一類具有治療胃腸炎疾病的新型補身烷類化合物的製作方法

2023-12-08 18:39:21 2

專利名稱：一類具有治療胃腸炎疾病的新型補身烷類化合物的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物化學醫藥領域，具體而言涉及一類新補身烷類化合物及其在治療 腸胃炎方面的應用。
背景技術：
腸胃炎又稱腸胃感冒，是消化系統的常見病和多發病，一般認為是胃黏膜和腸粘 膜發炎引起的，常常表現為嘔吐、腹瀉，帶有腹部陣痛性痙攣及絞痛，伴有發燒、出汗等症 狀。隨著年齡的增長，發病率不斷地增加。現代醫學認為是由於進食微生物感染的食物導 致，多通過使用抗生素(例如諾氟沙星)來調節胃腸道失衡的菌群來達到治療的目的；中醫 理論則認為是由於人體感受風、寒、暑、溼之邪，以及穢濁之氣，侵犯脾胃，使胃腸功能障礙 所致，其本質為清濁之分，升降失常，症狀為氣機阻滯，傳化失常，為痛為瀉，胃失和降，氣機 上逆，為惡為吐，在治療方面以調節脾胃目的，通過顧護胃氣、調節升降、調節陰陽、注重平 衡等四個方面達到治療的目的，如使用黎藥複方-腸胃康等。黎藥複方-腸胃康顆粒是國家保護中藥品種(保護品種號ZYB2072004057)，由牛 耳楓和辣蓼兩味藥組成，清熱除溼化滯，用於急性胃腸炎，屬傷食洩瀉型及溼熱洩瀉型者， 證見腹痛腹滿、洩瀉臭穢、噁心嘔腐或有發熱惡寒苔黃脈數等。該複方的臨床效果較好，但是其中的活性成分並不知曉。因此在製藥領域中需要 知道該複方中的活性成分，從而對腸胃炎的治療研究產生積極的推動作用。

發明內容
為解決上述問題，本發明人進行了大量研究。在前期的研究中證實該複方中的總 黃酮類成分為其活性成分之一。通過深入研究，從該複方中分離得到了一組補身烷類化合物，其中兩個為新化合 物。這類補身烷化合物屬於倍半萜類，具有多種藥理活性。因此，根據本發明的一個方面，提供了新的補身烷類化合物，所述化合物具有治療 腸胃炎的作用。本發明的補身烷類化合物為具有如下結構 本發明的補身烷類化合物屬於倍半萜類化合物，具有多種藥理活性，其中的抗炎 活性是我們關注的焦點，通過體內外實驗對其藥理活性尤其是胃腸炎相關的活性進行了研究。實驗表明，本發明的化合物具有抗炎和解痙的作用，對腸胃炎具有確切的療效。根據本發明的另一個方面，提供了一種製備本發明化合物的方法，所述方法包括如下步驟(1)沸水提取粉碎後的牛耳楓和辣蓼的混合物；(2)濃縮提取液，得到浸膏；(3)將步驟(2)中所得的浸膏懸浮於水中，用二氯甲烷萃取，得到二氯甲烷萃取 物；(4)濃縮步驟(3)中所得的二氯甲烷萃取物並上樣至矽膠色譜柱上，用石油醚 乙酸乙酯的體積比為100 0至0 100的混合溶劑進行梯度洗脫，按照所使用的不同梯 度的洗脫液收集流份；(5)將步驟(4)中使用石油醚乙酸乙酯體積比為60 40的混合溶劑洗脫下來 的流份上樣至矽膠色譜柱上，用石油醚丙酮為4 1 (ν/ν)的混合溶劑進行洗脫，對所得 的流份進行重結晶純化，得到純化的化合物1 ；(6)將步驟(4)中使用石油醚乙酸乙酯體積比為80 20的混合溶劑洗脫下來 的流份上樣至矽膠色譜柱上，用正己烷丙酮的體積比為90 10至60 40的混合溶劑 進行梯度洗脫，按照所使用的不同梯度的洗脫液收集流份；(7)將步驟(6)中使用正己烷丙酮體積比為80 20的混合溶劑洗脫下來的流 份上樣至凝膠色譜柱上，用氯仿甲醇的體積比為1 1的混合溶劑進行洗脫，收集洗脫體 積為56-64ml之間的流份，濃縮得到化合物2。根據本發明的具體實施方案，其中上述步驟(4)中所使用的混合溶劑中石油醚 乙酸乙酯的體積比例依次為100 0、98 2、95 5、90 10,85 15,80 20,70 30、 60 40,50 50和0 100。根據本發明的另一個具體實施方案，其中上述步驟(6)中所 使用的混合溶劑中正己烷丙酮的體積比例依次為90 10,85 15,80 20,70 30和 60 40。根據本發明的具體實施方案，所述方法還包括使用薄層色譜和/或高效液相色譜 檢驗所得的各化合物。根據本發明的具體實施方案，其中上述步驟(4)中所述的矽膠色譜柱為粒徑 50-74 μ m的矽膠色譜柱。根據本發明的另一個具體實施方案，其中所述步驟(5)和(6)中 所述的矽膠色譜柱為粒徑10-40 μ m的矽膠色譜柱。根據本發明的又另一個具體實施方案，其中上述步驟(7)中所述的凝膠色譜柱為 Sephadex LH-20柱。根據本發明的其他具體實施方案，其中上所述步驟(5)中所述的重結 晶過程中使用的溶劑為甲醇。本發明還提供了一種用於治療腸胃炎的藥物組合物，所述組合物含有至少一種本 發明的化合物。本發明還提供了本發明化合物用於製備治療腸胃炎的藥物的用途。根據本發明的具 體實施方案，所述腸胃炎可為慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、急慢性腸炎或者結腸炎等等。


圖1為製備本發明化合物的方法的示意圖。
具體實施例方式實施例1.本發明的化合物的製備製備本發明的化合物的步驟示於圖1。取牛耳楓10_14kg，辣蓼5_7Kg，粉碎後用水煎3_10次，每次用5倍體積的水煎 1-6小時(共使用15-50倍體積的水)。將提取液合併，過濾，減壓蒸乾水分，得到浸膏(約 IOOOg)。將浸膏懸浮於100000ml蒸餾水中，用二氯甲烷萃取(2500ml X 5_10次)。將所得 萃取液合併濃縮，得到二氯甲烷萃取物(50ml)。取二氯甲烷萃取物(40ml)，上樣至矽膠色 譜柱上(青島海洋化工有限公司柱層析矽膠，粒徑50-74 μ m)。使用不同梯度的石油醚-乙 酸乙酯混合溶劑(石油醚乙酸乙酯=100 0-0 100, ν/ν)進行洗脫，流速為6-10ml/ min。每種梯度的混合溶劑用量為20000ml，按照所用不同梯度的洗脫液收集流份。每種梯 度的洗脫液的配比以及所得流份的命名如下所示 將其中的Fr. 8流份經過薄層色譜矽膠(青島海洋化工有限公司薄層色譜矽膠，粒 徑10-40 μ m)填裝的柱色譜進行分離.使用不同梯度的石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚 丙酮=4 1或1 1，ν/ν)進行洗脫，流速為3-5ml/min。每種梯度的混合溶劑用量為 2000ml，按照所用不同梯度的洗脫液收集細分流份。每種梯度的洗脫液的配比以及所得細
分流份的命名如下所示 其中在subFr. a流份中析出無色片狀晶體，溶解於甲醇，溶劑揮發後重新析出結 晶，除去剩餘的部分母液，反覆以上重結晶操作後得到化合物1，經薄層色譜檢識(10%硫 酸乙醇顯色劑顯色)，在多種展開條件(石油醚-丙酮，氯仿-丙酮，氯仿-甲醇)下展開後 為單一斑點，經高效液相色譜法(HPLC)檢識化合物1的純度達到95%以上。將上述的Fr. 6流份經過薄層色譜矽膠(青島海洋化工有限公司薄層色譜矽膠， 粒徑10-40 μ m)填裝的柱色譜分離。使用不同梯度的正己烷-丙酮混合溶劑(正己烷 丙酮=90 10-60 40，v/v)進行洗脫，流速為3-5ml/min。每種梯度的混合溶劑用量為 2000ml，按照所用不同梯度的洗脫液收集細分流份。每種梯度的洗脫液的配比以及所得細 分流份的命名如下表所示 將其中的subFr. III部分上樣至S印hadex LH-20凝膠柱色譜上，用氯仿-甲醇 (1 1)洗脫，流速為l-2ml/min，收集洗脫液，每瓶8ml，其中將按序洗脫的第8個接受瓶中 的洗脫液濃縮後得到化合物2的片狀結晶。同樣，經薄層色譜檢識(10%硫酸乙醇溶液顯 色)，在多種展開條件下(石油醚_丙酮，氯仿_丙酮等)化合物2為單一斑點，經HPLC檢 識其純度達到95%以上。實施例2.本發明化合物的表徵經過測試化合物1和2的理化性質、波譜數據確定了其結構。化合物1和2的波譜數據見表1。表1.化合物1和2的波譜數據a a. 1H-WR 測試條件為 600MHz，d6_DMS0 ； 13C-WR 測試條件為 I25MHz，d6_DMS0化合物1和2的高分辨質譜數據見表2 ；表2.化合物1和2的高分辨質譜數據 實施例3.本發明化合物對一氧化氮合酶活性的抑制大量研究表明，通過抑制一氧化氮合酶可以治療炎症。本實施例通過體外酶活性 測試，對本發明的兩個化合物抑制一氧化氮合酶的活性進行評價。1.實驗材料將化合物1和2用蒸餾水配製為一定濃度的溶液，iNOS (重組酶，Cayman Chemical 公司)，BH4( 二鹽酸鹽)，iNOS試劑盒(Cayman Chemical公司)。2.實驗儀器電熱恆溫水浴箱，分析天平，TU21800紫外可見光分光光度計。3.實驗方法在試管中加入氨基苯磺酸、磷酸鹽緩衝溶液、N-(l-萘基)-乙二胺和iNOS樣品， 不加入BH4和受試藥物，反應後測得空白管吸光度；另取數個試管，各試管中分別加入氨基 苯磺酸、磷酸鹽緩衝溶液、N-(l-萘基)-乙二胺、iNOS樣品和不同濃度的BH4,不加入受試藥物，反應後測定各管吸光度，計算出iNOS活性達到最大時所需BH4最小有效濃度，此濃度 下所測得的吸光度為標準管吸光度。在試管中加入3種試劑、iNOS樣品、BH4和化合物1或 2，反應後所測得的吸光度為測定管吸光度，按公式抑制率(％ )=(標準管吸光度-測定管吸光度)/(標準管吸光度-空白管吸光 度)X 100%計算出化合物1或2在指定濃度下對iNOS活性的抑制百分率。4.實驗結果結果表明，化合物1和2抑制具有顯著一氧化氮合酶的活性，其中化合物2呈現明 顯的量效關係，實驗結果見表3 表3.化合物1和化合物2對一氧化氮合酶活性的抑制 實施例4.用二甲苯誘導的炎症模型評估本發明化合物的抗炎活性通過選擇化合物1和2對二甲苯誘導的炎症模型的改善作用，對以上化合物抗炎 活性進行評價。1.實驗材料實施例1中獲得的化合物1和2，小鼠，昆明種，一級，體重18_22g，雌雄各半。 FINNPIPETTE可調式移液器(量程20-200 μ 1)，熱電(上海)儀器有限公司；BS200S電子 天平(感量0. OOlg)，德國Sartorius公司二甲苯(分析純)。2.實驗方法(1)給藥劑量設計化合物1和2製成0. 3mg/ml (低劑量)、0· 6mg/ml (中劑量)、 1. 2mg/ml (高劑量)的藥液，按0. 4ml/只的劑量灌胃給藥。(2)分組及給藥將小鼠按性別、體重隨機分成8組，每組10隻，其中陰性對照組 (蒸餾水)、陽性對照組(醋酸地塞米松，劑量0. 2mg/只)各1組，化合物1和化合物2按 高、中、低劑量各3組。動物按0.4ml/只的劑量灌胃給藥，1日1次，連續3天。(3)小鼠耳廓致炎實驗末次給藥Ih後，用微量移液器吸取二甲苯20 μ 1均勻塗 布於小鼠右耳廓引起炎症。致炎1小時後處死小鼠，同時剪下左右兩側耳廓，用直徑8mm的 打孔器分別在左右兩耳廓的相同部位打下圓形耳片，精密稱取兩耳片重量。以右耳片重量 減去左耳片重量的差值(mg)作為炎症腫脹度。按照下述公式計算炎症抑制率抑制率(％) =[(空白組腫脹度-給藥組腫脹度)/空白組腫脹度]X 100 %(4)統計學方法數據均表示為平均值士標準差，採用DPS 3. 1統計分析軟體處 理，組間比較用Durmett T檢驗。3.實驗結果結果表明化合物1和2在給藥量為0. 6和1. 2mg/ml時均對二甲苯致炎的模型具有顯著的抑制作用，且均呈劑量依賴關係(見表4)表4.化合物1和化合物2對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 注各給藥組與陰性對照組比較，*為P < 0. 05，#為P < 0. 01實施例5.本發明化合物的解痙作用的評估本實施例中通過選擇化合物1和2對小鼠腸推進作用的影響，對以上化合物的解 痙作用進行評價。1.實驗材料硫酸阿託品片，規格0. 3mg/片，批號060204，用蒸餾水製成0. 015mg/ml藥液，備用。羧甲基纖維素鈉、藥用澱粉、注射用活性炭。營養性半固體糊的製備取IOg羧甲 基纖維素鈉，溶於250ml蒸餾水中，分別加入16g奶粉、8g糖、8g澱粉和2g活性炭末，攪拌 均勻，配製成300ml約300g的黑色半固體糊狀物。冰箱冷藏，用時恢復至室溫。小鼠，昆明種，一級，體重18_22g，雌雄各半。
實施例1中獲得的化合物1和2。
2.實驗方法(1)給藥劑量設計化合物1和2製成0. 3mg/ml (低劑量)、0· 6mg/ml (中劑量)、 1. 2mg/ml (高劑量)的藥液，按0. 4ml/只的劑量灌胃給藥。(2)分組及給藥將小鼠按性別、體重分層隨機分成9組，每組10隻，其中陰性對 照組(蒸餾水)、陽性對照組(硫酸阿託品，劑量0. 3mg/只)各1組，化合物1號和 化合物 2均為高、中、低劑量各3組。動物按0.4ml/只的劑量灌胃給藥，1日1次，連續3天。(3)小鼠腸推進測定末次給藥Ih後，小鼠灌胃給予營養性半固體糊0. 8ml/只， 20min後脫頸椎處死小鼠，開腹，迅速取出小腸，輕輕剝離後直鋪於白紙上，測量幽門至回盲 腸部全長及幽門至黑色半固體糊前沿的距離，以幽門至黑色半固體糊前沿的距離佔幽門至 回盲部全長的百分率為小腸推進率，並計算抑制率。抑制率(％)=[(陰性組推進率-給藥組推進率)/陰性組推進率]X100%(4)統計學方法數據均表示為平均值士標準差，採用DPS 3. 1統計分析軟體處 理，組間比較用Durmett T檢驗。3.實驗結果化合物1和2的高劑量組具有抑制小腸推進的作用，說明在給濃度為1. 2mg/ml時 兩個化合物均具有解痙的作用(見表5)。表5.化合物1和2對小鼠體內腸推進的影響 注各給藥組與陰性對照組比較，*為P < 0. 05，#為P < 0. 01。從本發明的各實施例的結果可以看出，本發明中的化合物具有抗炎和解痙的作 用，對腸胃炎具有確切的療效。
權利要求
具有下式結構的化合物FSA00000018646400011.tif
2.一種製備權利要求1的化合物的方法，包括下述步驟(1)沸水提取粉碎後的牛耳楓和辣蓼的混合物；(2)濃縮提取液，得到浸膏；(3)將步驟(2)中所得的浸膏懸浮於水中，用二氯甲烷萃取，得到二氯甲烷萃取物；(4)濃縮步驟(3)中所得的二氯甲烷萃取物並上樣至矽膠色譜柱上，用石油醚乙酸 乙酯的體積比為100 0至0 100的混合溶劑進行梯度洗脫，按照所使用的不同梯度的 洗脫液收集流份；(5)將步驟(4)中使用石油醚乙酸乙酯體積比為60 40的混合溶劑洗脫下來的流 份上樣至矽膠色譜柱上，用石油醚丙酮為4 l(v/v)的混合溶劑進行洗脫，對所得的流 份進行重結晶純化，得到純化的化合物1 ；(6)將步驟(4)中使用石油醚乙酸乙酯體積比為80 20的混合溶劑洗脫下來的流 份上樣至矽膠色譜柱上，用正己烷丙酮的體積比為90 10至60 40的混合溶劑進行 梯度洗脫，按照所使用的不同梯度的洗脫液收集流份；(7)將步驟(6)中使用正己烷丙酮體積比為80 20的混合溶劑洗脫下來的流份上 樣至凝膠色譜柱上，用氯仿甲醇的體積比為1 1的混合溶劑進行洗脫，收集洗脫體積為 56-64ml之間的流份，濃縮得到化合物2。
3.根據權利要求2的方法，其中所述步驟(4)中所使用的混合溶劑中石油醚乙酸 乙酯的體積比例依次為100 0、98 2、95 5、90 10,85 15,80 20,70 30、 60 40,50 50和0 100 ；和/或其中所述步驟(6)中所使用的混合溶劑中正己烷丙 酮的體積比例依次為90 10,85 15,80 20,70 30和60 40。
4.根據權利要求2的方法，還包括使用薄層色譜和/或高效液相色譜檢驗所得的各化 合物。
5.根據權利要求2的方法，其中所述步驟(4)中所述的矽膠色譜柱為粒徑50-74ym的 矽膠色譜柱；和/或其中所述步驟(5)和(6)中所述的矽膠色譜柱為粒徑10-40 u m的矽膠 色譜柱。
6.根據權利要求2的方法，其中所述步驟(7)中所述的凝膠色譜柱為S印hadexLH-20柱。
7.根據權利要求2的方法，其中所述步驟(5)中所述的重結晶過程中使用的溶劑為甲
8.一種用於治療腸胃炎的組合物，含有至少一種權利要求1的化合物。
9.權利要求1的化合物用於製備治療腸胃炎的藥物的用途。
10.根據權利要求9的用途，其中所述腸胃炎為慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、急 慢性腸炎或結腸炎。
全文摘要
本發明涉及具有下述結構式的新補身烷類倍半萜化合物體外實驗證實上述化合物具有治療腸胃炎疾病的效果。本發明的化合物製備成藥物製劑，可用於治療慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎、急慢性腸炎或者結腸炎等。
文檔編號C07C62/36GK101870647SQ20101011273
公開日2010年10月27日 申請日期2010年2月4日 優先權日2010年2月4日
發明者劉明生, 康勝利, 張俊清, 張小坡, 盛琳, 符乃光, 羅海燕 申請人:海南醫學院