治療或預防炎症性疾病的組合物和方法

2023-12-08 18:41:11

專利名稱：：治療或預防炎症性疾病的組合物和方法
技術領域：
：本發明涉及治療或預防炎症性疾病的組合物和方法。炎症性疾病，無論急性還是慢性，代表著健康衛生行業一個基本問題。簡言之，慢性炎症被認為是期間延長(數周或數月)的炎症，在此期間活動性炎症、組織破壞和試圖治癒同時進行著(RobbinsPathologicalBasisofDisease由R.S.Cotran，V.Kumar，和S.L.Robbins編著，W.B.SaundersCo.，第75頁，1989)。儘管慢性炎症可能是急性炎症演變而來，但是它也可以開始於一個隨時間發展的隱匿過程，例如，做為頑固性感染(如，結核、梅毒、肺部感染)的結果，它引起遲髮型過敏反應，延長暴露於內源性(如，升高血脂)或外源性(如二氧化矽、石棉、焦油、手術縫線)毒素，或針對自體組織的自身免疫反應(如風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、多發性硬化、牛皮癬)。因此慢性炎症性疾病包括許多常見的醫學情況，如風溼性關節炎、再狹窄、牛皮癬、多發性硬化、手術粘連、結核、和慢性炎症性肺部疾病(如哮喘、塵肺、慢性阻塞性肺部疾病、鼻息肉和肺纖維化)。牛皮癬牛皮癬是一種常見的慢性炎症性皮膚病，它以癢、灼傷、刺痛及易出血的隆起、發炎、增厚和有鱗屑的損害為特徵。大約10％的病人，牛皮癬伴有與風溼性關節炎所見改變類似的確切的關節症狀，。大約2-3％的美國人患有牛皮癬，每年有25,000例新病例被確診。目前牛皮癬的原因尚不清楚，儘管有相當多的證據表明它是一種多基因自身免疫性障礙。此外，當前牛皮癬不能治癒。可行的治療包括局部治療如類固醇霜和軟膏、煤焦油和地蒽酚，和系統治療如類固醇、紫外線B、PUVA、氨甲蝶呤和環孢菌素。然而，大多數抗-牛皮癬治療表現為不令人滿意的緩解率和/或潛在的嚴重副作用。在美國，每年用於治療牛皮癬的總費用據估計達30～50億美元，使得牛皮癬成為一個主要的衛生健康問題。多發性硬化多發性硬化，美國有350,000人(女性與男性比例為2∶1)患病，同時每年有8,000例新病例發生，是累及神經系統的最常見的慢性炎症性疾病。典型地，MS臨床表現為在數年多的期間不利的神經缺損反覆發作。粗略地有半數MS病人可發展成更為慢性階段。儘管該病在早期不會導致死亡或認知功能障礙，但是它可通過視敏度障礙；刺激性復視；幹擾運動功能影響行走和手的使用；產生腸道和膀胱失禁；強直狀態；和感覺缺損(觸、痛和溫度覺)而使病人致殘。MS原因不明，儘管有可觀的的證據表明它是一種自身免疫性疾病。當前，不能有效治癒多發性硬化，而且目前的治療原則僅僅是部分成功。例如，儘管化療藥物如氨甲堞呤、環孢菌素和硫唑嘌呤已用於控制那些對治療不敏感的進展性疾病的病人，但迄今為止，證實其遠期有益效果甚微。近來被許可的其它治療方法包括用於能夠行走的復發-緩解型MS病人的幹擾素-α(Paty等，Neurology43662-667，1993)，特別地，Betaseron(重組幹擾素α-1αβ；17位點取代的人幹擾素α，CysSer；Berlex/Chiron)或Avonex(重組幹擾素α-1α；產生於哺乳細胞的糖基化人幹擾素α；Biogen)。不幸的是，儘管Betaseron提供了多發性硬化病人生活質量的提高，但是疾病進展沒有呈現明顯改善。與Betaseron治療有關的不利經驗包括注射部位反應(炎症、疼痛、過敏和壞死)，和流感-樣症候群(發熱、寒戰、焦慮和精神混亂)。風溼性關節炎風溼性關節炎(RA)是一種衰弱性慢性炎症性疾病，1～2％的世界人口患病。該病引起機體多個關節疼痛、腫脹和破壞並且也可導致其它器官如肺和腎損害。該病晚期病人的死亡率高於某些癌症，正由於此，治療原則已經轉向攻克為減少不可逆關節損害可能性設計的早期藥物治療。美國風溼病學會的最近推薦(ArthritisandRheumatism39(5)713-722，1996)包括對於任何確診和有進展症狀病人進行早期開始的減輕-疾病的抗-風溫藥物(DMARD)治療。抗癌藥物已經成為絕大多數病人的第一線治療藥物，而化療藥物，氨甲蝶呤成為60-70％的風溼病學家的選擇藥物。疾病的嚴重程度常常使該藥不確定每周地使用，且使用氨甲蝶呤治療一些病人的疾病仍進展(超過50％的病人)，這樣第二線化療藥物如環孢菌素和硫唑嘌呤(單獨或聯合)被經常使用。再狹窄再狹窄是一種導致管壁增厚和使供應組織血管的血流損失的慢性血管損傷形式。它發生於對血管重建過程的反應，包括實際上任何試圖消除血管阻塞的操作，並且是限制侵入性治療血管疾病有效性的主要因素。在過去的15年，再狹窄對心血管研究是一個主要挑戰。據1994年估計(美國心臟和發作(stroke)基金會)，超過6千萬美國人患有一種或多種形式的心血管疾病。在同一年這些疾病奪去大約1百萬人的生命(佔美國死亡人數的41％)並且被認為是發達國家致死和致殘的主導原因。目前，不存在技術許可的有效預防人類再狹窄的治療。已研究的系統治療包括直接針對內皮缺失治療的物質、抗-血小板物質(如，阿司匹林)、血管舒張藥(如，鈣通道阻滯劑)、抗血栓形成劑(如，肝素)、抗-炎症物質(如，類固醇)、阻止血管平滑肌細胞(VSMC)增生物質(如，秋水仙鹼)和內皮再生促進劑(如，血管內皮生長因子)。已研究的局部治療包括局部藥物釋放(如，肝素)和β與γ射線。所有在人類的使用均令人失望，主要是由於它們似乎作用於再狹窄過程的一個局限部位。系統治療也遭遇另外的問題，即在疾病部位如何達到藥物充分吸收並停留以提供持續生物作用而不引起不利的系統併發症和毒性。炎症性腸道疾病炎症性腸道疾病(IBD)是指在小腸和大腸引起炎症和潰瘍的慢性疾病(主要指克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎)。簡要講，在美國大約有2百萬人患有IBD，男女比例患病均等。患病主要高峰在15-30歲之間，第二個高峰據報導在55-60歲之間。儘管有許多流行的證明模式，但它仍是一種原因不明的疾病。IBD通常的特點是緩解與不可預測的且嚴重程度不同的復發或突發交替出現，。大約50％的病人持續緩解，大多數患者在10年內至少復發一次。此外，該病常伴有許多系統併發症，以關節炎最為常見，有四分之一IBD患者發生關節炎症狀。關節炎症狀最經常在疾病進程中結腸受累時出現，在腸道疾病最活動時發作。此類型炎症性關節炎不會引起永久性畸形，且時間短暫。該病的其它併發症包括眼部炎症(虹膜炎、結膜炎和鞏膜外層炎)、口腔炎症(黏膜炎)、皮膚炎症(結節性紅斑和壞疽性膿皮病)，骨骼肌異常(關節強直性脊椎炎)、腎的併發症(腎結石和尿道瘻)、膽石症和其它肝臟疾病(如肝炎)和膽系統疾病(硬化性膽管炎)。不幸的是，在許多病例中，長病程疾病(大於10年)可能導致更為嚴重的併發症如結腸癌和腸外癌症。目前還不能治癒IBD，許多現行的治療藥物集中於通過抑制與疾病有關的炎症來控制疾病症狀。治療IBD的基本藥物是對氨基水楊酸和皮質類固醇，以及對使用這些藥物反應不好的一些病人，也可以使用抗生素和免疫抑制藥物。儘管藥物治療對於70-80％的病人有效，但對於患更為活動疾病的病人則常常需要手術治療。與活動疾病如腸道梗阻、穿孔、膿腫或出血有關的慢性症狀和併發症可以通過手術幹預而得以減輕和糾正。儘管該病手術治療不能永久性治癒疾病且復發率高，但是它減輕了活動期症狀。手術粘連手術粘連形成，正常分離的機體組織長在一起的複雜過程，最常發生於手術創傷結束時。這些術後粘連主要發生在經歷了婦科大手術60-90％的病人中，在工業化世界代表著腸道梗阻最常見的原因之一。這些粘連是手術治療失敗的主要原因，也是導致腸梗阻和不育症的主要原因。其它粘連-處置併發症包括慢性骨盆疼痛、尿道梗阻、和排洩機能障礙。目前，預防性治療是術後給藥4-5天用來阻止粘連形成。已檢驗了預防粘連的各種模式，包括(1)預防纖維沉積，(2)減少局部組織炎症和(3)消除纖維沉積。通過使用機械的或由粘性溶液構成的物理屏障來預防纖維沉積。儘管許多研究者正在使用粘連預防屏障，但存在著許多技術上的困難。通過給藥如皮質類固醇和非甾體類抗炎藥可減少炎症。然而，由於炎症反應程度和全身副作用所致劑量的限制，在動物模型中使用這些藥物的結果，並非令人鼓舞。最後，研究了通過使用蛋白水解酶和纖維蛋白分解酶消除纖維沉積。臨床使用這些酶的一個潛在併發症是出血過多的可能性。炎症性肺部疾病慢性炎症性肺部疾病，包括例如，哮喘、塵肺、慢性阻塞性肺部疾病、鼻息肉和肺纖維化，影響著全世界許多人。典型地，此類疾病以侵入性炎症過程和受累組織增厚為特徵。例如，鼻息肉以增厚的鼻基膜組織為特徵。息肉可發生於呼吸系統疾病如，哮喘、囊纖維化、原發性纖毛運動障礙和免疫缺乏。鼻息肉被認為是發生於上呼吸道的一個慢性炎症過程表現。36％的不能耐受阿司匹林的病人中發現有鼻息肉，7％哮喘病人、0.1％的兒童和大約20％囊纖維化病人有鼻息肉。與鼻息肉有關的其它情況是Churg-Strauss症狀、過敏性真菌竇炎和纖毛運動障礙症候群和Young’s症狀。大約40％鼻息肉切除術病人復發。(Settipane，AllergyAsthmaProc.17(5)231-236，1996)。鼻息肉病的主要症狀是鼻腔阻塞和嗅覺障礙。醫學治療鼻息肉病的目的是，(1)去除鼻息肉和鼻炎症狀，(2)重新建立鼻腔呼吸和嗅覺和(3)預防復發。由少數大的息肉所致的鼻道閉塞，可以用簡單的鼻息肉切除術治療以來幫助病人通過鼻腔呼吸。手術治療的目的是，儘可能清除通道內的息肉以恢復鼻生理性能和引流感染的鼻竇。然而，鼻息肉復發是臨床鼻學科最常見的未解決問題之一。由於手術不能治療黏膜疾病的炎症成分，故息肉病的補充醫學治療總是必要的。最廣泛使用的治療是局部應用皮質類固醇，以減小息肉和預防術後復發。類固醇類減少鼻炎、改善鼻呼吸、減小息肉大小和降低復發率，但是，它們對嗅覺和鼻竇病理學具有不足取的作用。然而，對多發息肉，類固醇類可與感染性併發症所需的抗生素聯合應用。其它治療鼻息肉病的藥物包括H1受體拮抗劑(如氮斯汀HCL)和抗利尿劑(如，速尿)。這些治療不總是有效而且復發率仍很高。鼻息肉現行的治療是利用皮質類固醇來減輕疾病症狀，但對疾病病理學基礎沒有作用。此外，疾病復發和類固醇治療的抗藥性已經在鼻息肉病人中觀察到。移植排斥移植排斥是宿主免疫系統將移植組織識別為異物的複雜過程。以形態學和基本機制為基礎，排斥反應分成三種類型超急性、急性和慢性。冒著感染的危險，用免疫抑制治療消除或控制了早期(急性)排斥，慢性排斥已經成為移植機能障礙和最終失敗的不斷增加的重要原因。目前，慢性血管排斥是接受心臟移植者第一年內死亡或移植失敗的首要原因。簡要講，本發明提供治療或預防炎症性疾病的方法，包括向炎症部位釋放抗-微管物質。這些物質代表性例子包括taxanes(如，紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、促微管積聚蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起的細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，抗-微管物質製成更進一步地包括聚合物的製劑。可治療的炎症性疾病的代表性例子包括多發性硬化、牛皮癬、關節炎、狹窄、移植排斥、手術粘連、炎症性腸道疾病和炎症性肺部疾病。本發明的一些實施例中，抗-微管物質可與其它化合物或組合物一起被製成如，乳液、軟膏、霜、洗液、凝膠、噴霧劑等。一些實施例中，化合物或組合物起載體功能，所述載體是聚合物或是非-聚合物。聚合物載體代表性例子包括聚(乙烯醋酸-乙烯酯)、乳酸和羥基乙酸的共聚物、聚己內酯、聚(乳酸)、聚(乳酸)和聚(己內酯)共聚物、明膠、透明質酸、膠原基質和白蛋白。其它適宜載體的代表性例子包括，但不限於乙醇；乙醇和乙二醇類(例如，乙二醇或丙二醇)的混合物；乙醇和肉豆蔻酸異丙酯混合物或乙醇、肉豆蔻酸異丙基酯及水的混合物(例如55∶5∶40)。乙醇和eineol或D-檸檬烯(含或不含水)的混合物；乙二醇類(例如，乙二醇或丙二醇)和乙二醇類混合物如丙二醇和水、磷脂醯甘油、二油醯磷脂醯甘油、Transcutol或萜品油烯；肉豆蔻酸異丙基酯和1-己基-2-吡咯烷酮、N-十二烷基-2-二乙哌啶酮(piperidione)或1-己基-2-吡咯烷酮的混合物。本發明還有一方面，抗-微管物質可製成包含在手術或醫療裝置或植入體之內，或製成適於通過手術或醫療裝置或植入體釋放的製劑，例如，斯藤特氏印模、縫線、留置導管、假體，等等。參考下面詳細描述和附圖，本發明的這些和其它方面將被證實。此外，更為詳細地描述一定過程、裝置或組合物的各種參考在下面陳述，並由此將之全文引入參照。附圖簡述圖1A是顯示中性粒細胞(5×106細胞/ml)對血漿調理的CPPD結晶(50mg/ml)的化學螢光反應曲線。紫杉醇(也認為是「紫杉酚」)的作用(○)代表無紫杉醇，(●)4.5μM，(△)14μM，(▲)28μM，(□)46μM；n＝3。圖1B是顯示紫杉醇抑制血漿調理CPPD結晶誘導中性粒細胞化學螢光的濃度依賴性對時間曲線。圖1C是顯示由化學螢光測試的氟化鋁對調理的酵母多糖-誘導中性粒細胞活化作用影響的曲線圖。圖1D顯示由化學螢光測試的甘氨酸乙酯對調理酵母多糖-誘導中性粒細胞活化作用曲線圖。圖1E顯示LY290181對調理酵母多糖-誘導中性粒細胞化學螢光作用曲線圖。圖2是顯示溶菌酶從對血漿調理DPPD結晶(50mg/ml)反應的中性粒細胞(5×106細胞/ml)中釋放的曲線圖。紫杉醇的作用(○)代表無紫杉醇，(●)28μM，(△)對照(僅有細胞)，(▲)對照(細胞和28μM紫杉醇)；n＝3。圖3A是顯示對血漿調理DPPD結晶(50mg/ml)反應的中性粒細胞(5×106細胞/ml)產生超氧陰離子曲線圖。紫杉醇的作用(○)代表無紫杉醇，(●)28μM，(△)對照(僅有細胞)；n＝3。圖3B是表示紫杉醇抑制血漿調理CPPD結晶誘導中性粒細胞生成超氧陰離子的濃度依賴性對時間曲線。圖3C是顯示LY290181對CPPD結晶誘導的中性粒細胞超氧陰離子生成作用直方圖。圖4A是中性粒細胞(5×106細胞/ml)對血漿調理的酵母多糖(1mg/ml)反應的的化學螢光反應曲線。紫杉醇的作用(○)無紫杉醇，(●)28μM；n＝3。圖4B是顯示血漿調理的酵母多糖-誘導的中性粒細胞超氧陰離子生成曲線圖。圖5A是顯示髓過氧化物酶從對血漿調理CPPD結晶(50mg/ml)反應的中性粒細胞(5×106細胞/ml)中釋放的曲線圖。紫杉醇的作用(○)無紫杉醇，(●)28μM；(△)對照(僅有細胞)；(▲)對照(細胞和28μM紫杉醇)；n＝3。圖5B顯示紫杉醇抑制髓過氧化物酶從對血漿調理CPPD結晶(50mg/ml)反應的中性粒細胞中釋放的濃度依賴性曲線圖；n＝3。圖5C和5D是顯示LY290181溶菌酶和髓過氧化物酶自CPPD結晶-誘導的中性粒細胞釋放圖。圖6是描述不同濃度紫杉醇時滑膜細胞增生曲線圖。圖7描述體外實驗時紫杉醇對角質細胞作用的曲線圖。圖8A和8B表示紫杉醇對星狀細胞形態學作用。電子顯微鏡圖像揭示轉基因對照動物星型細胞厚的、排列整齊的細絲狀突起，而紫杉醇治療的轉基因動物星型細胞形態學發生改變。相對於未治療動物，紫杉醇誘導星型細胞變圓，窄化細胞加工和降低細胞漿細絲。圖9是描述用大於10-8M濃度紫杉醇處理的EOMA細胞活性曲線圖。圖10是描述用濃度不斷增高的紫杉醇處理的培養基中EOMA細胞程序性死亡百分比的直方圖。圖11A-11E是描述各種抗-微管物質24小時後對滑膜細胞作用曲線圖。圖12A-12H是顯示各種抗-微管物質抑制膠原酶表達作用的印跡。圖13A-13H是顯示各種抗-微管物質對蛋白聚糖表達作用的印跡。圖14A和14B是用對照(未負載)熱糊劑處理的患腫瘤CAM的兩幅照片。簡要地，圖14A中央白色物質是腫瘤組織。注意豐富的血管從CAM各個方向進入腫瘤。腫瘤誘導宿主脈管系統通過「血管形成因子」的產生而向腫瘤內生長。腫瘤組織沿著供應它的血管向遠側膨脹。圖14B是15A所示CAM的底面視圖。簡要講，該視圖描述進入腫瘤的血管基本表現象車輪的輪輻。注意腫瘤附近血管密度大於正常CAM組織周圍的密度。圖14C和14D是用負載20％紫杉醇熱糊劑處理的患腫瘤CAM的兩幅照片。簡要地，圖14C中央白色物質是腫瘤組織。注意腫瘤組織附近少量血管。抗-微管物質持續釋放能夠克服由腫瘤產生的血管形成刺激物。腫瘤本身缺乏血管形成和進行性尺寸減小。圖14D是14C所示CAM底部的圖片，描述與對照腫瘤組織相比進入腫瘤的血流中斷。注意腫瘤附近的血管密度下降和較CAM正常周圍組織的密度稀疏。圖15A是顯示無-殼蛋培養第6天的圖片。圖15B是數位化計算機-顯示的用立體顯微鏡拍攝的活的、未染色的毛細血管圖像(1040×)。圖15C顯示由大的、基層血管(箭頭；1300×)流入的絨毛膜尿囊膜(CAM)微脈管系統侵蝕鑄塑圖片。圖15D是描述橫斷CAM切下的0.5mm厚塑料切片的圖片，並在光學顯微鏡水平記錄。該圖片顯示CAM組成，包括外面的雙-層外胚層(Ec)、含毛細血管(箭頭)和散在外膜細胞的中胚層(M)，和單層內胚層(En)(400×)。圖15E是電子顯微鏡水平(3500×)的圖片，其中顯示典型的毛細血管結構存在薄-壁內皮細胞(箭頭)和結合的的周皮細胞。圖16A、16B、16C和16D是與每10ml甲基纖維素10μg紫杉醇反應48小時拍攝的4種不同的、未染色CAMs系列數位化圖像。含紫杉醇透明甲基纖維素盤(*)存在於每一個CAM且位於單一無血管區(A)與周圍血島(Is)上。這些無血管區伸出盤外且典型地具有大約6mm直徑。圖16D描述無論小的還是大的血管由無血管區周邊改變方向的典型「肘」效應(箭頭)。圖17A是顯示直接外緣到無血管區的毛細血管(箭頭)展現無數內皮細胞停滯於有絲分裂的圖片(＝400×)。外胚(Ec)；中胚(M)；外胚(En)。圖17B(＝400×)顯示無血管區內固有的典型毛細血管結構已經消除和有無數外滲血細胞(箭頭)。圖17C(＝400×)顯示在無血管區中央區域，紅細胞分散於整個中胚層。圖18A(＝2,200×)顯示位於下鄰外胚層(Ec)的小毛細血管有3個內皮細胞停滯於有絲分裂(*)。幾個在外胚層或中胚層的其它類型細胞也停滯於有絲分裂。圖18B(＝2,800×)顯示早期無血管區包含下鄰外胚層的外滲血細胞；這些血細胞與預期的內皮細胞(*)和它們的混雜過程。降解性細胞空泡(箭頭)。圖18C(＝2,800×)顯示對紫杉醇反應，外胚-中胚界面已變為聚居著含密集空泡和顆粒(箭頭)的各個降解階段細胞。圖19A按照圖式描述基質金屬蛋白酶轉錄系統調節。圖19B是描述IL-1刺激AP-1轉錄活性的印跡。圖19C是顯示從紫杉醇預處理的軟骨細胞釋出的溶解產物IL-1誘導的結合活性降低曲線圖。圖20是顯示IL-1誘導膠原酶和溶基質素在軟骨細胞RNA水平的增加，和此誘導可被紫杉醇預處理抑制的印跡。圖21是描述體外實驗紫杉醇對正常軟骨細胞活性作用曲線圖。圖22是繪製觀測到的紫杉醇(20μgml-1在37℃pH分別為3.7和4.9的10％HPβCD和10％HPγCD溶液)準一級動力學降解曲線圖。圖23是顯示環糊精和紫杉醇在37℃水中溶解相曲線圖。圖24是顯示37℃紫杉醇與γCD、HPβCD或HPγCD二級絡合曲線圖。圖25是顯示PDLLA-PEG-PDLLA組合物的熔化溫度、焓、分子量、多分散性和特性粘度的表。圖26是描述PDLLA-PEG-PDLLA和PEG的DSC熱分析圖。加熱速率10℃/分。熔化溫度和焓見圖30。圖27是描述紫杉醇在37℃從負載20％紫杉醇PDLLA-PEG-PDLLA柱狀體向PBS白蛋白緩衝液累積釋放曲線圖。誤差棒代表4個樣本標準差。由於降解40％PEG柱狀體於第4天中斷。圖28A、28B和28C是描述負載20％紫杉醇的PDLLA-PEG-PDLLA柱狀體在體外實驗時37℃釋放紫杉醇過程中維度、長度(A)、直徑(B)和溼重(C)變化曲線圖。圖29是顯示PDDLA-PEG-PDLLA柱狀體(負載20％紫杉醇)在37℃向PBS白蛋白緩衝液釋放過程中團塊消減和聚合物成分變化表。圖30是表示負載20％紫杉醇PDDLA-PEG-PDLLA柱狀體(20％PEG，1mm直徑)向37℃PBS白蛋白緩衝液釋放過程中凝膠滲透色譜圖。圖31A、31B、31C和31D是紫杉醇釋放前和釋放期間乾燥的PDDA-PEG-PDLLA柱狀體(負載20％紫杉醇，1mm直徑)的SEMs。A20％PEG，0天；B30％PEG，0天；C20％PEG，69天；D30％PEG，69天。圖32是描述紫杉醇在37℃從負載20％紫杉醇PDDA∶PCL混合物和PCL向PBS白蛋白緩衝液累積釋放曲線圖。誤差棒代表4個樣本的標準差。圖33是描述，在一定時間過程，紫杉醇在37℃從PCL糊劑向PBS緩衝液釋放曲線圖。該PCL糊劑含紫杉醇微粒和#140篩製備的各種添加劑。誤差棒代表3個樣本的標準差。圖34是描述紫杉醇在37℃從紫杉醇-明膠-PCL糊劑向PBS緩衝液釋放時程曲線圖。該圖顯示明膠濃度(#140篩)和使用#140或#60篩製備的紫杉醇-明膠(1∶1)微粒的大小的作用。誤差棒代表3個樣本的標準差。圖35A和35B是描述添加劑(17A；#140篩)和微粒大小(17B；#140或#60篩)及添加劑比例(#140篩)對含20％紫杉醇PCL糊劑懸浮於37℃蒸餾水後腫脹行為影響的曲線圖。由於基質的崩解，對紫杉醇-明膠中用270μm微粒製備的糊劑和含30％明膠糊劑的測定4小時後中斷。誤差棒代表3個樣本的標準差。圖36A、36B、36C和36D代表20％紫杉醇-明膠-PCL(20∶20∶60)糊劑在懸浮於37℃蒸餾水前(36A)和懸浮後6小時(36B)的掃描電子顯微圖。顯微圖36C和36D是36B的高倍放大，顯示紫杉醇(杆狀)和明膠基質的密切聯繫。圖37A和37B代表用明膠-PCL(37A)和紫杉醇-明膠-PCL(20∶20∶60；37B)糊劑處理的CAMs顯微圖片，顯示紫杉醇處理的CAM中的無血管區。圖38是顯示環糊精和紫杉醇糊劑在37℃水中溶解相曲線圖。圖39是顯示紫杉醇在37℃與γCD、HPβCD或HPγCD二級絡合曲線圖。圖40是顯示在37℃紫杉醇和羥丙基-β-環糊精在50∶50水∶乙醇溶液中相溶解度曲線圖。圖41是顯示紫杉醇在37℃0、5、10或20％HPγCD溶液中溶解速率概況曲線圖。圖42是顯示繪製觀測到的紫杉醇在37℃pH分別為3.7和4.9的10％HPβCD和10％HPγCD溶液中準一級動力學降解曲線圖。圖43A和43B是分別表示一定時間紫杉醇從EVA膜釋放，和紫杉醇在同一膜中殘留比例的兩幅圖。圖43C是顯示不含紫杉醇EVA/F127膜隨時間膨脹的曲線圖。圖43D是表示不含紫杉醇EVA/Span80膜隨時間膨脹的曲線圖。圖43E是描述各種EVA/F127混合物的應力對應變曲線圖。圖44是顯示血漿調理的聚合物微球對中性粒細胞對PCL微球(20mg/ml微球在0.5ml細胞(濃度為5×10-6細胞/ml)中)化學螢光效應影響曲線圖。圖45是顯示血漿預包覆+/-2％消泡F127對中性粒細胞(5×10-6細胞/ml)對PCL微球化學螢光效應影響曲線圖。圖46是顯示血漿預包覆+/-2％消泡F127對中性粒細胞(5×10-6細胞/ml)對PMMA微球化學螢光效應影響曲線圖。圖47是顯示血漿預包覆+/-2％消泡F127對中性粒細胞(5×10-6細胞/ml)對PLA微球化學螢光效應影響曲線圖。圖48是顯示血漿預包覆+/-2％消泡F127對中性粒細胞(5×10-6細胞/ml)對EVA∶PLA微球化學螢光效應影響曲線圖。圖49是顯示用IgG(2mg/ml)預包覆或先用2％消泡F127然後用IgG(2mg/ml)預包覆對中性粒細胞對PCL微球化學螢光效應影響曲線圖。圖50是顯示用IgG(2mg/ml預包覆)或先用2％消泡F127然後用IgG(2mg/ml)預包覆對中性粒細胞對PMAL微球化學螢光效應影響曲線圖。圖51是顯示用IgG(2mg/ml)預包覆或先用2％消泡F127然後用IgG(2mg/ml)預包覆對中性粒細胞對PVA微球化學螢光效應影響曲線圖。圖52是顯示用IgG(2mg/ml)預包覆或先用2％消泡F127然後用IgG(2mg/ml)預包覆對中性粒細胞對EVA∶PCL微球化學螢光效應影響曲線圖。圖53A是顯示37℃從含1％、2％、5％、或10％紫杉醇聚己內酯微球向磷酸緩衝鹽水釋放速率概貌曲線圖。圖53B是顯示用對照微球處理的CAM圖片。圖53C是顯示用負載5％紫杉醇微球處理的CAM圖片。圖54是描述對照微球(PLLA∶GA-85∶15)顆粒大小範圍的曲線圖。圖55是描述負載20％紫杉醇微球(PLLA∶GA-85∶15)顆粒大小範圍的曲線圖。圖56是描述對照微球(PLLA∶GA-85∶15)顆粒大小範圍的圖。圖57是描述負載20％紫杉醇微球(PLLA∶GA-85∶15)顆粒大小範圍的圖。圖58A、58B和58C是描述紫杉醇從不同大小範圍微球和PLLA與GA不同比值中釋放速率概況曲線圖。圖59A和59B是顯示紫杉醇從具有PLLA與GA不同比值的微球中釋放速率概況曲線圖。圖60A和60B是顯示紫杉醇從具有PLLA與GA不同比值的微球中釋放速率概況曲線圖。圖61A、61B和61C是描述紫杉醇從不同大小和PLLA與GA不同比值微球中釋放速率概況曲線圖。圖62是描述紫杉醇從紫杉醇-尼龍微膠囊中釋放速率概況曲線圖。圖63A和63B是粘連蛋白包覆的PLLA微球在膀胱組織(63A)，和聚(L-賴氨酸)微球在膀胱組織的照片。圖64顯示在膠原-誘導的關節炎大鼠模型紫杉醇微膠粒改善每日平均關節炎評分的曲線圖。圖65A-65D顯示在膠原-誘導的關節炎大鼠模型膠束紫杉醇作用的系列x-線。圖66A-66C是大鼠踝關節掃描電子顯微圖。圖67是顯示膠原-誘導的關節炎大鼠模型的組織學放大視圖。圖68A和68B是顯示膠原-誘導的關節炎大鼠模型滑膜血管組織病理學放大視圖。圖69是描述唑酮誘導小鼠耳接觸性過敏反應的圖。在抗原攻擊同時和此後每日一次用1％紫杉醇凝膠或載體治療。通過與攻擊前耳厚度比較測量耳腫脹從而定量皮膚炎症。數據代表均值+/-SD(n＝5)。**p＜0.01；***p＜0.001。圖70是描述唑酮誘導小鼠耳接觸性過敏反應的圖。在抗原攻擊後24小時即開始和此後每日一次用1％紫杉醇凝膠或載體治療。通過與攻擊前耳厚度比較測量耳腫脹從而定量皮膚炎症。數據代表均值+/-SD(n＝5)。*p＜0.05；**p＜0.01。圖71是描述局部應用PMA誘導小鼠耳炎症的圖。在用PMA後1小時即開始和此後每日一次用1％紫杉醇凝膠或載體治療。通過與攻擊前耳厚度比較測量耳腫脹從而定量皮膚炎症。數據代表均值+/-SD(n＝5)。*p＜0.05；***p＜0.001。圖72是描述局部應用PMA誘導小鼠耳炎症的圖。在用PMA後24小時即開始和此後每日一次用1％紫杉醇凝膠或載體治療。通過與攻擊前耳厚度比較測量耳腫脹從而定量皮膚炎症。數據代表均值+/-SD(n＝5)。*p＜0.05；***p＜0.001。圖73描述局部應用PMA誘導小鼠耳炎症的圖。用1％紫杉醇凝膠(右耳)或載體(左耳)預處理。用PMA後48小時攝取圖像。注意與紫杉醇-處理的右耳相比，載體-處理的左耳紅和血管充血。共5隻小鼠觀察到同樣的結果。圖74是描述紫杉醇對DM20轉基因小鼠體重的影響。轉基因小鼠用載體或紫杉醇(2.0mg/kg)每周治療3次共24天然後在第27天殺死。結果是2隻紫杉醇治療的動物和1隻未治療動物的結果。紫杉醇治療的動物表現出很小體重下降，而對照動物體重下降30％，從29g到22g。圖75是描述紫杉醇高劑量間歇療法對轉基因小鼠臨床症狀進展的作用。轉基因小鼠用20mg/kg每周一次共4周治療(0、1、2和3)並觀察10周，每2天對每項症狀測定評分。數據代表紫杉醇治療轉基因小鼠(n＝5)和對照小鼠(n＝3)的平均分(所有症狀累積分)。紫杉醇減輕DM20在轉基因小鼠過度表達引起的衰退，而對照小鼠衰退極為迅速3隻動物中有2隻未能生存到試驗方案(如指示)的最後。圖76A和76B顯示在大鼠頸動脈模型血管周應用(用於血管外膜)紫杉醇糊劑。用2.5mg或者對照糊劑(76A)或者負載20％紫杉醇糊劑(76B)處理左總頸動脈外膜表面。由於平滑肌細胞過度增生對照動脈表現出動脈壁厚度增加，而負載紫杉醇糊劑治療動脈未顯示出內膜增厚跡象。圖77A和77B描述在大鼠頸動脈模型血管周應用紫杉醇糊劑的近接效應。紫杉醇-負載糊劑直接用到鄰接避免再狹窄血管的血管周區域；然而，當糊劑不直接鄰接血管壁時則新內膜明顯充血。圖78A、78B和78C顯示紫杉醇對星型細胞GFAP染色的作用。取自正常動物和載體或紫杉醇治療的轉基因動物(發展為一種類似多發性硬化的神經疾病)的大腦切片用GFAP(有活力星型細胞的標識物染色)並進行組織學檢測。與正常大腦切片相比，對照轉基因小鼠星型細胞數量和總GFAP水平增加。然而，細胞組織學相似。與未治療轉基因動物相比，紫杉醇治療轉基因動物的大腦切片顯示星型細胞數量和總GFAP水平下降。組織學上，細胞變圓和星型細胞的星狀突起變細。圖79A和79B是顯示paclitaxe抑制T-細胞對髓磷脂鹼性蛋白多肽(GP68-88)和伴刀豆球蛋白反應刺激曲線圖。GP68-88(A)或伴刀豆球蛋白(B)作為刺激物RT-1的T-細胞增生培養48-小時。在抗原刺激開始或24小時後以梯度濃度加入紫杉醇和其載體(微膠粒)。無論任何刺激物，紫杉醇在0.02μM這樣低的濃度抑制T-細胞增生。圖80A、80B、80C和80D，是顯示塊菌素和紫杉醇抑制無論IL-1還是TNF-誘導的NF-KB活性的直方圖。圖81A和81B是表示濃度不斷增加的紫杉醇或喜樹鹼濃度對人前列腺癌細胞(LNCaP)(2×103/孔)生長作用直方圖，用龍膽紫染色，測定492nm吸收度。用％表示相對於對照組的增長百分比，給出的是8個結果的平均值。闡述發明前，對將要使用的一些術語的限定進行陳述有助於理解發明。這裡使用的「炎症性疾病」指以血管變化水腫和中性粒細胞浸潤(如，急性炎症反應)；單核細胞組織浸潤；炎症細胞、結締組織細胞和它們的細胞產物的組織破壞；結締組織代替的試圖修復(如，慢性炎症反應)為特徵的任何數量的疾病。這類疾病代表性的實例包括許多常見醫學情況如風溼性關節炎、動脈粥樣硬化、牛皮癬、感染性腸道疾病、多發性硬化、手術粘連、再狹窄、結核、移植排斥和慢性炎症性呼吸系統疾病(如，哮喘、肺炎、慢性阻塞性肺部疾患、鼻息肉和肺纖維化)。「抗微管藥」理解為包括影響微管功能的任何蛋白質、多肽、化學品或其它分子，例如，通過預防或穩定集聚反應。各種方法可用於測定特定化合物的抗微管活性，包括例如，由Smith等(CancerLett79(2)213-219，1994)和Mooberry等(CancerLett96(2)261-266，1995)描述的測定方法。正如上面提到的，本發明提供治療或預防炎症性疾病的方法，包括向炎症部位釋放抗微管物質的步驟。簡言之，各種藥物可釋到炎症部位(或潛在的炎症部位)，無論有或沒有載體(如，聚合物或軟膏)，以治療或預防炎症性疾病。這樣的藥物代表性的實例包括taxanes[如紫杉醇(將在下面詳細討論)和docetaxel][Schiff等，Nature277665-667，1979；Long和Fairchild，CancerResearch544355-4361，1994；Ringel和Horwitz，J.Natl.CancerInst.83(4)288-291，1991；Pazdur等，CancerTreat.Rev.19(4)351-385，1993]，喜樹鹼(campothecin)、elentherobin(如美國專利5,473,057)、sarcodictyins(包括sarcodictyinA)、epothilonesA和B(Bollag等，CancerResearch552325-2333，1995)、discodermolide(ter和Haar等，Biochemistry35243-250，1996)、氧化氘(D2O)(James和Lefebvre，Genetics130(2)305-314，1992；Sollott等，J.Clin.Invest.951869-1876，1995)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)(Oka等，CellStruct.Funct，16(2)125-134，1991)、塊菌素(7-deazaadenosine)(Mooberry等，CancerLett.96(2)261-266，1995)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)(Panda等，J.Biol.Chem.272(12)7681-7687，1997)；Wood等，Mol.Pharmacol.52(3)437-444，1997)、氟化鋁(Song等，J.Cell.Sci.Suppl.14147-150，1991)、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)(succinimidylsuccinate)(Caplow和Shanks，J.Biol.Chem.265(15)8935-8941，1990)、甘氨酸乙酯(Mejillano等，Biochemistry31(13)3478-3483，1992)、單克隆抗特異反應抗體(Leu等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91(22)10690-10694，1994)、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)(Hwang等，Biochem.Biophys.Res.Commun.208(3)1174-1180，1995)、低滲狀態(190mosmol/L)、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)(Haussinger等，Biochem.Cell.Biol.72(1-2)12-19，1994)引起的細胞水腫，結合動力蛋白(Ohba等，Biochem.Biophys.Acta.1158(3)323-332，1993)、赤黴素(Mita和Shibaoka，Protoplasma119(1/2)100-109，1984)、XCH01(驅動蛋白-樣蛋白質)(Yonetani等，Mol.Biol.Cell7(suppl)211A，1996)、溶血磷脂酸(Cook等，Mol.Biol.Cell6(suppl)260A，1995)、鋰離子(Bhattacharyya和Wolff，Biochem.Biophys.Res.Commun.73(2)383-390，1976)、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)(Akashi等，Planta182(3)363-369，1990)、甘油緩衝液(Schilstra等，Biochem.J.277(PT.3)839-847，1991；Farrell和Keates，Biochem.Cell.Biol.68(11)1256-1261，1990；Lopez等，J.Cell.Biochem.43(3)281-291，1990)、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液(Brown等，J.CellSci.104(Pt.2)339-352，1993；Safiejko-Mroczka和Bell，J.Histochem.Cytochem.44(6)641-656，1996)、微管聯繫蛋白(例如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)(Burgess等，CellMoil.Cytoskeleton20(4)289-300，1991；Saoudi等，J.Cell.Sci.108(Pt.1)357-367，1995；Bulinski和Bossler，J.cell.Sci.107(Pt.10)2839-2849，1994；Ookata等，J.CellBiol.128(5)849-862，1995；Boyne等，J.Conp.Neurol.358(2)279-293，1995；Ferreira和Caceres，J.Neurosci.11(2)392-400，1991；Thurston等，Chromosoma105(1)20-30，1996；Wang等，BrainRes.Mol.BrainRes.38(2)200-208，1996；Moore和Cyr，Mol.Biol.Cell7(suppl)221-A，1996；Masson和Kreis，J.CellBiol.123(2)，357-371，1993)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)(Saoudi等，J.Cell.Sci.108(Pt.1)357-367，1995；Simerly等，J.CellBiol.111(4)1492-1504，1990)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP髓蓋)(Dye等，CellMotil.Cytoskeleton21(3)171-186，1992；Azhar和Murphy，CellMotil.Bytoskeleton15(3)159-161，1990；Walker等，J.CellBiol.114(1)73-81，1991；Drechsel和Kirschner，Curr.Biol.4(12)1053-1061，1994)、穩定的小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)(Prrollet等，Biochim.Biophys.Acta1160(1)113-119，1992；Pirollet等，Biochemistry31(37)8849-8855，1991；Bosc等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93(5)2125-2130，1996；Mrgolis等，EMBOJ.9(12)4095-4102，1990)和來自有絲分裂的張力(Nicklas和Ward，J.CellBiol.126(5)1241-1253，1994)，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。這些化合物可以通過解聚微管(例如，秋水仙礆和長春花礆)，或者通過穩定微管結構(例如，紫杉醇)起作用。本發明的一個優選實施例中，治療物質是紫杉醇，該化合物通過與微管蛋白結合形成異常的有絲分裂紡錘休而分列微管結構。簡要地，紫杉醇是從紫杉屬brevifolia(太平洋yew)和TaxomycesAndreanae和太平洋yew內生植物真菌(Stierle等，Science60214-216，1993)的果實和幹樹皮中提取的高度衍生的雙萜類(Wani等，J.Am.Chem.Soc.932325，1971)。「紫杉醇」(應當理解為包括前藥(produrg)、類似物和衍生物如，TAXOL、TAXOTERE、Docetaxel、紫杉醇的10-去乙醯類似物和紫杉醇的3』N-去苯乙醯基-3』N-叔丁氧基羰基類似物)可按照本領域技術人員公知的技術很方便地製備(參見例如，Schiff等，Nature277665-667，1979；Long和Fairchild，CancerResarch544355-4361，1994；Ringel和Horwitz，J.Natl.CancerInst.83(4)288-291，1991；Pazdur等，CancerTreat.Rev.19(4)351-386，1993；WO94/07882；WO94/07881；WO94/07880；WO94/07876；WO93/23555；WO93/10076；WO94/00156；WO93/24476；EP590267；WO94/20089；U.S.專利5,294,637；5,283,253；5,279,949；5,274,137；5,202,448；5,200,534；5,229,529；5,254,580；5,412,092；5,395,850；5,380,751；5,350,866；4,857,653；5,272,171；5,411,984；5,248,796；5,422,364；5,300,638；5,294,637；5,362,831；5,440,056；4,814,470；5,278,324；5,352,805；5,248,796；5,411,984；5,059,699；4,942,184；TetrahedronLetters35(52)9709-9712，1994；J.Med.Chem.354230-4237，1992；J.Med.Chem.34992-998，1991；J.NaturalProd.57(10)1404-1410，1994；J.NaturalProd.57(11)1580-1583，1994；J.Am.Chem.Soc.1106558-6560，1988)，或由各種商品獲得，包括例如，SigmaChemical公司，St.Louis，Missouri(T7402-來自紫杉屬brevifolia)。紫杉醇衍生物或類似物的代表性例子包括7-脫氧-docetaxol、7，8-環丙烷taxane、7，8-cyclopropataxanes、N-取代的2-氮雜環丁烷酮、6，7-環氧紫杉醇s、6，7-修飾的紫杉醇、10-去乙酸基紫杉酚、10-去乙醯紫杉酚(來自10-去乙醯漿果赤黴素III)、紫杉酚的膦酸和碳酸衍生物、紫杉酚2』，7-二(1，2-苯二羧酸鈉，10-去乙醯氧-11，12-二氫紫杉酚-10，12(18)-二烯烴衍生物，10-去乙醯氧基紫杉酚、protaxol(2』-和/或7-O-酯衍生物)，2』-和/或-7-O-碳酸衍生物)、紫杉酚側鏈的不對稱合成、氟紫杉酚、9-去氧紫杉烷、(13-乙醯基-去氧漿果赤黴素III，9-脫氧紫杉醇，7-去氧-9-脫氧紫杉醇，10-去乙酸-7-脫氧-9-脫氧紫杉醇，含氫或乙醯基和羥基和叔丁氧基羰基胺衍生物、硫酸2』-丙烯醯基紫杉酚和硫酸2』-O-醯基酸紫杉酚衍生物、琥珀醯紫杉酚、2』-γ-氨基丁醯紫杉酚甲酸鹽、2』-乙醯紫杉酚、7-乙醯紫杉酚、7-甘氨酸氨基甲酸紫杉酚、2』-羥-PEG(5000)氨基甲酸紫杉酚、2』-苯甲醯基和2』，7-二苯甲醯基紫杉酚衍生物，其它前藥(2』-乙醯紫杉酚；2』，7-二乙醯紫杉酚；2』琥珀醯紫杉酚；2』-(β-丙氨醯-紫杉酚)；2』γ-氨基丁醯紫杉酚甲酸鹽；2』琥珀醯紫杉酚的乙二醇衍生物；2』-戊醯紫杉酚；2』-(N，N-二甲基甘氨醯基)紫杉酚；2』-(2-(N，N-二甲氨基)丙醯)紫杉酚；2』鄰羧基苯甲醯基紫杉酚；紫杉酚的2』脂肪族羧基衍生物；前藥{2』-(N，N-二乙氨基丙醯基)紫杉酚、2』-(N，N-二甲基甘氨醯基)紫杉酚、7(N，N-二甲基甘氨醯基)紫杉酚、2』，7-二-(N，N-二甲基甘氨醯基)紫杉酚、7(N，N-二乙氨基丙醯基)紫杉酚、2』7-二-(N，N-二甲基甘氨醯基)紫杉酚、2』-(L-甘氨醯基)紫杉酚、7』-(L-甘氨醯)紫杉酚、2』，7-二-(L-甘氨醯)紫杉酚、2』-(L-丙氨醯)紫杉酚、7-(L-丙氨醯)紫杉酚、2』，7-二-(L-丙氨醯)紫杉酚、2』-(L-亮氨醯)紫杉酚、7-(L-亮氨醯紫杉酚、2』，7-二-(L-亮氨醯)紫杉酚、2』-(L-異亮氨醯紫杉酚、7-(L-異亮氨醯紫杉酚、2』，7-二-(L-異亮氨醯)紫杉酚、2』-(L-纈氨醯紫杉酚、7-(L-纈氨醯紫杉酚、2』，7-二-(L-纈氨醯紫杉酚、2』-(L-苯丙氨醯紫杉酚、7-(L-苯丙氨醯)紫杉酚、2』，7-二-(L-苯丙氨醯)紫杉酚、2』-(L-脯氨醯)紫杉酚、7-(L-脯氨醯)紫杉酚、2』，7-二-(L-脯氨醯)紫杉酚、2』-(L-賴氨醯)紫杉酚、7-(L-賴氨醯)紫杉酚、2』，7-二-(L-賴氨醯)紫杉酚、2』-(L-穀氨醯)紫杉酚、7-(L-穀氨醯)紫杉酚、2』，7-二-(L-穀氨醯)紫杉酚、2』-(L-胍基戊氨醯)紫杉酚、7-(L-胍基戊氨醯)紫杉酚、2』，7-二-(L-胍基戊氨醯)紫杉酚}，苯基異絲氨酸側鏈修飾的紫杉酚類似物，taxotere，(N-脫苯甲醯基-N-正-(丁氧基蒈酮)-10-去乙醯基紫杉酚，和紫杉烷(例如，漿果赤黴素III、三尖杉寧鹼、10-去乙醯基漿果赤黴素III、短葉、yunantaxusin、紫杉素)。微管解聚(或使不穩定或分解)物質的代表性例子包括諾考達唑(Nocodazole)(Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990；Dotti等，J.CellSci.Suppl.1575-84，1991；Oka等，Struct.Funct.16(2)125-134，1991；Wiemer等，J.CellBiol.136(1)71-80，1997)；細胞鬆弛素B(Illinger等，Biol.Cell73(2-3)131-138，1991)；長春花礆(Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990；Dirk等，Neurochem.Res.15(11)1135-1139，1990；Illinger等，Biol.Cell73(2-3)131-138，1991；Wiemer等，J.CellBiol.136(1)71-80，1997)；長春新鹼(Dirk等，Neurochem.Res.15(11)1135-1139，1990；Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990)；秋水仙礆(Allen等，Am.J.Physiol.261(4Pt.1)L315-L321，1991；Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990；Gonzalez等，Exp.Cell.Res.192(1)10-15，1991；Stargell等，Mol.Cell.Biol.12(4)1443-1450，1992)；CI980(秋水仙礆類似物)(Garcia等，AnticancerDrugs6(4)533-544，1995)；秋水仙胺(Barlow等，Cell.Motil.Cytoskeleton19(1)9-17，1991；Meschini等，J.Microsc.176(Pt.3)204-210，1994；Oka等，CellStruct.Funct.16(2)125-134，1991)；鬼臼毒素(Ding等，J.Exp.Med.171(3)715-727，1990)；苯菌靈(Benomyl)(Hardwick等，J.CellBiol.131(3)709-720，1995；Shero等，GenesDev.5(4)549-560，1991)；Oryzalin(Stargell等，Mol.Cell.Biol.12(4)1443-1450，1992)；Majusculamide(大醯胺)C(Moore，J.Ind.Microbiol.16(2)134-143，1996)；脫乙醯甲基秋水仙礆(VanDolah和Ramsdell，J.Cell.Physiol.166(1)49-56，1996；Wiemer等，J.Cell.Biol.136(1)71-80，1997)；和甲基-2-苯並咪唑氨基甲酸酯(MBC)(Brown等，J.Cell.Biol.123(2)387-403，1993)。製劑如上面提到的，這裡描述的抗-微管治療物質可被製成各種方式，並且可另外包括載體。在這方面，廣泛的各種載體可選自聚合的或者非-聚合的起始物。例如，在本發明的一個實施例中，可使用各種聚合物載體以包含和/或釋放上面討論的一種或多種治療物質，包括例如生物降解和非生物降解組合物。代表性的生物降解組合物包括白蛋白、膠原、明膠、透明質酸、澱粉、纖維素(甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素、鄰苯二甲酸乙酸纖維素、琥珀酸纖維素、鄰苯二甲酸羥基丙基甲基纖維素)、酪蛋白、右旋糖酐、多糖、纖維蛋白原、聚(D，L交酯-共-乙交酯)、聚乙交酯、聚羥丁酸酯、聚烷基碳酸酯和聚原酸酯、聚酯、聚戊酸、聚二噁烷酮、聚(乙烯對苯二酸酯)、聚馬來酸、聚羥基丙二酸、聚酐、含磷氮鏈聚合物、聚胺基酸和它們的共聚物(一般參見，Illum，L.，Davids，S.S.(編著)「PolymersinControlledDrugDelivery」Wright，Bristol，1987；Arshady，J.ControlledRelease171-22，1991；Pitt，Int.J.Phar.59173-196，1990；Holland等，J.ControlledRelease4155-0180，1986)。非生物降解聚合物的代表性例子包括聚(乙烯醋酸乙烯酯)(「EVA」)共聚物、矽膠、丙烯酸聚合物(聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚甲基異丁烯酸酯、聚甲基犬丙烯酸酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚胺(尼龍6，6)、聚氨酯、聚氨乙酯、聚氨醚酯、聚(酯-脲)、聚[聚(氧乙烯)、聚(氧丙烯)、消泡s和聚(四甲基甘油)]乙酯，、矽膠和乙烯聚合物(聚乙烯比咯烷酮、聚(乙烯醇)、聚(鄰苯二甲酸醋酸乙烯酯)。聚合物可以是陰離子的(如，藻酸鹽、角叉菜膠、羧甲基纖維素和聚丙烯酸)或陽離子的(如，殼聚糖、聚-L-賴氨酸、聚乙烯亞胺和聚(丙烯胺))。(一般參見Dunn等，J.AppliedPolymerSci.50353-365，1993；Cascone等，J.MaterialsSci.MaterialsinMedicine5770-774，1994；Shiraishi等，Biol.Pharm.Bull.16(11)1164-1168，1993；Thacharodi和Rao，Int』lJ.Pharm.120115-118，1995；Mizaki等，Int』lJ.Pharm.118257-263，1995)。特別優選的聚合物載體包括聚(乙烯醋酸乙烯酯)、聚(D，L-乳酸)的寡聚物和聚合物、聚(L-乳酸)的寡聚物和聚合物、聚羥基乙酸、乳酸和羥基乙酸的共聚物、聚已內酯、聚戊內酯、聚酐、聚已內酯或聚(乳酸)與聚乙二醇甘油的共聚物(如，MePEG)，以及它們的混合物。具有所需釋放特性和/或特定需要性質的聚合物載體可製成各種形式。例如，聚合物載體可製成暴露於特定觸發條件如pH(參見例如，Heller等，「ChemicallySelf-RegulatedDrugDeliverySystems，」inPolymerinMedicineIII，ElsevierSciencePublishersB.V.，阿姆斯特丹，1988，175-188頁；Kang等，J.AppliedPolymerSci.48343-354，1993；Dong等，J.Controlled19171-178，1992；Dong和Hoffmam，J.ControlledRelease15141-152，1991；Kim等，J.ControlledRelease28143-152，1994；Comejo-Bravo等，J.ControlledRealease33223-229，1995；Wu和Lee，Pharm.Res.10(10)1544-1547，1993；Serres等，Pharm.Res.13(2)196-201，1996；Peppas，「FundamentalsofpH-andTemperature-SensitiveDeliverySystems」，Gurny等(編著)的PulsatileDrugDelivery，WissenschaftlicheVerlagsgesellschaftmbH，Stuttgart，1993，41-55頁；Doelker，「纖維素衍生物」，1993，在Peppas和Langer(編著)，BiopolymersI，Springer-Verlag，柏林)。pH敏感聚合物代表性例子包括聚(丙烯酸)和它的衍生物(包括例如，均聚物如聚(氨基羧酸)；聚(丙烯酸)；聚(甲基丙烯酸)，這些均聚物的共聚物，和聚(丙烯酸)共聚物和如上面討論的丙烯醛基單體的共聚物。其它pH敏感聚合物包括多糖如鄰苯二甲酸乙酸纖維素；鄰苯二甲酸羥基丙基甲基纖維素；琥怕酸乙酸羥基丙基甲基纖維素；1，2，4-苯三酸酯乙酸纖維素；和殼聚糖。還有其它pH敏感聚合物包括pH敏感聚合物和水溶性聚合物的混合物。同樣地，聚合物載體可被製成溫度敏感形式(參見例如，Chen等，」NovelHydrogelsofatemperature-Sensitive消泡GraftedtoaBioadhesivePolyacrylicAcidBackboneforVaginalDrugDelivery，」在Proceed.Intern.Symp.Control.Rel.BioactMater.22167-168，ControlledReleasesociety，Inc.，1995；Okano，」MolecularDesignofStimuli-ResponsiveHydrogelsforTemporalControlledDrugDeliery，」在Proceed.Intern.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.22111-112，ControlledReleaseSociety，Inc.，1995；Johnston等，Pharm.Res.9(3)425-433，1992；Tung，Int』lJ.pharm.10785-90，1994；HarshandGehrke，J.ControlledRelease17175-186，1991；Bae等，Pharm.Res.8(4)531-537，1991；Dinarvand和D』Emanuele，J.ControlledRelease36221-227，1995；Yu和Grainger「NovelThermo-sensitiveAmphiphilicGelsPolyN-isopropylacrylamide-co-sodiumacrylate-co-n-N-alkylacrylamideNaetworkSynthesisandPhysicochemicalCharacterization」，Dept.ofChemicalBiologicalSci.，OregonGraduateInstituteofScienceTechnology，Beaverton，OR，820-821頁；Zhou和Smid，「PhysicalHydrogelsofAssociativeStarPolymers，」PolymerResearchInstitute，Dept.ofChemistry，CollegeofEnvironmentalScienceandForestry，StateUniv.ofNewYork，Syracuse，NY，822-823頁；Hoffman等，「CharacterizingPoreSizesandWater『Structure』inStimuli-ResponsiveHydrogels，」CenterforBioengineering，Univ.ofWashington，Seattle，WA，828頁；Yu和Grainger，「Thermo-sensitiveSwellingBehaviorinCrosslinkedN-isopropylacrylamideNetworksCationic，AnionicandAmpholyticHydrogels，」Dept.ofChemicalBiologicalSci.，OregonGraduateInstituteofScienceTechnology，Beaverton，OR，829-830頁；Kim等，Pharm.Res.9(3)283-290，1992；Bae等，Pharm.Res.8(5)624-628，1991；Kono等，J.ControlledRelease3069-75，1994；Yoshida等，J.ControlledRelease3297-102，1994；Okano等，J.ControlledRelease36125-133，1991；Hoffman，「ThermallyReversibleHydrogelsContainingBiologicallyActiveSpecies，」inMigliaresi等(編著)，PolymersinMedicineIII，ElsevierSciencePublishersB.V.，阿姆斯特丹，1988，161-167頁；Hoffman，「ApplicationsofThermallyReversiblePolymersandHydrogelsinTherapeuticsandDiagnostics，」inThirdInternationalSymposiumonRecentAdvancesinDrugDeliverySystems，SaltLakecity，UT，2月24-27，1987，297-305頁；Gutowska等，J.ControlledRelease2295-104，1992；Palasis和Gehrke，J.ControlledRelease181-12，1992；Paavola等，Pharm.Res.12(12)1997-2002，1995。代表性熱凝凝聚合物和它們的明膠溫度(LCST(℃))的例子包括均聚物如聚(N-甲基-N-n-丙基丙烯醯胺)，19.8；聚(N-n-丙基丙烯醯胺)，21.5；聚(N-甲基-N-異丙基丙烯醯胺)，22.3；聚(N-n-丙基異丁烯醯胺)，28.0；聚(N-異丙基丙烯醯胺)，30.9；聚(N，n-二乙基丙烯醯胺)，32.0；聚(N-異丙基異丁烯醯胺)，44.0；聚(N-環丙基丙烯醯胺)，45.5；聚(N-乙基甲基丙烯醯胺)，50.0；聚(N-甲基-N-乙基丙烯醯胺)，56.0；聚(N-環丙基異丁烯醯胺)，59.0；聚(N-乙基丙烯醯胺)，72.0。此外，熱凝凝聚合物可由上述單體製備共聚物，或者這些均聚物與其它水溶性聚合物如丙烯醛單體(例如，丙烯酸和它們的衍生物如異丁烯酸、丙烯酸酯和它們的衍生物如丁基異丁烯酸酯、丙烯醯胺、和N-n-丁基丙烯醯胺)混合。其它熱凝凝聚合物的代表性例子包括纖維素酯衍生物如羥丙基纖維素，41℃；甲基纖維素，55℃；羥丙基甲基纖維素，66℃；和乙基羥乙基纖維素，和消泡s如F-127，10-15℃；L-122，19℃；L-92，26℃；L-81，20℃；和L-61，24℃。本發明聚合物載體可被製成各種形式，包括例如，杆-狀裝置、小丸、片或膠囊(參見例如，Goodell等，Am.J.Hosp.Pharm.431454-1461，1986；Langer等，「Controlledreleaseofmacromoleculesfrompolymers」，inBiomedicalPolymers，PolymericMaterialsandPharmaceuticalsforBiomedicalUse，Goldberg，E.P.，Nakagim，A.(編著)AcademicPress，113-137頁，1980；Rhine等，J.Pharm.Sci.69265-270，1980；Brown等，J.Pharm.Sci.721181-1185，1983；和Bawa等，J.ControlledRelease1259-267，1985)。治療物質可通過包藏於聚合物基質、由共價鍵連接，或裝入微膠囊連接。在本發明特定實施例中，治療組合物以非-膠囊製劑如微球(大小範圍從毫微米到微米)、糊劑、不同大小的絲、膜和噴霧劑形式提供。優選地，本發明治療組合物被製成適宜於想要使用的樣式。本發明的特定方面，治療組合物應是生物適合性的，並且在數天到數月的期間內釋放一種或多種治療藥。例如，提供7～10天的期間內釋放大於治療藥物10％、20％或25％(重量/體積)的「速釋」或「脈衝」治療組合物。在特定實施例中，這樣的「速釋」組合物應能夠釋放化療量(合適的)的所需藥物。在其它實施例中，提供在7～10天期間內釋放小於治療藥物1％(重量/體積)的「緩釋」治療組合物。還有，本發明治療組合物優選數月內穩定並且能夠在無菌條件下製備和保存。本發明的一些方面，根據特定用途，治療組合物可製成50nm～500μm範圍內的任意大小，取決於特別應用。或者，組合物可製成能固化形成膜或包衣的隨時應用的「噴霧劑」。這樣的噴霧可由廣泛大小序列的微球製備，包括例如，0.1μm～3μm，10μm～30μm，和30μm～100μm。本發明治療組合物也可製備成不同的「糊或凝膠形式。例如，在本發明一實施例中，製備的治療組合物在一定溫度(例如，溫度大於37℃，如40℃、45℃、50℃、55℃或60℃)呈液態。這樣的「熱糊劑」按照本公開所述可以很方便地製備。本發明的另一方面，本發明治療組合物可製成膜劑，優選地，膜劑厚度一般小於5、4、3、2或1mm，更優選小於0.75mm或0.5mm，和最優選小於500μm～100μm。該膜劑優選地具有良好張力柔順性(例如，大於50，優選大於100，和更優選大於150或200N/cm2)、良好的粘附性(即，方便地粘附於潮的或溼的表面)，和具有受控的滲透性。本發明更有一方面，本發明治療組合物是局部應用製劑。代表性例子包括乙醇；乙醇和乙二醇的混合物(例如，乙二醇或丙二醇)；乙醇和肉豆蔻酸異丙酯的混合物或乙醇、肉豆蔻酸異丙基酯和水的混合物(例如55∶5∶40)；乙醇和eineol或D-檸檬烯(含或不含水)混合物；乙二醇類(例如，乙二醇或丙二醇)和乙二醇類混合物如丙二醇和水、磷脂醯甘油、二油醯磷脂醯甘油、Transcutol或萜品油烯；肉豆蔻酸異丙基酯和1-己基-2-吡咯烷酮、N-月桂基-2-二乙哌啶酮(piperidione)或1-己基-2-吡咯烷酮的混合物。其它賦形劑也可加入到上述製劑中，包括例如，酸類如油酸和亞油酸，和肥皂如十二烷基磺酸鈉。對上述更詳細的描述，一般參見，Hoelgaardetal.，J.Contr.2111，1985；Liu等.，Pharm.Res.8938，1991；Roy等，J.Pharm.Sci.83；126，1991；Ogiso等，J.Pharm.Sci.84482，1995；Sasaki等，J.Pharm.Sci.80533，1991；Okabe等，J.Contr.Rel32243，1994；Yokomizo等，J.Contr.Rel.38267，1996；Yokomizo等，J.Contr.Rel.4237，1996；Mond等，J.Contr.Rel.3372，1994；Michniak等，J.Contr.Rel.32147，1994；Sasaki等，J.Pharm.Sci.80533，1991；BakerHadgraft，Pharm.Res.12993，1995；Jasti等，AAPSProceedings，1996；Lee等，AAPSProceedings，1996；Ritschel等，SkinPharmacol.4235，1991；和McDaidDeasy，Int.J.Pharm.13371，1996。本發明一些實施例中，治療組合物也可包含其它成分如表面活性劑(例如，消泡s如F-127、L-122、L-192、L-81和L-61。本發明更一方面，提供適宜包含和釋放一種疏水化合物的聚合物載體，該載體包含與碳水化物、蛋白質或多肽結合的疏水化合物。一些實施例中，聚合物載體包含或包括一種或多種疏水化合物的區域、口袋或小粒。例如，在本發明一實施例中，疏水化合物摻進含有疏水化合物的基質中，然後將基質與聚合物載體整合。此中可使用各種基質，包括例如，碳水化合物和多糖如澱粉、纖維素、葡聚糖、甲基纖維素，和透明質酸、蛋白質或多肽如白蛋白、膠原和明膠。在二者擇一的另一實施例中，疏水化合物可包含一個疏水芯，和該芯包含在一個親水殼中。可用於包含和釋放本發明所述治療物質的其它的載體包括羥丙基β環糊精(Cserhati和Hollo，Int.J.Pharm.10869-75，1994)、脂質體(參見例如，Sharma等，CancerRes.535877-5881，1993；Sharma和Straubinger，Pharm.Res.11(60)889-896，1994；WO93/18751；US專利5,242,073)、脂質體/凝膠(WO94/26254)、毫微膠囊(Bartoli等，J.Microencapsulation7(2)1191-197，1990)、微膠粒(Alkan-Onyuksel等，Pharm.Res.11(2)206-212，1994)、植入體(Jampel等，Invest.Ophthalm.Vis.Science34(11)3076-3083，1993；Walter等，CancerRes.542217-2212，1994)、毫微顆粒(Violante和LanzafamePAACR)、改性的毫微顆粒(美國專利5,399,363)、紫杉酚乳劑/溶液(美國專利5,407,683)、微膠粒(表面活性劑)(美國專利5,403,858)、合成的磷脂化合物(美國專利4,534,899)、氣壓彌散劑(美國專利5,301,664)，乳液、泡沫、噴霧、凝膠、洗劑、霜、軟膏、分散囊、氣溶膠顆粒或固體-或-液體小滴、微乳劑(美國專利5,330,756)，聚合物殼(毫微或微膠囊)(美國專利5,439,686)，在表面-活性劑中的taxoid為主組合物(美國專利5,438,072)、乳劑(Tarr等，Pharm.Res.462-165，1987)、毫微球(Hagan等，Proc.Intern.Symp.ControlRel.Bioact.Mater.22，1995；Kwon等，PharmRes.12(2)192-195；Kwon等，PharmRes.10(7)970-974；Yokoyama等，J.Contr.Rel.32269-277，1994；Gref等，Science2631600-1603，1994；Bazile等，J.Pharm.Sci.84493-498，1994)和植入體(美國專利4,882,168)。正如下面將要更詳細地討論，本發明治療物質，任選地整合到本發明描述的一種或多種載體中以形成治療組合物，可被製備和用於治療或預防多種疾病。治療或預防炎症性疾病上面已經提到，本發明提供治療或預防多種炎症性疾病，包括給予病人一種抗-微管物質的步驟。可治療的炎症性疾病的代表性例子包括，例如，萎縮性胃炎、感染性溶血性貧血、移植排斥、炎症性中性白細胞減少、大皰天皰瘡、腹腔疾病、脫髓鞘神經病、皮肌炎、感染性腸道疾病(潰瘍性結腸炎和克羅恩氏病)、心肌炎、肌炎、鼻息肉、慢性鼻竇炎、普通天皰瘡、原發性腎小球性腎炎、牛皮癬、手術粘連、狹窄或再狹窄、鞏膜炎、硬皮病、溼疹(包括特異反應性皮炎、刺激性皮炎、過敏性皮炎)和I型糖尿病。其它炎症性疾病包括結節性脈管炎[例如，巨細胞動脈炎(暫時性動脈炎，高安氏病)、結節性多脈管炎、過敏性脈管炎和肉芽腫病(Churg-Strauss病)、多脈管炎重疊併發症、過敏性結節性脈管炎(Henoch-Schonlein紫癜)、血清病、藥物引起的結節性脈管炎、感染性結節性脈管炎、贅生性結節性脈管炎、與結締組織疾病有關的結節性脈管炎、與先天性補體系統缺陷有關的結節性脈管炎、韋格內氏肉芽腫病、kawasaki’s病、中樞神經系統結節性脈管炎、血栓閉塞性脈管炎和系統性硬化)]；胃腸道疾病(例如，胰腺炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、潰瘍性直腸炎、原發性硬化性膽管炎、各種原因包括自發性引起的良性狹窄(例如，膽道、食管、十二指腸、小腸或結腸的狹窄)；呼吸道疾病(如哮喘、過敏性肺炎、石棉肺、矽肺和其它形式的肺炎、慢性支氣管炎和慢性阻塞性氣道疾病)；鼻淚管疾病(例如，各種原因包括原發性引起的狹窄)；以及咽鼓管疾病(各種原因包括原發性引起的狹窄)。為了進一步理解這些疾病，代表性的炎症性疾病詳細描述如下。1.類症性皮膚疾病(例如，牛皮癬、溼疹)應用本發明藥物、組合物和方法，多種炎症性皮膚疾病可以很容易治療或預防。例如，本發明的一個實施例中，通過向炎症位點(或潛在的炎症位點)釋放抑制微管功能的藥物，皮膚炎症性疾病如牛皮癬或溼疹得以治療或預防。簡要地，皮膚細胞沿兩種可能程序-正常生長或傷口癒合遺傳編程。正常生長時，皮膚細胞產生於基底細胞層，然後穿過表皮到達皮膚表面。死細胞以與新細胞生成相同的速度從健康皮膚脫落。正常細胞的更新周期(即細胞生成到死亡的時間)大約為28天。在傷口癒合時，觸發了生長和修復的加速導致皮膚細胞更新周期(取代或修復傷口)加快、血液供應增加(以滿足與生長有關的增加的代謝需要)和局限炎症反應。在很多方面，牛皮癬與過度的傷口癒合過程相似。皮膚細胞(稱之「角質細胞」)在2-4天這樣短的時間內生成併到達皮膚表面。皮膚表面不能足夠快地剝離死亡細胞和過量角質細胞堆積而形成高的、有鱗屑的損害。生長由真皮(表皮下的支持組織)中建立的用以提供支持過度增生角質細胞所必需養分的新血管支持。同時，淋巴細胞、中性粒細胞和巨噬細胞組織浸潤，產生炎症、腫脹和痛苦，以及可能產生促進角質細胞迅速增生的生長因子。所有這些細胞(角質細胞、血管內皮細胞和白細胞)產生組織分解酶或蛋白酶由此加重疾病進程和周圍組織破壞。應用上面提供的組合物，炎症性皮膚損害可以得到迅速治療。特別是，將抗微管物質直接用於炎症位點(或潛在的炎症位點)，以治療或預防該病。適宜的抗微管物質已在上面詳細討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起的細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，抗微管物質是紫杉醇、喜樹鹼或epothilone之外的藥物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物給藥，或者以前述或下面詳細討論的脂質體、霜或軟膏製劑給藥。本發明優選地實施例中，物質或組合物以局部給藥或者皮下給藥。對牛皮癬的有效抗微管治療將取得至少下述之一效果減少皮損數量和嚴重度，降低活動性疾病加重發作的頻率或病程，延長緩解期間(即病人無症狀的期間)和/或減輕相關症狀的嚴重程度或期間(例如，關節疼痛和腫脹、軸性骨骼疼痛、腸道症狀)。臨床治療效果是減少皮損的大小或數量、減低皮膚症狀(受損皮膚的疼、灼痛和出血)和/或減輕相關症狀(如，關節紅、熱、腫，腹瀉，腹痛)。抗微管物質至少產生下述之一的病理學效果抑制角質細胞增生，減少皮膚炎症(例如，通過作用於趨化和生長因子、抗原呈遞、產生活性氧類和基質金屬蛋白酶)，和抑制真皮血管生成。抗微管物質以任意方式給藥可達到上述終點，但優選的方法包括局部和系統給藥。局部患病的病人可以直接在牛皮癬皮損處使用外用paclitaxe霜、軟膏或潤滑藥。例如，含0.01％～10％重量比紫杉醇的外用paclitaxe霜，根據疾病的嚴重度和病人對治療的反應給藥。在一優選的實施例中，含0.1％～1％重量比紫杉醇的外用製劑用於牛皮癬皮損。或者，將在適宜藥學載體的紫杉醇直接皮下注射以控制個別皮損。對具有多種疾病或皮膚症狀嚴重的病人(如，牛皮癬關節炎、萊特爾氏症候群、相關的脊椎炎、相關炎症性腸道疾病)，可進行紫杉醇系統治療給藥。例如，以10-75mg/m2的劑量靜脈注射紫杉醇製劑的間歇治療給藥，劑量取決於治療反應和病人的耐受性；同等的口服製劑也適於這樣的指徵。其它抗微管物質可以按照「相當於紫杉醇」劑量的效力和可耐受性調整給藥。其它可從局部用抗-微管物質受益的情況包括溼疹疾病(特異性皮炎、接觸性皮炎、溼疹)、免疫性大皰疾病、惡化前的表皮腫瘤、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、角化棘皮瘤、惡化的黑色素瘤、病毒性疣。含0.01％～10％重量比紫杉醇的外用霜、軟膏、和乳液適宜於控制這些狀況。2.多發性硬化本發明的另一方面，抗-微管物質可用於治療或預防多發性硬化。簡要地，多發性硬化(MS)是人中樞神經系統的破壞性脫髓鞘疾病。儘管它的病因和發病機理不明，據信與遺傳、免疫和環境因子有關。在疾病進程中，MS病人大腦進行性脫髓鞘導致運動功能喪失。儘管脫髓鞘的確切機制不明，但在髓鞘損害區域有星形膠質細胞增生和聚集。在這些部位，巨噬細胞-樣活性和增加的蛋白酶活性至少部分地與髓鞘的降解有關。抗-微管物質可用於炎症部位(或潛在的炎症部位)，以治療或預防該疾病。適宜的抗微管物質已在上面詳細討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源性微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細討論的脂質體形式給藥。在一些實施例中，藥物或組合物可口服、靜脈內給藥，或者直接向疾病部位(優選地在超聲、CT、螢光鏡、MRI或內窺鏡指導下)給藥。對多發性硬化的有效抗微管治療將取得下述一種或多種效果減輕症狀嚴重程度；縮短疾病惡化期間；增加疾病緩解/無症狀期間的頻率和時間；預防永久性損害和殘疾；和/或預防/減弱疾病的慢性進程。臨床上，將取得改善視覺症狀(視覺喪失，復視)、步態蹣跚(虛弱，站立不穩，感覺缺失，強直，反射亢進，精細動作喪失)、上肢機能障礙(虛弱，強直，感覺喪失)、膀胱機能喪失(尿急，尿失禁，排尿困難，不完全排空)、抑鬱、情感不穩定和認知障礙的效果。病理學上，治療減輕下述一種或多種損害，如髓鞘脫失、血腦屏障破壞、單核細胞血管外浸潤、免疫學異常、膠質瘢痕形成和星型細胞增生、髓鞘蛋白酶產生，和傳導速度損害。抗-微管物質以能達到終點的任何方式給藥，但優選的給藥方法包括靜脈注射、口服，或皮下、肌內或鞘內注射。抗微管物質可按慢性低治療量給藥用於預防疾病進展、延長疾病緩解期，或者減輕活動期疾病症狀。或者，治療藥物可用更高劑量的「脈衝」治療以誘導急性活動期疾病進入緩解期。可使用達到這些終點的最小劑量給藥並且可依病人、疾病嚴重程度、給予的藥物製劑、和給藥途徑的不同而不同。例如，使用紫杉醇，根據治療反應每1-4周以10-50mg/m2的紫杉醇連續慢性低治療量系統給藥；可按每1-21天50-250mg/m2應用1-6個循環的高劑量「脈衝」治療系統給藥。其它抗微管物質可按相當於此劑量的效力和耐受性調整給藥。3.關節炎炎症性關節炎是發達國家嚴重的健康問題，特別是年長個體患病數量增加。例如，一種炎症性關節炎，類風溼性關節炎(RA)是不明原因的多系統慢性、復發性、炎症性疾病。儘管許多器官受累，但RA主要是有時導致受累及關節破壞和強直的嚴重慢性滑膜炎的形式(RobbinsPathologicalBasisofDisease，由R.SCotran，V.Kumar，和S.L.Robbins，W.B.SaundersCo.，1989)。病理學上，該病以明顯增厚的形成絨毛狀突起伸向關節腔的滑膜為特徵，多層滑膜細胞基膜(滑膜細胞增生)，白細胞滑膜浸潤(巨噬細胞、淋巴細胞、漿細胞和淋巴濾泡，稱為「炎性滑膜炎」)，以及壞死細胞和纖維蛋白沉積於滑膜。此過程的結果是稱為肉芽組織的組織形成並且肉芽組織逐漸生長充填關節腔。肉芽組織通過血管生成過程產生演化為滑膜炎的必要的廣泛新血管網。肉芽組織細胞釋放的消化酶(基質金屬蛋白酶(如，膠原酶，溶基質素))和其它炎症介質(如，過氧化氫、過氧化物、溶菌酶、花生四烯酸代謝產物)導致軟骨組織進行性破壞。肉芽入侵關節軟骨引起軟骨組織的侵蝕和斷裂。逐漸地，軟骨下骨侵蝕伴纖維性關節強硬並最終導致受累及關節骨質性關節強硬。一般認為，但不是結論性觀點，RA是自身免疫性疾病，許多不同的關節基因刺激激活了免疫遺傳學上易感宿主的免疫反應。無論外源性感染物質(Ebstein-Barr病毒、風疹病毒、巨細胞病毒、肝炎病毒、人T-細胞嗜淋巴細胞病毒、支原體和其它)還是內源性蛋白質(膠原、蛋白多糖、改變的免疫球蛋白)均被推斷為觸發不適當宿主免疫反應的病原體。除所述這些物質外，自身免疫在疾病進程中起一定作用。特別是，相關抗原被抗原呈遞細胞(滑膜上的巨噬細胞或樹狀細胞)攝取，加工，和呈遞給T淋巴細胞。T細胞引發細胞免疫反應和刺激B淋巴細胞增生和分化程成為漿細胞。最後的結果是產生針對宿主組織的過度不適當免疫反應(如，針對II型膠原的抗體、針對自體IgG的Fc片段(稱為「類風溫因子」)的抗體)。免疫反應進一步擴大和加速軟骨組織破壞。級聯反應一旦啟動，無數軟骨組織破壞介質參與類風溼性關節炎的形成。因此，本發明的一個方面是，提供治療或預防炎症性關節炎(如，類風溼性關節炎)的方法，包括施予患者治療有效量的抗-微管物質的步驟。炎症性關節炎包括各種不同的情況包括但不限於，類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、系統性硬化(硬皮病)、混和性結締組織病、斯耶格倫症候群、強直性脊椎炎、貝切特氏症候群、肉樣瘤病和骨關節炎-所有這些的特徵是以關節紅腫、疼痛為主要症狀。在本發明的一個優選的實施例中，抗-微管物質可直接關節內注射給藥、手術糊劑或以其它途徑給藥，例如，系統或口服給藥。適宜的抗-微管物質已在上面詳細討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源性微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細討論的脂質體形式給藥。在一些實施例中，抗-微管物質是紫杉醇、喜樹鹼和epothilone之外的物質。抗-微管物質對炎症性關節炎的有效治療將取得下述一種或多種效果(i)減輕症狀嚴重程度(疼、腫和受累及關節觸痛；晨起僵硬、虛弱、疲勞、食欲不振、體重下降)；(ii)減輕疾病臨床表徵的嚴重程度(關節囊增厚、滑膜肥大、關節積液、軟組織攣縮、運動受限、關節強硬、永久性關節變形)；(iii)降低本病關節外表現(風溼結節、結節性脈管炎、肺結節、間質纖維化、心包炎、鞏膜外層炎、虹膜炎、費耳提氏症候群、骨質疏鬆)；(iv)增加疾病緩解期/無症狀期間的頻率和期限；(v)預防永久性損害和殘疾；和/或(vi)預防/減弱疾病的慢性進程。病理學上，對炎症性關節炎的有效抗-微管治療將產生至少下述之一的效果(i)降低炎症反應，(ii)中斷炎症性細胞因子的活性(如IL-1、TNFα、FGF、VEGF)，(iii)抑制滑膜細胞增生，(iv)阻滯基質金屬蛋白酶活性，和/或(v)抑制血管生成。抗-微管物質可按能夠取得上述效果的最小劑量系統給藥(口服、靜注、或肌注或皮下注射)。對於只有少數關節受累及，或者疾病較顯著地累及少數關節的患者，抗-微管物質可直接注射(關節內注射)到受累關節內。4.植入體和手術或醫療器械，包括斯滕特氏印模和移植物各種植入體、手術器械或斯滕特氏印模，可用本發明提供的任何一種抗-微管物質包覆或者就製成包含和/或釋放本發明任何一種抗-微管物質的器具。代表性的實例包括心血管裝置(如，可植入性靜脈導管、靜脈口、靜脈導管管道、慢性浸劑線或埠，包括肝動脈輸入導管、起搏器導線，可植入性除纖顫器)；神經/神經手術裝置(如心室腹膜分流器、心室心房分流器、神經刺激器裝置、硬腦脊膜修補片和預防椎板切除術後硬膜外纖維化的植入體、持續蛛網膜下腔輸入裝置)；胃腸道裝置(如，長期留置導管、飼管、門靜脈系統分流器、腹水引流器、釋藥腹膜植入體、腹膜透析導管、用於疝的可植入篩網、預防手術粘連的懸浮液或固體植入體，包括篩網)；泌尿生殖系統裝置(如，子宮植入體，包括子宮內裝置(IUDs)和預防子宮內膜增生裝置、輸卵管植入體，包括可逆性絕育裝置、輸卵管斯滕特氏固定模、用於尿失禁的人工括約肌和尿道周植入體、輸尿管引流器、慢性留置導管、膀胱增大，或輸精管吻合術的包裹或夾板)；眼科植入體(例如，新血管性青光眼的multino植入體和其它植入體、翼狀胬肉的接觸晶狀體藥物洗脫、淚囊鼻腔造口術(dacrocystalrhinostomy)失敗後使用的夾板、角膜新血管的接觸晶狀體藥物洗脫、糖尿病性視網膜病植入體、高風險角膜移植的接觸晶狀體藥物洗脫)；耳鼻喉科裝置(如，化膿耳或慢性耳炎的小骨植入體或咽鼓管夾板、斯滕特氏印模以代替transtempanic引流)；成形手術植入體(如預防乳房切除術或次全切除術後對含凝膠-或含鹽-的胸肌下或胸腺下乳房植入體的反應性纖維化攣縮，或頦植入體)，和整形手術的植入體(如，粘固粉矯形假體)。適宜的抗-微管物質已在上面詳細討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細討論的脂質體形式給藥。在一些實施例中，抗-微管物質是紫杉醇、喜樹鹼和epothilone之外的物質。植入體或其它手術或醫療裝置可用本發明任意形式的抗-微管組合物或抗-微管因子包覆(或另外適於釋放)，包括例如(a)將抗-微管物質或組合物直接添加到植入體或裝置中(如，或者向植入體或裝置噴敷一層聚合物/藥物膜，或者將植入體或裝置浸入聚合物/藥物溶液，或者其它共價或非共價結合方式)；(b)用含藥的可輪流吸收抗-微管組合物(或上述抗-微管因子)的物質如水凝膠包覆植入體或裝置；(c)將抗-微管組合物絲(或聚合物本身成絲)交織到植入體或裝置中；(d)將植入體或裝置嵌入由抗-微管物質構成或包覆的套管或篩網中；(e)植入體或裝置本身由抗-微管物質或組合物構成；(f)其它適於植入體或裝置釋放抗-微管物質的方式。本發明優選的實施例中，儲存期間和植入時組合物應牢固地附著在植入體或裝置上。抗-微管物質或組合物也優選地在儲存期間、植入前、或者植入機體(需要時)後加熱到體溫時不降解。此外，優選光滑和平坦地包覆植入體或裝置，抗-微管物質均勻分布，而不改變斯藤特氏印模的外形。本發明的優選實施例，一旦使用了植入體或裝置，抗-微管物質或組合物應向植入體或裝置周圍組織提供均勻、可預測的、延長釋放的抗-微管因子。對血管斯藤特氏印模，除了具備上述性質外，組合物還不應使斯藤特氏印模形成血栓(引起血凝塊形成)，或引起明顯的血液湍流(較不包覆斯藤特氏印模本身更易引起)。對於斯藤特氏印模的情況，多種斯藤特氏印模可製成包含和/或釋放本發明提供的抗-微管物質，包括食管斯藤特氏印模、胃腸斯藤特氏印模、血管斯藤特氏印模、膽道斯藤特氏印模、結腸斯藤特氏印模、胰斯藤特氏印模、輸尿管斯藤特氏印模、尿道斯藤特氏印模、淚腺斯藤特氏印模、咽鼓管斯藤特氏印模、輸卵管斯藤特氏印模、氣管/支氣管斯藤特氏印模。斯藤特氏印模可方便地由商品來源獲得，或者按照公知技術製成。斯藤特氏印模的代表性實例包括那些在美國專利4,786,523題為「HydrogelAdhesive」；美國專利4,776,337，題為「ExpandableIntraluminalGraft，andMethodandApparatusforImplantingandExpandableIntraluminalGraft」；美國專利5,041,126，題為「EndovascularStentandDeliverySystem」；美國專利5,052,998，題為「IndwellingStentandMethodofUse」；美國專利5,064,435，題為「Self-ExpandingProsthesisHavingStableAxialLength」；美國專利5,089,606，題為「Water-insolublePolysaccharideHydrogelFoamforMedicalApplications」；美國專利5,147,370，題為「NitinolStentforHollowBodyConduits」；美國專利5,176,626，題為「IndwellingStent」；美國專利5,213,580，題為「BiodegradablePolymericEndoluminalSealingProcess」；美國專利5,328,471，題為「MethodandApparatusforTreatmentofFocalDiseaseinHollowTubularOrgansandOtherTissueLumers。」本發明的另一方面，提供擴充機體腔道的方法，包括將斯藤特氏印模植入通道，所述斯藤特氏印模具有通常的管狀結構，結構表面用一種抗-微管組合物(或者，單獨一種抗-微管因子)包覆(或相反適於釋放)，由此使通道擴大。下面描述不同的實施例，其中機體腔道被擴充以便清除膽道、胃腸道、食管、氣管/支氣管、尿道或血管阻塞。一般地，斯藤特氏印模以相似的方式植入，而不考慮部位或所治療的疾病。簡要地，為了確定斯藤特氏印模植入的適宜位置，通常的第一步操作是植入前檢查。所述植入前檢查，是通常的診斷成像過程、內窺鏡檢查或手術時直接造影。然後導引絲前進穿過損傷面或計劃植入的部位，以及在此導引下遞送一輸送導管，該導管允許斯藤特氏印模以摺疊形式植入。典型地，斯藤特氏印模可被壓縮，以便於它們能通過小導管的微腔而被植入，一旦到達所需的特定區域，它們就擴張為較大直徑。一旦擴張，斯藤特氏印模物理性地迫使通道分離並保持開放狀態。於是，它們能夠通過小開口植入，而且還能使大直徑腔或通道保持開放。斯藤特氏印模可以是自身-膨脹性(如，Wallstent和Gianturco斯藤特氏印模)、氣囊樣膨脹(如，Palmaz斯藤特氏印模和Strecker斯藤特氏印模)，或者植入後隨溫度變化(如，Nitinol斯藤特氏印模)。斯藤特氏印模典型地是在放射學或直接視覺控制下操作植入的，特別小心地精確地將斯滕特氏印模穿越被治療器官的狹窄部位放置，然後移走輸送導管，留下斯滕特氏印模象腳手架樣獨自支撐。植入後檢查，通常的x-線，常用來確定是否植入到合適部位。本發明一個優選的實施例，提供消除膽道阻塞的方法，包括膽道內植入一個膽道斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結構，結構表面包覆(或相反適於釋放)一種如上所述的抗-微管物質或組合物，由此膽道阻塞得以消除。簡要地，總膽管腫瘤過度生長導致有損於生命健康膽汁鬱積型黃疸。通常，將膽汁從肝臟排洩到十二指腸的膽道系統最常見的阻塞原因是(1)膽管細胞腫瘤(膽管腫瘤)，(2)侵犯膽管的腫瘤(如，胰腺癌)，或者(3)施加外部壓力和壓迫膽管的腫瘤(如，增大的淋巴結節)。不論原發性膽道腫瘤，還是其它引起膽管樹壓迫的腫瘤，使用本發明所述斯滕特氏印模均可得到治療。一種原發性膽道癌的例子是腺癌(當位於總肝管分叉處時又稱Klatskin腫瘤)。膽總管血管癌、膽道系統腺癌，這些腫瘤也看作膽道腫瘤。影響膽管的良性腫瘤(如，膽道系統的腺瘤)，和極罕見的，膽管鱗狀細胞癌和膽囊的腺癌，也可引起膽管樹的壓迫並由此導致膽道阻塞。膽道樹壓迫最常由肝臟和胰腺腫瘤引起，肝臟和胰腺腫瘤壓迫並致膽管阻塞。多數胰腺腫瘤出現在胰管細胞。這是一種非常致命的癌症(所有癌症死亡的5％；美國每年新增患病人數26,000)，平均存活期6個月，一年存活率僅為10％。這些腫瘤位於胰頭時常引起膽道阻塞，並嚴重影響患者的生命質量。雖然所有的胰腺腫瘤統稱為「胰腺癌」，但組織學亞型包括腺癌、腺鱗癌、囊腺癌，和腺泡細胞癌。肝臟腫瘤，如上所討論的，也可引起膽道樹壓迫，並由此導致膽道阻塞。本發明的一個實施例中，首先按以下數種方式之一將膽道斯滕特氏印模植入膽道通過一個針頭穿過腹壁和穿過肝臟(經皮肝穿刺膽管造影照片或「PTC」)從頂端植入；通過一個內窺鏡穿越口腔、胃和十二指腸從膽管的底端植入插套管(一種內窺鏡逆行膽管造影照片或「ERCP」)；或者手術過程中直接切口植入。植入前檢查，一般進行PTC、ERCP，或手術時直接造影，以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置。然後導引絲向前穿過損傷面或計劃植入的部位，以及在此導引下遞送一個允許斯藤特氏印模以摺疊形式植入的輸送導管。如果診斷性檢查是PTC，導引絲和輸送導管通過腹壁植入，如果最初檢查是ERCP，斯滕特氏印模可通過口腔植入。斯藤特氏印模在放射學、內窺鏡或直接視覺控制下定位，特別小心地精確地將斯滕特氏印模穿越膽管的狹窄部位放置，然後移走輸送導管，留下斯滕特氏印模象腳手架樣獨自支撐。植入後檢查，再進行膽道造影照片，用來證實斯滕特氏印模植入到合適位置。本發明另一個實施例，提供消除食管阻塞的方法，包括向食管內植入一個食管斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結構，結構表面包覆有(或相反適於釋放)一種如上所述的抗-微管物質或組合物，由此食管阻塞得以消除。簡要地，食管是從口腔運送食物和液體到胃的中空管。食管癌或相鄰器官癌(如胃或肺的癌症)侵襲導致食物或唾液吞咽困難。在此實施例中，植入前檢查，通常進行鋇餐吞咽或內窺鏡檢查以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置。一導管或內窺鏡穿過口腔，一個導引絲向前穿過阻塞處。在放射學或內窺鏡控制下輸送導管越過導引絲遞送斯滕特氏印模，斯滕特氏印模精確地穿越食管狹窄部位放置。植入後檢查，通常利用x-線鋇餐吞咽造影，以證實植入的合適位置。本發明的又一實施例，提供結腸阻塞的清除方法，包括向結腸內植入一個結腸斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結構，結構表面包覆(或相反適於釋放)一種如上所述的抗-微管物質或組合物，由此結腸阻塞得以消除。簡要地，結腸是將消化過的食物和廢物從小腸運送到肛門的中空管。直腸和/或結腸癌或相鄰器官癌(如子宮、卵巢或膀胱癌)侵襲導致糞便從腸道排出困難。在此實施例中，植入前檢查，通常進行鋇灌腸或結腸鏡檢查以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置。然後將一導管或內窺鏡穿過肛門，一個導引絲向前穿過阻塞處。在放射學或內窺鏡控制下輸送導管越過導引絲遞送斯滕特氏印模，斯滕特氏印模精確地穿越結腸或肛門狹窄部位放置。植入後檢查，通常利用鋇灌腸x-線造影，以證實植入的合適位置。本發明另一實施例，提供消除氣管/支氣管阻塞的方法，包括向氣管或支氣管內植入一個氣管/支氣管斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結構，結構表面包覆(或相反適於釋放)一種如上所述的抗-微管物質或組合物，由此氣管/支氣管阻塞得以消除。簡要地，氣管/支氣管是將口腔和鼻腔的空氣攜帶進入肺的中空管。氣管癌堵塞或相鄰器官癌(如肺癌)侵襲，或軟骨軟化(環狀軟骨減弱)導致呼吸困難。在此實施例中，植入前檢查，通常進行內窺鏡鏡檢查以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置。然後將一導管或內窺鏡穿過口腔放置，一個導引絲向前穿過阻塞處。然後。在放射學或內窺鏡控制下，斯滕特氏印模精確地穿越狹窄部位放置。接著去除輸送導管留下斯滕特氏印模象三角架樣獨自支撐。植入後檢查，通常利用支氣管鏡，以證實植入的合適位置。本發明另一實施例，提供消除尿道阻塞的方法，包括向尿道內植入一個尿道斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結構，結構表面包覆(或相反適於釋放)一種如上所述的抗-微管物質或組合物，由此尿道阻塞得以消除。簡要地，尿道是穿過陰莖排空膀胱的管道。穿越前列腺部分的外尿道的狹窄，起因於前列腺肥大，幾乎60歲以上的每個男人均存在前列腺肥大，於是造成進行性排尿困難。在此實施例中，植入前檢查，通常進行內窺鏡或尿道造影以決定斯滕特氏印模植入的適宜位置，適宜位置是下末端的尿道括約肌之上，上部末端關閉使膀胱頸充盈，然後穿過陰莖開口放置一個內窺鏡或導管及一個導引絲向前穿過阻塞處。接著，一個輸送導管越過導引絲以便於斯滕特氏印模植入，隨後去除輸送導管，斯滕特氏印模在適當的位置擴張。植入後檢查，通常利用內窺鏡或逆行性尿道造影，以證實植入的合適位置。本發明另一實施例，提供消除血管阻塞的方法，包括向血管內植入一個血管斯滕特氏印模，該斯滕特氏印模具有一般的管狀結構，結構表面包覆(或相反適於釋放)一種如上所述的抗-微管物質或組合物，由此血管阻塞得以消除。簡要地，植入片可放置到一批大的血管中，動脈和靜脈均可，用於預防血管成形術後的再狹窄，用於治療使用血管成形術有可能失敗的狹窄，以及用於治療手術-後狹窄(如，透析移植再狹窄)。適宜部位的代表性例子包括迴腸動脈、腎動脈和冠脈、上腔靜脈，和透析移植。在一實施例中，首先進行血管造影以確定斯滕特氏印模植入的部位。典型地通過一個導管向一動脈或靜脈注射不透X線的對照物然後拍x-線片而完成。然後將一導管經穿刺或經手術插入股動脈、肱動脈、股靜脈，或肱靜脈，並且在螢光鏡的引導下控制導管經過血管系統進入合適的血管，接著將斯滕特氏印模穿過狹窄處放置。植入後仍進行血管造影，以證實植入的合適位置。再狹窄研究常用動物模型是大鼠頸動脈模型，其中通過外頸動脈引入的氣囊導管的管腔內通道使頸總動脈的內皮剝脫(Clowes等，Lab.Invest.49(2)208-215，1983)。2周時，由於平滑肌細胞收縮使頸動脈明顯變窄，但2～12周期間內膜的加倍增厚導致腔徑變小。5.炎症性腸道疾病使用本發明提供的物質、組合物和方法，多種腸道炎症性疾病得以治療或預防。炎症性腸道疾病一般指一組病因不明的累及胃腸道的慢性炎症性疾病。慢性IBD分為兩組潰瘍性結腸炎和克羅恩氏病。在西歐和美國，每100,000人有6～8人患潰瘍性結腸炎。雖然疾病的原因尚未明了，但已提出與遺傳、感染、免疫和心理因素有關。在潰瘍性結腸炎，涉及結腸黏膜的炎症反應導致黏膜表面潰瘍。常見中性粒細胞浸潤和反覆的炎症發作引起纖維化和結腸縮短。長期發作的潰瘍性結腸炎，表皮發育異常並最終惡性變。克羅恩氏病以蔓延到小腸壁各層的慢性炎症為特徵。隨著疾病進展，腸道變厚和腔出現狹窄。黏膜潰瘍出現和潰瘍可穿透黏膜下層和肌層形成瘻管和裂隙。抗-微管物質可以數種方式用於治療炎症性腸道疾病。特別是，為了治療疾病，抗-微管物質可向炎症部位(或潛在的炎症部位)給藥。適宜的抗-微管物質已在上面詳細討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細討論的脂質體形式給藥。研究IBD的理想模型應是基本上與人所患疾病相同的自然發生或誘導的動物疾病。目前，只有兩種自然發生的小腸炎症模型，均是在靈長類，尚未找到致病生物體。第一種，棉花-頂(cotton-top)胥(tamarin)，沒有相關明確病原體的自發性結腸炎高度流行，與人一樣，疾病過程自發地加重或緩解(Madara等，Gastroenterology8813-19，1985)。另一種自發性慢性結腸炎也出現在幼年的恆河猴獼猴(Adler等，Gastroenterology98A436，1990)。有許多試驗性誘導的結腸炎動物模型。在小鼠、大鼠、天竺鼠和兔子，通過硫酸多糖(角叉菜膠支鏈澱粉硫酸酯、葡聚糖硫酸酯)灌胃(Marcus和Watt，Lancet2489-490，1969)、直腸注射化學刺激劑(稀醋酸)(MacPherson和Pfeiffer，Digestion17135-150，1978)可誘髮結腸炎和對二硝基氯苯(Glick和Falchuk.，Gut22120-125，1981)或硫酸三硝基苯(Rabin和Rogers，Gastroenterology7529-33，1978)的遲發性過敏反應。由於IBD沒有病理基因組特徵或特異性實驗診斷，抗-微管物質對疾病的有效控制根據臨床判定。抗-微管物質對IBD的有效治療將達到至少下述之一的效果降低發作頻率、延長緩解期、(即，病人沒有症狀的期間)和/或減輕相關症狀(膿腫形成、瘻管形成、結腸癌、小腸穿孔、中毒性巨結腸、肢端關節炎、強直性脊椎炎、膽石病、硬化性膽管炎、肝硬化、結節性紅斑、虹膜炎、眼色素層炎、鞏膜外層炎、靜脈血栓形成)的嚴重程度或期間。特異地，症狀如血性腹瀉、腹痛、發熱、體重下降、直腸出血、裡急後重、和腹脹將減輕或緩解。抗-微管物質以能達到上述終點效果的任何方式給藥。但優選的方法包括口服、直腸或管周(peritubular)給藥(優選地在超聲、CT、螢光鏡、MRI或內窺鏡指導下；也可在腹腔手術時直接給藥)。在一些病人，也使用靜注、皮下注射或肌注方式治療疾病。對具有廣泛或腸外症狀的病人，系統治療(如，口服、靜注、皮下注射、肌注)是適宜的。在一優選的實施例，根據治療反應和病人的耐受性紫杉醇可按每1～4周10～75mg/m2劑量口服。為治療嚴重急性加劇病人，可按照50～250mg/m2高劑量口服(或靜注)紫杉醇進行「脈衝」治療。患局部直腸疾病的病人(95％潰瘍性結腸炎的患者累及直腸)，局部用紫杉醇可以直腸霜或栓劑給藥。例如，含0.01％～10％重量紫杉醇的局部用霜劑可根據疾病的嚴重程度和病人對治療的反應用藥。在一優選的實施例中，含0.1％～1％重量紫杉醇的外用製劑可根據需要每天用藥。紫杉醇管外給藥(即，將藥物用於腸道外面或腸繫膜表面)可用於治療疾病活動的腸道區域。在一優選的實施例中，用在一定期間內釋放的0.5％～20％重量紫杉醇負載到聚合物載體上(如在實施例中描述)以「糊劑」、「膜」或「包覆」形式用於腸繫膜表面」。在所有的實施例中，其它抗-微管物質可按照相當於此劑量的效力和耐受性調整給藥。6.手術過程正如上面所提到的，抗-微管物質和組合物可在多種手術過程中使用。例如，本發明的一個方面，為了將正常組織與惡變組織隔離，和/或預防疾病向周圍組織擴散，可將一種抗-微管物質或組合物(例如，以噴霧或膜的形式)包覆或噴霧一個腫瘤切除前的區域。本發明的另一方面，抗-微管物質或組合物(如，噴霧形式)可通過內窺鏡過程輸送以覆蓋腫瘤，或將疾病抑制到所希望的局部。本發明還有一方面，用本發明抗-微管物質或組合物包覆或適於釋放抗-微管物質或組合物的手術篩網可用於使用手術篩網的任何手術過程中。例如，本發明的一個實施例中，負載了一種抗-微管組合物的手術篩網在腹部癌瘤切除術(如，結腸切除術後)中使用，以提供結構支撐，和釋放一定量的抗-微管因子。本發明進一步的方面是，提供腫瘤切除部位的治療方法，包括向切除術後的腫瘤切除邊緣給予一種上述抗-微管物質或組合物，由此抑制腫瘤在這些部位復發。本發明的一個實施例中，抗-微管組合物(或單一抗-微管因子)直接向腫瘤切除術部位給藥(如，用抗-微管組合物或因子刷漿、刷塗或包覆腫瘤切除術邊緣)。或者，在公知的手術糊劑給藥之前先將抗-微管組合物或因子摻入手術糊劑劑中。本發明特別優選的實施例，抗-微管組合物在惡性腫瘤的部分乳房切除術，和神經手術手術後應用。本發明的一個方面，抗-微管組合物(如上所述)可用於各種腫瘤切除邊緣，包括例如，胸、頭和頸部腫瘤、結腸、腦和肝臟腫瘤。例如，本發明的一個實施例，抗-微管物質或組合物可用於神經腫瘤切除後的部位，由此抑制腫瘤的復發。簡要地，大腦是高度功能性定位器官；即，每一解剖區域特異地執行著特殊功能。因此腦的病理學位置常較其類型更為重要。關鍵區域相對小的損害可較不重要區域的很大損害更具毀滅性。類似地，腦表面的損害可很容易地手術切除，而位於腦深部的同樣腫瘤可能不易切除(將不得不切開太多的致命結構才能到達)。還有，即使良性腫瘤也可能是危險的，原因有數種它們可能生長在關鍵區域並引起明顯的損害；儘管它們可經手術切除而治癒，但手術不可能進行；最終地，如果未加抑制的保留，它們將引起顱內壓增高。頭顱是一個不能夠擴大的封閉的腔。因此，如果某物質在一個部位生長，那麼另一部位的某物質必定受到擠壓-結果是增加顱骨壓力或增加顱內壓。如果這種狀況不加以治療，致命性結構可能受到壓迫，導致死亡。中樞神經系統(CNS)惡性腫瘤發生率為每100,000人8-16例。腦原發性惡性腫瘤的預後令人低沉的，即使進行了手術切除，中等存活期小於一年。這些腫瘤，特別是神經膠質瘤，突出地是一種局部疾病，手術切除後它在原發灶2釐米的範圍內復發。可用本發明物質、組合物和方法治療的腦腫瘤的代表性實例包括神經膠質瘤(如退行性星形細胞瘤、多形惡性膠質瘤、纖維狀細胞星形細胞瘤、少突神經膠質細胞瘤、室管膜瘤、粘液乳頭瘤(myxopapillary)室管膜瘤、亞室管膜瘤(subependymoma)、脈絡膜帕尼扎氏叢乳頭狀瘤)；神經元腫瘤(如，成神經細胞瘤、成神經節細胞瘤、神經節瘤和成神經管細胞瘤)；松果體腺體腫瘤(如成松果體細胞瘤和松果體細胞瘤)；腦脊膜腫瘤(如，腦脊膜瘤、血管外皮細胞瘤、腦脊膜肉瘤)；神經鞘細胞腫瘤(如，schwanoma、neurolemma和神經纖維瘤)；淋巴瘤(如，何杰金氏細胞和非何杰金氏細胞淋巴瘤(包括無數亞型，無論原發還是繼發))；畸形(malformative)腫瘤(如，craniopharyngioma、表皮樣囊腫、皮樣囊腫和膠樣囊腫)；和轉移的腫瘤(事實上可衍生自任何腫瘤，最常見來自肺、胸、乳腺、腎和胃腸道腫瘤)。適宜的抗-微管物質已在上面詳細討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermo1ide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細討論的脂質體形式給藥。在一些實施例中，抗-微管物質是紫杉醇、喜樹鹼和epothilone之外的物質。7.手術粘連本發明其它發明，提供通過給予病人一種抗-微管物質而治療和/或預防手術粘連的方法。簡要地，手術粘連形成是一個複雜的過程，其中正常狀態應分離的機體組織生長在以一起。手術後粘連常發生在60％～90％的進行了重大婦科手術的患者。手術創傷，作為組織乾燥、局部缺血、熱傷害、感染或存在異物的結果，早已被認為是形成組織粘連的刺激因素。粘連是手術治療失敗的主要原因並是引起腸梗阻和不育症的主導原因。其它手術粘連併發症包括慢性骨盆痛、尿道阻塞和排空機能障礙。一般地，粘連形成是一種炎症反應，反應中炎症因子釋放，增加血管通透性並導致纖維蛋白原流出和纖維沉積。這種沉積成為連接鄰接組織的基質。成纖維細胞聚集、附著到基質，膠原沉積和引發血管生成。如果術後4～5天內能夠預防這種級聯反應，則粘連形成將被抑制。如上所述，本發明提供治療和/或預防手術粘連的方法。使用多種動物模型以評價特定治療組合物或治療方案。簡要地，受到嚴重創傷的動物發生腹膜外粘連，所述創傷通常涉及兩個鄰接面。創傷可是機械性的，由於局部缺血或是引入異物的結果。機械損傷包括使腸道破裂(Choate等，Arch.Surg.88249-254，1964)和剝離或刮除腸壁外層(Gustavsson等，ActaChir.Scand.109327-333，1955)。將小腸主要大血管分為袢造成局部缺血(James等，J.Path.Bact.90279-287，1965)。可引入的異物包括滑石粉(Green等，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.133544-550，1970)、紗布綿拭(Lehman和Boys，Ann.Surg111427-435，1940)、毒性化學品(Chancy，Arch.Surg.601151-1153，1950)、細菌(Moin等，Am.J.Med.Sci.250675-679，1965)和糞便(Jackson，Surgery44507-518，1958)。目前，典型的粘連預防模型包括涉及刮擦兔子宮內膜的兔子宮角模型(Linsky等，J.Reprod.Med.32(1)17-20，1987)，涉及子宮內膜刮擦和血液供應阻斷的兔子宮角、血液供應阻斷改變模型(Wiseman等，J.InvestSurg.7527-532，1994)以及涉及切除腹膜壁斑片加上刮擦盲腸的兔盲腸側壁模型(Wiseman和Johns，Fertil.Steril.Suppl25s，1993)。適宜的抗-微管物質已在上面詳細討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)，喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothiloneA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細討論的脂質體形式給藥。在一些實施例中，抗-微管物質是紫杉醇、喜樹鹼和epothilone之外的物質。使用本發明提供的物質、組合物和方法，可以治療或預防多種手術粘連和手術併發症。粘連形成或不需要的疤痕組織積聚/包裹使手術過程變得複雜。如上所述，事實上手術粘連使腹腔或盆腔的任何切開或內窺鏡手術過程變得複雜。手術植入體的包裹覆也使乳房重建手術、關節置換手術、疝修補手術、如果血管移植手術，和神經手術手術變得複雜。在任何情況，植入體被纖維結締組織囊包裹，折中或損害手術植入體的功能(如，乳腺植入體、人工關節、手術篩網、血管移植、硬腦脊膜修補片)。在糾正慢性竇炎或清除其它區域慢性炎症(如，異物、感染(真菌，分直桿菌屬))的手術期間也發生慢性炎症和疤痕化。抗-微管物質以能達到上述終點的任何方式給藥。但優選的方法包括管周(peritubular)給藥(或者手術時直接給藥或者在內窺鏡、超聲、CT、MRI，或螢光鏡指導下給藥)；「包覆手術植入體」；和在手術部位放置一個藥物-洗脫性聚合物植入體。在一優選的實施例中，用在一定期間內釋放的0.5％～20％重量紫杉醇負載到聚合物載體上(如在下面的實施例中描述)並象「糊劑」、「膜」或「包覆」形式用於管周(腸繫膜)表面，由此可以降低手術粘連發生率。紫杉醇-聚合物製劑可以「噴霧」形式使用，在內窺鏡檢查過程中通過內窺鏡的輸出埠施於腹腔腸繫膜，和手術過程中處理的盆腔器官。在一特別優選的實施例，特定組合物是0.1％～5％重量紫杉醇。在另一優選的實施例中，含0.1％～20％重量紫杉醇的聚合物包衣用於手術植入體的表面(如，乳房植入體、人工關節、血管移植)以預防在植入體附近的囊化/不適合的疤痕形成。還有一優選的實施例，含0.1％～20％重量紫杉醇的聚合物植入體直接用於手術部位(如，直接用於竇、胸腔、腹腔，或神經手術手術部位)，由此降低炎症復發、粘連形成或疤痕。在所有實施例中，其它的抗-微管物質可按相當於此劑量的效力和耐受性調整給藥。8.呼吸道慢性炎症性疾病本發明的其它方面，抗-微管物質(和組合物)可用於治療或預防疾病如呼吸道慢性炎症性疾病。特別是，為了治療疾病，抗-微管物質可施向炎症部位(或潛在的炎症部位)。適宜的抗-微管物質已在上面詳細討論過，包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細討論的脂質體形式給藥。在本發明優選的實施例中，抗-微管物質或組合物可鼻內給藥、經吸入系統給藥、局部給藥(如，鼻息肉的情況)，或竇腔內給藥。哮喘本發明的特定方面，抗-微管物質可用於治療或預防哮喘。簡要地，哮喘是以反覆發作的氣道阻塞為特徵的狀態，哮喘可自發地或經過治療而消除。儘管它的確切病因不明，但過度的支氣管收縮藥和炎症反應刺激物可使5％的人群發病。抗-微管物質對哮喘的有效治療將改變哮喘狀態的一種或多種病理特徵，如降低炎症細胞(T-細胞、杆細胞、嗜酸性粒細胞)浸潤和活性，減少氣道上皮的增生和增厚、抑制氣道壁平滑肌細胞增生和高敏性、降低氣道腔粘液分泌、阻斷誘導和維持炎症的炎症性細胞因子(IL-3、IL-4、IL-5、GMSF)的活性，以及抑制氣道分泌腺體充血和肥大。臨床上，對哮喘的有效抗-微管治療將取得下述一種或多種效果降低症狀嚴重程度、縮短發作時間、增加疾病緩解期的頻率和期間、預防永久性損傷和機能障礙以及預防呼吸困難、咳嗽和喘鳴的慢性進程；同時改善缺氧、FEV1(一秒鐘用力呼氣量)、氣流阻力和低碳酸血症/呼吸性礆中毒，以及降低V∶Q(換氣∶血流)不匹配。抗-微管物質以能達到上述終點的任何方式給藥。但優選的給藥方法包括吸入(如，通過劑量-計吸入器、霧化器，通過一個endothacheal管，吸入微粒)和系統治療(靜注、皮下注射或肌注或口服製劑)。系統治療用於患嚴重呼吸困難或不適宜吸入治療的的病人。使用能達到臨床或病理改善效果的最小劑量。例如，紫杉醇，根據反應，紫杉醇可按每1～4周10～50mg/m2進行慢性低劑量系統治療；對急性病人，可按照50～250mg/m2高劑量「脈衝」治療。對於吸入治療，0.01％～1％紫杉醇可通過上面提到的釋放載體/製劑直接吸入。這將直接向呼吸道釋放1～50mg/m2的紫杉醇。該劑量可根據反應進行滴定測量。其它抗-微管物質可按相當於此劑量的效力和耐受性調整給藥。慢性阻塞性肺病(COPD)COPD包括各種導致慢性呼吸道阻塞的狀況(慢性支氣管炎、喘息性支氣管炎、慢性阻塞性支氣管炎和肺氣腫)。這些狀況可引起嚴重的機能障礙，在美國居主要死亡原因之第四位。臨床上，均以呼吸困難、咳嗽、哮鳴、和呼吸道反覆感染為特徵。疾病表徵包括FEV1降低、殘氣容積增加、V∶Q不匹配和低氧症。病理上，粘液分泌增加、粘液腺充血、蛋白酶(主要是彈性蛋白酶)活性增加、氣道炎症和肺泡壁破壞。雖然有廣泛的病因(吸菸最為常見)，但上述任一症狀、表徵或病理過程的改善將對此產生有益影響；因此，對COPD的有效抗-微管治療是改變至少上述一個方面。抗-微管物質的治療可按照前述哮喘的治療給藥吸入的紫杉醇按1～50mg/m2給藥，如果需要可以重複用藥；紫杉醇系統治療時，可按每1～4周10～50mg/m2慢性低劑量給藥；或者對急性病人按照50～250mg/m2高劑量「脈衝」給藥。其它抗-微管物質可按臨床上相當劑量給予。9.狹窄，贅生性疾病和梗阻如上所述，本發明提供治或預防多種與機體腔道阻塞有關疾病的方法，包括例如，血管疾病、贅生性阻塞、炎症性疾病，和感染性疾病。例如，本發明一個方面是本發明所述多種抗-微管物質和組合物可用於治療引起血管系統阻塞的血管疾病。此類疾病代表性的實例包括所有血管的動脈粥樣硬化(圍繞任何動脈、靜脈或移植物)，所述血管包括但不限於冠狀動脈、主動脈、髂動脈、頸總動脈、股淺動脈、膕動脈和移植吻合術部位血管；血管痙攣(如，冠脈痙攣和雷諾氏病)；再狹窄(原來進行過如氣囊血管成形術、旁路手術、斯滕特氏印模植入和移植植入部位的血管阻塞)；炎症性和自身免疫性疾病(如，顳動脈炎、結節性脈管炎)。簡要地，血管疾病如動脈粥樣硬化，白細胞，尤其是)單核細胞和T淋巴細胞附著於血管內皮細胞，特別是動脈分支處。附著於內皮後，對化學刺激物反應，白細胞穿過內皮細胞基底膜遷移，與平滑肌細胞一起在動脈壁內膜聚集。動脈粥樣硬化發展的最初損害是「脂質條紋」。脂質條紋中的單核細胞分化為巨噬細胞；巨噬細胞和平滑肌細胞攝取脂質和脂蛋白變為泡沫細胞。隨著巨噬細胞聚集，覆在其上面的內皮機械性破裂並被巨噬細胞釋放的氧化脂質、氧衍生自由基和蛋白酶化學性改變。泡沫細胞侵蝕內皮表面造成血管壁微小-潰瘍。潛在地形成血栓的內皮下組織(如膠原和蛋白質)暴露於血流成分導致血小板粘附於破損的內皮。血小板粘附和其它因素觸發生長因子包括PDGF、血小板刺激因子(PAF)、IL-1和IL-6的加工和向環境釋放。認為旁分泌因子刺激血管平滑肌細胞(VSMC)遊移和增生。正常(無病)血管壁，VSMCs具有收縮表型和低指數有絲分裂活性。然而，在血小板、巨噬細胞和內皮細胞釋放的細胞因子和生長因子的影響下，VSMC發生表型改變，從成熟的收縮細胞轉化為未成熟的分泌細胞。轉化後的VSMC在血管壁中層增生、遊移進入內膜，在內膜繼續增生並產生大量細胞外基質。這使受累的血管損傷處轉化為纖維斑塊。被分泌型VSMC變得複雜的細胞外基質包括膠原、彈力纖維、糖蛋白和糖胺聚糖，以膠原為粥樣斑細胞外基質的主要成分。彈力纖維和糖胺聚糖聯合脂蛋白也助於損害加重。纖維斑塊由包含平滑肌細胞的不同厚度密集的結締組織纖維帽和覆蓋的巨噬細胞組成。除了PDGF，IL-1和IL-6，血管壁浸潤細胞還產生其它致有絲分裂因子包括TGFβ、FGF、，糖蛋白G、5-羥色胺、血栓烷A2、去甲腎上腺素和抗血管緊張素II。這導致更多細胞聚集，更多細胞外基質複雜化和更多脂質聚集。動脈粥樣損害進行性擴大直到明顯侵佔管腔。開始，血流通過管腔受阻只是在血流量需要增加時引起末梢組織局部缺血-以後隨著損害進一步堵塞動脈，休息時也出現局部缺血。動脈粥樣硬化斑中的巨噬細胞釋放氧化脂質、自由基和引起鄰近組織細胞損傷和壞死的膠原酶。損傷發展為一個枯斑芯並轉變為複合斑。複合斑是可以脫落引起栓塞的不穩定損傷斑；局部出血(損傷斑迅速膨脹導致血管腔阻塞由此繼發供應損傷斑的血管滋養血管破裂)；或潰瘍和裂隙形成(形成血栓的枯斑芯暴露於血流產生局部血栓或末梢栓塞)。即使沒有後遺症出現，附壁血栓可組織起來合併到損傷斑中，由此加速它的增大。進一步，隨著纖維蛋白原和纖維蛋白酶局部濃度增加，刺激肌層血管平滑肌細胞和內膜增生；此過程也最終導致血管腔更為狹窄。正常動脈的內膜和肌層進行氧合和由動脈腔或外膜血管滋養血管供應養分。隨著動脈粥樣硬化損傷斑的發展，來自外膜血管滋養血管的微血管延伸進入增厚的內膜和肌層。該血管網隨著損傷斑的增大趨於更為廣泛並隨著斑的消失而消退。微血管出血可加速與動脈斷裂、潰瘍或栓塞有關的斑的突然膨脹和破裂。還有一個假說是，微血管血漿蛋白酶的漏出可吸引炎性細胞進入區域浸潤，這些炎性細胞與動脈粥樣硬化斑的快速增大和相關併發症(通過局部水腫和炎症)有關。為了治療血管疾病，如上面所討論的，一種抗-微管物質(有或沒有載體)可釋放到機體腔道的外部，或者通過機體腔道的外膜釋放到平滑肌細胞。在這方面特別優選的抗-微管物質包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothiloneA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，抗-微管物質是紫杉醇、喜樹鹼和epothilone之外的物質。在一些實施例中，抗-微管物質與聚合物載體一起作為組合物，或者以在前或在後詳細討論的脂質體製劑釋放。本發明一些實施例中，抗-微管物質或組合物可通過氣囊導管、口服、血管周給藥，通過斯滕特氏印模系統給藥。本發明的其它方面，本發明描述的抗-微管治療物質或組合物可用於治療贅生性阻塞。簡要地，本發明所言「贅生性阻塞」，理解為包括機體管道任何贅生性(良性或惡性)阻塞，而不考慮管道的部位或惡變所屬組織學類型。代表性實例包括胃腸道疾病[如，口-咽喉癌腺癌、食管癌(鱗狀細胞癌、腺癌、淋巴瘤、黑素瘤)、胃癌(腺癌、皮革狀胃、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、小腸腫瘤(腺瘤、平滑肌瘤、脂肪瘤、腺癌、淋巴瘤、類癌瘤)、結腸癌(腺癌)和肛門直腸癌]；膽道疾病(如，引起膽道阻塞的贅生物如胰腺癌(導管腺癌、小島細胞腫瘤、囊腺癌)、膽管癌和肝細胞癌)；肺部疾病(如，肺和/或氣管/支氣管癌(小細胞肺癌、非-小細胞肺癌))；女性生殖系統疾病(如，輸卵管惡性腫瘤、子宮癌、宮頸癌、陰道癌)；男性生殖系統疾病(如，睪丸癌、附睪癌、輸精管腫瘤、前列腺癌、良性前列腺肥大)；尿道疾病(如，腎細胞癌、腎盂腫瘤、尿液收集系統腫瘤如過渡型細胞癌、膀胱癌，和良性狹窄或惡性腫瘤引起的尿道阻塞)。作為一個實例，良性前列腺充血(BPH)是前列腺增大，特別在包繞輸尿管的腺體中央部分，這是對長時間雄性激素刺激反應而出現的。它影響著大於80％的50歲以上的男性。增大引起穿過前列腺的輸尿管部分受壓，導致膀胱流出管道阻塞，即產生尿流需要異常高的膀胱壓。1980年，作為治療BPH的手段，美國進行了367,000例跨尿道前列腺切除術。其它治療包括藥物、跨尿道括約肌切開術、跨尿道雷射或微波治療、跨尿道高溫治療、跨尿道超聲、跨尿道微波、跨尿道高溫、跨尿道超聲和手術切除。所有療法均有缺點包括括約肌機能障礙導致尿失禁和狹窄形成。為了治療贅生性疾病，廣泛的各種治療物質(有或沒有聚合物載體)可釋放到機體腔道的外部，或通過機體腔道外膜釋放到平滑肌細胞。例如，在一優選的實施例中，在超聲指導下通過跨尿道途徑(或者兩者擇一地transperineally)將一根探針或導管引入到與尿道鄰接的前列腺內並通過探針或導管釋放治療物質，優選地在腺體的數個象限，特別是輸尿管周圍。探針或導管也可直接在觸診或內窺鏡、螢光鏡、CT或MRI的指導下放入，並間歇給藥。作為替代方法，通過導管或套管針放置小丸也可完成給藥。上述過程可單獨完成或與斯藤特氏印模植入尿道前列腺部結合完成。通過避免尿道器械或損傷尿道，括約肌機能保留完整無損，避免尿失禁，和極少可能狹窄。本發明其它方面，提供治療或預防影響或引起機體腔道阻塞的炎症性疾病的方法。炎症性疾病包括導致各種機體腔道阻塞的急性或慢性炎症。代表性例子包括結節性脈管炎(如，巨細胞動脈炎(顳動脈炎、高安氏病)、結節性多發脈管炎、過敏性脈管炎和肉芽腫病(Churg-Strauss病)、多發脈管炎重疊症候群、過敏性結節性脈管炎(Henoch-Schonlein紫癜)、血清病、藥物引起的結節性脈管炎、感染性結節性脈管炎、贅生性結節性脈管炎、與結締組織疾病有關的結節性脈管炎、與先天性補體系統缺陷有關的結節性脈管炎)、韋格內氏肉芽腫病、kawasaki’s病、中樞神經系統結節性脈管炎、血栓閉塞性脈管炎和系統性硬化)；胃腸道疾病(例如，胰腺炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、潰瘍性直腸炎、原發性硬化性膽管炎、各種原因包括自發性引起的良性狹窄(例如，膽道、食管、十二指腸、小腸或結腸的狹窄)；呼吸道疾病(如哮喘、過敏性肺炎、石棉肺、矽肺，和其它形式的肺炎、慢性支氣管炎和慢性阻塞性氣道疾病)；鼻淚管疾病(例如，各種原因包括原發引起的狹窄)；以及咽鼓管疾病(各種原因包括原發引起的狹窄)。為了治療炎症性疾病，如上面所討論的，一種抗-微管物質(有或沒有載體)可向機體腔道的外部釋放，或者通過機體腔道外膜向平滑肌細胞釋放。本發明還有其它方面，提供治療或預防與機體腔道阻塞有關或是其成因的感染性疾病。簡要地，感染性疾病包括導致機體腔道阻塞的數種急性和慢性感染過程，所述機體腔道阻塞包括例如，男性生殖道阻塞(如，尿道炎、附睪炎、前列腺炎)；女性生殖道阻塞(如，陰道炎、子宮頸炎、盆腔炎症性疾病(如結核、淋病球菌、chlamydia、腸球菌和梅毒))；尿道阻塞(如，膀胱炎、尿道炎)；呼吸道阻塞(如，慢性支氣管炎、結核、其它分支桿菌感染(MAI等)、厭氧菌感染、黴菌感染和寄生蟲感染)；和心血管阻塞(黴菌性動脈瘤和感染性心內膜炎)。為治療感染性疾病，如上面所討論的，廣泛的各種治療物質(有或沒有載體)可釋放到機體腔道外部，或通過機體腔道外膜釋放到平滑肌細胞。在這方面特別優選的治療物質包括上面討論的抗-微管物質。10.移植排斥前述抗-微管物質和組合物同樣地可用於治療或預防移植排斥。簡要地，慢性移植/器官排斥兩種主要組織學表現是炎症和動脈粥樣硬化。如同心移植(Johnson等，J.HeartTransplantation8349，1989)、肝移植(Demetris等，Am.J.Pathol118151，1985)和肺移植(Burke等，LancetI5171986)一樣，在長-存活期的腎同種移植物可以觀察到neointimal充血(Hume等，J.Clin.Invest.34327，1955；Busch等，Humanpathol.2253，1971)。由於心肌依賴於冠脈血流，心臟移植對腔的縮小極為敏感。許多動物模型已經用於慢性心臟同種移植物排斥的研究。Lewis-F344大鼠心臟移植術模型產生以動脈粥樣硬化損傷形成為特徵的心臟同種移植物慢性排斥。該模型是有用的，因為超過80％的接受者存活3周多，90％顯示冠脈初期損傷(Adams等，Transplantation531115-1119，1992)。除了顯示高的死亡率和重度損傷，由於該系統不需要免疫抑制劑，所以炎症發展階段相當容易識別。儘管單核細胞浸潤的程度和壞死更為嚴重，但該模型中動脈損傷與臨床移植動脈粥樣硬化極為相似。對移植排斥的有效抗-微管治療應取得至少下述之一效果(i)延長移植的生命，(ii)減輕與免疫抑制治療有關的副作用，和(iii)降低與移植術有關的加速的動脈粥樣硬化。適宜的治療移植排斥的抗-微管物質包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，抗-微管物質與聚合物載體一起作為組合物，或者以在前或在後詳細討論的脂質體製劑釋放。抗微管物質以能達到上述終點的任何方式給藥。但優選的方法包括口服或靜注、皮下或肌內注射。抗微管物質可按慢性低治療量給藥以預防慢性移植排斥或用較高劑量以預防急性移植排斥。例如，使用紫杉醇，根據治療反應每1～4周以10～50mg/m2的紫杉醇慢性低劑量治療；按每1～21天50～250mg/m2高劑量「脈衝」治療，如果需要可重複6個循環。其它抗微管物質可按藥物效力和耐受性調整為相當劑量給藥。11.系統性紅斑狼瘡系統性紅斑狼瘡(SLE)是病因不明的以多器官系統炎症為特徵的疾病，所述炎症與產生與細胞核、細胞漿和細胞膜抗原反應的抗體有關。SLE是十分常見的疾病，在某些人群以高達每2500中1人患病的比例流行(Michet等，MayoClini.Proc.60105，1985)。SLE主要在女性發病，10歲到64歲女性中發病率為每700名有1人患病，且女性與男性發病率比值為9∶1。易感人群SLE平均年發生率為每100,000人約6～35新病例發生。SLE表現為多因素引發的綜合病症，由遺傳、激素和環境因子之間相互作用協調激活輔助T和B細胞從而導致分泌數種自體抗體。SLE常被劃分為自身免疫性疾病，以直接的特別針對核抗原(抗核抗體-ANAs)和磷脂的自體抗體數量增加為特徵。20～40％的狼瘡患者存在抗磷脂抗體並已發現與一定數量的陰離子磷脂起反應。SLE形態學變化差異極大，反映患者個體的臨床表現和疾病過程的差異性。最具特徵性損害是由免疫複合物沉積引起，並於血管、腎、結締組織和皮膚發現免疫複合物。儘管皮膚和肌肉最常受累，但涉及小的動脈和小動脈的急性壞死性結節性脈管炎可存在於任何組織。受到小血管結節性動脈炎累及的器官，最早損害通常以粒細胞浸潤和動脈周紅斑為特徵。纖維蛋白元在血管壁沉積也是動脈炎的特徵。慢性階段，血管發生纖維性增厚與管腔變細。在脾臟，血管損害涉及中央動脈並以明顯的血管周纖維化為特徵，產生所謂的洋蔥皮損害。治療SLE適宜的抗-微管物質包括例如，taxanes(如紫杉醇和docetaxel)、喜樹鹼、eleutherobin、sarcodictyins、epothilonesA和B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、塊菌素(7-deazaadenosine)、LY290181(2-氨基-4-(3-吡啶基-萘並(1，2-b)吡喃-3-cardonitrile)、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯、單克隆抗特異反應抗體、微管積聚促進蛋白(紫杉酚-樣蛋白質，TALP)、由低滲(190mosmol/L)狀態、胰島素(100nmol/L)或谷醯胺(10nmol/L)引起細胞腫脹、結合動力蛋白、赤黴素、XCHO1(驅動蛋白-樣蛋白質)、溶血磷脂酸、鋰離子、植物細胞壁成分(例如，聚-L-賴氨酸和伸展蛋白)、甘油緩衝液、三硝基甲苯X-100微管穩定緩衝液、微管聯繫蛋白(如，MAP2，MAP4，Tau，大Tau，ensconsin，延長因子-1α(EF-α)和E-MAP-115)、細胞質(例如，組蛋白H1，髓磷脂礆蛋白和著絲點)、內源性微管結構(例如，基因絲結構，填充物和GTP帽)、穩定小管單多肽(例如，STOP145和STOP220)和來自有絲分裂的張力，以及上述任何化合物的類似物和衍生物。在一些實施例中，這些藥物以與聚合物載體一起的組合物或者以前述或下面詳細討論的脂質體製劑給藥。在一些實施例中，抗-微管物質是紫杉醇、喜樹鹼和epothilone之外的物質。在一些實施例中，抗-微管物質與聚合物載體一起作為組合物形式釋放，或者以在前或在後詳細討論過的脂質體形式釋放。本發明特別優選的實施例中，抗-微管物質或組合物可鼻內給藥、經吸入系統給藥、或局部給藥(如，在鼻息肉的情況)。製劑和給藥如上面所提到的，本發明抗-微管物質可製備成各種形式(如，微球、糊劑、膜、噴霧、洗液、霜、凝膠，等)。更進一步，本發明組合物可製備成含多於一種抗-微管物質，含有各種其它化合物，具有特定物理特性(如，彈性、特定熔點，或特定釋放速率)製劑。本發明一些實施例中，為了達到所需效果，組合物可聯合用藥(如，為取得既快速又慢速或延長釋放一種或多種抗-微管物質的效果，數種微球製劑可以聯合)。抗-微管物質可單獨，或與藥學或生理學適宜載體、賦型劑或稀釋劑結合形式給藥。一般地，載體應當在所使用的劑量和濃度對接受治療者無毒。通常，這種組合物製劑需要使治療物質與緩衝液、抗氧化劑如抗壞血酸、低分子量(小於10個殘基)多肽、胺基酸、碳水化物如葡萄糖或葡聚糖、螫合劑如EDTA、穀胱甘肽和其它穩定劑與賦形劑聯合。與非特異血清白蛋白混合的中性緩衝等滲液或生理鹽水是示範性適宜的稀釋劑。如上面提到的，本發明抗-微管物質、組合物，或這裡所提供的藥學組合物可製備成用於各種不同途徑給藥，包括例如，局部給予炎症部位、口服、直腸、顱內、鞘內、鼻內、眼內、靜注、皮下、腹膜、肌注、舌下、膀胱內給藥。其它代表性給藥途徑包括直接(優選在超聲、CT、螢光鏡、MRI或內窺鏡指導下)向疾病部位給藥。本發明治療物質、治療組合物和藥學組合物可與提供材料使用注意事項的包裝材料一起放置於容器內。一般地，所述注意事項包括描述試劑濃度的明確表達，以及在一定實施例中，對於重新組成抗-微管物質、抗-微管組合物或藥學組合物所必要的賦型劑組分或稀釋劑(如，水、生理鹽水或PBS)的相對用量。下面的實施例以例證方式提供，但不局限於此。實施例如上面所討論的，慢性炎症是以白細胞(巨噬細胞、淋巴細胞、中性粒細胞，和漿細胞)組織浸潤、炎性細胞和細胞產物(活性氧類、組織降解酶如金屬蛋白酶)組織破壞和結締組織反覆試圖替代(血管生成和纖維變性)為特徵的過程。為了評價抗-微管物質對於慢性炎症的效力，以下述病理學/生物學為終點(1)抑制引發炎症級聯的白細胞反應(巨噬細胞、中性粒細胞和T細胞)；(2)抑制間質細胞(成纖維細胞、滑膜細胞，等增生)；(3)抑制引起組織破壞的基質金屬蛋白酶產生/活性；(4)阻斷可增強炎症反應和提供纖維組織生長和發展所必需代謝支持的血管生成；和(5)所有這些必須達到而對正常實質細胞基本沒有實質毒性或不會損害基質組分(如，膠原和蛋白聚糖)的正常合成。正如下面詳細陳述，檢測了穩定微管物質如，例如，紫杉醇在數個組織和炎症疾病狀態的活性。這些物質顯示出改變許多上述疾病參數的效力。實施例1抗-微管物質對中性粒細胞活性的影響本實施例描述抗-微管物質對受調理CPPD結晶或受調理酵母多糖刺激的中性粒細胞反應的作用。如下實驗所闡述，通過測定中性粒細胞對血漿調理過的微晶或酵母多糖反應的化學螢光、過氧化物陰離子生成和脫粒，表明抗-微管物質是微粒-誘導的中性粒細胞活化的強的抑制劑。A.材料和方法研究全部使用pH7.4的Hanks緩衝生理鹽水溶液(HBSS)。除非另外聲明，所有化學藥品購自希格瑪化學製劑公司(SigmaChemicalCo)(St.Louis，Mo)。除非另外聲明，所有實驗在37℃進行。1.結晶的製備和特性製備CPPD(三斜晶系的)結晶。結晶大小分布是約33％小於10μm，58％在10與20μm之間和9％大於20μm。在上述條件下製備的無致熱原結晶和在無菌、無致熱原條件下生產的結晶，與在正常、未滅菌實驗室條件下生產的結晶產生同樣數量的中性粒細胞反應。2.結晶和酵母多糖的調理所有研究在紫杉醇存在時中性粒細胞對結晶或酵母多糖反應的實驗，是在使用血漿調理的CPPD或酵母多糖的條件下進行。用50％肝素化血漿以每毫升50％血漿75mgCPPD或12mg酵母多糖的濃度調理結晶或酵母多糖。結晶或酵母多糖與血漿在37℃孵育30分鐘，然後用過量的HBSS衝洗。3.中性粒細胞製備中性粒細胞從枸櫞酸抗凝人全血新近採集製備。簡要地，400ml血與80ml4％葡聚糖T500(PhamaciaLKB，BiotechnologyABUppsala，Sweden)在HBSS中混合併放置1小時。連續採集血漿，5ml用於盛有5mlFicollpaque(Phamacia)的15ml聚乙烯管(Coming，NY)中。500轉離心30分鐘，洗滌通過20秒低滲震蕩去除了紅細胞的中性粒細胞團。用HBSS重新懸浮中性粒細胞，冰中保存並在3小時內用於實驗。中性粒細胞活性和純度大於90％。4.用抗-微管物質孵育中性粒細胞(a)紫杉醇每次實驗前用二甲基亞碸(DMSO)新鮮配製12mM紫杉醇原液。用DMSO將此原液稀釋成濃度範圍1～10mM的溶液。在中度渦旋中將稀釋後的紫杉醇溶液等體積加到每毫升5,000,000個細胞的中性粒細胞液中使在0.5％終濃度的DNSO中濃度為0～50μM。在加入結晶或酵母多糖之前，細胞於33℃孵育20分鐘然後在37℃孵育10分鐘。(b)氟化鋁用HBSS新鮮配製1M氟化鋁(ALF3)原液。用HBSS將原液稀釋成濃度範圍5～100mM的溶液。將稀釋後的ALF3溶液等體積加到每毫升5,000,000個細胞的中性粒細胞液中並在37℃孵育15分鐘。加入魯米諾(Luminol)(1μM)和然後加入20μl調理的酵母多糖(終濃度＝1mg/ml)用以激活細胞。(c)甘氨酸乙酯用HBSS新鮮配製100mM甘氨酸乙酯原液。用HBSS將原液稀釋成濃度範圍0.5～10mM的溶液。將稀釋後的甘氨酸乙酯溶液等體積(50μl)加到每毫升5,000,000個細胞的中性粒細胞液中並在37℃孵育15分鐘。加入魯米諾(1μM)和然後加入20μl調理酵母多糖(終濃度＝1mg/ml)用以激活細胞。(d)LY290181用HBSS新鮮配製100μMLY290181原液。用HBSS將原液稀釋成濃度範圍0.5～50μM的溶液。將稀釋後的LY290181溶液等體積(50μl)加到每毫升5,000,000個細胞的中性粒細胞液中並在37℃孵育15分鐘。加入魯米諾(1μM)和然後加入20μl調理酵母多糖(終濃度＝1mg/ml)用以激活細胞。5.化學螢光分析所有化學螢光研究使用CPPD(50mg/ml)在細胞濃度5,000,000個細胞/ml的HBSS溶液中進行。所有實驗中，在1.5ml帶蓋Eppendorf管中，將0.5ml細胞加入到25mgCPPD或0.5mg酵母多糖。加入溶解了10μl魯米諾的25％DMSOHBSS溶液使終濃度為1μM，混合樣本以使結晶或酵母多糖激發中性粒細胞活性。化學螢光分析使用LKB發光計(型號1250)的監測器在37℃檢測20分鐘，測定前即時搖動使結晶或酵母多糖重新懸浮。對照管含有細胞、藥物和魯米諾(不含結晶)。6.過氧化物陰離子生成使用過氧化物歧化酶可抑制性還原細胞色素C分析方法測定過氧化物陰離子濃度。簡要地，25mg結晶或0.5mg酵母多糖放入1.5ml帶蓋Eppendorf管中並加熱到37℃。在37℃將0.5ml細胞與細胞鐵色素C(終濃度為1.2mg/ml)一起加入，搖動加蓋的小管以激活細胞。在適當時間將小管以10,000g離心10秒種，收集上清液測定分析550nm吸收度。每毫升含600單位超氧歧化酶的對照管按相同條件製備。7.中性粒細胞脫粒分析含有或者25mgCPPD或者1mg酵母多糖的1毫升和0.5毫升Eppendorf管預熱到37℃。在37℃加入細胞0.5ml，接著劇烈振蕩以激發反應。適當時間，將小管以10,000g離心10秒種，取0.4ml上清液儲存於-20℃供以後分析用。通過溶壁微球菌懸浮液在450nm吸收度下降測定溶菌酶。簡要地，溶壁微球菌以0.1mg/ml懸浮於pH6.2的65mM磷酸鉀緩衝液中，通過稀釋調整到450nm吸收度為0.7個單位。結晶(或酵母多糖)和細胞上層清液(100μl)加入2.5ml微球菌懸浮液，檢測吸收度的降低。製備範圍在0～2000單位/ml的溶菌酶標準品(雞蛋白)並繪製不同濃度溶菌酶在450nm吸收度下降率的標準曲線。伴隨聯茴香胺氧化於450nm吸收的增加測定髓過氧化物酶(MPO)活性。通過超聲處理將7.8mg聯茴香胺溶於100ml0.1M枸櫞酸緩衝液，pH5.5，濃度3.2mM。往1ml比色杯中，加入0.89ml聯茴香胺溶液，然後加入50μl1％三硝基甲苯×100、10μl0.05％過氧化氫水溶液和50μl結晶-細胞上清液。根據每分種吸收度(450nm)的變化，△450，測定MPO活性，使用下面的公式氧化聯茴香胺(nmol/分)＝50×△4508.中性粒細胞生存性為了解抗-微管物質對中性粒細胞生存性的作用，測定了細胞漿標誌酶，乳酸脫氫酶(LDH)的釋放。脫粒實驗使用的含有細胞和藥物(不含結晶)對照管也用於LDH分析。B.結果所有實驗使用Studentst-檢驗進行顯著性統計，p＜0.05為具有顯著性。所示誤差棒表示n個數值給出平均值的標準差。1.中性粒細胞生存性(a)紫杉醇用46μM紫杉醇在37℃處理1小時的中性粒細胞顯示出LDH釋放水平(一般小於總量的5％)與對照相比無任何增加，說明紫杉醇沒有引起細胞死亡。(b)氟化鋁用5～100mM濃度範圍的氟化鋁在37℃處理1小時的中性粒細胞顯示出LDH釋放水平與對照相比無任何增加，說明氟化鋁沒有引起細胞死亡。(c)甘氨酸乙酯用0.5～20mM濃度範圍的甘氨酸乙酯在37℃處理1小時的中性粒細胞顯示出LDH釋放水平與對照相比無任何增加，說明甘氨酸乙酯沒有引起細胞死亡。2.化學螢光(a)紫杉醇如圖1A、1B和2A分別所示，28μM紫杉醇對血漿調理的CPPD和血漿調理的酵母多糖-誘導的中性粒細胞化學螢光具有強的抑制作用。對CPPD和酵母多糖化學螢光反應抑制高峰分別是52％(+/-12％)和45％(+/-11％)。28μM紫杉醇對血漿調理的CPPD和血漿調理的酵母多糖-誘導的中性粒細胞化學螢光的抑制作用在3～16分鐘的所有時間點均具有顯著性(圖1和圖4A)。圖1A和1B顯示紫杉醇對血漿調理CPPD-誘導中性粒細胞化學螢光抑制作用的濃度依賴性。所有實驗的對照樣本從未產生大於5mV的化學螢光值並且加入實驗使用的各個濃度紫杉醇對對照樣本化學螢光值無影響。(b)氟化鋁如圖1C所示，5～100mM濃度的氟化鋁對血漿調理酵母多糖-誘導的中性粒細胞化學螢光具有強的抑制作用。該圖顯示出ALF3抑制血漿調理酵母多糖-誘導中性粒細胞化學螢光的濃度依賴性。加入實驗使用的各個濃度ALF3對對照樣本化學螢光值無影響。(C)甘氨酸乙酯如圖1D所示，0.5～20mM濃度的甘氨酸乙酯對血漿調理酵母多糖-誘導的中性粒細胞化學螢光具有強的抑制作用。該圖顯示出甘氨酸乙酯抑制血漿調理酵母多糖-誘導中性粒細胞化學螢光的濃度依賴性。加入實驗使用的各個濃度甘氨酸乙酯對對照樣本化學螢光值無影響。(d)LY290181如圖1E所示，0.5～50μM濃度的LY290181對血漿調理酵母多糖-誘導的中性粒細胞化學螢光具有強的抑制作用。該圖顯示出LY290181抑制血漿調理酵母多糖-誘導中性粒細胞化學螢光的濃度依賴性。加入實驗使用的各個濃度LY290181對對照樣本化學螢光值無影響。3.過氧化物生成通過過氧化物歧化酶(SOD)可抑制性還原細胞色素C測定血漿調理CPPD結晶誘導-過氧化物陰離子生成的時間過程用圖3表示。用28μM紫杉醇處理的細胞在所有時間過氧化物生成量均下降。如圖3A所示，在所有時間的下降均具有顯著性。圖3B顯示抑制作用的濃度依賴性。調理酵母多糖(圖4B)對過氧化物陰離子生成的刺激作用顯示出與CPPD-誘導激活作用相似的時間過程。圖4B所示，28μM紫杉醇對酵母多糖-誘導過氧化物陰離子生成的抑制作用沒有對CPPD激活作用的抑制那麼明顯，但在所有時間的抑制作用均具有顯著性。用17μMLY290181處理CPPD-誘導的中性粒細胞也產生降低過氧化物生成量的作用(圖3C)。4.中性粒細胞脫粒由血漿調理的CPPD結晶-誘導髓過氧化物酶和溶菌酶的釋放或血漿調理酵母多糖-誘導髓過氧化物酶的釋放檢測中性粒細胞脫粒。當用血漿包覆的CPPD結晶刺激中性粒細胞時，顯示出有足夠數量的兩種酶釋入細胞外間質，而不需要另外向細胞中加入細胞鬆弛素B。圖5和圖2分別表示MPO和溶菌酶從血漿-包覆CPPD刺激的中性粒細胞中釋放的時間過程。圖5A表示紫杉醇抑制結晶-細胞孵育開始9分鐘內髓過氧化物酶自血漿調理CPPD激活的中性粒細胞中的釋放。如圖5A所示，在所有時間紫杉醇顯著性地抑制CPPD-誘導的髓過氧化物酶的釋放。圖5B表示紫杉醇對CPPD-誘導髓過氧化物酶釋放抑制作用的濃度依賴性。如圖2所示，28μM紫杉醇減少溶菌酶釋放並且此脫粒抑制作用在所有時間均有顯著性。調理酵母多糖刺激的中性粒細胞僅有少量MPO和溶菌酶釋放。儘管這些酶的水平低，但檢測到28μM紫杉醇存在時孵育9分鐘後MPO釋放50％抑制是具有統計學顯著性(p＜0.05)的(數據沒有顯示)。用17μMLY290181處理CPPD結晶-誘導中性粒細胞降低了溶菌酶和髓過氧化物酶自細胞的釋放(圖5C和5D)。C.討論這些實驗表明紫杉醇和其它抗-微管物質是結晶-誘導中性粒細胞活化的強抑制劑。此外，在中性粒細胞對另一特異激活劑，調理後酵母多糖，的反應中所顯示出的相似抑制水平可以看出，紫杉醇和其它抗-微管物質的抑制活性不局限於中性粒細胞對結晶的反應。這也表明紫杉醇、氟化鋁、甘氨酸乙酯和LY290181是對酵母多糖-誘導中性粒細胞活化的強抑制劑而不引起細胞死亡。LY290181顯示出降低過氧化物陰離子生成和CPPD結晶-誘導中性粒細胞脫粒作用。實施例2T細胞對抗原刺激反應為了測定紫杉醇是否影響T-細胞對刺激物反應的活化作用，使用髓磷脂鹼性蛋白多肽，GP68-88或者植物凝血素，伴刀豆球蛋白(伴刀豆球蛋白)，在不含紫杉醇或含遞增濃度微紫杉醇的膠束製劑下刺激TR1T-細胞克隆48小時。用多肽或伴刀豆球蛋白開始刺激細胞或刺激後24小加入紫杉醇。測定摻入的氚標記胸腺嘧啶核甙作為測量T-細胞對多肽或伴刀豆球蛋白刺激反應增生的指標。結果表明，多肽GP68-88和伴刀豆球蛋白刺激T-細胞增加。在對照用聚合物微膠粒存在下，對兩種激動劑反應的T-細胞刺激無變化。然而，用紫杉醇微膠粒處理，無論開始還是刺激後24小時，T細胞反應呈濃度依賴性降低。在兩種情況下，0.02μM紫杉醇完全抑制T-細胞增生(圖79)。這些數據表明，紫杉醇是抗原-誘導刺激T-細胞增生的有力抑制劑。實施例3紫杉醇對滑膜細胞增生作用的體外研究進行兩個實驗以評價不同濃度紫杉醇對體外氚標記胸腺嘧啶核苷摻入(測試滑膜細胞DNA合成)和細胞增生的影響。A.材料與方法1.3H-胸腺嘧啶核苷摻入滑膜細胞滑膜細胞與不同濃度(10-5M，10-6M，10-7，和10-8M)紫杉醇體外連續孵育6或24小時。在這些時間點，將1×10-6cpm的3H-胸腺嘧啶核苷加入細胞培養基中並於37℃孵育2小時。將細胞置入細胞收集器，衝洗通過濾膜，切下濾膜，測定濾膜切片中所含射線量。一旦確定了摻入細胞的氚標記胸腺嘧啶核苷的量，將其用於測定細胞增生速率。實驗重複3次並校準數據。2.滑膜細胞增生小牛滑膜細胞在不含和含不同濃度(10-5M，10-6M，10-7M，和10-8M)紫杉醇的條件下生長24小時。到時間後，通過胎盤蘭染色排除法計數，憑視力測定有活力滑膜細胞的總數。實驗重複4次並校準數據。B.結果1.3H-胸腺嘧啶核苷摻入滑膜細胞研究表明，低至10-8M濃度的紫杉醇抑制3H-胸腺嘧啶核苷摻入滑膜細胞(和廣泛的DNA合成)。孵育6小時，高濃度和低濃度紫杉醇的抑制程度無顯著性差異(圖8)。然而，孵育24小時，低濃度藥物(10-8M)的某些作用消失，但仍基本上低於對照動物中的。2.滑膜細胞增生研究表明，紫杉醇呈濃度依賴性地對滑膜成纖維細胞增生具有細胞毒性。紫杉醇在低至10-7M的濃度仍能夠抑制滑膜細胞增生(圖9)。較高濃度紫杉醇(10-6M和10-5M)對體外滑膜成纖維細胞具有毒性。C.討論上述研究表明，體外實驗時相對較低濃度紫杉醇能夠抑制滑膜細胞衍化的成纖維細胞增生。因此，基於結締組織在慢性炎症進展中的作用和在炎症性疾病病理期間的表現，阻斷細胞增生會對體內疾病結果產生有益影響。實施例4紫杉醇對體外人表皮角質細胞的活性特徵研究了紫杉醇對活化增殖人正常角質細胞和HaCAT角質細胞(自發性永久性人表皮角質細胞)的時間和劑量-依賴性作用。A.材料與方法通過測定細胞數量和細胞摻入的3H-胸腺嘧啶核苷評價紫杉醇對角質細胞的作用。胸腺嘧啶核苷摻入，在倍增期用0～10-4M濃度紫杉醇處理於平皿中的低密度角質細胞(DMEM添加10％FCS，穀氨醯胺，抗體)6小時。向細胞中加入3H-胸腺嘧啶核苷並再孵育6小時。收集細胞測定放射活性。為測定細胞總數，角質細胞置於平皿中，在含或不含紫杉醇中孵育4天。孵育後，收集細胞並用臺盼蘭排出法計數。B.結果測定了活細胞佔未處理對照細胞數的百分比。紫杉醇濃度為10-9M時，細胞活力大於未處理對照組的100％，濃度10-8M時，活力略低於87％(圖7)。紫杉醇濃度10-7M或更高時，細胞生存力顯著下降。C.討論紫杉醇在低至10-7M濃度時對人角質細胞極具毒性。牛皮癬，角質細胞是異常增生細胞，由於紫杉醇穩定微管，可以預期它對牛皮癬有絲分裂活動系統有效。另一研究發現紫杉醇對增生性滑膜細胞具有細胞毒性，但對非-增生性軟骨細胞無影響。所以，紫杉醇可作用於牛皮癬損害的高度增生性細胞而對正常表皮細胞無毒。實施例5紫杉醇對星型細胞增生的作用已經確定，MS病灶中有許多纖維星型細胞數量增加，這被認為是通過產生細胞因子和基質金屬蛋白酶而參與髓磷脂破壞(Mastronardi等，J.Neurosci.Res.36315-324，1993；Chandler等，J.Neuroimmunol.72155-161，1997)。纖維狀星型細胞具有高含量作為纖維性星型細胞增生生物化學標識物的神經膠質酸性蛋白(GFAP)。用脫髓鞘疾病轉基因小鼠模型評價膠束紫杉醇對星型細胞增生的抑制能力。A.材料與方法臨床發病之初(約4個月)開始紫杉醇連續皮下注射治療(2mg/kg；每周3次，總共注射10次)。5隻動物接受膠束紫杉醇，2隻小鼠作對照；一隻為不治療正常小鼠和一隻為不治療轉基因小鼠。由於實驗室已經很好地確立了該疾病過程，所以只使用一隻轉基因小鼠為對照。在MS神經病理起始表徵明顯時，給4個月齡的動物注射膠束紫杉醇。第十次注射後3天，終止實驗，對大腦組織進行組織學分析。光學顯微鏡下，福馬林固定組織和石蠟包埋。切片用抗-GFAP抗體(DACO)著色，洗滌和然後與偶合了HPP的第二抗體反應。切片HPP著色和計數蘇木精染色細胞。電子顯微鏡，組織用2.5％戊二醛和磷酸緩衝鹽水(pH7.2)固定，1％四氧化鋨固定。製備切片並用JEOL1200II傳輸EM(透射式電子顯微鏡)觀測。B.結果作為神經病理學進展，轉基因小鼠大腦GFAP水平升高；認為這反映纖維性星型細胞數量增加。相反，用紫杉醇治療的轉基因小鼠GFAP水平基本正常(表1)。數據提示紫杉醇可抑制體內星型細胞增生，這將有助於預防MS脫髓鞘。進一步分析大腦組織中GFAP進行組織學評價。圖78描述正常小鼠、未用紫杉醇治療對照轉基因小鼠和用紫杉醇治療對照轉基因小鼠的大腦切片。儘管對照轉基因小鼠纖維性星型細胞數量更多，但星型細胞形態學與在正常動物觀到的相似(粗的星狀突起自細胞體伸出)。然而，用紫杉醇治療對照轉基因小鼠的纖維性星型細胞顯著降低。還有，觀察到兩種形態學變化纖維性星型細胞的細胞體顯得變圓(已證明將導致培養細胞程序性死亡)和細胞體周圍的細胞突起很細。使用電子顯微鏡進一步超微結構分析證實，轉基因小鼠星型細胞以起源於細胞體的濃厚著色的星狀細胞突起為特徵。廣泛突起包含著排列整齊的細絲表明細胞是存活的激活細胞。然而，用紫杉醇治療轉基因小鼠星型細胞形態學以細胞變圓、細絲狀突起和細胞內細絲蛋白質耗減和結構破壞為特徵(圖80)。C.結論數據證實紫杉醇引起體內纖維狀星型細胞變化，纖維狀星型細胞是MS損害中增生最活躍的細胞類型。很可能紫杉醇也抑制星型細胞突起的功能並且，因此，可改變與髓磷脂破壞有關的細胞內過程。實施例6紫杉醇對內皮細胞增生的作用為了確定紫杉醇是否抑制內皮細胞增生，EOMA細胞(一種內皮細胞系)低密度鋪板並在不含和含遞增濃度紫杉醇的條件下孵育48小時。孵育後，用臺盼蘭排出分析法計數活細胞數量。結果(圖9)顯示紫杉醇濃度為10-8M時抑制50％以上的內皮細胞增生，濃度為10-7M或更高時完全抑制細胞增生。這些數據證明，紫杉醇是內皮細胞增生的強抑制劑。所有細胞毒性分析進行3次，和每次一式三份獨立測量。為了確定紫杉醇對內皮細胞周期和細胞程序性死亡的作用，EOMA細胞在不含和含有遞增濃度紫杉醇的條件下孵育24小時。細胞用3.7％甲醛磷酸緩衝鹽水固定20分鐘，用1μg/mlDAPI(4』-6-二氨基-2-苯基吲哚)染色，在40倍目鏡的表面螢光光鏡下檢測。用細胞核片段和凝結的染色質給細胞評分來評價程序性死亡細胞。數據顯示紫杉醇濃度大於10-8M時引起內皮細胞程序性死亡(圖10)。實施例7增生分析試驗(MTT)第1天，按每孔5-10×104滑膜細胞制板(96孔板)。第1列孔不加入細胞(空白)。第2天，輕彈平板棄去介質，加入200μl含不同濃度藥物的介質，細胞與藥物作用6小時、24小時或4天。第1列和第2列孔不加藥(分別為空白和不處理對照)。棄去含藥介質並加入200μl不含藥新鮮介質。細胞再繼續生長3～4天。第5天，加入20μl二甲噻唑聯苯四唑鎓溴鹽(MTT)(5mg/mlPBS)並於37℃孵育4小時。輕輕倒出介質，加入200μlDMSO。振蕩平板30分鐘，在562nm處讀取吸光度。結果數據用未處理對照的第2列孔中存活細胞數(分析前細胞數取自一個標準化處理值)除以處理後存活細胞數表示存活％。IC50，殺死50％細胞的藥物濃度，可從圖11A-E以內插值替換。作用24小時，發現LY290181化合物是降低和抑制細胞增生的最強的抗-微管物質，其IC50小於5nM(圖C)。paclitaxe、epothiloneB和塊菌素作用稍弱，IC50分別為30nM(圖A)、45nM(圖F)和45nM(圖B)上下。最後，氟化鋁(ALF3)和己二醇的IC50顯著高出，分別為32μM(圖E)和64mM(圖D)。實施例8紫杉醇和其它抗-微管物質對基質金屬蛋白酶產生的作用A.材料與方法1.紫杉醇抑制IL-1刺激的AP-1轉錄活性軟骨細胞用含AP-1驅動CAT報告基因的構造轉染，並用IL-1刺激，加入IL-1(50ng/ml)，在不含和含不同濃度紫杉醇的條件下孵育24小時。紫杉醇處理呈濃度依賴性地降低CAT活性(平均值±SD)。根據t-檢驗，帶一個星號(*)的數據表示與IL-1誘導的CAT活性比較具有顯著性，p＜0.05。所示結果代表3個獨立實驗。2.紫杉醇對IL-1誘導的AP-1DNA結合活性的影響，AP-1DNA用放射性標記的人AP-1序列探針和凝膠移位分析方法分析結合活性。IL-1β(20ng/ml)之後不用或用不同量紫杉醇(10-7～10-5M)處理的軟骨細胞提取液與過量探針在冰中孵育30分鐘。，接著進行非-變性凝膠電泳。「共同的」泳道含有過量的未標記AP-1寡核苷酸。結果代表3個獨立實驗。3.紫杉醇對IL-1誘導的MMP-1和MMP-3mRNA表達的影響細胞用不同濃度紫杉醇(10-7～10-5M)處理24小時。然後，在紫杉醇存在的條件下用IL-1β(20ng/ml)再處理18小時。提取總RNA，用Northern印跡分析法測定MMP-1mRNA水平。隨後剝離印跡並用32P-放射標記的大鼠GAPDHcDNA再探針，GAPDHcDNA常用作管家基因。結果代表4個獨立實驗。定量膠原酶-1和溶基質素-表達mRNA水平。MMP-1和MMP-3表達水平用GAPDH校準。4.其它抗-微管劑對膠原酶表達的影響原代軟骨培養細胞取自新鮮腓腸軟骨。在100×20mm培養皿按每毫升2.5×106將細胞鋪板並於37℃在含5％FBS的Ham’sF12介質中孵育過夜。細胞在不含血清的介質中飢鋨過夜，然後用不同濃度抗-微管物質處理6小時。每個培養皿中均加入IL-1(20ng/ml)並再孵育18小時。使用酸化胍異硫氰酸鹽法提取總RNA，並進行變性凝膠電泳。用1％變性凝膠進行凝膠電泳、轉移到尼龍膜和用32p-標記的膠原酶cDNA探針雜交對變性的RNA樣本(15μg)進行分析。32p-標記的甘油醛磷酸脫氫酶(GAPDH)cDNA探針作為內標以確保負載大致相同。掃描曝光的膜並用ImageQuant定量分析。B.結果1.基質金屬蛋白酶家族的促進劑圖19A顯示除明膠酶B以外所有基質金屬蛋白酶含有轉錄因子AP-1和PEA-3。早已證實基質金屬蛋白酶如膠原酶和溶基質素的表達依賴於轉錄因子AP-1的激活。所以AP-1抑制劑將抑制基質金屬蛋白酶的表達。2.紫杉醇對AP-1轉錄活性的作用如圖19B所示，IL-1刺激AP-15-倍的轉錄活性。用紫杉醇短暫預處理轉染的軟骨細胞降低了IL-1誘導AP-1報告基因CAT的活性。因此，紫杉醇呈濃度依賴性地降低軟骨細胞中IL-1誘導的AP-1活性。這些數據證明，紫杉醇是軟骨細胞AP-1活性的強抑制劑。3.紫杉醇對DNA結合活性的影響為確定紫杉醇抑制AP-1活性不是非特異性作用所致，利用軟骨細胞核溶解產物研究了紫杉醇對IL-1誘導的AP-1與寡核苷酸結合作用的影響。如圖19C所示，10-7～10-5M濃度紫杉醇預處理24小時的軟骨細胞溶解產物使IL-1誘導的結合活性降低。紫杉醇抑制轉錄活性與AP-1與DNA的結合下降密切相關。4.紫杉醇對膠原酶和溶基質素表達的作用既然紫杉醇是AP-1活性的強抑制劑，所以對紫杉醇或IL-1誘導的膠原酶和溶基質素表達作用進行了研究，膠原酶和溶基質素是與炎症性疾病有關的兩種重要基質金屬蛋白酶。概要地，如圖20所示，IL-1誘導軟骨細胞膠原酶和溶基質素mRNA水平升高。用紫杉醇預處理軟骨細胞24小時膠原酶和溶基質素mRNA水平顯著降低。結果表明紫杉醇在與抑制AP-1活性相同的濃度時完全抑制了兩種基質金屬蛋白酶的表達。5.其它抗-微管劑對膠原酶表達的影響圖12A-H證實，抗-微管物質抑制膠原酶表達。加入作為前炎症性細胞因子的IL-1刺激膠原酶表達。用不同抗-微管物質，特別是LY290181、己二醇、二氧化氘、甘氨酸乙酯、ALF3、塊菌素epothilone、和乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)預處理軟骨細胞，在低至10-7M的濃度均阻止IL-1誘導膠原酶表達。C.討論體外實驗時10-6M紫杉醇能夠抑制膠原酶B和溶基質素表達。由於該抑制可解釋為抑制了AP-1活性，因此需要誘導除明膠酶以外的所有基質金屬蛋白酶這一步驟，紫杉醇有望能夠抑制其它AP-1依賴性基質金屬蛋白酶。這些基質金屬蛋白酶在所有的炎症性疾病中水平均升高並且在分解基質、細胞遷移和增生，以及血管生成中起主要作用。實施例9抗-微管物質對蛋白聚糖表達的影響原代軟骨培養細胞取自新鮮腓腸軟骨。在100×20mm培養皿按每毫升2.5×106細胞鋪板並於37℃在含5％FBS的Ham’sF12介質中孵育過夜。細胞在不含血清的介質中飢鋨過夜，然後用不同濃度抗-微管物質(10-7M，10-6M，10-5M和10-4M)處理6小時。每個平皿中均加入IL-1(20ng/ml)並再孵育18小時。使用酸化胍異硫氰酸鹽法提取總RNA，並進行變性凝膠電泳。用1％變性凝膠進行凝膠電泳、轉移到尼龍膜和用32p-標記的蛋白聚糖(聚集蛋白聚糖)cDNA探針雜交對變性的RNA樣本(15μg)進行分析。32P-標記的甘油醛磷酸脫氫酶(GAPDH)cDNA探針作為內標以確保負載大致相同。掃描曝光的膜並用ImageQuant定量分析。結果圖13A-H顯示對膠原酶表達具有抑制作用的抗-微管物質(實施例8)，特別是LY290181、己二醇、二氧化氘、甘氨酸乙酯、ALF3、塊菌素epothilone、和乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)，在所有實驗濃度並不影響聚集蛋白聚糖表達，所述聚集蛋白聚糖是軟骨基質的一種主要組分。實施例10NF-kB活性(基於細胞)分析IL-1和TNF均被確定為刺激基因轉錄的前炎症性細胞因子，基因轉錄由也參與炎症過程的稱為NF-kB的轉錄因子驅動。因此可通過分析報告基因(NF-kB)對IL-1和TNF刺激的反應而對間接分析IL-1和TNF的炎症性作用。第1天，按每孔(24孔板)5×104個用NF-kB報告結構(Luciferase，Promega公司)穩定地轉染了的NIH-3T3(鼠成纖維細胞)制板。一旦融合(第3-4天)，全部細胞介質用1ml不含血清的介質替代使細胞飢餓。24小時飢餓之後，在加入IL-1(20ng/ml)和TNF(20ng/ml)之前先用不同濃度抗-微管物質處理細胞6小時。細胞與IL-1和TNF反應1小時和16小時，24小時之後測定NF-kB活性。第5天，棄去介質，PBS輕洗細胞一次。然後用250μl細胞溶解緩衝液(Promega公司，Wisconsin)抽提細胞15分鐘。向盛有2.5μl細胞提取液的試管中加入25μl螢蟲素酶底物以分析NF-kB轉錄活性。試管立即插入發光計(TurnerDesigns)中並測定光發射10秒種。接著用蛋白質濃度校準螢光素酶數據。結果數據表達了抗-微管物質所顯示出的對NF-kB誘導(合併誘導)的幹擾作用。如圖80A、80B、80C和80D所示，塊菌素和紫杉醇對IL-1和TNF誘導的NF-kB活性均有抑制作用。塊菌素和紫杉醇6小時和24小時的抑制作用分別在10μM和2μM左右。實施例11紫杉醇抑制腫瘤血管生成受精家養雞胚去除殼之前孵育4天。剝除空腔部位周圍的殼、分離殼內膜、穿破殼對面頂端並允許卵內容物從平端輕輕流出，從而倒出卵內容物。內容物倒入園底無菌玻璃碗中，蓋上陪替氏培養皿蓋並在90％相對溼度和3％二氧化碳條件下孵育。MDAY-D2細胞(一種小鼠淋巴腫瘤)注入小鼠並使腫瘤生長至0.5-1.0g。殺死小鼠，乙醇擦拭腫瘤部位、切除、置入無菌組織培養基中，並在層流通風櫥中切成1mm小方塊。在將切割的腫瘤植入9-天大的雞胚之前，用30號針頭輕輕刮擦CAM表面，以確保腫瘤的植入。然後將腫瘤植入孵育8天的CAM(開殼後4天)，並允許在CAM生長4天以建立血管供應。用此方法製備4個胚胎，每個胚胎接受3塊腫瘤。第12天，胚胎中3個腫瘤的每一個腫瘤或者接受負載20％紫杉醇熱糊劑或者接受未負載熱糊劑或者不經治療。記錄結果之前繼續治療2天。接種的MDAY-D2腫瘤分泌血管生成因子，血管生成因子使毛細血管(源於CAM)向腫瘤內生長並使腫瘤繼續長大。既然所有腫瘤血管源出CAM，而所有腫瘤源自外植體，因此，分別分析對兩種過程的治療幹擾作用是可能的。通過測定負載紫杉醇熱糊劑對(a)抑制腫瘤的血管形成和(b)抑制腫瘤細胞自身生長的影響進行分析。體內直接立體顯微鏡評價和對本實驗固定組織組織學檢驗表明用負載20％紫杉醇熱糊劑治療的腫瘤，供應腫瘤的血管數量減少(圖14C和14D)，腫瘤內血管數量減少，和腫瘤周圍(典型地實體腫瘤最高度血管化的區域)血管數量減少。在研究進行的2天內，腫瘤尺寸和團塊開始減小。另外，可看到無數的內皮細胞停滯在細胞分裂期，證明內皮細胞增生受到影響。也常見到腫瘤細胞停滯在有絲分裂期。所有4個胚胎一致顯示出負載20％紫杉醇熱糊劑抑制腫瘤血管形成而未負載熱糊劑者則無抑制作用。通過對比，未負載熱糊劑治療的CAMs，腫瘤血管形成良好，與正常周圍組織相比血管數量和密度增加，與負載紫杉醇熱糊劑治療的腫瘤相比，血管引人注目地增多。新形成血管象輪幅附著於車輪中央似地由各個角度向腫瘤中央集中(圖14A和14B)。治療過程中腫瘤大小和團塊繼續增大。組織學上，可看到腫瘤周圍組織有無數擴張的薄壁毛細血管和很少看到內皮細胞分裂。腫瘤組織具有良好的血管形成和整個組織處於活動期。作為一個實施例，兩個相同大小(起始，植入時)腫瘤放置於相同CAM，得到下列數據。用負載20％紫杉醇熱糊劑治療的腫瘤，測得腫瘤330mm×597mm；腫瘤中度邊界有14條血管，腫瘤團塊僅有3-4條小毛細血管。用未負載熱糊劑處理的腫瘤，腫瘤尺寸為623mm×678mm；腫瘤中度邊界有54條血管，腫瘤團塊有12-14條小血管。另外，CAM自身的周圍較紫杉醇-治療腫瘤周圍含有更多的血管。本研究證實熱糊劑釋放足量的紫杉醇抑制伴隨腫瘤生長和發展的病理性血管形成。在腫瘤細胞產生的能夠引導毛細血管從周圍組織向腫瘤團塊內生長的血管形成因子存在的情況下，最大地刺激了血管形成。負載20％紫杉醇熱糊劑能夠阻斷這一過程並限制腫瘤組織保持充足的血供。既通過藥物對腫瘤細胞本身的細胞毒性作用又通過剝奪腫瘤組織生長和擴大所需養分的作用，結果是腫瘤塊縮小。實施例12紫杉醇抑制血管形成A.雞絨毛膜尿囊膜(「CAM」)分析受精的家養雞胚在去殼培養之前孵育3天。剝除空腔部位的殼、分離殼內膜、穿破殼對面頂端並允許卵內容物從平端輕輕流出，經此過程，倒出卵內容物。卵內容物倒入圓底無菌玻璃碗中，蓋上陪替氏培養皿蓋並在90％相對溼度和3％二氧化碳條件下孵育3天。紫杉醇(Sigma，St.Louis，MI)的濃度按0.25、0.5、1、5、10、30μg與每份10μl等份試樣的0.5％水溶性甲基纖維素混合。由於紫杉醇不溶於水，所以使用玻璃珠來產生細微顆粒。10μl等份試樣的溶液在石蠟膜上乾燥1小時形成直徑2mm的盤。然後將含紫杉醇乾燥盤小心地放到孵育6天的每一個CAM生長邊緣。在同一時間將不含紫杉醇的甲基纖維素盤放置於同樣時程的CAMs作為對照。反應2天後(孵育第8天)藉助立體顯微鏡檢查血管。將LiposynII，一種白色不透明溶液，注射到CAM內以增加血管細節的可視性。未染色血管，活的雞胚用帶電視攝象機(Dage-MTIInc.，MichiganCity，IN)界面的Zeiss立體顯微鏡成像。電視信號放大160倍顯示並用成像分析系統(Vidas，Kontron；Etching，德國)捕獲圖像。然後在圖示記錄器(型號3000；MatrixInstruments，Orangeburg，NY)上製成圖像底片。8天大的無殼胚胎的膜用2％戊二醛的0.1M甲胂酸鈉緩衝液灌流；附加的固定液注射到CAM下面。在原位10分鐘後，取出CAM並置入新鮮固定液中，室溫下2小時。用含6％蔗糖的二甲胂酸鈉緩衝液衝洗組織過夜。感興趣區域用1％四氧化鋨在4℃固定1.5小時。用梯度乙醇將組織脫水，與氧化丙烯溶劑交換，並用Spurr樹脂包埋。用金剛石刀切片，置於銅柵條上，染色，和Joel1200EX電子顯微鏡檢測。相似地，切下0.5mm切片用甲苯蘭染色和光學顯微鏡檢查。養至第11天的雞胚被用於腐蝕侵蝕鑄塑技術。使用30號皮下注射針頭將Mercox樹脂(TedPella，Inc.，Redding，CA)注入CAM血管。鑄塑材料由2.5克MercoxCL-2B聚合物和0.05克具有5分鐘聚合時間的催化劑(55％過氧化苯甲醯)組成。注射後塑料在室溫下原位停留1小時，然後在65℃烤箱過夜。接著將CAM放進50％氫氧化鈉水溶液消化所有有機組分。塑料鑄塑體在蒸餾水中廣泛衝洗，風乾，金/鎵包衣，用飛利浦501B掃描電子顯微鏡觀測。上述實驗結果示於圖15-18。概要地，圖15A顯示正常缺殼雞卵培養的一般性質。孵育第6天，胚胎中央輻射狀擴張血管網；CAM鄰接胚胎發展。這些生長血管接近表面並可方便地觀測到，使得該系統成為研究血管生成的理想模型。CAM未染色的活的毛細血管網，可使用立體顯微鏡無損傷成像。圖15B描述使用電視/計算機界面記錄的這樣一個血管區域，其中毛細血管內有血液細胞組分。三維體系結構的CAM毛細血管網絡通過侵蝕鑄塑方法顯示並在掃描電子顯微鏡下觀測(圖15C)。這些鑄塑揭示了底部血管向CAM表面投射從而在CAM表面形成吻合的毛細血管。CAM橫斷面顯示外胚層由雙細胞層組成，寬闊的中胚層含有下鄰外膜、外膜細胞的毛細血管，和單內皮細胞層內膜(圖15D)。在電子顯微鏡水平上，CAM毛細血管典型結構細節被闡明。典型地，血管與外胚層的內細胞層緊密相連(圖15E)。與濃度為0.25、0.5、1、5、10、或30μg紫杉醇反應48小時後，使用裝配了電視/計算機界面的立體顯微鏡在活體條件下檢查每一個CAM以評價對血管形成的作用。160倍放大影像使得可以直接看到毛細血管內的血液細胞；因此很容易評定和記錄感興趣區域的血流。此研究中，血管形成的抑制限定為CAM缺乏毛細血管網和血管血流的一個區域(測得直徑2-6mm)。整個實驗，無血管區域按4個無血管等級評價(表1)。分級代表總體抑制程度，最大抑制用無血管等級3表示。根據其濃度，紫杉醇非常一致地在48小時內引起最大無血管區(直徑6mm或無血管等級3)。表1無血管等級0---正-常多血管狀態1--缺少一些微血管運動2*--直徑大約2mm的小無血管區3*--無血管區超出盤(直徑6mm)*-表示抗血管形成的正效應劑量-依賴性，各種治療物質不同濃度時作用的實驗數據示於表2。表2物質釋放載體濃度抑制/n紫杉醇甲基纖維素(10μl)0.25μg2/11甲基纖維素(10μl)0.5μg6/11甲基纖維素(10μl)1μg6/15甲基纖維素(10μl)5μg20/27甲基纖維素(10μl)10μg16/21甲基纖維素(10μl)30μg31/31PCL糊劑(3mg)0.05％0/9PCL糊劑(3mg)0.10％1/8PCL糊劑(3mg)0.25％5/7PCL糊劑(3mg)0.5％4/4PCL糊劑(3mg)1％8/8PCL糊劑(3mg)2％10/10PCL糊劑(3mg)5％10/10PCL糊劑(3mg)10％9/9PCL糊劑(3mg)20％6/620％明膠60％PCL20％5/6糊劑(3mg)明膠(1mg)20％17/17眼用懸浮液(2×10μl)0.3％1/12眼用懸浮液(2×15μl)0.3％3/3眼用懸浮液(1×15μl)0.3％15/15眼用的微球懸浮液10％4/4(15μl)斯滕特氏印模包衣2.5％5/5(～1mg)斯滕特氏印包衣10％1/1(～1mg)斯滕特氏印包衣33％3/3(～1mg)環糊精溶液(10μl)10％5/5膠束幹製劑(1mg)10％非常毒膠束溶液(10μl)10％非常毒膠束溶液(10μl)4μg1/1-非常毒cremophor紫杉4μg1/1-非常毒4PCL1MePEG20％10/13片劑(1mg)PCLMePEG糊劑(3mg)20％6/9微球(黏膜黏膜)20％7/7微球(EVA)0.6％2/2微球(30-100μm)20％11/11-慢釋微球(30-100μm)10％1/8-慢釋微球(10-30μm)20％5/6-中釋微球(10-30μm)10％5/9-中釋微球(1-10μm)20％8/11-速釋微球(1-10μm)10％9/9-速釋漿果赤黴素糊劑(2mg)2μg2/3甲基纖維素(5ml)5μg4/7甲氨+蝶呤PCL糊劑(3mg)1％0/13PCL糊劑(3mg)2％0/3PCL糊劑(3mg)20％0/1PCLMePEG糊劑(3mg)2％1/195PCL5MePEG糊劑1％0/6(3mg)95PCL5MePEG糊劑10％0/5(3mg)甲基纖維素(10μl)2μg0/8醋酸潑尼松眼用懸浮液(2×10μl)1％3/4龍眼用懸浮液(2×15μl)1％1/1原花色甙甲基纖維素(10μl)10μg1/18(proanthocyanidin)PCL糊劑(3mg)15％1/2PCL糊劑(3mg)30％非常毒vero細胞毒甲基纖維素(10μl)10ng0/8素甲基纖維素(10μl)675ng0/2硫酸肝素片甲基纖維素(10μl)0.2μg0/6段(1)硫酸肝素片甲基纖維素(10μl)0.4μg0/7段(2)釩酸鹽微球(1mg)5％0/5硫酸氧釩PCL糊劑(3mg)2.5％0/3BMOVPCL糊劑(3mg)10％非常毒PCL糊劑(3mg)25％非常毒PCL糊劑(3mg)35％非常毒BEOVPCL糊劑(3mg)10％非常毒s-膦酸80％PLA20％MePEG20％非常毒糊劑(1mg)PCL糊劑(1mg)2％2/7PCL糊劑(3mg)1％0/9PCL糊劑(3mg)2％0/6PCL糊劑(3mg)4％0/3PCL糊劑(3mg)8％1/9三苯氧胺甲基纖維素(10μl)5μg0/2鯊魚軟骨粉N/A1mg0/5雌二醇氮芥PCL糊劑(3mg)5％0/6磷酸鈉PCL糊劑(3mg)10％0/6長春花鹼甲基纖維素(10μl)9μg非常毒甲基纖維素(10μl)2μg非常毒PCL糊劑(3mg)0.25％4/6PCL糊劑(3mg)0.5％0/4PCL糊劑(3mg)1％2/3PCL糊劑(3mg)2％非常毒長春新鹼甲基纖維素(10μl)9μg非常毒甲基纖維素(10μl)1μg非常毒PCL糊劑(3mg)0.05％1/1-非常毒PCL糊劑(3mg)0.1％2/2-非常毒PCL糊劑(3mg)0.25％1/1-非常毒PCL糊劑(3mg)0.5％非常毒PCL糊劑(3mg)1％非常毒PCL糊劑(3mg)2％非常毒雙萜-1甲基纖維素(10μl)3μg0/5雙萜-2甲基纖維素(10μl)3μg0/5薰草菌素-CPCL糊劑(3mg)10％0/14PCL糊劑(3mg)20％0/10MDHC(酪氨PCL糊劑(3mg20％0/8酸抑制劑)erbstatinPCL糊劑(3mg)20％0/5-非常毒金雀異黃素PCL糊劑(3mg)10％0/7PCL糊劑(3mg)20％0/4殺草菌素PCL糊劑(3mg)2％3/4PCL糊劑(3mg)0.5％1/1喜樹鹼PCL糊劑(3mg)0.25％3/4PCL糊劑(3mg)1％2/3PCL糊劑(3mg)5％4/5蘇拉明和醋甲基纖維素(10μl)20μg/70μg2/4酸可的松甲基纖維素(10μl)50μg/40μg5/14甲基纖維素(10μl)50μg/50μg3/26甲基纖維素(10μl)20μg/50μg0/24甲基纖維素(10μl)70μg/70μg0/9蘇拉明和硫甲基纖維素(10μl)50μg/50μg0/6酸四氫S魚精蛋白甲基纖維素(10μl)50μg0/10甲基纖維素(10μl)100μg1/10TIMP甲基纖維素(10μl)15μg0/5秋水仙礆甲基纖維素(10μl)3μg1/1-非常毒典型的紫杉醇-治療的CAMs也顯示直徑6mm無血管區，超出了透明甲基纖維素盤的中心位置。稍加放大，周圍的無血管區清楚明了(圖16C)；周圍功能血管通過改變方向遠離紫杉醇源(圖16C和圖16D)。在正常狀態下從未觀測到這樣使血流改變方向的角。紫杉醇作用的另一特徵是在代表血細胞聚集的無血管區形成血島。紫杉醇-處理的CAM有關的形態學改變在光學和電子顯微鏡水平下可輕易地見到。為了方便描述起見，顯示了由正常到無血管狀態總過渡的三個截然不同的階段。無血管區邊緣附近CAM以三個胚層豐富的有絲分裂細胞為特徵標誌(圖17A和圖18A)。也觀測到毛細血管內皮血管細胞有絲分裂增強。然而，內皮細胞保持連接完整的沒外滲血細胞。隨著進一步退化，CAM以毛細血管破潰和溶解為特徵(圖17B和18B)。推定內皮細胞，典型地停滯在有絲分裂期，與血細胞仍保持緊密的間隙聯接並位於外胚的下部；然而，這些細胞不是接合連接。無血管區最中心部分以增厚的外胚和內膜層為特徵(圖17C和圖18C)。儘管這些層增厚，細胞接合保持完整無損及胚層保持它們的結構特徵。中胚層內，散布豐富的停滯在有絲分裂期的細胞；這些細胞未顯示在前一時相觀察到的內皮細胞極化。而且，整個無血管區，退化細胞共同的特點是顯著的電子密集空泡和細胞碎片(圖18C)。總之，研究表明將紫杉醇用於CAM48小時後，血管形成受到抑制。血管形成抑制代表了紫杉醇作用的三個過渡相的無血管區。在中央，無血管區最受影響區域含有伴有紅細胞外滲的破潰毛細血管；說明內皮細胞的細胞間接合缺損。內胚層和外胚層細胞保持它們的細胞間接合和因此胚層完整無損；然而，它們輕度增厚。靠近正常血管區域，血管保持接合組合因而也完整無損。紫杉醇-處理區域周邊，血管生長也被抑制，這即是血管改變方向或「肘」效應的典型例證(圖16D)。紫杉醇-處理的無血管區也揭示了CAM所有三個胚層大量細胞停滯於有絲分裂期；這對紫杉醇-而言是獨一無二的，因為以前的研究未曾闡述過這樣的結果。由於停滯於有絲分裂期，內皮細胞不能進行參與血管生成的正常代謝功能。與此相比，用蘇拉明和醋酸可的松治療的無血管區，不產生CAM細胞停滯於有絲分裂期；它們僅僅阻止血管長入腫瘤區。所以，即使這些物質是抗-血管形成劑，也有許多點可靶向血管形成。觀察了48小時期間紫杉醇的作用。在觀察期間，注意到早至用藥後9小時即出現血管形成抑制。組織學切片顯示相似的形態學變化，如見於圖17A和18A所示48小時無血管區第一過渡時相的變化。而且，也觀察到原來無血管區內血管再形成過程。已經發現肝素和血管生成類固醇形成的無血管區在用藥後60小時血管再形成。一個研究中，紫杉醇-處理的無血管區至少在用藥後7天內沒有血管再形成，意味著具有更強的長效作用。實施例13紫杉醇和喜樹鹼對LNCaP細胞增生的作用材料與方法LNCaP細胞以每個孔2×103和1×103細胞的濃度分別種到96孔板上。48小時後，向每個培養孔加入不同濃度的紫杉醇或喜樹鹼(25μl)，板在37℃孵育5天。孵育後，用1％戊二醛溶液固定細胞，用0.5％龍膽紫染色5分鐘。用100μl緩衝溶液連續洗脫染料，在TitertekMultiskan微板閱讀器讀取492mm波長的吸收度。細胞生長用相對於不含化合物對照孔(設為100％)的百分比表示。結果紫杉醇抑制LNCaP細胞生長，EC50大約0.09nM。使用DNA片段分析法對紫杉醇處理後的孔中細胞進行細胞程序性死亡實驗。觀測到大量細胞程序性死亡說明紫杉醇是通過細胞程序性死亡機制的細胞毒性物質。喜樹鹼對LNCaP細胞極具毒性作用。喜樹鹼在0.001nM濃度可毒死60％以上的細胞。因此，該藥物對LNCaP細胞的EC50必定在毫微微摩爾(femtomolar)濃度範圍。表1對照492nm吸收度＝0.49±0.06表2對照492nm吸收度＝0.47±0.05實施例14其它抗-微管物質的抗-血管形成作用除了紫杉醇，其它抗-微管物質也可摻入聚合物載體。下面提供的代表性實施例包括喜樹鹼和長春鹼類如長春新鹼和長春花鹼，以及微管穩定劑如塊菌素、氟化鋁和LY290181。A.將物質摻入PCL用乳缽和杵棒研磨物質使顆粒小於5微米。然後以乾粉末形式與聚己內酯(分子量18,000伯明罕聚合物，ALUSA)。加熱混合物到65℃5分鐘，攪拌溶化的聚合物/物質混合物5分鐘，調勻為糊劑。溶化糊劑裝入1ml注射器中，擠壓成3mg小丸。將小丸放置到受孕6天的CAM上，以評價它們的抗-血管形成性能。B.負載喜樹鹼PCL對CAM的作用與對照PCL小丸相比，負載喜樹鹼的熱糊劑能有效抑制血管形成。負載5％藥物時，試驗的4/5CAMs顯示出強的血管形成抑制作用。另外，負載量為1％和0.25％時，分別有2/3和3/4的CAMs顯示出血管形成抑制作用。因此，這些結果證明喜樹鹼從PCL熱糊劑充分釋放並具有抗-血管形成的療效。C.負載長春花礆和長春新鹼PCL糊劑對CAM的作用通過測試作用於CAM的製劑，藥物從PCL小丸足量釋放以產生生物學作用是顯然的。與對照PCL熱糊劑小丸相比，在CAM試驗中長春花鹼和長春新鹼均能產生抗-血管形成作用。負載藥物濃度為0.5％和0.1％時，長春新鹼在所有測試CAMs中均產生血管形成抑制作用。當實驗濃度超過2％，達到中毒藥物水平並發生胚胎意外死亡。長春花鹼在0.25％、0.5％和1％濃度時對CAM血管形成也有抑制作用。但是，濃度超過2％，長春花鹼對胚胎具有毒性作用。D.負載塊菌素PCL糊劑對CAM作用與對照PCL小丸相比，負載塊菌素的糊劑能有效抑制血管形成。負載1％藥物時，塊菌素對1/3的試驗CAMs產生血管形成抑制作用。然而，更大的5％負載藥物濃度時，塊菌素在2/3的CAMs產生強的血管形成抑制作用。因此，這些結果證明塊菌素從PCL熱糊劑充分釋放並具有強的抗-血管形成的活性。E.負載氟化鋁PCL糊劑對CAM作用與對照小丸相比，負載氟化鋁(ALF3)的PCL糊劑在負載20％藥物時能有效抑制血管形成。負載20％藥物時，2/4的CAMs表現血管形成抑制，測得無血管區直徑2～6mm。然而，較低的藥物負載，1％和5％，血管形成抑制作用不明顯(分別為0/6和0/5CAMs)。因此，氟化鋁只是在較高藥物濃度產生抑制血管形成的效果。F.負載LY290181PCL糊劑對CAM作用分析負載5％LY290181PCL糊劑對CAM的作用，顯示LY290181能使1/3的試驗CAMs產生血管形成抑制作用。然而，1％負載藥物時，LY290181不產生血管形成抑制效應(n＝2)。實施例15紫杉醇對非-增生細胞生存的作用雖然治療疾病藥物能夠強力抑制慢性疾病進程中出現的各種過量不適宜細胞活性(增生、炎症、蛋白水解酶產生)是重要的，但必須不能對正常組織具有毒性。特別嚴格的是正常細胞不能受損，因為正常細胞受損將導致疾病進展。本實施例，利用培養的軟骨細胞生長融合，檢測了紫杉醇體外試驗時對正常非-分裂細胞活性的作用。概要地，軟骨細胞在含紫杉醇(10-5M、10-7M和10-9M)或不含紫杉醇(對照)條件下孵育72小時。此期間結束時，用盼蘭排出計數法測定活細胞總數。試驗進行4次並校準數據。試驗結果示於圖21。簡要講，由圖21中可以看出，體外試驗時紫杉醇不影響正常非-增生細胞的活性，即使是高濃度的紫杉醇(10-5M)。更特異的是，即使在前面實施例所述足以阻斷病理進程的藥物濃度時，對正常軟骨細胞無毒性作用。實施例16局部紫杉醇製劑的滲透增強劑選擇A.紫杉醇在各種增強劑中的溶解度檢測了下述滲透增強劑Transcutol、乙醇、丙二醇、肉豆蔻酸異丙酯和油酸Transcutol∶肉豆蔻酸異丙酯(9∶1體積比)。取各種增強劑各1毫升裝入玻璃小瓶預熱到37℃並加入過量紫杉醇。從每個小瓶中取0.5ml液體樣本在37℃以13000轉/分離心2分鐘。將上清液等份試樣(0.1ml)由離心管轉移至容量燒瓶中並用甲醇稀釋。用高壓液相色譜儀(HPLC)分析紫杉醇含量。B.分配係數將特定量紫杉醇溶於加熱到37℃的一定容積增強劑中。溶液等分試劑(1ml)加到盛有1ml辛醇的4ml玻璃試管中。然後加入磷酸緩衝鹽水(1ml)(pH7.4)並渦旋試管產生乳化。試管置入37℃烘箱16小時，然後從每個試管取0.1ml辛醇相併用9.9ml甲醇稀釋。對於水相，0.5ml樣本取自油酸和肉豆蔻酸異丙酯試管及0.5ml樣本取自丙二醇試管並用0.5ml甲醇稀釋。取自Transcutol試管的0.1ml樣本用9.9ml50∶50乙醇∶PBS稀釋，取自乙醇試管的0.1ml樣本用9.9ml50∶50乙醇∶PBS稀釋。HPLC分析紫杉醇含量。每次測定一式三份進行。C.結果37℃紫杉醇在每個增強劑中的溶解度列於表1。表1各種滲透增強劑中紫杉醇飽和濃度辛醇/水分配係數Ko/w列於表2。表2紫杉醇在各種增強劑中辛醇/水分配係數為有效發揮作用，紫杉醇必須穿透皮膚到達有活力表皮的下層。已經確定，藥物要穿透有活力表皮，它們必須具有接近100的辛醇/水分配係數(HadgraftJ.H.和WaltersK.，Drugabsorbtionenhancements，A.G.deBoers編著，HarwoodPublishers，1994)。基於表1和2的結果，丙二醇和Transcutol顯示了溶解紫杉醇和增加它從油相向水相分配的最佳結合。然而，Transcutol和丙二醇的Ko/w仍有些低，它們與Ko/w無限的肉豆蔻酸異丙酯結合以試圖增加紫杉醇在辛醇相的溶解度。肉豆蔻酸異丙酯在室溫很易溶解於Transcutol。為形成均相，丙二醇和肉豆蔻酸異丙酯也與乙醇混合，丙二醇∶乙醇∶肉豆蔻酸異丙酯混合比例為4∶3.5∶0.5。Ko/w結果示於表3。表3紫杉醇在聯合增強劑中辛醇/水分配係數肉豆蔻酸異丙酯加入Transcutol導致分配係數顯著增加。然而，丙二醇∶乙醇∶肉豆蔻酸異丙酯溶液與單獨丙二醇相比，並未引起分配係數明顯改善。這後一結果，和已經發現乙醇加劇牛皮癬狀況的事實，足以將此聯合增強劑排出在進一步的考慮之外。再者，加入肉豆蔻酸異丙酯確實使紫杉醇溶解度高於單獨Transcutol時的溶解度。紫杉醇在Transcutol溶解度為346.9mg/ml，Transcutol肉豆蔻酸異丙酯聯合時溶解度增至353.9mg/ml。因此，選用此聯合增強劑用於皮膚研究。實施例17局部紫杉醇製劑的製備和分析A.紫杉醇軟膏A的製備Transcutol(3.2g)，肉豆蔻酸異丙酯(0.3g)，labrasol(2.5g)，紫杉醇(0.01g)和0.5mCi/ml3H-紫杉醇(0.3ml)在20ml閃爍管中結合。另一閃爍管中，labrafil(2.5g)，arlacel165(1.2g)和compritol(0.3g)結合併加熱到70℃直至全部熔化。將第一閃爍管的內容物加到內容物熔化的後一試管中，渦旋直至均勻然後冷卻。B.紫杉醇軟膏B的製備Transcutol(2.5g)，肉豆蔻酸異丙酯(1.0g)，labrasol(2.5g)，紫杉醇(0.01g)和0.5mCi/ml3H-紫杉醇(0.3ml)在20ml閃爍管中結合。另一閃爍管中，labrafil(2.5g)，arlacel165(1.2g)和compritol(0.3g)結合併加熱到70℃直至全部熔化。將第一閃爍管的內容物加到內容物熔化的後一試管中，渦旋直至均勻然後冷卻。C.皮膚製備和穿透性研究切除的Yucatan小豬皮膚-70℃冷凍儲存直至使用。使用10號軟木塞鑽孔器從冷凍皮膚中盤狀衝壓製備皮膚樣本。皮膚樣本用鏈黴素-青黴素漂淨並置於冷凍袋中-70℃儲存。皮膚切片在Franz滲濾池封固，切下角質層。底部受體溶液是於逆滲透(R.O.)水中的0.05％阿莫西林溶液。供體細胞夾到每一塊皮膚表面。加熱紫杉醇軟膏直至熔化(40～50℃)並抽入注射器。仍為熔化狀態時，向每塊皮膚表面擠出0.1ml。用玻璃盤蓋住供體細胞並將該集合裝配放置24小時。24小時後，細胞松解，除去多餘的軟膏並儲於閃爍管中。用3ml二氯甲烷(DCM)迅速衝洗細胞表面並乾燥。DCM洗液存於盛有過量軟膏的同一試管中。皮膚切片和受體溶液分開放置於閃爍管中。在-30℃將皮膚冷凍切片為30μm的切片並放置於不同試管。最初的刮屑和剩餘皮膚也收集到不同玻璃試管。向每一個皮膚切片樣本試管中加入0.5ml組織溶解劑使樣本溶解。樣本留置過夜以在室溫下溶解。次日，向試管中加入3ml閃爍合劑。對於DCM洗液，取100μl移至盛有1ml乙腈試管中，然後加入3ml閃爍合劑。使用β計數儀測定所有這些溶液的放射活性。皮膚細胞在Franz滲濾池封固並分為三組。相應地處理每一樣本(不處理或軟膏B處理或不含紫杉醇的軟膏處理)。24小時後，移出樣本使用標準組織學技術進行加工。D.結果組織學切片，未處理皮膚角質層切片厚度為50～120μm，而有活力表皮厚度為400～700μm。對於含3％重量比肉豆蔻酸異丙酯軟膏(軟膏A)，皮膚中紫杉醇濃度在角質層和整個表皮層基本上恆定於1μg/ml(1.2×10-6M)。對於含10％重量比肉豆蔻酸異丙酯軟膏(軟膏B)，角質層和表皮層紫杉醇濃度恆定，但角質層更高(6μg/ml，表皮為2μg/ml)。每一個軟膏試驗中，受體溶液均沒有放射性，說明紫杉醇完全不通過皮膚部分。使用含紫杉醇軟膏未發現肉眼能看到的差異。實施例18開發紫杉醇治療牛皮癬的系統給藥製劑對牛皮癬嚴重的病例，認為攻擊性治療是可以接受的，因此可接受與紫杉醇系統治療有關的毒性作用。紫杉醇系統給藥製劑由在水溶液中形成微膠粒的兩親二嵌段共聚物構成，所述微膠粒在水中由疏水芯和親水殼組成。二嵌段共聚物聚(DL-交酯)-嵌-甲氧基聚乙烯乙二醇(PDLLA-MePEG)、聚己內酯-嵌-甲氧基聚乙烯乙二醇(PCL-MePEG)和聚(DL-交酯-共聚-聚己內酯)-嵌-甲氧基聚乙烯乙二醇(PDLLACL-MePEG)可用整體熔化聚合方法或相似的方法合成。簡要講，在通氮氣和攪拌狀態下，將一定量的DL-交酯、己內酯和不同分子量的甲氧基聚乙烯乙二醇單體加熱(130℃)熔化。催化劑辛酸亞錫(0.2％w/w)加入熔化的單體中。聚合反應進行4小時。分子量、臨界微膠粒濃度和紫杉醇最大負載量分別用GPC、螢光和溶解試驗測定(圖22)。獲得紫杉醇的高包合容量。紫杉醇溶解取決於共聚物的組成和濃度(圖22和23)。PDLLA-MePEG溶解的紫杉醇最穩定(圖23和24)。聚合物微膠粒內芯的強締合呈現包含疏水藥物如紫杉醇的高容量環境。藥物可共價結合於嵌段共聚物形成微膠粒結構或可物理性摻進微膠粒疏水芯內。藥物從微膠粒釋放機制包括從芯擴散和在單聚合物鏈和微膠粒之間的交換。小的微膠粒(正規地小於100nm)將消除注射較大顆粒時遇到的困難。實施例19熱糊劑製備過程5g分子量10,000～20,000的聚己內酯(Polysciences，WarringtonPenn.USA)；20ml玻璃閃爍管置於盛有稱重的50ml水的600ml燒杯中。將燒杯逐漸加熱到65℃並在此溫度保持20分鐘直至聚合物熔化。已知重量的紫杉醇，或其它血管形成抑制劑在65℃與熔化的聚合物徹底混合。將熔化聚合物傾到預熱(60℃烘箱)的模具中並冷卻直至聚合物凝固。將聚合物切成小片(大約2mm×2mm大小)並置於1ml玻璃針筒中。然後將玻璃針筒垂直放置(帶蓋子一端在下)於盛有65℃(粒化熱板)蒸餾水的500ml燒杯中直至聚合物完全熔化。然後針筒中插入活塞以擠壓熔化聚合物使在筒底端形成粘性物質。針筒加蓋並室溫冷卻。為了應用，注射器重新加熱到60℃，以液體給藥，冷卻至體溫是凝固。實施例20紫杉醇從使用PDLLA-PEG-PDLLA和低分子量聚(d，l乳酸)熱糊劑中釋放的改進A.製備PDLLA-PEG-PDLLA和低分子量PDLLADL-交酯購自Aldrich。分子量8,000的聚乙二醇(PEG)、辛酸亞錫和DL-乳酸購自Sigma。分子量20,000的聚-ε-己內酯(PCL)購自BirminghamPolymers(Birmingham，AL)。紫杉醇購自HauserChemicals(Boulder，CO)。窄分子量分布的聚苯乙烯標準品購自Polysciences(Warrington，PA)。乙腈和二氯甲烷是HPLC分析級(FisherScientific)。PDLLA-PEG-PDLLA三嵌共聚物通過開環聚合反應合成。DL-交酯單體和PEG以不同比例混合併加入0.5％辛酸亞錫。聚合反應在在150℃進行3.5小時。低分子量PDLLA通過DL-乳酸縮聚反應合成。反應在輕輕通氮氣、機械攪拌和加熱180℃的條件下在玻璃燒瓶中進行1.5小時。通過滴定羧酸末端基團測得PDLLA分子量約800。B.生產糊劑製劑負載20％或30％紫杉醇與PDLLA-PEG-PDLLA共聚物徹底混合或與90∶10、80∶20和70∶30PDLLA∶PCL混合，在60℃熔化。紫杉醇-負載糊劑稱重後分裝於1ml針筒4℃保存。C.PDLLA-PEG-PDLLA和糊劑混合物的特徵使用GPC測定PDLLA-PEG-PDLLA共聚物分子量和分散性，其中GPC使用一個ShimadzuLC-10ADHPLC泵和連接一個10AHewlettPackardPl凝膠柱的ShimadzuRID-6A折射指數的檢測器(Kyoto，日本)。流動相是氯仿，流速1ml/分。0.2％聚合物濃度(重量/體積)時進樣體積20μl。測定相對於聚苯乙烯標準品的聚合物分子量。使用Cannon-Fenske粘度計測定25℃PDLLA-PEG-PDLLA在氯仿中的特性粘度。使用TAInstruments2000調節器和DuPont910SDSC(Newcastle，Delaware)的差異掃描測熱法(DSC)進行共聚物熱力學分析。加熱速率10℃/分鐘，紫杉醇/共聚物基質樣本稱重(3-5mg)，置於捲縮打開的鋁樣本盤中。1H核磁共振(NMR)用於測定聚合物的活性組成。在CDCL3中使用NMR設備(Bruker，AC-200E)在200MHz測定負載紫杉醇的PDLLA-PEG-PDLLA的1HNMR波譜。聚合物濃度為1-2％。使用掃描電子顯微鏡(SEM)(HitachiF-2300)進行紫杉醇/PDLLA-PEG-PDLLA的形態學研究。用Hummer設備(Technics，USA)將樣本用60％Au和40％Pd包衣(厚度10-15nm)。D.紫杉醇體外釋放負載20％紫杉醇的PDLLA∶PCL糊劑(約2mg)小丸或負載20％紫杉醇的PDLLA∶PEG∶PDLLA糊劑柱狀體(通過針頭擠出溶化糊劑)置入帶塞的盛有10ml磷酸緩衝鹽液(pH7.4)和0.4g/L白蛋白的14ml玻璃試管中。試管於37℃旋轉混合溫育。定期取上清液進行紫杉醇分析並補充以新鮮PBS/白蛋白緩衝液。用1ml二氯甲烷萃取上清液(10ml)。輕輕倒出水相，在60℃氮氣流吹乾二氯甲烷相。吹乾的殘渣用40∶60水∶乙腈混合物重新溶解並以10,000g離心約1分鐘。HPLC分析上清液中紫杉醇含量。HPLC分析使用110A泵和C-8超微球柱(Beckman)，和波長設為232nmSPD-6A紫外檢測器，SIL-9A自動進樣器和C-R3A積分儀(Shimadzu)。選樣體積20μl和流速為1ml/分。流動相為58％乙腈、5％甲醇和37％蒸餾水。E.結果與討論使用GPC，測定了相對於聚苯乙烯標準品PDLLA-PEG-PDLLA的分子量和分子量分散(圖30)。使用Canon-Fenske粘度計測定了共聚物在25℃CHCL3的特性粘度。分子量和特性粘度隨著PEG含量增加而降低。PEG含量為10％-40％時PDLLA-PEG-PDLLA多分散性為2.4～3.5。然而，含70％PEG共聚物具有窄的分子量分散，多分散性為1.21。這可能由於高含量PEG減少諸如可導致聚合物分子量廣泛分散的酯交換副反應的機會。或者，該疏水-親水嵌合共聚物盤繞結構可能導致人為的低多分散性值。DSC掃描純PEG和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物結果示於圖25和26。PEG與PEG含量為70％和40％的PDLLA-PEG-PDLLA共聚物表現出吸熱峰焓值隨著共聚物中PEG含量降低而降低。PEG含量為70％和40％的共聚物的吸熱峰大概由於PEG區域溶化所致，說明發生相分離。而純PEG具有尖的熔化峰，PEG含量70％和40％共聚物顯示寬峰，70％PEG含量共聚物有清楚的肩峰。寬的溶化峰可能由於PDLLA幹擾PEG結晶。70％PEG共聚物肩峰可能表示PDLLA區域的玻璃轉化。PEG含量10％、20％和30％的共聚物在10-250℃溫度範圍未發生熱力學變化，說明沒有出現明顯的結晶(因此可能是相分離)。PDLLA∶PCL(70∶30，80∶20，90∶10)未與紫杉醇混合或與20％紫杉醇混合的DSC熱分析圖顯示吸熱峰在60℃，是PCL溶化的結果。由於PDLLA吸熱性質和它的低分子量(800)，未觀測到PDLLA溶化和玻璃轉化。PEG含量20％和30％的PDLLA-PEG-PDLLA共聚物被選作糊劑最適製劑材料，原因如下10％PEG含量的PDLLA-PEG-PDLLA在60℃左右溫度時不會溶化；40％和70％PEG含量的PDLLA-PEG-PDLLA在60℃很易溶化，而20％和30％PEG共聚物在50℃～60℃變為粘性液體；以及40％和70％PEG共聚物在水中的高度腫脹將極易導致糊劑在水中迅速分散。體外實驗時紫杉醇從PDLLA-PEG-PDLLA柱狀體釋放概貌由圖27所示。從40％PEG柱狀體釋放的測試實驗被終止，是由於柱狀體高度腫脹(一天內約200％水攝取)且很短幾天就分解。30％PEG柱狀體釋放紫杉醇逐漸增加超過70天。從20％PEG柱狀體釋放的紫杉醇緩慢增加至30天然後突然增加，接著是另一逐漸增加過程。紫杉醇釋放存在的顯著不同到這樣的程度以致於每個柱狀體(20％PEG)顯示出突然變化。在突然增加之前，紫杉醇釋放部分低於相同直徑(1mm)的低PEG含量共聚物柱狀體的釋放。40％和30％PEG柱狀體顯示出較20％PEG柱狀體更高的紫杉醇釋放速率。例如，30％PEG柱狀體30天釋放17％紫杉醇，而20％PEG柱狀體只釋出2％。小直徑柱狀體導致快的釋放速率(如，直徑0.65mm和1mm的30％PEG柱狀體30天分別釋放26％和17％紫杉醇(圖27))。上述觀察結果可用紫杉醇自柱狀體釋放機制解釋。紫杉醇以在光鏡下觀察到的結晶形式分散於聚合物中。發熱期顯微鏡觀察到結晶170℃開始溶於共聚物基質至180℃時完全溶解。負載20％紫杉醇PDLLA-PEG-PDLLA(30％PEG)糊劑DSC熱力分析圖揭示紫杉醇一小的結晶放熱曲線(16J/g，190℃)和一個溶化吸熱曲線(6J/g，212℃)(圖25)，說明來自共聚物180℃溶化的紫杉醇再結晶。在這種藥物/聚合物基質中，紫杉醇可通過擴散和/或聚合物侵蝕釋放。在擴散控制情況中，藥物可通過分子在聚合物內擴散和/或通過所形成的連接藥物顆粒的開放通道釋放。因此，20％負載時，一些紫杉醇顆粒是獨立的，紫杉醇可通過擴散溶解於聚合物而釋放。其它紫杉醇顆粒可形成連接於表面的簇而通過通道擴散釋放。對於兩種情況，小直徑柱狀體由於擴散途徑短而提供更快的藥物釋放(圖27)。記錄釋放期間柱狀體尺度變化和水攝取(圖28)。30％PEG柱狀體長度、直徑和溼重變化迅速增加2天內達最大，15天保持不變，然後逐漸減小。柱狀體起始直徑不影響腫脹性質。20％PEG柱狀體，在1天內長度減少10％並穩定，而直徑和水攝取一直逐漸增加。由於共聚物中PEG越多則水攝取越多而便於紫杉醇擴散，於是觀察到快速釋放(圖27)。用GPC檢測PDLLA-PEG-PDLLA糊劑共聚物分子量降解。20％PEG柱狀體，洗脫體積峰位置隨時間增加說明在實驗釋放期間聚合物分子量降低(圖30)。第69天時觀察到分子量雙相分布。30％PEG柱狀體(1mm和0.65mm)聚合物的分子量也降低，但未觀察到雙相分布。NMR波譜揭示PEG峰在3.6ppm而PDLLA峰在1.65ppm和5.1ppm。69天後PEG峰區下降相對於共聚物中PDLLA更為顯著(圖29)，說明PEG與PDLLA分離後溶解。也記錄了柱狀體幹基質損失(圖29)，顯示降解速率按以下順序遞減30％PEG-0.65mm＞30％PEG-1mm＞20％PEG-1mm。使用SEM觀察了紫杉醇釋放前和釋放期間幹柱狀體形態學變化(圖31)。簡要講，觀察了釋放前的固體紫杉醇柱狀體和無-孔聚合物基質(圖31A和31B)。釋放69天後，未觀測到紫杉醇結晶及由於聚合物降解和水攝取而使基質含有許多孔(圖31C和31D)。30％PEG柱狀體在水中僅2天就顯示廣泛腫脹(圖28)因此對分離的水溶性PEG塊和降解的PDLLA(即，DL-乳酸低聚物)的擴散阻礙作用下降。由於30％PEG柱狀體的團塊損耗和降解繼續，侵蝕釋放作用逐漸增加導致持續釋放而沒有任何突然變化(圖27)。20％PEG柱狀體，起始低腫脹導致降解產物低擴散(圖28)。因而降解產物主要停留在內部區域同時由於短的擴散途徑故外部區域很少有降解產物。由於低聚物羧酸末端基團催化水解降解，所以降解產物加速降解速率。這將導致正如雙相共聚物分子量分散圖所顯示的高分子量殼和低分子量內部(圖30，第69天)。由於殼破裂依賴於如殼的強度、厚度和缺損等因素以及內部降解產物，內部降解產物的攻擊和損耗程度就極為不同。因為殼破裂不一致和聚合物中藥物顯微鏡下非均質性，所以4個測試樣本的釋放脈衝時間點和脈衝程度不同(圖27)。paclitacel自PDLLA和PCL混合物和純PCL的釋放由圖32表示。簡要講，釋放部分隨著混合物中PDLLA含量增加而增加。例如，10天內，PDLLA∶PCL為80∶20、70∶30和0∶100時，紫杉醇釋放分別為17％、11％和6％。關於80∶20PDLLA∶PCL糊劑，觀察到第一天小脈衝之後，接近恆定速率釋放。釋放期間未見顯著腫脹。PDLLA∶PCL混合物，由於PDLLA分子量很低約為800，它迅速水解為不能長時間停留在塊損耗的水溶性產物。PCL作為「保持」材料以維持糊劑不至於迅速降解。因此，由於促進降解作用，混合物中PDLLA含量增加使釋放速率增加。PDLLA不間斷侵蝕控制紫杉醇釋放並導致恆定釋放。由於PCL降解速率慢(1-2年)，紫杉醇從純PCL的釋放可能由擴散控制。在負載20％紫杉醇90∶10PDLLA∶PCL糊劑的釋放研究中遇到了困難，因為糊劑小丸在孵育24小時內降解。簡要講，孵育的前12小時期間，每小時取樣本以便確定紫杉醇釋放消弱情況。10小時內紫杉醇自90∶10糊劑釋放25-35％。含30％紫杉醇90∶10PDLLA∶PCL糊劑較含20％紫杉醇90∶10PDLLA∶PCL糊劑釋放的紫杉醇更多。因此，通過調節聚合物和化療物質性質或者通過調節給藥部位，調節紫杉醇釋放速率，在開發局部治療製劑中是重要的。實施例21製備含水溶性添加劑和紫杉醇的聚合組合物A.聚合組合物製備製備紫杉醇/添加劑的助沉澱微粒並隨後加到PCL中形成糊劑。概要地，紫杉醇(100mg)溶於0.5ml乙醇(95％)並與預先溶解或分散在1.0ml蒸餾水的添加劑(100mg)混合。研磨混合物直至形成勻滑糊劑。將糊劑鋪放在陪替氏培養皿37℃空氣乾燥過夜。用乳缽和杵臼磨碎幹塊並用#140篩(106μm)過篩(EndecottsTestSievesLtd.，London，England)。然後按紫杉醇20％負載量將微粒(40％)摻入65℃溶化的PCL(65％)。本實驗使用的添加劑是明膠(B型，100bloom，FisherScientific)、甲基纖維素(BritishDrugHouses)、葡聚糖、T500(Pharmacia，Sweden)、白蛋白(FisherScientific)和氯化鈉(FisherScientific)。紫杉醇和明膠或白蛋白顆粒按前述方法製備但要通過#60(270μm)篩(EndecottsTestSievesLtd.，London，England)以評價顆粒大小對紫杉醇從糊劑釋放的影響。也製備PCL中含10、20或30％明膠和20％紫杉醇的糊劑以研究添加劑比例對藥物釋放的影響。除非另外說明，製備分散於PCL含量為20％紫杉醇的糊劑作為釋放速率研究的對照。B.藥物釋放研究約2.5mg負載紫杉醇糊劑小丸懸浮於盛有50ml10mMPBS(pH7.4)的帶螺旋-蓋試管中。37℃試管頭尾倒置翻滾，在一定時間間隔取出49.5ml上清液，0.45μm過濾膜過濾，留作紫杉醇分析用。每個試管取代等體積PBS使在整個研究中保持滲透狀態。為了分析，用3×1ml二氯甲烷(DCM)萃取濾液，在氮氣流下蒸發乾燥DCM萃取液並用1ml乙腈溶解殘渣。HPLC分析，流動相為水∶甲醇∶乙腈(37∶5∶58)，流速1ml/分(BeckmanIsocratic泵)，C18反相柱(Beckman)，和232nmUV檢測器(ShimadzuSPDA)。C.膨脹研究紫杉醇/添加劑/PCL糊劑，使用#140篩(和只用#60明膠)大小的紫杉醇-添加劑顆粒製備，擠出形成柱狀體，切成小片，稱重，用測微計(MitutoyioDigimatic)測量每一小片的直徑和長度。小片懸浮於37℃蒸餾水(10ml)中，按預定時間間隔棄去水，測量柱狀小片的直徑和長度及稱重樣本。使用掃描電子顯微鏡(SEM)(HitachiF-2300)檢測樣本(懸浮於水之前和之後)的形態學。使用Hummer設備(Technics，USA)將樣本用60％Au和40％Pd包衣(厚度10-15nm)。D.雞胚尿囊絨毛膜(CAM)研究受精的家養雞胚在去殼培養之前孵育4天。卵內容物在90％相對溫度和3％二氧化碳條件下孵育，孵育第6天，1mg負載紫杉醇糊劑小片(含6％紫杉醇，24％明膠和70％PCL)或對照(PCL中30％明膠)糊劑直接放置於CAM表面。作用2-天后，用帶電視攝相機界面的立體顯微鏡檢測血管形成；然後將電視信號在計算機上顯示並列印圖像。E.結果與討論紫杉醇與明膠或白蛋白助沉澱微粒既硬又脆很方便摻入PCL，其它添加劑生產在製備糊劑過程中易於破碎的軟顆粒。圖33顯示紫杉醇從含20％紫杉醇PCL糊劑或20％紫杉醇、20％添加劑和60％PCL糊劑釋放時間過程。紫杉醇從含或不含添加劑的PCL釋放呈現雙-相釋放模式；紫杉醇從糊劑快速釋放的起始階段認為是位於表面的紫杉醇溶解或紫杉醇從糊劑表面區域擴散的結果。隨後的慢釋放相歸因於藥物與緩衝液接觸的有效表面區域減少，緩衝液緩慢進入聚合物基質或藥物通過聚合物基質的通道途徑的擴散增加。明膠、白蛋白和甲基纖維素親水性添加劑存在時紫杉醇從PCL釋放的兩個釋放相均產生藥物釋放速率的最大增加(圖33)。當使用大的紫杉醇-添加劑顆粒(270μm)製備的糊劑，與使用小的紫杉醇-添加劑顆粒(106μm)相比，紫杉醇從聚合物基質的釋放進一步增加(圖34)。增加添加劑量(如，明膠)，藥物釋放相應地增加(圖34)。圖35A顯示含20％紫杉醇、20％添加劑和60％PCL糊劑的腫脹情況。腫脹速率順序如下明膠＞白蛋白＞甲基纖維素＞葡聚糖＞氯化鈉。另外，向糊劑中加入高比例水溶性聚合物，腫脹速率增加(圖35B)。含明膠或白蛋白的糊劑在前8-10小時快速腫脹，隨後當樣本體積變化大於40％時腫脹速率下降。使用大(270μm)紫杉醇-明膠顆粒製備的糊劑腫脹速率快於使用小(106μm)紫杉醇-明膠顆粒。當體積增加大於50％時，所有糊劑降解。SEM研究顯示，糊劑膨脹伴隨著基質斷裂(圖36)。高倍放大時(圖36C和36D)，在糊劑表面有明顯的針-或杆-狀紫杉醇結晶並且與明膠後繼腫脹密切相關(圖36C和36D)。滲透的或腫脹的親水物質以分散顆粒包埋在疏水聚合物中導致藥物以基質侵蝕、通過聚合物基質擴散，和/或通過水溶性添加劑溶解產生的小孔擴散和/或對流的結合方式釋放。分散於疏水聚合物的滲透物質和可膨脹聚合物將吸取水(作為燈芯物質)，溶解或膨脹和施加充盈壓使顆粒交界隔膜(聚合物層)破裂，產生微通道和由此便於藥物分子通過擴散或對流脫逸到外周介質中。糊劑基質的膨脹和斷裂(圖36)導致貫穿基質內部的微通道的形成。聚合物不同腫脹速率和程度(圖35)可解釋觀察到的紫杉醇釋放速率的不同(圖33和34)。圖37顯示對照明膠-PCL糊劑(圖37A)和20％紫杉醇-明膠-PCL糊劑(圖37B)處理的CAMs。CAMs表麵糊劑在圖中用箭頭表示。對照糊劑處理的CAM顯示正常毛細血管網體系結構。紫杉醇糊劑處理的CAM始終如一地顯示血管退化和缺少毛細血管網區域。糊劑中摻入添加劑明顯增加無血管區的直徑(圖37)。體外研究顯示，向PCL基質中摻入紫杉醇/親水聚合物微粒可以增加紫杉醇從PCL釋放。評價治療小鼠皮下腫瘤製劑效果的體內研究也顯示，紫杉醇/明膠/PCL糊劑顯著減小腫塊。水溶性物質類型、微粒大小和添加劑比例等因素影響藥物釋放特性。實施例22製備毫微糊劑過程毫微糊劑是微球懸浮在親水凝膠中。本發明的一個方面，作為負載藥物微球定位貼緊靶組織的方法，可將凝膠或糊劑塗敷在組織上。作為水基，糊劑很快被體液稀釋引起糊劑粘度下降和微球趨向於沉積到附近組織。因此包封的藥物微球池定位貼緊靶組織。實驗中使用的試劑和設備包括玻璃燒杯、carbopol925(製藥級，GoodyearChemicalCo.)、蒸餾水、氫氧化鈉水溶液(1M)、氫氧化鈉水溶液(5M)、0.1lm～0.3lm大小以20％重量/體積比懸浮於水中的微球(見前面)。1.製備5％聚羧乙烯(carbopol)凝膠足量的聚羧乙烯加到1M氫氧化鈉中製得5％重量/體積比溶液。聚羧乙烯溶於1M氫氧化鈉，混合物放置約1小時。在此期間攪拌混合物和，1小時後，用5M氫氧化鈉調pH為7.4直至聚羧乙烯完全溶解。一旦pH達7.4，封蓋凝膠並放置2～3小時。2.製備毫微糊劑過程足量0.1μm～0.3μm微球加到水中製得20％微球懸浮液。聚羧乙烯凝膠(5％重量/體積8ml)放入玻璃燒杯中，加入2ml20％微球懸浮液。攪拌混合物使微球徹底分散於凝膠。混合物4℃儲存。實施例23紫杉醇環糊精組合物A.材料紫杉醇得自HauserChemicalsInc.(Boulder，Colorado)。磷酸二鈉(Fisher)、檸檬酸(BritishDrugHouses)、羥丙基-β-環糊精(HPβCD)、γ-環糊精(γ-CD)和羥丙基-γ-環糊精(HPγγCD)得自美國Maize-Products公司(Hammond，Indiana)並按來樣計算使用。B.方法1.溶解度研究過量紫杉醇(5mg)加入含有不同濃度γ-CD、HPγ-CD、或HPβ-CD水溶液中，於37℃輕輕翻轉24小時。懸浮液平衡等份試樣經0.45μm過濾膜(Millipore)過濾，適當稀釋並用HPLC分析。流動相由乙腈、甲醇和水的混合物(58∶5∶37)組成，流速1.0ml/分。也研究了紫杉醇在50∶50水和乙醇(95％)組成的含不同濃度，最高達10％的HPβ-CD溶劑中的溶解度。另外，紫杉醇溶解速率研究通過將2mg紫杉醇(按來樣計算)加到0、5、10、或20％HPγ-CD溶液或2mg預先水合的紫杉醇(在水中懸浮7天)加到純水中並置於37℃輕輕翻轉。不同時間間隔取等份試樣分析紫杉醇。2.穩定性研究含20％HPβCD或HPγCD溶液的pH值分別為3.9和5.2。通過分析37℃或55℃不同時間間隔含10或20％HPβCD或HPγCD或水或50∶50水-乙醇混合物溶液中的紫杉醇，研究紫杉醇在環糊精溶液的穩定性。此外，也測定了紫杉醇於55℃在含1％、2％或5％HPβCD溶液(1μg/ml)的穩定性。C.結果1.溶解度研究在實驗的CD濃度範圍內紫杉醇溶解度不斷增加；紫杉醇在HPβ-CD溶解度增加最大(圖38)。溶解度曲線提示化學計量為此1∶1絡合更高的數量級。紫杉醇與HPβ-CD和HPγ-CD均形成AP型曲線，而與γ-CD形成AN型曲線。紫杉醇於37℃在50％HPβ-CD溶液的溶解度為3.2mg/ml，該濃度約高出紫杉醇在水中溶解度的200倍。估算的γ-CD、HPγ-CD和HPβ-CD的紫杉醇-環糊精一級絡合穩定常數(從圖39)分別是3.1、5.8和7.2M-1，γ-CD、HPγ-CD和HPβ-CD的二級絡合穩定常數分別為0.785×103、1.886×103和7.965×103M-1。觀測到的穩定常數值提示紫杉醇與環糊精形成的包合絡合物主要是二級絡合物。如在純水中觀察到的絡合，紫杉醇在50∶50水∶乙醇混合物中的穩定性隨著環糊精濃度增加而增加(圖40)。紫杉醇和HPβ-CD在存在50％乙醇(26.57M-1)時的絡合表觀穩定常數顯著低於(約300倍)不含乙醇時的穩定常數。該低的穩定常數可能有助於在乙醇存在時改變溶劑的介電常數和極性。紫杉醇在0、5、10和20％γ-CD溶液中的溶解概貌(圖41)說明在純水或環糊精溶液中紫杉醇亞穩態溶液形成；溶液中紫杉醇量逐漸增加，達最大值隨後下降。使用預先懸浮於水中48小時的水合紫杉醇樣本的溶解度研究未顯示亞穩態溶液形成。另外，水合紫杉醇(室溫下真空烘箱乾燥)DSC分析顯示在60和110℃之間兩個寬的吸熱峰。這些峰伴有約4.5％的重量損失(通過熱重量分析測定)指示水合的存在。約2.1％的重量損失提示紫杉醇單水合物形成。因此，60和110℃之間DSC峰的出現和約4.5％的重量損失指示水合的存在。約2.1％的重量損失提示存在二水合物。紫杉醇樣本按來樣計算，沒有明顯的60℃與110℃之間吸熱峰或重量損失(TGA結果)。所以，(按來樣計算)紫杉醇是無水的並懸浮於水中溶解形成過飽和溶液，過飽和溶液以低溶解度水合物再結晶(圖41)。2.穩定性研究紫杉醇降解依賴於環糊精濃度並按照準-一級降解動力學(如，圖42)。紫杉醇在55℃含1％HPβ-CD溶液降解速率快於(k＝3.38×10-3h-1)高濃度環糊精溶液的溶解度。觀測到紫杉醇在10％HPβ-CD和HPγ-CD中的降解速率常數分別為1.78×10-3h-1和0.96×10-3h-1。含2、4、6或8％HPβ-CD的紫杉醇溶液(1μg/ml)的降解速率與10或20％HPβ-CD溶液(20μg/ml)的未有顯著差異。乙醇的存在並不逆向影響紫杉醇在環糊精溶液的穩定性。D.結論研究表明，紫杉醇穩定性可通過與環糊精絡合而增加。這些水-基環糊精製劑可用於治療各種炎症性疾病。實施例24紫杉醇濃度增加的聚合組合物PDLLA-MePEG和PDLLA-PEG-PDLLA是具有疏水(PDLLA)和親水(PEG或MePEG)區域的二嵌共聚物。以適當分子量和化學組成，它們可形成疏水PDLLA芯和親水MePEG殼的細小集合物。紫杉醇可負載於疏水芯中，因而提供「溶解度」增加的紫杉醇。A.材料D，L-交酯購自Aldrich，辛酸亞錫、聚(乙二醇)(分子量8,000)、MePEG(分子量2,000和5,000)購自Sigma。MePEG(分子量750)購自UnionCarbide。使用辛酸亞錫為催化劑通過環打開聚合工藝合成共聚物(Deng等，J.Polym.Sci.，PolymLett.28411-416，1990；Cohn等，J.Biomed.Mater.Res.22993-1009，1988)。為合成PDLLA-MePEG，將DL-交酯/MePEG/辛酸亞錫混合物加到10毫升玻璃安瓿中。安瓿連接真空泵並用火焰封口。150℃油浴孵育3小時完成聚合。為合成PDLLA-PEG-PDLLA，將DL-交酯/MePEG/辛酸亞錫混合物轉移到玻璃燒瓶中，橡皮塞封口，150℃烘箱中加熱3小時。共聚物的起始組合物列於表1和2。所有實例中，辛酸亞錫的量為0.5％-0.7％。B.方法聚合物溶於乙腈，於10,000g離心5分鐘，棄去所有不溶解雜質。然後向每個聚合物溶液中加入紫杉醇乙腈溶液製成10％重量比的紫杉醇(紫杉醇+聚合物)溶液。在氮氣流和60℃溫度下，去除乙腈溶劑得到澄清的紫杉醇/PDLLA-MePEG基質。加入4倍於基質重量的蒸餾水、0.9％NaCl生理鹽水、或5％葡聚糖。在渦旋混合和周期性60℃加熱的協助下，基質最終「溶解」。所有實例均得到澄清溶液。用亞微米粒度計(NICOMP型號270)測得粒子均小於50nm。製劑列於表1。表1PDLLA-PEG-PDLLA情況中(表2)，由於共聚物不溶於水，紫杉醇和聚合物共同-溶於丙酮。逐漸向紫杉醇和聚合物中加入水或水/丙酮混合物從而形成紫杉醇/聚合物球。表2.PDLLA-PEG-PDLLA組合物*PEG分子量.8,000.C.結果許多PDLLA-MePEG組合物在水、0.9％NaCl生理鹽水、或5％葡聚糖中形成澄清溶液，說明納米範圍細小集合物形成。紫杉醇成功負載到PDLLA-MePEG微膠粒中。例如，以％負載時(表示1ml紫杉醇/PDLLA-MePEG/含水系統有10mg紫杉醇)，2000-50/50和2000-40/60配比得到澄清溶液。粒子大小約60nm。實施例25膜生產過程術語膜指聚合物形成的多種幾何形狀之一。膜可以是薄的、有彈性聚合物薄片或是2mm厚聚合物盤，兩者均可用於組織表面以預防繼後的疤痕和粘連形成。膜被設計成放置於暴露組織表面以便於任何包封藥物在組織位點可從聚合物長時間釋放。膜可由數種過程製備，包括例如，鑄塑，和噴塗。鑄塑技術，聚合物或者溶化後倒入成型機或者溶解於二氯甲烷再倒入成型機。然後聚合物分別或冷卻固化或通過溶劑蒸發固化。噴塗技術，聚合物溶於溶劑並噴霧到玻璃上，溶劑蒸發聚合物在玻璃固化。重複噴霧製成可從玻璃剝落的聚合物膜。這些實驗使用的試劑和設備包括一個小的燒杯、Corning熱板攪拌器、鑄塑模具(如，50ml離心管蓋)和模具支撐裝置、20ml帶蓋玻璃閃爍管(塑料插入型)、TLC噴霧器、氮氣罐、聚己內酯(「PCL」-分子量10,000～20,000；Polysciences)、紫杉醇(Sigma純度95％)、乙醇、「洗脫的」(見前面)乙烯醋酸乙烯酯(「EVA」)、聚(DL)乳酸(「PLA」-分子量15,000～25,000；Polysciences)、DCM(HPLC級；FisherScientific)。1.膜製備過程-溶化鑄塑盛有已知重量紫杉醇的小燒杯放到大的盛有水(作水浴用)的燒杯中，放在70℃熱板上直至聚合物完全溶化。向溶化的聚合物中加入已知重量的藥物並徹底攪拌混合物。將溶化的聚合物倒入模具然後冷卻。2.膜製備過程-溶劑鑄塑已知重量PCL稱重後直接加入20ml玻璃閃爍管中，加入足量DCM以製得10％重量/體積比溶液。向溶液中加入足量紫杉醇後混合溶液以達所需的紫杉醇終濃度。渦旋溶液使紫杉醇溶解，放置1小時(減少空氣泡的存在)然後緩慢倒入模具。將模具置於通風櫥過夜，使DCM蒸發。3.膜製備過程-噴塗法足量聚合物稱重後直接加入20ml玻璃閃爍管中，加入足量DCM製得2％重量/體積比溶液。混合溶液使聚合物溶解。使用自動吸量管將適當體積(最少5ml)2％聚合物溶液移至另一個玻璃閃爍管中。向溶液中加入足量紫杉醇，搖動振蕩蓋塞試管使紫杉醇溶解。為產生噴霧，去除試管塞並將TLC噴霧器桶浸入聚合物溶液。氮氣罐連接噴霧器的進氣口，逐漸增加壓力直至霧化和開始噴霧。使用5秒往復振蕩噴霧，噴霧之間15秒乾燥時間，將模具噴塗。噴霧繼續進行直至適宜厚度的聚合物沉積在模具上。實施例26負載治療物質的乙烯醋酸乙烯酯和表面活性劑組成的聚合物膜本實驗研究兩種膜負載紫杉醇的純EVA膜和負載紫杉醇的EAV/表面活性劑混合膜。實驗的表面活性劑是兩種疏水表面活性劑(Span80和消泡L101)和一種親水表面活性劑(消泡F127)。消泡表面活性劑本身是聚合物，它們具有吸引力的性質是因為它們可與EVA混合而使不同藥物釋放特性達到最佳。Span80是小分子它可分散於聚合物基質，並不形成混合物。表面活性劑對於調節紫杉醇從膜的釋放速率是有宜的，並且使膜的一些物理參數得到優化。顯示藥物釋放速率可以控制的表面活性劑混合膜的一個方面是改變化合物在水中的膨脹速率和程度的能力。水擴散進入聚合物-藥物基質是藥物從載體釋放的關鍵。圖43C和43D顯示膜的膨脹程度受到混合物中表面活性劑水平的影響。純EVA膜在2個多月時間內膨脹程度不明顯。然而，提高加入EVA中的表面活性劑水平很可能增加化合物膨脹程度，並由此通過提高親水性而使膨脹加劇。這些膜實驗結果示於圖43A-E。簡要講，圖43A顯示紫杉醇從純EVA膜的超時釋放(mg計)。圖43B顯示同一膜中殘留藥物百分比。從這兩個圖可看出，紫杉醇負載增加(即，紫杉醇重量百分比增加)，藥物釋放速率增加，顯示預期的濃度依賴性。隨著紫杉醇負載增加，膜中紫杉醇殘留百分比也增加，說明高負載量對於長-期釋放製劑更具吸引力。測試了膜的物理強度和彈性並展示於圖43E。簡要講，圖43E表示純EVA膜和EVA/表面活性劑混合膜的應力/張力曲線。此粗糙的應力測試說明膜的彈性隨著消泡127的加入而增加，和拉伸強度(斷開應力)對於加入消泡127呈濃度依賴性增加。設計膜時彈性和強度是重點考慮的內容，膜必須能夠在不引起化合物永久變形的情況下為特定臨床應用所使用。上述數據表明，一些表面活性劑可控制藥物釋放速率和改變載體的物理特性。實施例27製備毫微噴霧劑毫微噴霧是小微球懸浮於生理鹽水。如果微球特別小(即，直徑小於1μm)，它們形成膠體懸浮而不會在重力作用下沉降。如下面將要詳述的，通過laproscopic幹預，或通過指壓泵氣溶膠(如，局部釋放)，製備適宜在手術時(如，血管粘連)直接氣霧化沉降到組織的0.1μm～1μm微球懸浮液。製備毫微噴霧劑的設備和材料包括200ml水夾層燒杯(Kimax或Pyrex)，Haake循環水浴，架空攪拌器和2英寸直徑調節器(4葉片螺旋槳型不鏽鋼攪拌器；Fisher牌)，500ml玻璃燒杯，熱板攪拌器(Corning牌)，4×50ml聚乙烯離心管(Nalgene)，帶塑料插塞的玻璃閃爍管，臺式離心機(Bechman)，高速離心機-落地型(JS21Beckman)，Mettler分析天平(AJ100，0.1mg)，Mettler數字顯示的自頂裝入式天平(AE163，0.01mg)，自動吸量管(Gilson)，無菌移液管管尖，泵作用氣溶膠(Pfeifferpharmaceuticals)20ml，層流通風櫥，PCL(分子量10,000～20,000；Polysciences，Warrington，PennsylvaniaUSA)，「洗脫的」(見前面)EVA，PLA(分子量15,000～25,000；polysciences)，聚乙烯醇(「PVA」-分子量124,000～186,000；99％水解的；AldrichChemicalCo.，MilwaukeeWIUSA)，DCM或「二氯甲烷」；HPLC級Fisherscientific)，蒸餾水，無菌生理鹽水(Becton和Dickenson或等價物)。1.製備5％(重量/體積比)聚合物溶液為了製備聚合物溶液，下述物質稱重後直接加到20ml玻璃閃爍管中1.00gPCL或PAL或者0.50gPLA和0.5g洗脫的EVA。經量筒測量，加入20mlDCM並蓋緊試管塞。試管室溫(25℃)放置直至聚合物溶化。2.製備3.5％(重量/體積比)的PVA原液溶液按下述過程製備，或通過稀釋製備微球時(見實施例28)製備的5％(重量/體積)PVA原液製備。簡要地，17.5gPVA稱重後直接加到600ml玻璃燒杯中，並加入500ml蒸餾水。燒杯蓋好後放入盛有300ml水的2000ml玻璃燒杯中。85℃以300轉/分攪拌直至PVA完全溶解。3.毫微噴霧劑製備過程簡要地，100ml3.5％PVA溶液放入盛有200ml水連接Haake水浴的夾層燒杯中。以3000轉/分攪拌燒杯內容物並使用5ml自動吸量管在2分鐘的時期間將10ml聚合物溶液(使用的聚合物溶液基於所製備毫微噴霧的類型)滴入攪拌的PVA中。3分鐘後，攪拌速度調至2500轉/分(+/-200轉/分)2.5小時。2.5小時後，從毫微噴霧製劑中移走攪拌葉片，用10ml蒸餾水漂淨葉片並將漂洗溶液加到毫微製劑中。微球製劑倒入500ml燒杯。用70ml蒸餾水衝洗夾層水浴並將這70ml漂洗液加入微球製劑。此180ml微球製劑用玻璃棒攪拌和等量倒入4個50ml聚乙烯離心管中，在10,000g(+/-1000g)離心10分鐘。PVA溶液從微球小丸中離出並將之棄掉。每個離心管中加入蒸餾水(5ml)並渦旋。該4個微球懸浮液倒入一個盛有20ml蒸餾水的離心管中以10,000g(+/-1000g)離心10分鐘。棄掉從微球小丸中離出的上清液，加入40ml蒸餾水並渦旋微球製劑(此過程重複3次)。然後將微球製劑轉移至預先稱重的玻璃閃爍管中。試管在室溫(25℃)放置1小時使直徑2μm和3μm的微球在重力作用下沉降。1小時後，取出上面9ml懸浮液，放入一無菌帶蓋50ml離心管，以10,000g(+/-1000g)離心10分鐘。棄掉上清液，用20ml無菌生理鹽水重新懸浮小丸，以10,000g(+/-1000g)離心懸浮液10分鐘。棄上清液，用無菌生理鹽水重新懸浮小丸。生理鹽水用量取決於所需懸浮液濃度(一般為10％重量/體積)。將毫微噴霧劑加入氣溶膠。實施例28製備微球用於製備微球的設備包括200ml水夾層燒杯(Kimax或Pyrex)，Haake循環水浴，架空攪拌器和2英寸直徑調節器(4葉片螺旋槳型不鏽鋼攪拌器；Fisher牌)，500ml玻璃燒杯，熱板攪拌器(Corning牌)，4×50ml聚乙烯離心管(Nalgene)，帶塑料插塞的玻璃閃爍管，臺式離心機(Bechman)，高速離心機-落地型(JS21Beckman)，Mettler分析天平(AJ100，0.1mg)，Mettler數字顯示的自頂裝入式天平(AE163，0.01mg)，自動吸量管(Gilson)。試劑包括PCL(分子量10,000～20,000；Polysciences，Warrington，PennsylvaniaUSA)，「洗脫的」(見後面方法「洗脫」)EVA，PLA(分子量15,000～25,000；polysciences)，聚乙烯醇(「PVA」-分子量124,000～186,000；99％水解；AldrichChemicalCo.，MilwaukeeWI，USA)，DCM或「二氯甲烷」；HPLC級Fisherscientific和蒸餾水。A.製備5％(重量/體積)聚合物溶液DCL(1.00g)或PLA，或PLA和洗脫的EVA各0.50g稱重後直接加到20ml玻璃閃爍管中。加入20mlDCM。試管加蓋並於室溫(25℃)存放1小時(偶爾使用搖動)，或直至所有聚合物溶解。溶液可於室溫存放至少2周。B.製備5％(重量/體積比)的PVA原液25gPVA稱重後直接加到600ml玻璃燒杯中，並沿聚四氟乙烯包衣的3英寸攪拌棒加入500ml蒸餾水。用玻璃覆蓋燒杯以減少蒸發損失，放入盛有300ml水的2000ml玻璃燒杯中。85℃以300轉/分攪拌(Corning熱板攪拌器)PVA2小時或直至完全溶解。目測PVA溶解情況；溶液應當澄清。將溶液移至上端帶螺扣的玻璃儲存容器中並於4℃最多儲存2個月。然而，使用或稀釋前溶液必須加熱到室溫。C.微球製備過程基於要製備微球的大小(見表1)，100mlPVA溶液(濃度列於表1)放進200ml水夾層燒杯中。Haake循環水浴與夾層燒杯連接，內容物在27℃(+/-1℃)平衡10分鐘。基於要製備微球大小(見表1)，設定高位攪拌器的起始速度，高位攪拌器的葉片浸於PVA溶液的中部。啟動攪拌器，然後使用5ml自動吸量管用2分鐘時間向攪拌的PVA溶液中加入10ml聚合物溶液(使用的聚合物溶液基於要製備微球的類型)。3分鐘後調整攪拌速度(見表1)，再攪拌溶液2.5小時。從微球製劑中移出攪拌葉片，並用10ml蒸餾水漂洗以便於將漂洗溶液倒入微球製劑。接著將微球製劑倒入500ml燒杯，用70ml蒸餾水衝洗夾層水浴，洗液也倒入微球製劑。用玻璃棒攪拌此180ml微球製劑，並等量倒入4個50ml聚乙烯離心管。試管蓋塞，離心10分鐘(離心力在表1給出)。每個微球小丸離出45mlPVA溶液。表1PVA濃度，攪拌速度，和每種直徑範圍微球所需離心力然後，5ml蒸餾水加入每一個離心管並渦旋使微球重新懸浮。該4個微球懸浮液同20ml蒸餾水一起倒入離心管中再離心10分鐘(離心力在表1中給出)。此過程重複2次總共3次洗滌。然後最後一次離心微球並用10ml蒸餾水重新懸浮。最後洗滌後，將微球製劑轉移至預先稱重的玻璃閃爍管中。試管加蓋並於室溫(25℃)過夜以使微球在重力作用下沉降。由於0.1μm～0.3μm大小的微球不受重力作用沉降，所以它們留在10ml懸浮液中。D.乾燥直徑10μm～30μm或30μm～100μm微球微球置於室溫過夜後，上清液從沉降微球離出。放在一個抽屜中在不加蓋小瓶中的微球乾燥一周或直至它們完全乾燥(小瓶重量恆定)。將小瓶置於通風櫥中在慢的氮氣流(流速約10ml/分)下可加速完成乾燥。完全乾燥後(小瓶重量恆定)，稱重小瓶並加蓋。標記的加蓋小瓶室溫儲存於一抽屜中。微球正常儲存不超過3個月。E.測定直徑0.1μm～0.3μm微球懸浮液濃度此大小範圍的微球不沉降，所以它們在4℃留在懸浮液中最多達4周。為測定10ml懸浮液中微球的濃度，將200ml懸浮液樣本用吸量管移至預先稱重的1.5mlmicrofuge管。管在10,000g(Eppendorf臺式頂部放置式microfuge)下離心，移走上清液，管在50℃過夜乾燥。重新稱重小管以測定管內乾燥微球的重量。F.生產負載紫杉醇微球為製備包含紫杉醇的微球，稱重的適量紫杉醇(基於要包封的紫杉醇百分比)直接置於20ml玻璃閃爍管。然後向含紫杉醇試管中加入10ml適宜聚合物溶液，接著渦旋直至紫杉醇溶解。然後基本上按照上述(C)到(E)步驟製備包含紫杉醇微球。實施例29表面活性劑包衣的微球A.材料與方法基本上按前面描述的方法由聚(DL)乳酸(PLA)、聚甲基異丁烯酸酯(PMMA)、聚己內酯(PCL)和50∶50乙烯基醋酸乙烯酯(EVA)∶PLA製備微球。大小範圍直徑10～100μm，平均直徑45μm。由健康志願者得到人血。使用葡聚糖沉降和Ficoll海帕克(Hypaque)離心技術從血中分離中性粒細胞(白細胞)。每mlHBSS懸浮5百萬個白細胞。用化學螢光法測定活性氧類生成從而測定中性粒細胞活化水平。特別是，使用1μM螢光增強劑的LKB螢光計測定化學螢光。通過將10mg微球懸浮於0.5ml血漿並於37℃翻轉30分鐘，進行血漿預包覆(或調理素作用)微球。用1mlHBSS微球衝洗微球，離心的微球小丸在時間t＝0時加到37℃中性粒細胞懸浮液中。通過將10mg微球在37℃於0.5ml2％重量/重量消泡F127HBSS溶液中懸浮30分鐘，將微球表面用稱為消泡F127(BASF)的表面活性劑改性。在將微球加入中性粒細胞或血漿進行下一步預包覆之前，用1mlHBSS衝洗微球表面。B.結果圖44顯示未處理微球的化學螢光值小於50mV。這些值表示中性粒細胞低活化水平。經過比較，炎性微結晶產生的值可接近1000mV，溶解的化學激活劑產生的值可接近5000mV。然而，用血漿預包覆微球，化學螢光值增大到100～300mV(圖44)。此水平中性粒細胞反應或活化認為是中度炎症。PMMA產生最大反應可認為是最重度炎症。血漿預處理後(或調理素作用)PLA和PCL兩者激活中性粒細胞作用增加3～4倍，但在此方面兩種聚合物之間差異很小。由於微球難以乾燥和重新懸浮於含水緩衝液中，EVA∶PLA不可能用於製備血管形成製劑。血漿的這種作用被稱為調理素作用，是抗體或補體分子吸附到表面的結果。這些吸附物質與白細胞受體相互作用引起增強的細胞活化。圖45-48描述血漿分別預包覆PCL、PMMA、PLA和EVA∶PLA微球的效果以及血漿預包覆之前先用消泡F127預包覆微球的效果。所有圖均顯示同樣結果(1)血漿預包覆使反應增強；(2)消泡F127預包覆對其本身無影響；(3)由血漿預包覆增強的中性粒細胞反應可被2％消泡F127預處理微球表面而強烈抑制。使用電泳對來自血漿的吸附蛋白類的性質也進行了研究。使用該方法，顯示消泡F127預處理微球表面抑制抗體吸附到聚合物表面。圖49-52同樣地顯示用IgG(2mg/ml)或者先用2％消泡F127再用IgG(2mg/ml)預包覆PCL、PMMA、PLA和EVA∶PLA微球(分別地)的效果。如圖中所見，由IgG預包覆微球的增強反應可被消泡F127處理抑制。這些結果顯示，用消泡F127預處理微球的所有4種類型聚合物表面，中性粒細胞對微球的「炎症」反應可被抑制。實施例30聚(ε-己內酯)微球包封治療物質負載紫杉醇微球抑制CAM血管形成作用分析本實施例評價紫杉醇置於CAM上時其從聚(ε-己內酯)(PCL)生物降解微球中體外釋放速率概貌並說明從微球中釋出的紫杉醇的體內抗-血管形成活性。試驗中使用的試劑PCL(分子量35,000～45,000；購自Polysciences，(Warrington，PA))；DCM購自FisherScientificCo.，加拿大；聚乙烯醇(PVP)(分子量12,000～18,000；99％水合)購自AldrichChemicalCo.，(Milwaukee，Wis.)，和紫杉醇購自SigmaChemicalCo.(St.Louis，MO)。除非另外特別聲明，所有化學品和試劑由供應商提供。整個過程使用蒸餾水。A.製備微球基本上按照實施例28描述的使用溶劑蒸發方法製備微球。簡要地，通過將10mg紫杉醇和190mgPCL溶於2mlDCM，加入100ml1％PVP含水溶液並在25℃1000轉/分攪拌2小時，製得負載5％重量/重量紫杉醇微球。微球懸浮液1000g離心10分鐘(BeckmanGPR)，移走上清液，用水將微球衝洗3次。洗滌後的微球空氣-乾燥過夜並室溫儲存。按上述方法製備對照微球(不含pacitaxel)。同時製備含1％和2％紫杉醇的微球。用帶鏡臺測微計的光學顯微鏡測量微球大小。B.包封效果已知重量的負載藥物微球(約5mg)溶於8ml乙腈，加入2ml水以沉澱聚合物。混合物在1000g離心10分鐘，通過測定上清液在UV分光光度計(Hewlett-Packard8452A二極體陣列分光光度計)232nm處的吸收度計算包封的紫杉醇量。C.藥物釋放研究約10mg負載紫杉醇微球懸浮於盛有20ml10mMPBS(pH7.4)的帶螺扣-蓋試管中。37℃翻滾試管，在預定時間間隔取出19.5ml上清液(待微球沉在管底後)，0.45μm濾膜過濾並留作紫杉醇分析用。每個試管補充等體積PBS使整個研究過程保持消減狀態。用3×1mlDCM萃取濾液，DCM萃取液在氮氣流下蒸發乾燥，1ml乙腈溶解殘渣並進行HPLC分析，HPLC使用流動相為水∶甲醇∶乙腈(37∶5∶58)，流速1ml/分(BeckmanIsocratic泵)，C8反相柱(Beckman)，和UV檢測器(ShimadzeSPDA)波長232nm。D.CAM研究受精的家養雞胚去殼培養前孵育4天。孵育第6天，將1mg負載5％紫杉醇或對照(不含紫杉醇)微球的等份試樣直接放置於CAM表面。作用2天後，使用有電視攝象機介面的立體顯微鏡檢測血管形成情況；電視信號在計算機上顯示並列印。E.掃描電子顯微鏡微球置於樣品容器，用金濺射塗膜然後放進飛利浦501BSEM，在15kV操作。F.結果微球樣本大小為30～100μm，儘管每一批負載紫杉醇和對照微球中均有一些微球明顯落在此範圍之外。所有藥物負載研究中，PCL微球負載紫杉醇效率一般大於95％。電子顯微鏡掃描顯示微球均呈球形且表面粗糙或有許多麻點。看上去微球表面沒有明顯的固體藥物。紫杉醇從負載1％、2％和5％的PCL微球釋出時間過程由圖53A表示。釋放速率概貌呈雙相。所有負載藥物均有一個紫杉醇起始快速釋放或「脈衝相」。1％和2％負載量微球脈衝相出現1-2天，而5％負載量微球脈衝相出現3-4天。起始快速釋放相之後是顯著變慢的藥物釋放相。含1％或2％紫杉醇微球在21天後不再有藥物釋放。負載5％紫杉醇，21天後微球釋放總藥量的20％。圖53B顯示用對照PCL微球處理的CAMs，圖53C顯示負載5％紫杉醇微球處理的CAMs。用對照微球處理的CAM顯示正常毛細血管網結構體系。用紫杉醇-PCL微球處理的CAM顯示明顯的血管退化和缺乏毛細血管網區。G.討論溶劑蒸發方法製備的負載紫杉醇微球包封效率極高且在95-100％之間。這是由於紫杉醇水溶性差和它的疏水性質有益於分配於包含聚合物的有機溶劑相。對許多從生物降解聚合物基質釋出的藥物來說，紫杉醇雙相釋放概貌是典型的釋放模式。聚(ε-己內酯)是可在生理條件下水解降解的脂肪族聚合物並且它是無毒及組織適合性的。PCL降解顯著慢於廣泛研究的乳酸和羥基乙酸的聚合物和共聚物，因此PCL適於長期藥物釋放系統設計。認為紫杉醇釋放的起始快速或脈衝相是由於藥物從微球表面(接近微球表面)區域擴散釋放所致。釋放概貌第二相(慢速)紫杉醇釋放不可能是由於PCL降解或侵蝕所致，因為研究已經顯示，水中進行的體外試驗時在7.5周的期間PCL沒有顯著的重量損失或表面侵蝕。紫杉醇釋放慢速相大概是由於因為溶於聚合物基質流體填充的小孔中並通過小孔擴散。高紫杉醇負載量時更快釋放可能是聚合物基質內有更廣泛小孔網絡的結果。5％負載量的紫杉醇微球放置於CAM時已經顯示出釋放足量藥物產生廣泛的血管形成抑制。抑制血管生長導致無血管區示於圖53C。實施例31製備PLGA微球由乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)製備微球。A.方法用標準方法製備大小為0.5～10μm、10-20μm和30-100μm微球(聚合物溶於二氯甲烷和按照前面PCL或PDLLA微球製備方法中描述的在聚乙烯醇溶液中攪拌乳化)。使用PLLA與GA不同比值作為不同分子量聚合物(見內部粘性(IV))。B.結果由下面起始聚合物成功地製備了微球。PLLA∶GAI.V50∶500.7450∶500.7850∶501.0665∶350.5575∶250.5585∶150.5610％或20％負載量的紫杉醇成功地摻入各種微球。一種起始聚合物(85∶15，IV＝0.56)大小分布的實例示於圖54-57。使用不同大小和不同組合物微球進行紫杉醇釋放實驗。釋放速率見圖58-61。實施例32紫杉醇包封於尼龍微膠囊治療物質也可包封於廣泛不同的載體，所述載體可製成所選用的形式或器具，例如，下面將要詳述，紫杉醇可摻入尼龍微球製成人工心臟瓣膜、血管移植、手術篩網，或縫線。A.製備負載紫杉醇微球使用界面聚合技術將紫杉醇包封於尼龍微球。簡要講，100mg紫杉醇和100mg消泡F-127溶於1mlDCM並加入0.4ml(約500mg)己二醯二氯(ADC)。使用Polytron勻漿器(1副)將溶液在2％PVA溶液中勻化15秒種。勻漿過程中滴狀加入溶於5ml蒸餾水的1，6-己烷-二胺(HMD)溶液。加入HMD溶液後將混合物再勻漿10秒種。混合物移至一個燒杯中並用磁力攪拌器攪拌3小時稀釋。離心混合物，收集並用1ml蒸餾水重新懸浮。B.包封效果/紫杉醇負載約0.5ml懸浮液過濾並加入微球。稱重約2.5mg微膠囊並懸浮於10ml乙腈24小時。用上清液分析紫杉醇且結果用紫杉醇百分比表示。初步研究顯示，紫杉醇可以高負載量(高達60％)和高包封效率(大於80％)包封於尼龍微膠囊。C.紫杉醇釋放研究約2.5mg紫杉醇-尼龍微球懸浮於分別含1M氯化鈉和1M尿素的50ml水中並定期分析。紫杉醇從微膠囊釋放快，72小時後大於95％的藥物釋放(圖62)。實施例33生物粘著微球A.製備生物粘著微球由直徑10-60μm粒徑100kg/molPLLA製備微球。微球在氫氧化鈉溶液孵育以通過水解聚酯在表面上產生羧酸基團。反應以氫氧化鈉濃度和測量表面電荷確定的孵育時間為特徵。0.1M氫氧化鈉孵育45分鐘後反應完全。鹼處理後，將微球懸浮於DEC乙醇溶液從而將微球用二甲胺基氨基丙醯基碳化二亞胺(DEC)包衣，DEC是一種交聯劑，以及將混合物乾燥製成可分散的粉。微球與DEC重量比是9∶1。微球乾燥後，它們攪拌分散於2％重量/體積的聚(丙烯酸)(PAA)溶液，DEC與PAA反應在微球表面形成不溶於水的交聯PAA網。掃描電子顯微鏡用於確定微球表面PAA的存在。鹼處理前後微球的不同掃描測熱法揭示，用SEM觀測到整體熱性質(Tg，熔點和結晶度)未發生變化。B.體外紫杉醇釋放速率製備相同粒徑的紫杉醇-負載微球(負載10％和30％重量/重量)並在體外於PBS中釋放10天的釋放概貌。釋放與藥物負載成比例，10天內從5mg30％負載量微球釋出400μg紫杉醇，而相同期間從10％負載量微球釋出1500μg。包封效率約為80％。紫杉醇-負載微球在0.1M氫氧化鈉孵育45分鐘，氫氧化鈉孵育前後測定電動電勢。鹼處理前後紫杉醇-負載微球表面電荷均低於不負載紫杉醇微球。C.製備聚賴氨酸或粘連蛋白包覆的PLLA及對其體外評價製備含1％蘇丹黑(使微球著色)PLLA微球。微球懸浮於2％(重量/體積)聚賴氨酸(Sigmachemicals-Hydrlbromellform)或粘連蛋白(Sigma)溶液10分鐘。微球用緩衝液衝洗一次並放置於新鮮製備的大鼠膀胱內表面。膀胱放置10分鐘然後在緩衝液中衝洗3次。此過程後膀胱壁存在殘留(結合)微球，因此表明粘連蛋白和聚-1-賴氨酸包衣微球均發生生物粘附。(圖63A和63B)。實施例34紫杉醇預防CIA大鼠模型中關節炎發病A.材料與方法給120～150g純種雌性Louvain大鼠注射用0.1M醋酸溶解並在FIA(Difco，Detroit，MI)乳化的天然雞膠原II(Genzyme，Boston，MA)0.5mg。免疫後約9天，動物發展為伴肉芽組織形成和軟骨侵蝕組織學變化的多發性關節炎。總共45隻大鼠分為4組方案1個只接受載體的對照組(n＝17)和3個紫杉醇治療組，其中1個預防方案組和2個抑制方案組。為評價紫杉醇作用，免疫後2天(預防方案)或關節炎發病第9天(抑制方案)將紫杉醇(溶於1∶1稀釋的乙醇和CremophorE.L.(Sigma)中並加入生理鹽水使紫杉醇在5％重量/體積乙醇和CremophorE.L.的終濃度為4.8mg/ml)腹膜內給藥(i.p.)。預防方案組(n＝8)，於第2天開始按1mg/kg體重紫杉醇給藥並於第5、7、9、12和14天給藥5次。高劑量抑制方案組(n＝10)，紫杉醇(1mg/kg體重)自第9天開始隔日給藥。低劑量抑制方案組(n＝10)，紫杉醇以1mg/kg體重於第9、11和13天給藥，然後以75％該劑量水平(0.75mg/kg體重)隔日給藥至21天。由不了解治療組的人員通過臨床和放射照片來評價對照和實驗動物疾病嚴重程度。每日評價各個肢體炎症程度並基於標準的腫脹度和特異性紅斑評分(正常為0分，嚴重為4分)。實驗第28天評價動物放射照片。雙後肢放射照片按照軟組織腫脹、關節腔狹窄、骨骼破壞，和骨膜新骨形成程度評分。每個肢體按0-3級表示(0＝正常，1＝軟組織腫脹，2＝早期骨侵蝕，3＝嚴重骨骼破壞和/或關節強硬)。在實驗末尾完成關節組織學評價。第28天完成測定CII遲髮型變態反應的耳放射測量分析。放射測量耳指數≥1.4表示對CII反應顯著。用酶-聯免疫吸附測定法(ELISA)測定抗-CII抗體的存在。取自第26天的血清樣本按1∶2,560稀釋，結果用一式四份等份試樣在490nm的平均光密度表示。此稀釋度時正常大鼠血清本底水平為0，且很易區別於膠原-免疫大鼠血清。B.結果在本模型中，與載體對照組比較，關節炎發病前開始紫杉醇治療完全阻止了所有治療大鼠的疾病發展(甚至中止紫杉醇治療後)。對照動物疾病臨床症狀進行性加重直至出現畸形和關節功能喪失。關節炎發病後接受高-或低-劑量紫杉醇的動物表現了顯著的臨床改善。平均講，臨床評分與起始治療組的相等，說明紫杉醇具有預防疾病臨床進展的作用。接受紫杉醇動物能夠負重和走動並顯示極少毒性，若治療有毒性作用的話。觀察到治療動物接種部位的傷口癒合和皮毛重新生長。與對照組相比，紫杉醇-治療動物體重增加。紫杉醇關節炎預防方案組沒有一隻大鼠表現出任何放射線照片變化或臨床關節炎。高-和低-紫杉醇組放射照片顯示疾病明顯少於對照組。進一步組織學分析顯示對照組大鼠表現出明顯的肉芽組織伴有骨和軟骨侵蝕，然而，紫杉醇-治療大鼠則很少，即使有的話，並保護關節的軟骨。ELISA測定，紫杉醇-治療大鼠的抗膠原II型IgG抗體顯著低於對照組；預防方案組大鼠IgG抗體顯著低於高和低劑量紫杉醇抑制方案組。C.討論免疫後但在關節炎發病前給藥，紫杉醇阻斷疾病進程，因此它是關節炎和可能其類型自身免疫性疾病有效治療劑。結果表明，如果CII免疫後2天開始給藥，紫杉醇可以完全消除關節炎發病。用紫杉醇治療的兩個抑制方案組，紫杉醇給藥期間關節炎嚴重程度持續下降但在停止治療後第4天開始加重。然而，紫杉醇早期幹預看來可以減少連續治療的需要。實施例35使用紫杉醇消退膠原-誘導關節炎膠束紫杉醇製劑系統給藥在CIA模型顯示疾病-改善作用。為了評價紫杉醇疾病-改善作用效力，給臨床可察覺關節炎發病(第9天)的免疫動物按5mg/kg體重(第1組)或10mg/kg體重(第2組)每4天(q.o.d.)腹腔內注射(i.p.)膠束紫杉醇(Cremophor-free)一次。整個評價期給予紫杉醇。作為標準治療對照，第3組在關節炎發病後第0、5和10天接受氨甲蝶呤0.3mg/kg腹腔注射(相當於人的劑量)。第4組接受氨甲蝶呤(0.3mg/kg)和膠束紫杉醇(10mg/kg)聯合治療。由不了解治療組的人員通過臨床和放射線照片評價對照(第5組)和實驗動物的疾病嚴重程度。每日評價各個肢體炎症程度並基於標準的腫脹度和特異性紅斑評分(正常為0分，嚴重為4分)。實驗第28天評價動物放射線照片。雙後肢放射線照片按照軟組織腫脹、關節腔狹窄、骨骼破壞，和骨膜新骨形成程度評分。每個肢體按0-3級表示(0＝正常，1＝軟組織腫脹，2＝早期骨侵蝕，3＝嚴重骨骼破壞和/或關節強硬)(Brahn等，ArhtritisRheum.37839-845，1994；Oliver等，Cell.Immunol.，157291-299，1994)。在本模型中，關節炎發病前開始膠束紫杉醇治療完全阻止了所有治療大鼠的疾病發展甚至在中止紫杉醇治療之後。在對照動物，疾病臨床症狀進行性加重(圖64)直至出現畸形和關節功能喪失。與對照動物相比，接受氨甲蝶呤治療的動物沒有統計學顯著改善(圖64和表1)。關節炎發病後接受低劑量膠束紫杉醇(5mg/kg)的動物表現出一些改善，但接受高劑量膠束紫杉醇(10mg/kg)的動物表現出高度顯著性(p＜0.0002)臨床改善(圖64)。平均講，臨床評分與起始治療組的相等，說明膠束紫杉醇具有預防該疾病臨床進展的作用(表1)。接受紫杉醇動物能夠負重和走動並且未顯示治療有任何毒性。觀察到治療動物接種部位的傷口癒合和皮毛重新生長。膠束紫杉醇-治療動物相對於未治療對照組體重增加。與對照相比(圖64)，同時接受膠束紫杉醇和氨甲蝶呤組對治療耐受性好並顯示出令人印象深刻的臨床改善(p≤0.0001)。ELISA測定，paclitaxe-和聯合(紫杉醇/氨甲蝶呤)-治療大鼠的抗膠原II型IgG抗體顯著低於對照組。放射線照片研究也顯示紫杉醇治療顯著改善疾病。對照和氨甲蝶呤-治療組動物表現放射照片上明顯的軟組織腫脹、關節腔狹窄、骨骼破壞和骨膜新骨形成，而紫杉醇-治療組動物x-光片則顯示基本正常的關節結構(圖65)。事實上，僅小比例(17％～18％)的單獨接受紫杉醇(10mg/kg)或與氨甲蝶呤聯合治療的動物發展軟骨侵蝕。軟骨侵蝕作為疾病進展/結果重要標識，對照或單獨接受氨甲蝶呤動物的發生頻率(72％)為接受膠束紫杉醇治療動物的4倍多(表2掃描電子顯微鏡證實體內紫杉醇治療的軟骨保護效果。正常關節表面以一層薄滑膜基膜包繞光滑完整軟骨基質為特徵(圖66A)。在CIA，軟骨表面被肉芽組織和發炎的滑膜產生的MMP侵蝕(圖66B)。表面的軟骨基質被消化，暴露軟骨細胞或它們曾佔據的間隙(圖66B插圖)。臨床關節炎發病後接受紫杉醇治療的患CIA動物，關節表面保持完好無損(圖66C)和軟骨基質大多正常，甚至在高倍放大時觀察(圖66C插圖)也一樣。紫杉醇-治療組未見肉芽組織形成和滑膜肥大。組織學上，CIA以明顯的滑膜肥大、滑膜炎症細胞浸潤和軟骨破壞為特徵(圖67A)。紫杉醇-治療動物，滑膜看上去正常，只有1-2層滑膜細胞且沒有炎症細胞浸潤(圖67B)。侵蝕鑄塑也用於評價紫杉醇能否阻斷患CIA動物的滑膜血管形成。以100mmHg的壓力將Mercox聚合物注入死亡動物股骨動脈內，使在原位固化，組織隨後消化產生注塑的下肢體脈管系統。患CIA動物注塑滑膜脈管系統掃描電子顯微圖片顯示，盲-端毛細血管向關節腔蔓延(圖68A)。這些血管形態學上與實體腫瘤和其它血管形成狀況時所描述的成長血管形成相似(圖68A插圖)。相反，紫杉醇-治療動物的滑膜血管呈毛細血管袢(圖68B)沒有明顯的新血管分支。膠束紫杉醇/MTX動物的血管增生退化和形態學血管結構與陰性對照相似。這些研究提示膠束紫杉醇和紫杉醇/氨甲蝶呤治療，可退化新血管形成、抑制炎症進程、使滑膜炎恢復正常和預防關節破壞。已經證實，系統給予紫杉醇可有效治療關節炎。疾病的自然病程是發作和緩解，每一次後續發作引起損害加重最終導致關節破壞。使用短-期、高劑量、系統治療以引導疾病緩解或持續低劑量治療維持疾病控制是可能的。對於1～2個關節為主的病人，紫杉醇可選擇方法包括直接將藥物注射到受損關節內。實施例36在牛皮癬動物模型評價紫杉醇製劑A.皮膚血管生成模型新的動物模型用於研究皮膚-特異性血管生成。免疫缺陷SCID小鼠作為用血管內皮生長因子(VEGF)定向或反向轉染的人角質細胞株表面移植的受體。通過使用改性矽酮移植室試驗將角質細胞移植到受體小鼠皮膚上。角質細胞分化和誘導皮膚血管生成。然後系統或局部(霜、軟膏、洗劑、凝膠)施予紫杉醇，對不治療或治療組血管數量和大小進行形態測量。B.皮膚遲髮型過敏反應小鼠模型皮膚遲髮型過敏反應小鼠模型用於研究紫杉醇對誘導的皮膚炎症的作用。概要講，皮膚局部塗抹唑酮使小鼠致敏。5天後，耳部皮膚(左耳唑酮，右耳僅載體)局部塗抹唑酮攻擊小鼠，引起皮膚炎症，「遲髮型過敏」反應。通過測量48小時期間所引起的耳腫脹來量化炎症程度(見圖69和70)。Epon-包埋，吉姆沙染色，1μm組織切片評價存在的炎症細胞、存在的組織肥大細胞和它們的活化狀態，以及表皮充血程度。系統或局部給予紫杉醇以定量它對此體內模型皮膚炎症反應的作用。C.結果本研究表明在治療實驗-誘導的小鼠皮膚炎症中1％給藥與單獨使用載體相比，紫杉醇對皮膚炎症產生抑制作用。在實驗性-誘導的遲發-型過敏反應，與單獨載體處理相比，用1％紫杉醇局部治療的耳腫脹明顯下降。局部應用1％紫杉醇製劑顯著抑制局部使用PMA(佛波醇12-肉豆蔻13-醋酸酯)誘導的耳腫脹和皮膚紅斑(紅色)(見圖71和72)。如圖73所示，與對照(左耳)相比紫杉醇治療耳(右耳)外觀正常。所有5隻小鼠均取得相似的結果。為評價和單獨用載體相比對皮膚的刺激作用，每日將這兩種製劑以20μl分別用於兩耳共8天。8天後，不論單獨使用載體還是使用1％紫杉醇製劑用於正常或發炎鼠耳皮膚後均沒有可察覺的皮膚刺激。實施例37動物模型慢性排斥評價加速形成的動脈粥樣硬化出現在大多數心臟移植接受者並限制長期移植物存活。Lewis-F344異位大鼠心臟移植慢性排斥模型是特別適用的試驗模型，因為在中和長期存活同種移植物中它產生各階段動脈粥樣硬化損害。Lewis-F344模型的優點是(i)長-存活移植物動脈粥樣硬化的發生率和嚴重程度特別高；和(ii)由於該系統不需用免疫抑制劑，所以損害發展的炎症階段容易辨認。成年雄性Lewis大鼠作為供體，F344大鼠作為接受者。在麻醉的受者腹中線製造一長切口暴露主動脈和下腔靜脈，將20個心臟異位腹腔嫁接移植。將兩血管與周圍結締組織分離，小血管鉗夾住血管。在每個血管的吻合部位製造長方形切口(2～3mm)。打開麻醉的供體大鼠腹腔，向下腔靜脈內注射300單位含水肝素。打開胸壁暴露心臟。結紮腔靜脈，接著橫切上行的主動脈和肺主動脈，保留依附於心臟的2～3mm起始血管。分離結紮線遠側端的腔靜脈，將結紮線放在左心房和肺靜脈周圍。分離結紮線肺側端的血管並取出心臟。供體心臟放置於受者腹腔，在受者血管切口部位縫合主動脈。類似地，以同樣方式將肺動脈連接在下腔靜脈切口處。放鬆血管鉗(腔靜脈近心端、腔靜脈和主動脈遠心端和主動脈近心端)以減少從針眼出血。移植後，經冠狀動脈外表面一定長度的心外膜給10隻大鼠注射紫杉醇(33％)聚己內酯(PCL)糊劑(n＝10)或單獨PCL糊劑(n＝10)，於是動脈區域包埋在餘留的未治療心肌層。嫁接時所有接受者肌注一次盤尼西林G(100,000單位)。每日門診同種移植物並按其功能分為1～4級，其中4代表正常心跳而0代表缺乏力學活動。於14天每組殺死5隻大鼠，28天殺死剩下的5隻。觀察到大鼠體重下降和其它系統性疾病的症候。14或28天後，以與起始試驗相同的方式將動物麻醉並暴露心臟。分離包覆和未包覆的冠狀動脈，用10％甲醛緩衝液固定並進行組織學檢測。起始試驗可於移植後在冠狀動脈腔改用紫杉醇/EVA膜或包覆的斯滕特氏印模。以與上述相似的方式將EVA膜用於冠狀動脈腔外表面，而包覆斯滕特氏印模植入腔內。另外，這些研究可進一步擴展除嫁接移植(如，靜脈，皮膚)外也包括其它器官移植。實施例38在MS動物模型上紫杉醇作用驗證了紫杉醇微膠粒抑制脫髓鞘轉基因小鼠模型(Mastronardi等，J.eurosci.Res.36315-324，1993)MS症狀進展和發病。這些轉基因小鼠包含70對轉基因DM20，一個髓磷脂蛋白脂質。臨床上，3月齡前動物表現正常。3個月後，出現神經病狀，如驚厥、顫抖、後肢鬆動、步態不穩、尾無力、搖擺步態和活動度下降，表現和嚴重程度進行性增加直至動物在6～8月齡死亡。臨床徵候與組織學上脫髓鞘和大腦纖維星型細胞增生相關(Mastronardi等，J.Neurosci.Res.36315-324，1993)。A.材料與方法使用兩組動物進行研究，臨床發病初(接近4月齡)即開始的皮下注射低劑量紫杉醇的連續治療方案(2.0mg/kg；每周3次，共10次)或者皮下注射高劑量紫杉醇的「脈衝」治療方案(20mg/kg；每周1次，共4次)。低劑量方案組，5隻動物接受膠束紫杉醇，兩隻小鼠作對照；1隻不治療正常小鼠和1隻不治療轉基因產仔小鼠。只用1隻轉基因小鼠作對照是因為在實驗室已很好地建立了該疾病過程。當MS起始徵兆已這上述症狀分類1+分時，給4月齡動物注射膠束紫杉醇。治療時程24天(2.0mg/kg紫杉醇，每周3次，共10次)。每個注射日記錄體重和臨床症候。B.結果接受紫杉醇的5隻動物未顯示體重下降。然而，不治療轉基因顯示體重下降30％，從29g降至22g(圖74)，這正常地與疾病進展有關。每日監測MS臨床標識症侯，如顫抖、後肢鬆動、驚厥、頭震顫、步態不穩、尾無力和活動度下降。開始治療時，動物主要症候分類為1+分。在以後的27天內不治療動物的一些症候從1+進展到4+分；3+以平衡差為特徵，平衡差是疾病的一個主要特徵。紫杉醇治療組，在相同的期間所有5隻動物的上述監測症候保持為1+分(表1)。高劑量方案組，象用於腫瘤病人一樣紫杉醇20mg/kg每周一次共4周治療動物以減少化療間歇脈衝(胸部和卵巢癌每月給藥)。監測動物10周，每2天對每一個症狀測定評分。3個不治療動物，在試驗過程中神經症狀急劇進展並有2隻死亡(第5周和第9周)；3隻存活動物臨床症狀嚴重。5隻發病後開始接受紫杉醇治療的轉基因動物，第1周監測MS評分相對低於對照，因此，沒有觀察到進一步的神經退化。這些動物，沒有觀察到疾病進展，並且不論是治療期間(0～3周)還是隨後停止藥物治療(4～10周)動物保持臨床緩解(圖75)。C.結論低或高劑量紫杉醇均能阻止MS動物模型觀測到的神經症狀的迅速進展。這些數據提示紫杉醇是脫髓鞘疾病的有效治療劑。實施例39紫杉醇和其它微管穩定劑治療鼻息肉的評價上皮細胞培養和/或鼻息肉組織培養用於評價包含紫杉醇或其它物質的製劑治療鼻息肉的效果。該研究是基於內皮細胞釋放細胞因子並有助於鼻息肉以及鼻炎和哮喘可測得慢性炎症，且長時間釋放藥物將預防嗜酸性細胞增多及抑制細胞因子基因表達。紫杉醇製劑包括溶液(使用環糊精)或包含用黏膜附著聚合物包封的紫杉醇的懸浮液用作鼻噴霧劑，和/或紫杉醇的黏膜附著聚合物微-膠囊用作吸入劑。這些製劑用於下面詳述的研究。A.體外試驗紫杉醇作用組織處理-正常鼻黏膜(NM)標本取自無鼻炎臨床跡象和皮膚-劃痕試驗陰性的鼻重建手術患者。鼻息肉(NP)標本取自皮膚-劃痕試驗陽性和陰性和接受鼻息肉切除術的病人。鼻樣本置入添加了100UI/ml盤尼西林、100μg/ml鏈黴素和2μg/ml兩性黴素B的Ham’sF12介質中並立即轉移到實驗室。上皮細胞培養-用如下蛋白酶消化分離來自NM和NP的鼻內皮細胞。組織樣本用添加了100UI/ml盤尼西林、100μg/ml鏈黴素和2μg/ml兩性黴素B的Ham’sF12衝洗2-3次，然後在4℃0.1％XIV型Ham’sF12孵育過夜。孵育後，加入10％FBS中和蛋白酶活性及輕輕振蕩使上皮細胞分散。細胞懸浮液通過60目分離篩過濾和室溫下以500g離心10分鐘。細胞團在含下列試劑的激素限定的Ham’sF12培養介質(Ham’sHD)重新懸浮100UI/ml盤尼西林、100μg/ml鏈黴素和2μg/ml兩性黴素B、150μg/ml谷醯胺、5μg/ml轉鐵蛋白(transferin)、5μg/ml胰島素、25ng/ml表皮生長因子、15μg/ml內皮細胞生長添加劑、200pM三碘甲狀腺氨酸和100nM氫化可的松。然後將細胞懸浮液(105細胞/孔)於包覆了膠原的盛有2mlHam’sHD孔上制板並於5％CO2潮溼大氣下於37℃培養。當天和以後隔日換培養介質。培養6-10天後單層細胞融合。人上皮條件培養介質(HECM)傳代-上皮細胞培養融合後，Ham’sHD切換成添加了100UI/ml盤尼西林、100μg/ml鏈黴素和2μg/ml兩性黴素B、150μg/ml谷醯胺和25mMHepes緩衝液(RPMI10％)的RPMI1640介質(Irvin，Scotland)。從培養基中收集與RPMI(10％)孵育48小時後傳代的HECM，室溫(RT)下400g離心10分鐘，0.22μm過濾膜過濾滅菌，於-70℃儲存至使用。嗜酸性細胞存活和紫杉醇作用-從外周血分離嗜酸性細胞，以兩種方式檢測不論取自NM還是取自NP的HECM對嗜酸性細胞存活的影響時間-過程和劑量反應分析。在時間-過程試驗中，濃度約為250,000/ml嗜酸性細胞在6個含或不含(陰性對照)50％HECM的孔組織培養孵育，於第2、4、6和8天評價存活指數。其它試驗用1～50％HECM進行。在測試藥物(例如，紫杉醇)對HECM-誘導嗜酸性細胞存活作用的試驗中，加入HECM之前，0.1nM～10μM藥物(紫杉醇)與嗜酸性細胞在37℃孵育1個多小時。每一個試驗，通常對陰性對照(僅有培養介質)和陽性對照(含HECM培養介質)孔進行評價。為研究藥物是否有任何毒性作用，比較了24小時期間與藥物(不同濃度)孵育的嗜酸性細胞和與單獨10％RPMI培養的嗜酸性細胞的活性。B.紫杉醇對細胞因子基因表達和從上皮細胞釋放的作用取自鼻息肉和正常鼻黏膜的上皮細胞培養融合，含或不含紫杉醇(或其它物質)人上皮細胞條件介質傳代，用ELISA測定上清液。用Mullol等在ClinicalandExperimentalAllergy25607-615，1995描述的反轉錄-聚合物鏈反應(RT-PCR)檢測細胞因子基因表達。結果顯示紫杉醇是否以調節細胞因子基因表達作為抑制嗜酸性細胞存活的方式。使用原代細胞培養的主要缺點是細胞達到融合需要10天，割斷了細胞功能與局部melieu以及系統作用的關係，這將導致把疾病放在首位。然而，這是研究生長因子調節結構細胞功能和增生的極好的體內/體外模型並由此闡明黏膜炎症的一些方面。C.人鼻息肉化學介質的免疫釋放紫杉醇或其它物質調節-手術切除時取鼻息肉，用Tyrode’s緩衝液重新5次，用小剪刀將碎片切成200mg溼重的平行切片。平行切片懸浮於3ml37℃含不同濃度紫杉醇緩衝液中，並用0.2μg/mlE抗原攻擊(5分鐘後)。與抗原孵育15分鐘後，移走滲出液和將組織在新鮮緩衝液中煮10分鐘以提取殘留的組織胺。使用HPLC測定組織胺和SRS-A。實施例40破壞微管功能物質的血管外給藥該研究是為了評價負載紫杉醇-喜樹鹼的手術糊劑(PCL)和/或EVA膜作為再狹窄的血管周治療的效果。A.材料與方法給250～300gWISTAR大鼠肌注哌啶醇(0.33ml/kg)麻醉。一旦安靜再用氟烷麻醉。全身麻醉後，剪去頸部毛，鉗夾皮膚用聚烯吡酮碘擦試。在左頸動脈上作一垂直切口並暴露頸動脈遠端。圍繞頸動脈遠端放置兩根結紮線並作橫向動脈切開術。然後向頸動脈引入2號FrenchFogarty氣囊導管並進入左頸總動脈，氣囊內充入生理鹽水。將充脹的氣囊在頸動脈內上下拉動3次以剝脫內皮細胞。然後移走導管並且放鬆左頸動脈遠端結紮線。大鼠隨機分為10組，不接受治療、單獨聚合物(EVA膜或PCL糊劑)，或聚合物加20％紫杉醇。聚合物混合物(2.5mg)以圓周樣圍繞頸動脈放置。然後關閉傷口。每組5隻大鼠於14天殺死，另外5隻於28天殺死。其間，觀察體重下降或系統疾病的其它表徵。14天或28天後，麻醉動物分離左頸動脈，用10％甲醛緩衝液固定並進行組織學檢測。作為預試研究，兩隻大鼠用負載10％喜樹鹼的EVA膜治療14天以評價喜樹鹼在此疾病模型的效果。B.結果這些研究揭示負載紫杉醇(20％)聚合物完全預防了再狹窄，對照動物和接受單獨聚合物的動物於氣囊損傷後14天和28天發展28％和55％腔危害(圖76A和76B)。徹底抑制了接觸紫杉醇的血管壁內膜充血。然而，如紫杉醇作用不均衡，所證實的作用極為局限是由於藥物不能與血管壁保持鄰接(圖77A和77B)。初步數據顯示負載喜樹鹼EVA膜有效預防再狹窄動物模型中是有效的。喜樹鹼完全抑制兩種動物模型的內膜充血。實施例41紫杉醇對手術粘連動物模型的作用驗證了使用負載palitaxelEVA膜減少兔子宮角模型粘連形成。麻醉紐西蘭雌性白兔和腹中線切口剖腹。暴露子宮角，使用解剖刀刀片擦傷兩側子宮角，刮擦要足以去除絨膜，導致斑點出血。兔隨機設為對照組或紫杉醇治療組和術後2、4、和8周評價期。紫杉醇治療組，刮擦後用負載紫杉醇EVA膜包裹每側子宮角。縫合肌腹膜層和用皮釘釘合皮膚層。術後2、4、或8周評價動物粘連形成情況。人道地將動物安樂死並進行屍體剖檢。對子宮角進行大體檢查和用標準顯微鏡技術組織學檢查。大體上，使用基於子宮角損傷5cm的事實的標準評分系統對粘連評級；於是，通過測量包含粘連區域的長度確定粘連形成程度。使用如下評級系統0＝無粘連，1＝25％區域粘連，2＝50％區域粘連和3＝累及全面粘連。粘連嚴重程度如下測量0＝分離無阻力，0.5＝有一些阻力(需要適度力量)，和1＝需要利刃切開。總等級是累積的，粘連評分範圍0-4代表程度和嚴重度。實施例42膠束紫杉醇治療炎症性腸道疾病(IBD)炎症性腸道疾病(IBD)，稱為克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎，以周期性復發和緩解為特徵。最適用的IBD模型是給大鼠結腸內注射溶於乙醇和生理鹽水溶液的2，4，6-三硝基苯磺酸(TNB)(Morris等，Gastroenterology，96795-803，1989)。單次注射引起持續數周的急性和慢性炎症。然而，藥理學上顯示兔結腸較鼠與人結腸更為相似(Gastroenterology，9913424-1332，1990)。所有實驗使用雌性紐西蘭兔。靜注(i.v)注射苯巴比妥麻醉動物。直腸插入嬰兒飼管，尖端距肛門20cm，以便注射TNB(0.6ml；40mg溶於25％乙醇生理鹽水中)。注射TNB一周後，將兔隨機分為3個治療組。這時，動物或者不治療、或單獨接受微膠粒(i.v.)或者接受膠束紫杉醇(i.v.)。每4天重複一次共治療4次。研究過程中，每周在如上所述全麻下使用兒科支氣管鏡對兔進行內窺鏡檢查。由內窺鏡醫師(不了解實驗分組)按下述程度評分0，沒有異常；1，炎症，但無潰瘍；2，炎症和1個位點潰瘍(＜1cm)；3，2個或更多位點炎症和潰瘍或沿結腸長度一個主要位點炎症和潰瘍(＞1cm)。最後一次治療後，於24小時和1、2、4和6天將兔安樂死。沿逆-腸繫膜邊緣分離、切除和打開整個結腸，用生理鹽水衝洗並置於盛有抗體的Hank’s平衡鹽溶液中。立體顯微鏡檢測結腸並根據與內窺鏡相同的標準評分。同樣，屍體解剖時選擇結腸樣本，從肛門上至結腸整個長度中既選擇明顯發炎和潰瘍區域也選擇正常結腸。組織用10％甲醛固定和進行石蠟包埋；切5mm片和用溶血毒素和伊紅染色。組織學檢測有IBD和無IBD的玻片。初始實驗時可於兔結腸內注射TNB誘導結腸炎後改用口服紫杉醇。動物隨機分為3組，不治療、接受單獨載體或口服紫杉醇。實施例43紫杉醇對系統性紅斑狼瘡動物模型的作用用膠束紫杉醇治療雌性NZB/NZWF1小鼠(B/W)檢測紫杉醇對系統性紅斑狼瘡的效果。小鼠這種勞損發展為類似人SLE的疾病。1個月齡時，與正常小鼠相比，這些小鼠脾B-細胞水平升高自發分泌免疫球蛋白。2月齡時出現高水平的抗-ssDNA抗體。5月齡時，免疫球蛋白沿小球毛細血管壁聚集。進展為嚴重的腎小球性腎炎並在9月齡時，50％的B/W小鼠死亡。A.材料與方法雌性B/W小鼠購自Jackson實驗室(BarHarbor，ME，USA)。5月齡雌性B/W小鼠隨機分為治療組和對照組。治療組或接受低劑量連續膠束紫杉醇(2.0mg/kg；每周3次，共10次)或接受高劑量「脈衝」膠束紫杉醇(20mg/kg；每周1次，共4次)。對照組僅接受對照微膠粒。檢測前每隔一定時間，殺死相同月齡的紫杉醇治療和不治療對照B/W小鼠，取出小鼠脾臟防腐處理和製備淋巴細胞計數的單細胞懸浮液。為分辨脾淋巴細胞亞型，使用螢光分析。使用ELISA測定每百萬脾B-細胞中自發分泌免疫球蛋白(IgG、IgM、和總免疫球蛋白)或抗-ssDNA-抗體的細胞數。通過前述，應當領會，儘管為了闡明目的這裡已經描述了本發明的特異實施例，但可進行不背離本發明精神和範圍的各種改變。因此，發明不限於除附加的權利要求之外的發明。權利要求1.治療或預防多發性硬化的方法，包括施予病人治療有效量的抗-微管物質由此所述多發性硬化得以治療或預防。2.根據權利要求1所述方法，其中所述抗-微管物質選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。3.根據權利要求1所述方法，其中所述抗-微管物質是紫杉醇，或它的類似物或衍生物。4.治療或預防牛皮癬的方法，包括施予病人治療有效量的抗-微管物質，由此所述牛皮癬得以治療或預防。5.根據權利要求4所述方法，其中所述抗-微管物質選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。6.權利要求5所述方法，其中所述抗-微管物質是局部給藥。7.治療或預防關節炎的方法，包括施予病人治療有效量的抗-微管物質，由此所述關節炎得以治療或預防，條件是所述抗-微管物質不是紫杉醇，或它的類似物或衍生物。8.根據權利要求7所述方法，其中所述抗-微管物質選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。9.根據權利要求7所述方法，其中所述抗-微管物質系統或關節內給藥。10.治療再狹窄的方法，包括施予病人治療有效量的抗-微管物質，由此所述再狹窄得以治療或預防，條件是所述抗-微管物質不是紫杉醇，或它的類似物或衍生物。11.根據權利要求10所述方法，其中所述抗-微管物質選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。12.根據權利要求10所述方法，其中所述抗-微管物質系統或血管周給藥。13.根據權利要求10所述方法，其中抗-微管物質以包覆於醫療器具形式給藥。14.根據權利要求13所述方法，其中所述醫療器具是斯滕特氏印模、斯藤特氏移植物、血管移植物或留置導管。15.根據權利要求10所述方法，其中所述抗-微管物質通過腔內器具給藥。16.治療移植排斥的方法，包括施予病人抗-微管物質。17.根據權利要求16所述方法，其中所述抗-微管物質選自紫杉醇、epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。18.治療或預防手術粘連的方法，包括施予病人治療有效量的抗-微管物質，由此所述手術粘連得以治療或預防，條件是所述抗-微管物質不是紫杉醇，或它的類似物或衍生物。19.權利要求18所述方法，其中所述抗-微管物質選自epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。20.治療炎症性腸道疾病的方法，包括施予病人治療有效量的抗-微管物質，由此所述炎症性腸道疾病得以治療或預防。21.根據權利要求20所述方法，其中所述抗-微管物質選自紫杉醇、epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。22.治療或預防慢性炎症性肺部疾病的方法，包括施予病人治療有效量的抗-微管物質，由此所述鼻息肉得以治療或預防。23.根據權利要求20所述方法，其中所述抗-微管物質選自紫杉醇、epothiloneA或B、discodermolide、氧化氘(D2O)、己二醇、塊菌素、LY290181、氟化鋁、乙二醇-雙-(琥珀醯亞氨基琥珀酯)、甘氨酸乙酯以及它們的類似物或衍生物。24.根據權利要求22所述方法，其中所述抗-微管物質是鼻內給藥。25.根據權利要求1、4、6、8、14或16任一所述方法，所述物質進一步包括聚合物。26.根據權利要求25所述方法，其中所述聚合物形成平均大小為0.5～200μm的微球。27.根據權利要求25所述方法，其中聚合物是乳酸和羥基乙酸的共聚物。28.根據權利要求25所述方法，其中所述聚合物包括聚(己內酯)。29.根據權利要求25所述方法，其中所述聚合物包括聚(乳酸)。30.根據權利要求25所述方法，其中所述聚合物是聚(乳酸)和聚(己內酯)的共聚物。31.根據權利要求25所述方法，其中所述聚合物包括乙烯醋酸乙烯酯。32.根據權利要求25所述方法，其中所述聚合物包括肉豆蔻酸異丙基酯。33.根據權利要求25所述方法，其中所述聚合物包括Transcuol。34.根據權利要求25所述方法，其中所述聚合物是是二嵌或三嵌共聚物。全文摘要本發明提供治療或預防炎症性疾病如牛皮癬或多發性硬化的方法,包括向炎症部位釋放抗—微管物質,或它們的類似物或衍生物的步驟。文檔編號A61K31/437GK1246791SQ97181581公開日2000年3月8日申請日期1997年12月2日優先權日1996年12月2日發明者W·L·享特申請人:血管技術藥物公司