照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比10-30∶90-70∶0.1-2的甲醇-水-冰醋酸為流動相，優選為20∶80∶1；檢測波長為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數按綠原酸峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水(甲醇、乙醇)製成每1ml含40μg的溶液，即得。
供試品溶液的製備 精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計，為0.05～2.0mg。
(3)連翹 照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比10-40∶90-60的乙腈-水為流動相，優選為25∶75；檢測波長為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數按連翹苷峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取連翹苷對照品適量，精密稱定，加30～90％甲醇或乙醇製成每1ml含60μg的溶液，優選採用50％甲醇或乙醇，即得。
供試品溶液的製備 精密量取本品10ml，置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內徑1cm)上，用30～90％乙醇40ml洗脫，優選採用70％甲醇或乙醇，收集洗脫液，濃縮至幹，殘渣加30～90％甲醇或乙醇適量，優選採用50％甲醇或乙醇，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每1ml含連翹以連翹苷(C29H36O15)計，為0.05～0.4mg。
本發明的一種雙黃連注射液的質量控制方法，也可以包括金銀花和連翹的含量測定方法，黃芩和金銀花的含量測定方法，或黃芩和連翹的含量測定方法。
本發明的雙黃連注射液的製備方法，採用三種原料分別提取有效成分，將金銀花改為用熱水先浸泡再醇沉，避免了金銀花有效成分的破壞，使綠原酸的收率有所提高。本發明雙黃連注射液的成分檢測方法，提高了產品質量的控制水平，保證產品的療效。既有利於生產廠家和管理部門對產品的監測，也可以為醫療部門和患者的治療提供較好的保障。


圖1-1為金銀花陰性液色譜圖；圖1-2為金銀花檢測時雙黃連注射液標準色譜圖；圖2-1為連翹陰性液色譜圖；圖2-2為連翹檢測時雙黃連注射液色譜圖。
具體實施例方式
以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。
實施例1雙黃連注射液製備方法1)金銀花濃浸膏的製備稱取金銀花，第一遍加入10倍量水，於80℃保溫浸泡1小時，第二遍加入10倍量水，於80℃保溫浸泡40分鐘，分次過濾，收取濾液濃縮至相對密度1.20±0.02(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入90％乙醇至含醇量75％，靜置12小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味，並濃縮至相對密度1.18(80±5℃測)；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.20±0.02(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到85％，靜置12小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值8.5，靜置24小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的製備稱取連翹，第一遍加入8倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.5小時，過濾；第二、第三遍各6倍量水，煮沸1.0小時，合併藥液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入90％乙醇至含醇量75％，沉澱12小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到85％，靜置12小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值9.0，靜置24小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的製備取黃芩片，加入8倍量水，煎煮2小時，過濾，加入6倍量水，煎煮1小時，合併濾液，濃縮至生藥量5倍，靜置1小時後濾取上清液用2mol/L鹽酸調pH值至1.0，80℃保溫1小時，靜置12小時，濾過，沉澱加8倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調節pH值至7.5，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過濾，濾液用2mol/L鹽酸調pH值至1.0，60℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，沉澱用乙醇洗至pH值為7.5，回收乙醇，離心得沉澱物；取沉澱物加入2倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃的注射用水，浸潤4小時，再加入4倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃的注射用水，攪拌2分鐘後緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調pH值至6.5，加入0.5％的藥用炭，煮沸30分鐘，待冷卻至60℃後，加入藥液體積0.5倍量的90％乙醇，趁熱過濾，濾液用10％HCl調pH值至1.5，60±5℃保溫30分鐘，靜置4小時，棄去上清液，沉澱物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽乾，乾燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的製備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋，混勻後加入黃芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過濾，微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘並冷卻至70℃，調pH值6.8，定容至全量，攪拌均勻，進行粗濾，粗濾後的藥液冷卻至40℃，精濾，灌裝，118℃滅菌30分鐘，即得。
實施例21)金銀花濃浸膏的製備稱取金銀花，第一遍加入4倍量水，於60℃保溫浸泡80分鐘，第二遍加入8倍量水，於80℃保溫浸泡60分鐘，第三遍加入12倍量水，於85℃保溫浸泡30分鐘，分次過濾，收取濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入95％乙醇至含醇量80％，靜置18小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)；待冷至40℃以下，加入膏重6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置24小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到90％，靜置18小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值9.0，靜置24小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的製備稱取連翹，第一遍加入12倍量水，浸泡40分鐘，加熱煮沸3小時，過濾；第二、第三遍各8倍量水，煮沸2小時，合併藥液濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入90％乙醇至含醇量80％，沉澱20小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重2倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置24小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到90％，靜置18小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值8.0，靜置36小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.20～1.23(80±5℃測)，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的製備取黃芩片，加入2倍量水，煎煮1小時，過濾，加入8倍量水，煎煮2小時，加入10倍量水，煎煮1小時，合併濾液，濃縮至生藥量3倍，靜置1小時後濾取上清液用2mol/L鹽酸調pH值至2.0，70℃保溫3小時，靜置20小時，濾過，沉澱加5倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調節pH值至6.0，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過濾，濾液用2mol/L鹽酸調pH值至2.0，70℃保溫60分鐘，靜置20小時，濾過，沉澱用乙醇洗至pH值為7.0，回收乙醇，離心得沉澱物；取沉澱物加入3倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，浸潤10小時，再加入6倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，攪拌6分鐘後緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調pH值至7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸40分鐘，待冷卻至70℃後，加入藥液體積0.5倍量的90％以上乙醇，趁熱過濾，濾液用10％HCl調pH值至1.0，60±5℃保溫60分鐘，靜置10小時，棄去上清液，沉澱物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽乾，乾燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的製備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋，混勻後加入黃芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過濾，微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘並冷卻至70℃以下，調pH值7.5，定容至全量，攪拌均勻，進行粗濾，粗濾後的藥液冷卻至30℃，精濾，灌裝，118℃滅菌60分鐘，即得。
實施例31)金銀花濃浸膏的製備稱取金銀花，第一遍加入6倍量水，於70℃保溫浸泡1小時，第二遍加入16倍量水，於85℃保溫浸泡30分鐘，分次過濾，收取濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入90％乙醇至含醇量78％，靜置24小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)；待冷至40℃以下，加入膏重2倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置20小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到85％，靜置24小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值8.5，靜置24小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的製備稱取連翹，第一遍加入4倍量水，浸泡60分鐘，加熱煮沸1小時，過濾；第二、第三遍各2倍量水，煮沸1.5小時，合併藥液濃縮至相對密度1.22～1.25(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入95％乙醇至含醇量78％，沉澱24小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置20小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到85％，靜置24小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值10.0，靜置30小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.12～1.16(80±5℃測)，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的製備取黃芩片，加入12倍量水，煎煮2小時，過濾，加入6倍量水，煎煮3小時，合併濾液，濃縮至生藥量6倍，靜置1小時後濾取上清液用2mol/L鹽酸調pH值至3.0，75℃保溫2小時，靜置18小時，濾過，沉澱加10倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調節pH值至8.0，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過濾，濾液用2mol/L鹽酸調pH值至1.5，65℃保溫40分鐘，靜置18小時，濾過，沉澱用乙醇洗至pH值為8.0，回收乙醇，離心得沉澱物；取沉澱物加入1倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，浸潤6小時，再加入8倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，攪拌10分鐘後緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調pH值至7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸60分鐘，待冷卻至80℃後，加入藥液體積0.5倍量的90％以上乙醇，趁熱過濾，濾液用10％HCl調pH值至3.0，60±5℃保溫40分鐘，靜置6小時，棄去上清液，沉澱物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽乾，乾燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的製備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋，混勻後加入黃芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過濾，微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘並冷卻至70℃以下，調pH值7.0，定容至全量，攪拌均勻，進行粗濾，粗濾後的藥液冷卻至10℃，精濾，灌裝，115℃滅菌40分鐘，即得。
實施例4由實施例1製備的雙黃連注射液對三種成分進行檢測。
1)金銀花的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸(20∶80∶1)為流動相；檢測波長為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數按綠原酸峰計算應不低於2000。取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水製成每1ml含40μg的溶液，即為對照品溶液。精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定。本發明中雙黃連注射液每1ml含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計，為1.1mg。
2)連翹的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-水(25∶75)為流動相；檢測波長為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數按連翹苷峰計算應不低於2000。取連翹苷對照品適量，精密稱定，加50％乙醇製成每1ml含60μg的溶液，即為對照品溶液。精密量取本品10ml，置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內徑1cm)上，用70％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至幹，殘渣加50％乙醇適量，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定。本發明中雙黃連注射液每1ml含連翹以連翹苷(C29H36O15)計，為0.2mg。
3)黃芩的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)為流動相；檢測波長為276nm，理論板數按黃芩苷峰計算不低於1000。精密稱取黃芩苷對照品，加50％甲醇製成每1ml含0.2mg的溶液，即得對照品溶液。精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標法計算含量，即得。本品每1ml含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計，為8.8mg。
實施例5基本過程同實施例4，不同的是三種成分檢測過程中的條件黃芩的含量測定中，以40∶2∶60的甲醇-冰醋酸-水為流動相；製備對照品溶液和供試品溶液，所用溶劑為40％乙醇。
金銀花的含量測定中，以10∶90∶2的甲醇-水-冰醋酸為流動相；連翹的含量測定中，以10∶90乙腈-水為流動相，製備對照品溶液所用溶劑為30％甲醇，供試品溶液洗脫用30％甲醇，溶解用的90％甲醇。
實施例6基本過程同實施例4，不同的是三種成分檢測過程中的條件黃芩的含量測定中，以60∶0.5∶40的甲醇-冰醋酸-水為流動相；製備對照品溶液和供試品溶液，所用溶劑為60％乙醇。
金銀花的含量測定中，以30∶70∶0.1的甲醇-水-冰醋酸為流動相；連翹的含量測定中，以40∶60乙腈-水為流動相，製備對照品溶液所用溶劑為90％甲醇，供試品溶液洗脫用90％甲醇，溶解用的30％甲醇。
對於產品成分檢測也可以只針對金銀花和連翹的含量測定方法、黃芩和金銀花的含量測定方法，或黃芩和連翹的含量測定方法。
實驗例1金銀花含量測定及方法學考察(1)儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Agilent 1200，色譜柱Agilent ZORBAXEclipse XDB-C18 4.6×150mm 5μ。
對照品綠原酸(來源於中國藥品生物製品檢定所，批號110753-200413，供含量測定用)。
樣品批號20060801、20060802、20060803試劑甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純。
(2)色譜條件以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸(10-30∶90-70∶0.1-2)為流動相；檢測波長為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數按綠原酸峰計算應不低於2000。
(3)供試品溶液的製備精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。
(4)對照品溶液的製備取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水(甲醇、乙醇)製成每1ml含40μg的溶液，即得。
(5)線性範圍試驗精密稱定綠原酸對照品10.28mg，置100ml棕色量瓶中加水(甲醇、乙醇)溶解並稀釋至刻度。從中取出4ml至10ml棕色量瓶中稀釋至刻度。精密吸取上述溶液各2μl、5μl、10μl、15μl、20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值為縱坐標Y，以進樣量(μg)為橫坐標X，進行線性回歸，結果表明綠原酸進樣量在0.08-0.82μg範圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關係，結果見表1。
表1 線性範圍試驗

(6)精密度試驗精密吸取對照品溶液10μl，連續進樣6次，依法測定峰面積，結果RSD＝0.16％，符合規定，見表2。
表2 精密度試驗

(7)穩定性試驗取同一供試品溶液分別在製備好後0小時、2小時、4小時、6小時、8小時、24小時注入液相色譜儀，結果其峰面積均未見明顯變化(RSD＝0.14％)，說明供試品溶液24小時內較穩定，結果見表3。
表3 穩定性試驗

(8)專屬性試驗取不含金銀花的其他藥材按生產工藝製備陰性對照液，取6ml置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，進行測定，結果對樣品測定無幹擾(見圖1-1，1-2)。
(9)重複性試驗精密量取樣品6份(批號20060801)各6ml，分別置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，分別測定，重複性良好，結果見表4。
表4 重複性試驗

(10)回收率試驗精密量取重複性試驗項下的5號供試品溶液6ml共6份，至棕色量瓶中，精密加入綠原酸對照品2.2762mg，加水(甲醇、乙醇)攪拌使溶解，並稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得。注入液相色譜儀，分別測定，計算回收率及RSD％值。結果見表5。
表5 回收率試驗

綠原酸的平均回收率為100.56％，RSD＝0.46％；結果表明該方法的回收率理想。
(11)樣品含量測定分別精密量取樣品(批號20060801、20060802、20060803)，每份6ml，置50ml棕色量瓶中，用水(甲醇、乙醇)稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，分別測定，結果見表6。
表6 樣品含量測定

實驗例2連翹含量測定及方法學考察(1)儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Agilent 1200型，色譜柱Agilent ZORBAXEclipse XDB-C184.6×150mm 5μ。
對照品連翹苷(來源於中國藥品生物製品檢定所，批號110821-200609，供含量測定用)。
樣品批號20060801、20060802、20060803
試劑乙腈為色譜純。
(2)色譜條件以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈-水(10-40∶90-60)為流動相；檢測波長為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數按連翹苷峰計算應不低於2000。
(3)對照品溶液的製備取連翹苷對照品適量，精密稱定，加30～90％甲醇或乙醇製成每1ml含60μg的溶液，即得。
(4)供試品溶液的製備精密量取本品10ml，置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內徑1cm)上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至幹，殘渣加30～90％甲醇或乙醇適量，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，即得。
(5)線性範圍試驗精密稱定連翹苷對照品14.80mg，置100ml量瓶中加30～90％甲醇或乙醇溶解並稀釋至刻度。從中取出4ml至10ml量瓶中稀釋至刻度。精密吸取上述溶液各2μl、5μl、10μl、15μl、20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值為縱坐標Y，以進樣量(μg)為橫坐標X，進行線性回歸，結果表明連翹苷進樣量在0.12～1.18μg範圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關係，結果見表7。
表7 線性範圍試驗

(6)精密度試驗精密吸取對照品溶液10μl，連續進樣6次，依法測定峰面積，結果RSD＝0.35％，符合規定，見表8。
表8 精密度試驗

(7)穩定性試驗取同一供試品溶液分別在製備好後0小時、2小時、4小時、6小時、8小時、24小時注入液相色譜儀，結果其峰面積均未見明顯變化(RSD＝0.25％)，說明供試品溶液24小時內較穩定，結果見表9。
表9 穩定性試驗

(8)專屬性試驗取不含連翹的其他藥材，按相同工藝製備陰性對照液，精密量取10ml，按供試品溶液的製備方法製備樣品，注入液相色譜儀，進樣測定，結果對樣品測定無幹擾(見圖2-1，2-2)。
(9)重複性試驗共量取適量樣品6份(批號20060801)，從中各精密吸取10ml，分別置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內徑1cm)上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至幹，殘渣加30～90％甲醇或乙醇適量，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，分別測定，重複性良好，結果見表10。
表10 重複性試驗

(10)回收率試驗精密量取重複性試驗項下的5號供試品溶液10ml共6份，精密加入連翹苷對照品mg，攪拌溶解後，分別置中性氧化鋁柱(100～120目6g，內徑1cm)上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至幹，殘渣加30～90％甲醇或乙醇適量，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，即得。注入液相色譜儀，分別測定，計算回收率及RSD％值。結果見表11。
表11 回收率試驗


連翹苷的平均回收率為99.64％，RSD＝0.32％；結果表明該方法的回收率較理想。
(11)樣品含量測定精密量取樣品(批號20060801、20060802、20060803)各10ml，按供試品溶液的製備方法製備樣品，注入液相色譜儀，分別測定，結果見表12。
表12 樣品含量測定

本發明所述雙黃連注射液具有清熱解毒，清宣風熱的功效。藥效學研究表明按照本發明的製備方法以及產品檢測方法來控制產品質量，所得的成品在抑菌、抗病毒，抗炎，解熱，鎮痛等方面有較好的療效。
具體情況如下實驗例3體內抑菌作用比較(對腹腔注射金黃色葡萄球菌引起小鼠死亡的保護作用)取小鼠按體重隨機分為7組每組10隻，即空白對照組、雙黃連注射液I(按現行製備工藝所得)高中低三個劑量組和雙黃連注射液II(由實施例1所得)高中低三個劑量組。給藥組腹腔注射(最後一次皮下注射)藥液40ml/kg，每天一次，連續給藥7天；空白對照組以同樣方式給予注射用水。在最後一次給藥30min後，各組腹腔注射金黃色葡萄球菌的硫乙醇酸鹽培養液(37℃±1℃，24h，細菌數約108/ml)，劑量為每隻小鼠0.5ml，即刻觀察，並連續觀察7天，記錄每天小鼠死亡情況，計算半數有效量(ED50)。結果表明，雙黃連注射液I和雙黃連注射液II對腹腔注射金黃色葡萄球菌引起的小鼠死亡均有一定保護作用，且雙黃連注射液II的保護作用強於雙黃連注射液I，但兩者的ED50無顯著性差異(P＞0.05)，見表13。
表13 雙黃連注射液體內抑菌作用比較試驗結果

實驗例4體內抗病毒作用比較(對小鼠流感病毒性肺炎的影響)取小鼠按體重隨機分組，腹腔注射樣品，病毒感染對照組和正常動物對照組均給予相同藥液容積的注射用水。除正常對照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個LD50流感病毒液滴鼻感染，每隻0.05ml。從感染前一天開始給藥或水，每天2次，連續5天，第6天稱取小鼠體重後固定，放血、解剖，摘取全肺稱重，逐個計算肺指數值，並求出肺指數抑制率，結果見表14。肺組織用10％甲醛固定，乙醇系列脫水，二甲苯透明，石蠟包埋。切片厚度4～5μm，HE染色，普通光學顯微鏡觀察肺組織形態學變化。按炎症細胞浸潤程度分級標準，對細胞進行計分，並進行統計學處理，進行組間t檢驗比較，結果見表15。
表14 雙黃連注射液對流感病毒感染小鼠肺部炎症(肺指數)的影響(n＝10)

注與感染對照組相比，**P＜0.01，*P＜0.05
表15 雙黃連注射液對流感病毒感染小鼠肺部炎症(病毒觀察)的影響(n＝10)

注與感染對照組相比，**P＜0.01，*P＜0.05由表14、15結果可見，感染後小鼠肺指數值明顯增大，炎症計分值明顯增高，雙黃連注射液在本試驗條件下的劑量範圍內對流感病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用，肺指數值明顯降低，肺組織病變程度明顯減輕，計分值明顯降低。且在相同劑量條件下，雙黃連注射液II的作用強於雙黃連注射液I。
實驗例5抗炎作用比較(對腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高的影響)取50隻小鼠，雌雄各半，按體重隨機分為5組。用藥組按20ml/kg體重腹腔注射藥液，空白對照組給予同體積的注射用水。每天給藥一次，連續7天，於末次給藥30分鐘後，各小鼠均尾靜脈注射0.5％伊文思蘭生理鹽水溶液0.1ml/10g體重，並立即腹腔注射0.6％醋酸生理鹽水溶液0.2ml/只，20min後脫頸椎處死，打開腹腔，用6ml生理鹽水洗滌腹腔，收集洗滌液並離心，取上清液於590nm處測吸收度。結果由表16可見，雙黃連注射液能顯著抑制腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性的增高，與空白組比，20g/kg、10g/kg(含生藥)組，差異非常顯著(P＜0.01)，與劑量呈相關性。雙黃連注射液II的作用強度與雙黃連注射液I相似。
表16雙黃連注射液對腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高的影響


注與空白對照組比，**P＜0.01，*P＜0.05實驗例6解熱作用比較取預測溫合格家兔，在試驗日按要求測定給藥前直腸體溫後，按體溫隨機分組。給藥組靜脈注射藥液，空白對照組給予注射用水，給藥體積均為4ml/kg。除空白對照組外，各組給藥後立即靜脈注射細菌內毒素50ED/kg，以後每隔30min測直腸溫度一次，以不同時間所測體溫與給藥前體溫之差值，為體溫升高值(體溫下降在0.4℃以內者以0計)，結果見表17。
表17 雙黃連注射液對細菌內毒素所致家兔體溫升高的影響(n＝6)

注與模型組比較，**P＜0.01，*P＜0.05結果表明，雙黃連注射液給藥劑量在20g/kg、10g/kg(含生藥)時，對細菌內毒素引起的家兔體溫升高具有良好的解熱作用，與模型組比較差異非常顯著(P＜0.01)。雙黃連注射液II的解熱作用與雙黃連注射液I相似。
實驗例7鎮痛作用比較(扭體法)將50隻小鼠隨機分為5組，用藥組按20ml/kg體重腹腔注射藥液，空白對照組給予同體積的注射用水。每日一次，連續5天，第5天上午給藥45分鐘後，腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，觀察記錄15分鐘內各鼠扭體次數，結果進行統計學處理。
表18 雙黃連注射液對醋酸所致小鼠疼痛的影響

注與空白對照組比，*P＜0.05從表18可見，同等劑量下雙黃連注射液II的鎮痛作用好於雙黃連注射液I。
實驗例8止咳作用比較取小鼠50隻隨機分為5組，用藥組按20ml/kg體重腹腔注射藥液，空白對照組給予同體積的注射用水。連續給藥5天，一天一次，末次給藥1小時後，利用超聲霧化器噴霧26％氨水3秒，觀察並記錄小鼠的咳嗽潛伏期(即停止噴霧到咳嗽的時間)和2分鐘內小鼠咳嗽次數(以其腹肌收縮、張大嘴和聽到咳聲為準)，結果見表19。
表19 雙黃連注射液對氨水所致小鼠咳嗽的影響

注與空白對照組比較，**P＜0.01，*P＜0.05從表19可見，雙黃連注射液可顯著延長氨水所致小鼠咳嗽潛伏期，還可明顯減少小鼠咳嗽次數。雙黃連注射液II的鎮咳作用略好於雙黃連注射液I。
從以上試驗結果可見，同等劑量下的雙黃連注射液II的主要藥效學實驗結果均優於雙黃連注射液I。
雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬於本發明要求保護的範圍。
權利要求
1.一種雙黃連注射液的製備方法，其特徵在於，由如下步驟製備1)金銀花濃浸膏的製備稱取金銀花，加4～16倍水於60～85℃保溫浸泡30～180分鐘，浸泡2～3次，分次過濾，收取濾液濃縮至相對密度1.15～1.25(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入乙醇至含醇量75～80％，靜置12～24小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味，並濃縮至相對密度1.12～1.23(80±5℃測)；待冷至40℃以下，加入膏重2～6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12～24小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.15～1.25(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入乙醇，至含醇量達到80～85％，靜置12～24小時，取上清液調pH值8.0～10.0，靜置24～36小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.12～1.23(80℃±5℃測)，得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的製備稱取連翹，水煎3次，第一次，加入4～12倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.0～3.0小時，過濾；第二、第三次各2～8倍量水，煮沸1.0～2.0小時，合併藥液濃縮至相對密度1.15～1.25(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入乙醇至含醇量75～80％，沉澱12～24小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重2～6倍量的純化水，攪拌，靜置12～24小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.15～1.25(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加乙醇，使含醇量達到80～85％，靜置12～24小時，取上清液調pH值8.0～10.0，靜置24～36小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.12～1.23(80±5℃測)，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的製備取黃芩片，加入2～12倍量水，至少煎煮2次，每次1～3小時，過濾，合併濾液，濃縮至生藥量3～6倍，靜置1～3小時後濾取上清液調pH值至1.0～3.0，70～80℃保溫1～3小時，靜置12～20小時，濾過，沉澱加5～10倍量水，調節pH值至6.0～8.0，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過濾，濾液調pH值至1.0～3.0，60～70℃保溫30～60分鐘，靜置12～20小時，濾過，沉澱用乙醇洗至pH值為6.0～8.0，回收乙醇，離心得沉澱物；取沉澱物加入1～3倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，浸潤4～10小時，再加入4～8倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，攪拌2～10分鐘後，調pH值至6.0～7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸30～60分鐘，待冷卻至60～80℃後，用乙醇過濾，濾液調pH值至1.0～3.0，60±5℃保溫30～60分鐘，靜置4～10小時，棄去上清液，沉澱物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽乾，乾燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的製備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷，將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋，混勻後加入黃芩苷攪拌，溶解得雙黃連濃配液；絹布過濾，微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15～30分鐘並冷卻至70℃以下，調pH值6.8～7.5，定容至全量，攪拌均勻，進行粗濾，粗濾後的藥液冷卻至10～40℃，精濾，灌裝，115～118℃滅菌30分鐘，即得。
2.根據權利要求1所述的雙黃連注射液的製備方法，其特徵在於，由如下步驟製備1)金銀花濃浸膏的製備稱取金銀花，第一遍加入10倍量水，於80℃保溫浸泡1小時，第二遍加入10倍量水，於80℃保溫浸泡40分鐘，分次過濾，收取濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入90％以上乙醇至含醇量75％，靜置12小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到85％，靜置12小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值8.5～9.0，靜置24小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)。得金銀花濃浸膏；2)連翹濃浸膏的製備稱取連翹，第一遍加入8倍量水，浸泡30分鐘，加熱煮沸1.5小時，過濾；第二、第三遍各6倍量水，煮沸1.0小時，合併藥液濃縮至密度1.18～1.22(80±5℃測)，待溫度降至40℃以下，加入90％以上乙醇至含醇量75％，沉澱12小時，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味；待冷至40℃以下，加入膏重4倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置12小時，取上清液過濾，濾液濃縮至相對密度1.18～1.22(80±5℃測)；待冷至40℃以下，邊攪拌邊加入95％乙醇，使含醇量達到85％，靜置12小時，虹吸上清液用20％氫氧化鈉溶液調pH值8.5～9.0，靜置24小時，取上清液過濾，濾液回收乙醇至無醇味，並濃縮至相對密度1.15～1.20(80±5℃測)，得連翹濃浸膏；3)黃芩苷的製備取黃芩片，加入8倍量水，煎煮2小時，過濾，加入6倍量水，煎煮1小時，合併濾液，濃縮至生藥量4～5倍，靜置1小時後濾取上清液用2mol/L鹽酸調pH值至1.0～2.0，80℃保溫1小時，靜置12小時，濾過，沉澱加6～8倍量水，用40％氫氧化鈉溶液調節pH值至6.5～7.5，再加等量乙醇，攪拌使溶解，過濾，濾液用2mol/L鹽酸調pH值至1.0～2.0，60℃保溫30分鐘，靜置12小時，濾過，沉澱用乙醇洗至pH值為6.5～7.5，回收乙醇，離心得沉澱物；取沉澱物加入2倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，浸潤4小時以上，再加入4倍量(以黃芩苷幹品重量計)40℃以下的注射用水，攪拌2分鐘後緩緩加入10％氫氧化鈉溶液，調pH值至6.5～7.0，加入0.5％的藥用炭，煮沸30分鐘，待冷卻至60～80℃後，加入藥液體積0.5倍量的90％以上乙醇，趁熱過濾，濾液用10％HCl調pH值至1.5～2.0，60±5℃保溫30分鐘，靜置4小時以上，棄去上清液，沉澱物用95％的乙醇洗滌至pH＞4.0，抽乾，乾燥得黃芩苷；4)雙黃連注射液的製備按生藥比1∶2∶1，分別取金銀花濃浸膏、連翹濃浸膏和黃芩苷。將金銀花、連翹濃浸膏分別加注射用水稀釋，混勻後加入黃芩苷攪拌使溶解得雙黃連濃配液；絹布過濾，微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋至全量的90％，加入處方量的藥用炭，煮沸15分鐘並冷卻至70℃以下，調pH值6.8～7.5，定容至全量，攪拌均勻，進行粗濾，粗濾後的藥液冷卻至10～40℃，精濾，灌裝，115～118℃滅菌30分鐘，即得。
3.根據權利要求1或2的方法製成的雙黃連注射液的成分檢測方法，其特徵在於，該方法包括黃芩、金銀花與連翹中任意兩種或三種成分的含量測定。
4.根據權利要求3雙黃連注射液的成分檢測方法，其特徵在於所述的黃芩、金銀花和連翹的含量測定包括下列步驟(1)黃芩的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比40～60∶0.5～2∶60～40的甲醇-冰醋酸-水為流動相；檢測波長為276nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數按黃芩苷峰計算不低於1000，精密稱取黃芩苷對照品，加40～60％甲醇或乙醇製成每1ml含0.2mg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加40～60％甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標法計算含量，本品每1ml含黃芩以黃芩苷計，為6.0～12.0mg；(2)金銀花的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比10～30∶90～70∶0.1～2的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫。理論板數按綠原酸峰計算不低於2000；取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水、甲醇或乙醇製成每1ml含40μg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水、甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，本品每1ml含金銀花以綠原酸計，為0.05～2.0mg；(3)連翹的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比10～40∶90～60的乙腈-水為流動相；檢測波長為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫；理論板數按連翹苷峰計算不低於2000；取連翹苷對照品適量，精密稱定，加30～90％甲醇或乙醇製成每1ml含60μg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品10ml，置100～120目6g，內徑1cm的中性氧化鋁柱上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至幹，殘渣加30～90％甲醇或乙醇適量，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，本品每1ml含連翹以連翹苷計，為0.05～0.4mg。
5.根據權利要求4所述的雙黃連注射液的成分檢測方法，其特徵在於，黃芩的含量測定中，以體積比48∶1∶52的甲醇-冰醋酸-水為流動相；金銀花的含量測定中，以體積比20∶80∶1的甲醇-水-冰醋酸為流動相；連翹的含量測定中，以體積比25∶75乙腈-水為流動相。
6.根據權利要求3雙黃連注射液的成分檢測方法，其特徵在於所述的金銀花和連翹的含量測定包括下列步驟(1)金銀花的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比10～30∶90～70∶0.1～2的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫，理論板數按綠原酸峰計算不低於2000；取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水、甲醇或乙醇製成每1ml含40μg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水、甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，本品每1ml含金銀花以綠原酸計，為0.05～2.0mg；(2)連翹的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比10～40∶90～60的乙腈-水為流動相；檢測波長為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫；理論板數按連翹苷峰計算不低於2000；取連翹苷對照品適量，精密稱定，加30～90％甲醇或乙醇製成每1ml含60μg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品10ml，置100～120目6g，內徑1cm的中性氧化鋁柱上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至幹，殘渣加30～90％甲醇或乙醇適量，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，本品每1ml含連翹以連翹苷計，為0.05～0.4mg。
7.根據權利要求3雙黃連注射液的成分檢測方法，其特徵在於所述的黃芩和金銀花的含量測定包括下列步驟(1)黃芩的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比40～60∶0.5～2∶60～40的甲醇-冰醋酸-水為流動相；檢測波長為276nm；流速1ml/min；柱溫室溫，理論板數按黃芩苷峰計算不低於1000，精密稱取黃芩苷對照品，加40～60％甲醇或乙醇製成每1ml含0.2mg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加40～60％甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標法計算含量，本品每1ml含黃芩以黃芩苷計，為6.0～12.0mg；(2)金銀花的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比10～30∶90～70∶0.1～2的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為324nm；流速1ml/min；柱溫室溫，理論板數按綠原酸峰計算不低於2000；取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加水、甲醇或乙醇製成每1ml含40μg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品6ml，置50ml棕色量瓶中，用水、甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，本品每1ml含金銀花以綠原酸計，為0.05～2.0mg。
8.根據權利要求3雙黃連注射液的成分檢測方法，其特徵在於所述的黃芩和連翹的含量測定包括下列步驟(1)黃芩的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比40～60∶0.5～2∶60～40的甲醇-冰醋酸-水為流動相；檢測波長為276nm；流速1ml/min；柱溫室溫，理論板數按黃芩苷峰計算不低於1000，精密稱取黃芩苷對照品，加40～60％甲醇或乙醇製成每1ml含0.2mg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加40～60％甲醇或乙醇稀釋至刻度，搖勻，為供試品溶液；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各8μl，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標法計算含量，本品每1ml含黃芩以黃芩苷計，為6.0～12.0mg；(2)連翹的含量測定以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比10～40∶90～60的乙腈-水為流動相；檢測波長為278nm；流速1ml/min；柱溫室溫；理論板數按連翹苷峰計算不低於2000；取連翹苷對照品適量，精密稱定，加30～90％甲醇或乙醇製成每1ml含60μg的溶液，為對照品溶液；精密量取本品10ml，置100～120目6g，內徑1cm的中性氧化鋁柱上，用30～90％乙醇40ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至幹，殘渣加30～90％甲醇或乙醇適量，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，並稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，本品每1ml含連翹以連翹苷計，為0.05～0.4mg。
全文摘要
本發明提供了一種雙黃連注射液的製備方法，其先分別對黃芩、金銀花和連翹進行提取，然後再進行注射液的製備。同時還提供了雙黃連注射液的成分檢測方法，該成分檢測方法提高了產品質量的控制水平，保證產品的療效，既有利於生產廠家和管理部門對產品的監測，也可以為醫療部門和患者的治療提供較好的保障。
文檔編號G01N30/02GK101040915SQ20071009898
公開日2007年9月26日 申請日期2007年4月30日 優先權日2007年4月30日
發明者方同華 申請人:黑龍江省珍寶島製藥有限公司