治療以及預防非病毒性微生物感染的方法
2023-11-10 22:36:07 3
專利名稱：治療以及預防非病毒性微生物感染的方法
技術領域：
本發明涉及具有治療以及其他用途的各種化合物，更具體涉及能抑制細菌粘附於表面的各種化合物。
背景技術：
現在已經知道黃酮類化合物和具有不同數目的黃酮類單元的原花青素聚合物，例如，在W.L.Mattice等，Phyochemistry，23，p.1309-1311(1984)；Z.Czochanska等，J.C.S.Chem.Comm.，375(1979)；W.T.Jones等，Photochemistry，15，p.1407-1409(1976)；E.Haslam，Plant Polyphenols，p.75(1989)中都有報導。一直以來原花青素聚合物就被認為具有抗病毒活性。例如，授予Shaman製藥有限公司的國際專利公開WO/92/06695號和授予Cariel等的國際專利公開WO/90/13304號中都有記載。這些化合物都是從各種植物材料中提取出來的，如巴豆屬和紅厚殼屬的植物中。
發明的揭示本發明包括具有抑制細菌細胞粘附於表面的顯著生物活性的化合物，以及一種具有明顯抗粘附活性的植物提取物的應用。所用的化合物包括原花青素、無色花青苷、無色翠雀苷，和包括楊梅黃酮-3-吡喃糖苷的黃酮醇配糖體。典型的，較好的原花青素化合物是被取代的表兒茶素-兒茶素二聚體。
這些組分具有一個選自I，II，III，IV，以及它們的酯、醚或相應的氧鎓鹽的結構。
其中，結構式(I)或(II)中的x＝0-3，y＝0-3，w＝0或1，n＝0-16，結構式(III)中，n＝0-8(較好的是n＝0-6或7)。
單體包括結構式(IV)或結構式(V)的成分其中x＝0-3；y＝0-3；Z＝CH2、CHOH、C＝O、CHSO3H、棓醯、兒茶素或表兒茶素；R1＝H、吡喃糖苷、棓醯、兒茶素或表兒茶素；R2＝H、吡喃糖苷、棓醯或羥基。
用於治療非病毒性微生物感染的原花青素聚合物包括2至18個具有結構式IV的單體黃酮類單元，或其酯，醚，以及相應的氧鎓鹽。
本發明還包括代謝改變的保留完整的黃酮醇環系的多酚類物質，例如，兒茶素葡糖苷酸和/或3』-o-甲基-(+)-兒茶素葡糖苷酸和/或3』-o-甲基-(+)-兒茶素硫酸酯〔82249-08-9〕。它們經酚類物質如表兒茶素、兒茶素、楊梅黃酮、櫟精、蘆丁等代謝活化的物質和經其他具有化學活化的葡糖苷酸和/或硫酸酯。
本發明的另一方面涉及一種治療非病毒感染的方法，它是將一種治療有效量的抗粘附劑用於溫血動物，這種抗粘附劑包括一種含有2-8個黃酮類單元的原花青素單體聚合物。這些黃酮類單元包括但不僅限於兒茶素、表兒茶素、棓兒茶酸、棓表兒茶素、黃烷醇、黃酮醇、黃烷雙醇、無色花青素、無色翠雀定花青素及其混合物。這些黃酮類單元相互可以單鍵或雙鍵相連。原花青素聚合物可經靜脈內、腹膜內、皮下、肌肉內、口服等局部或吸入使用。
本發明還涉及用於治療非病毒感染的，一般具有選自上述I-V式的結構的原花青素，其酯，醚以及相應氧鎓鹽，其中，n＝0-18，較好的是n＝0-13，更好的是n＝0-9。
本發明還包括一種從植物材料中提取這些化合物以及純化它們的方法。
本發明也包括使用這些化合物來抑制細菌粘附於生物和非生物表面的方法。
這種提取物的抗粘附性可用於許多領域，如清潔工業發酵裝置，醫科和牙科器械，實驗室培養罐等；還可用於抑制細菌粘附於外科植入物，牙齒表面，口腔內的各種口腔細胞，以及人和/或動物的泌尿道細胞。
抑制細菌粘附的方法包括幾個步驟，即提供一種化合物，將分散於適當介質的這種化合物塗布於大腸桿菌等細菌會附著的表面，使這些細菌從其表面脫落。這種方法能抑制細菌粘附於牙齒、其他細菌粘附於牙齒表面、人的口腔上皮細胞、人的泌尿道上皮細胞，還能清潔牙齒植入物、工業發酵罐等。
對圖表的簡要說明
圖1是製備化合物的方法的流程圖。
圖2-5描述的是選自圖1所示方法的各步的產物的HPLC色譜圖。
圖6描述的是如圖1分離得到的活性物質的13C NMR譜。
圖7描述的是如圖1分離得到的活性物質的1H NMR譜。
圖8描述的是如圖1分離得到的活性物質的質譜圖。
發明的最佳實施狀態A.步驟如以上所述，用於實現本發明的組合物可能來自一種植物提取物。製備這種含有抑制非病毒微生物粘附於細胞表面的活性部分的植物提取物的方法，包括提供包含具有抗粘附活性的多酚類化合物的天然活性部分的植物材料勻漿；在勻漿中加入足夠量的鹼使其鹼化至pH值約大於10，使多酚類化合物的酚基離子化變為酚鹽離子，接著在鹼化的勻漿中加入足夠量的醇，形成帶有酚鹽離子的多酚類化合物的沉澱，分離沉澱物。本法還包括將沉澱物裝入親脂性柱中，通過分階段洗脫進行分級，洗脫液是由不同比例的醇或其他相對非極性的與水可混溶的有機溶劑和水組成的。開始是以較低的醇/水比例，然後用不同的醇/水比例洗脫得到一系列分階段洗脫的流出液，分離，鑑別其中一種基本上由具有抗粘附活性的餾分組成的流出液。
本法可進一步包括在柱上將抗粘附活性的流出液分級，從有色花青素化合物中分離出無色多酚類化合物，然後在第2根親脂性柱上，通過分階段洗脫將從上一柱回收的無色多酚類化合物分級，開始是採用較低的有機溶劑與水的比例，然後用不同的有機溶劑與水的比例得到第2系列分階段洗脫的流出液，分離，鑑別第2系列的流出液中的一種具有抗粘附活性的流出液。
目前較好的製備化合物的方法包括首先得到植物(如大果酸果蔓)提取物，然後從植物提取物使活性化合物基本純化。這個過程以圖解的形式描述於圖1，並構成下面說明的實施例1。它包括將前面被提取的植物材料的水溶液的pH調節至鹼性，該溶液中的「活性」化合物是可溶的。
B.較好的化合物用於本發明的抗微生物方法的原花青素低聚體或聚合物是單體黃酮類化合物組成的，包括兒茶素、表兒茶素、棓兒茶酸、棓表兒茶素、黃烷醇、黃酮醇、黃烷-3，4-二醇無色花青素和花青素。原花青素聚合物有2-16個黃酮類單元，較好的是2-15個單元，最好的是2-11個單元。
此外，結晶性的化合物的溶點(M.P.)大於280℃，在空氣中儲存時不會發生氧化反應，無色花青素具有這樣的性質。
晶體的形成(1316A)發生在LH-20 70/30流出液儲存在氮氣中一周至幾周或更長的時間時(圖1)。很明顯，在氮氣緩慢換氣時，流出液(一般體積為1ml-2ml)充分濃縮，被純化的活性化合物自髮結晶，這一現象在各種多酚類化合物中都有。針狀晶體可從水、醇(如甲醇或乙醇)或它們的混合物中得到。
另一些存在於大果酸果蔓提取物中的化合物已被進一步鑑別為具有抗粘附活性，有一些被部分純化，它們包括無色花青素/無色翠雀定和黃酮醇吡喃糖苷。默克索引#1908描述了兒茶素，表兒茶素3位羥基的取向與兒茶素不同。原花青素是聚合的化合物，包括兒茶素與表兒茶素殘基，結構式I-III描述了表兒茶素與兒茶素的二聚物，表兒茶素通過C4與兒茶素基的C8』相連。聚合的原花青素的重複單元，即兒茶素和表兒茶素殘基可在聚合的原花青素中以任何可能的組合物形式結合，分子量達到約5000道爾頓。原花青素聚合物具有不同數量的黃酮類單元。聚合物較好的是含有2-15個黃酮類亞單元，更好的是2-11個亞單元。默克索引#5334描述了無色花青素，與之相近的化合物是無色翠雀苷。楊梅黃酮-3-吡喃糖苷被認為是一種從提取物中分離出來的具有活性的化合物，楊梅黃酮記載在默克索引#6244。
被公認具有抗粘附活性的原花青素和原花青素聚合物當與選自黃烷醇，特別是被棓醯基取代的多酚類化合物包括棓兒茶酸、棓表兒茶素、吡喃糖苷或硫酸酯，無色花青苷，黃酮醇吡喃糖苷的物質合用時，它們的活性會增強。
在烏飯樹屬提取物中的黃酮醇吡喃糖苷中，楊梅黃酮-3-吡喃糖苷的未經代謝活化的形式顯示出最高的抗粘附作用，在它的天然狀態，這種化合物具有抗粘附活性，但沒有原花青素強。
較好的是具有如結構式(IV)所示的環系的化合物，其中C環的1位有氧原子，R2為吡喃糖苷，它具有抗粘附活性。無色花青苷類(如無色花青苷和無色翠雀苷)為具有飽和的C環和R2位上的吡喃糖苷的兒茶素或表兒茶素的環狀結構的無色化合物。用含水的酸溶液加熱處理無色花青苷時，O-R2碳水化合物鍵被水解和氧化，C環就被氧化，導致產生不飽和的花青素(或翠雀定)，其中C環是不飽和的，並顯示特殊的紅色。烏飯樹屬提取液的某些HPLC峰的物質，在280nm具有吸收，並具有抗粘附活性，它們在最初時是無色的。在加熱和用含水的酸溶液進行處理時，碳水化合物片斷被釋放，C環被氧化，具有512nm花青苷特徵吸收波長的部分顯示紅色，該物質活性消失。C環的氧化狀態在抗粘附活性的機理中起了重要作用。
櫟精和楊梅黃酮都有比無色花青苷氧化態稍高的兒茶素或表兒茶素樣的核，但R2＝H，對它們進行了抗粘附的試驗，表明無活性。但是，從烏飯樹屬分離的楊梅黃酮-3-吡喃糖苷具有抗粘附活性。而且如前面所述的，用這裡所述的一種抗粘附試驗，將一種物質的的抑制粘附的能力與甘露糖抑制這種粘附的能力比較，可知碳水化合物片斷與抗粘附活性有關，不論它是在代謝活化作用之前加入還是由於代謝活化而加入。
已經確定如結構式(IV)所示的結構，其中Z＝C、羰基或O，R1＝H或OH，R2＝H、OH、吡喃糖苷、吡喃糖苷鏈或棓醯，都具有一定的抑制微生物粘附於細胞表面的作用。而且，對細胞的粘附作用進行幹擾的微生物包括將粘附於細胞表面作為感染細胞的一個步驟的細菌和酵母。
根據文獻記載(Hackett等，(1983)Xenobiotica13(5)，279-86和ibid.，12(7)，405-16)，90％的被揭示的多酚類化合物被代謝成兒茶素葡糖苷酸和/或3』-O-甲基-(+)-兒茶素葡糖苷酸和/或3』-O-甲基-(+)兒茶素硫酸酯〔82249-08-9〕而排洩，它們保留完整的黃酮醇環系。
C.用途目前利用所得到的化合物的較好方法涉及抑制細菌粘附於表面(治療或預防)，包括提供這種化合物或其他材料(例如富含抗粘附活性的烏飯樹屬提取物，以及在280nm有吸收和/或360nm有吸收的多酚類化合物)，將足夠量的化合物與可接受的載體塗布於一般認為會有細菌如大腸桿菌等粘附的表面，將細菌從該表面清除掉。更理想的是表面經衝洗來除去被清除的細菌。這種方法能抑制細菌粘附於牙齒、牙齒表面、人的口腔上皮細胞、人的泌尿道上皮細胞，還能清潔牙齒植入物、細菌發酵罐等。
D.組合物本發明包括含有如前面所述的具有抗微生物粘附的性質的化合物的口腔衛生產品。這些口腔衛生產品包括但不限於牙膏、漱口水、口香糖。
本發明的牙膏的製造是將有效量的「活性成分」以常規的比例加入常規的粉末或糊狀載體中，這些載體包括親水性基質、乳化劑、調味劑、芳香劑、防腐劑等，這種牙膏還含有有效量的有研磨作用的成分使牙垢和/或氟化物機械崩解/除去。一種具體的牙膏實例在牙膏成分的組合物中以乾重計約含0.2％-5％的活性成分。
口香糖中含有常規的膠的成分，防腐劑，和有效量的活性成分。一般活性成分的量以乾重計約佔0.5％-5％。
漱口水可含有含水或水-醇的液體載體，防腐劑，和有效量的活性成分，一般後者按體積計約佔0.5％-10％，或按乾重計為0.005％-2％。
還有一種產品，其中利用提取物和/或新穎的化合物，以喉噴霧劑，或錠劑的形式，通過減少或防止有害的細菌粘附於喉組織來治療喉痛。
目前認為化合物中最好不要含有強氧化劑，如過氧化氫等，因為它們會造成一些化合物中的C環不飽和，破壞它們的抗粘附活性。
還考慮將活性成分製備成膠囊或片劑按時給藥，保持泌尿道的衛生，特別是作為一種預防藥防止尿路感染。還可以製成一種富含活性成分的飲料給一些不喜歡大果酸果蔓味道的病人食用。在片劑中活性成分含量為5mg-500mg，在100ml-250ml的飲料中含有相似量的活性成分。
活性成分也可以製備成治療尿路感染的組合物。在片劑中，這樣的組合物包括在適當的惰性載體中含有每劑量單位為0.5mg-500mg的有效成分，每日口服2-4次。它包括以下一種或多種可供選擇的物質用於緩解急性症狀的鹽酸非那吡啶(每劑量單位約50mg-200mg)；作為抗感染藥的烏洛託品(每劑量單位約50mg-500mg；尿路酸化劑如二磷酸鈉、馬尿酸、抗壞血酸、或扁桃酸(每劑量單位約100mg-500mg)。
本發明的一種足用藥粉，包含提取物的有效濃縮物並混合了咪康唑、克黴唑、滑石粉、澱粉和香料。當用於氣霧劑時，還需加入一種推進劑。
一種足用軟膏或霜劑，可包括有效量的提取物、咪康唑或克黴唑、石油、羊毛脂、十二烷基硫酸鈉、乳化劑和防腐劑。
一種足用液劑，可包含本發明的提取物、抗真菌劑如咪康唑或克黴唑、溶劑系統(例如水和醇)。
一種用於治療酵母菌感染的陰道用霜劑，包含提取物、有效量的抗真菌劑如克黴唑、咪康唑或特康唑、苄醇、十六烷醇、蠟或其他霜劑基質。
實施例實施例1當用於OCEAN SPRAY大果酸果蔓粉末的水溶液(以「OSCP溶液」略稱)時，本發明的方法如下。將足夠量的強鹼(例如氫氧化鈉)加入OSCP溶液中使它的pH值升高至足以使多酚類物質的酚基離子化，變為酚鹽化基團(≥pH10)(圖1；步驟1300)。當OSCP溶液進行以上步驟時在接近所需pH時溶液變為綠色。對1升大果酸果蔓粉末的飽和(20％)OSCP溶液，大約需要70ml-80ml的10N的氫氧化鈉。所得的綠色的鹼性OSCP溶液與足夠量的一種普通的醇攪拌混合形成綠色的沉澱(步驟1302)，大約需要4體積(4升)的甲醇。除了甲醇之外，還可用其他可混溶的1-3碳的醇。讓沉澱沉降，用濾紙過濾收集，然後，用少量(本例約1/5升-1/3升)的「鹼性」甲醇(步驟1304)洗滌。「鹼性」甲醇是由每升甲醇用1ml-2ml的10N氫氧化鈉鹼化而得。經洗滌的固體在空氣中乾燥，變為淡綠色的粉末，紅細胞(「RBC」)凝集試驗表明，這種粉末的活性部分水平增高了，可在室溫條件下穩定保存好幾個月。在這個步驟中大部分的糖被除去了。一般，可從每升20％的OSCP溶液中回收約70g-80g的綠色粉末。
接著，將足夠量的綠色粉末溶於200ml水中，形成濃的或近飽和的溶液(步驟1306；一般用30g-40g從20％OSCP溶液(步驟1302)所得的粉末)。用足量的濃酸(例如約13ml-16ml的12M的鹽酸)將pH值調至約3至4(步驟1308)使水溶液酸化讓酚鹽離子重新轉變為酚基。OSCP提取物的水溶液在pH3至4時變為酒紅色。未溶解的固體被除去(例如利用過濾和離心)，上清液被加至C18的親脂性柱上(Waters Cartidge)，這種柱預先用甲醇處理，再用去離子水洗滌(步驟1310)。當這種由大果酸果蔓所得的溶液裝柱後，親脂性C18柱用2-3倍柱體積的水洗滌，再進行分階段洗脫，所用的洗脫液是甲醇與水的各種比例的混合物。35ml的C18柱上約裝入200ml經酸化的由大果酸果蔓所得的溶液，洗脫步驟1312用的是100ml(2-3倍柱體積)的10∶90的甲醇/水混合液(體積/體積)，洗脫步驟1314用的是100ml 20∶80的甲醇/水混合液，洗脫步驟1316用的是30∶70的甲醇/水混合液，洗脫步驟1318用的是40∶60的甲醇/水混合液。其他與水混溶的醇可代替甲醇，以合適的醇水比例達到所期望的分離效果。此外，其他與水比較為非極性的有機溶劑也可代替醇(例如丙酮或乙腈)。而且，其他類似的反相矽膠柱，如C2，C8或苯基柱等也可代替C18或親脂性Sephadox LH-20或LH-60等。
步驟1316的流出物具有很高的抗粘附活性，含有原花青素和黃烷酮類化合物。再精製原花青素，將步驟1316的流出液調節至甲醇為50％(步驟1320)中，或是通過蒸發，再溶解的方法也可通過加甲醇的方法進行。將所得的溶液裝入羥丙基化凝膠過濾柱(例如LH-20 SEPHADEX柱，Sigma Chemicals)，柱預先經50∶50的甲醇/水混合液處理過(步驟1322)。柱體積通常約為已酸化溶液的原始體積的1/10-1/2。在LH-20柱上進樣流出物經50∶50甲醇調整的溶液後，柱用50∶50的甲醇/水混合液洗滌(步驟1324)。LH-20柱然後用約2-3柱倍體積的70％丙酮/水(體積/體積)洗脫(步驟1326)流出液蒸發至乾燥，再溶於水。LH-20柱能選擇性地將兒茶素、原花青素聚合物、可能在280nm有吸收的其他多酚類物質與其他多酚類化合物相分離。為達到類似的分離效果，苯基-SEPHAROSE柱或LH-60柱(Sigma Chemical Co.of St.Louis，MO)可代替LH-20。LH-20和LH-60 SEPHADEX在其SEPHADEX顆粒上通過醚鍵連有羥丙基側鏈，使SEPHADEX更具有親脂性。
LH-20的流出液再溶解於水(中性形式，較好的是如步驟1308酸化)，然後將溶液裝入與步驟1310類似的另一C18親脂性柱中，進行與前面相同的分步洗脫過程(步驟1310A，1312A，1314A，1316A)。步驟1316A的流出液(30％甲醇洗脫液)基本上含有一種在280nm有吸收的單一的化合物，如圖5所示，在分析用HPLC中在18-19分鐘時洗脫。一般，從每升20％OSCP中可回收約0.03g-0.10g的精製化合物，即回收率約為0.01％-0.05％。這種單一的活性化合物的回收率至少是通過前面所述的方法所得的混合的活性化合物回收率的20倍。
實施例2圖3-5描述的是通過圖1各步所得的產物分析的HPLC色譜圖。圖2表示的是兩個標識標準品的保留時間的HPLC色譜圖，這兩個標識標準品是兒茶素(峰1400)和表兒茶素(峰1402)，與圖3-5中是採用同樣的HPLC條件。圖3是被棄去的上清液的產物的色譜圖，據分析為在280nm有吸收的化合物和在360nm有吸收的化合物。圖4是步驟1316所得的產物的色譜圖，據分析也是在280nm和360nm有吸收的化合物。圖5是步驟1316A所得的產物的色譜圖，可看出它基本上無在360nm有吸收的化合物存在。
步驟1316A所得的流出液進行了13C和1H核磁共振(NMR)分析，質譜分析和紅外吸收分析。
圖2-5中顯示了從79％A/21％B(A＝0.4％磷酸，B＝95％甲醇和5％0.4％磷酸)到35％A/65％B的雙溶劑線性梯度，流速為1ml/min.，時間為0min-38.3min。38.3min.後，以35％A/65％B維持恆溶劑組成的流動21.7min.。該柱以1.0ml/min.的流速，用100％的甲醇洗脫10min.。用於校準的純物質是兒茶素(8.4min.)，表兒茶素(14min.)，櫟精(36min.)。大果酸果蔓流出液最有活性的物質之一天然地存在於第19mim.。
圖6描述的是步驟1316A所得的產物在d6-二甲基亞碸(DMSO)中的13C-NMR掃描。從DMSO和甲醇溶劑分別得出峰1600和峰1602。峰1604代表表兒茶素環系的C4碳原子，峰1606代表兒茶素環系的C4碳原子。峰1608代表黃烷醇(兒茶素)環系的B環的C3和C4碳原子。以下的數據可能對解釋圖6的NMR有所幫助脈衝寬度＝12.00μsACQ時間＝819.20Ms循環時間＝0.99sACQS數＝18,020去偶器標準-64調幅頻率＝4.000PFM功率＝2900/3000圖7描述的是步驟1316A所得的產品的1H-NMR掃描，也是在d6-DMSO中。以下的數據可能會對解釋圖7的NMR有幫助一個脈衝序列脈衝寬度＝3.00μsACQ時間＝1.36s循環時間＝3.74sACQS數＝64圖8描述的是步驟1316A所得的產物的質譜圖，與DMSO溶於3-硝基苄醇。
實施例3將500mg從實施例2得到的化合物加入3.0g已經得到的大果酸果蔓提取物中。
實施例4以下試驗測試的是前面實施例所得的化合物抑制大腸桿菌引起的豚鼠紅細胞凝集的能力。
抗粘附活性是以幹擾細菌粘附於膀胱細胞的作用來量度的一個健康女性志願者的尿液經離心後，收集其中的人體膀胱上皮細胞。細胞用標準的含鹽檸檬酸鹽(SSC)洗滌後再懸浮成所需的體積，測定細胞溶液的光密度和細胞計數。分離自尿路感染部位的大腸桿菌菌株於37℃，在胰蛋白酶醬油肉湯培養基中培養72小時，促進菌毛生成。細菌也可通過離心收集，再懸浮於所需體積的SSC，確定近似的細胞數。
試管中包括0.667ml的用於測定抗粘附活性的物質的稀釋液和0.334ml的細菌懸液。細菌於37℃與供試的物質一起(從圖1的各步分離所得)培養15min.，然後，在每個試管中加入1.0ml的膀胱細胞懸液，再培養15min.。測定的化合物在溶液中是10mg/ml。
經培養後，每個試管中的物質通過8微米的聚碳酸酯濾膜過濾，然後，濾膜用2體積(2ml＝1體積)的SSC淋洗，除去未粘附於膀胱細胞的細菌。將濾膜面朝下放在顯微鏡下，細胞經加熱固定在載玻片上。除去濾膜，將載玻片著色使細胞可見，計數每個載玻片上的20個細胞，觀察每個細胞上粘附的細菌數。
還進行了兩個對照試驗。第1，將膀胱細胞單獨培養在SSC中，不加任何細菌懸液或供試物質，確定來自尿樣的細菌有多少粘附在上皮細胞上。第2，用SSC代替供試物質來確定沒有抑制劑時，細菌粘附於細胞的最大值。
從豚鼠獲得的RBC在Alsevers溶液中是一種懸浮液，它用SSC洗滌後再懸浮於SSC中。用標準方法從志願者的血液中得到的人的RBC經SSC洗滌後再懸浮於SSC中。一般認為人的RBC具有大腸桿菌耐甘露糖菌毛的受體。
對經培養並作好準備的大腸桿菌進行如下試驗，在聚苯乙烯平皿上點上一系列在SSC中含有數量分級的經稀釋的供試物質的斑點，再加上一滴僅含SSC的斑點。每個斑點約含液體10微升。在每個斑點中混入等同體積的細菌懸物，再加入1/2體積的RBC。這樣，每個斑點的總體積，因為加上前面的10微升，共有25微升。將每個斑點的內容物充分混勻，用0-4的標度記錄凝集的程度，0代表不凝結。用32減去所有稀釋液斑點評分的總和，得到一個幹擾凝集的活性的指標。
比較抗粘附活性。
用於測定細菌粘附於人的膀胱細胞的試驗的大腸桿菌的菌株是從一個有活動性膀胱感染的志願者分離出來的。這種菌株被稱為#3B菌株，顯示出1型和P型兩種菌毛。
從試驗結果可看出，本發明的化合物既能抑制1型菌毛引起的大腸桿菌粘附於豚鼠RBC的現象，還能抑制P型菌毛引起的粘附現象。
以上是關於本發明的具體實施例，植物種類和部位，化學製備步驟等的描述，但是，本領域的技術人員能理解不偏離本發明的精神和範圍的其他各種化學取代。特別是多酚類物質，包括黃酮類物質和花青苷能通過許多不同的方法從植物材料中分離和/或被部分純化。
權利要求
1.一種製備用於幹擾非病毒性微生物的組織粘附於機體組織的組合物的方法，其特徵在於，這種組合物包含具有選自結構式I、II、III的結構的一種化合物，結構式I、II、III如下所示
其中X＝1-3，Y＝1-3，W＝0或1，n＝0-18。
2.如權利要求1所述的方法，其中n＝0-13。
3.如權利要求1所述的方法，其中n＝0-9。
4.如權利要求1所述的方法，其中的化合物包含1-18個具有結構式IV的單體黃酮類單元，
其中x＝1-2；y＝1-3；Z＝CH2、羰基、CHSO3H、棓醯、兒茶素或表兒茶素；R1＝H、吡喃糖苷、棓醯、兒茶素或表兒茶素；R2＝H、吡喃糖苷、棓醯或羥基。
5.如權利要求1所述的方法，其中的化合物包含1-18個具有結構式V的單體黃酮類單元，
其中x＝1-2；y＝1-3；Z＝CH2、羰基、CHSO3H、棓醯、兒茶素或表兒茶素；R1＝H、吡喃糖苷、棓醯、兒茶素或表兒茶素；R2＝H、吡喃糖苷、棓醯或羥基。
6.如權利要求4所述的方法，其中的化合物包含2-15個單體黃酮類單元。
7.如權利要求4所述的方法，其中的化合物包含2-11個單體黃酮類單元。
8.一種富含具有選自結構式I、II、III的結構的第1種化合物的植物材料提取物，
其中X＝1-3，Y＝1-3，W＝0或1，n＝0-18，其中所述提取物中的前述第1種化合物按乾重計的比例明顯超過所述植物材料中的前述第1種化合物的乾重比例。
9.如權利要求8所述的提取物，還包含具有結構式IV的結構的第2種化合物，
其中R2＝棓醯。
10.一種組合物，包括具有選自結構式I、II、III的結構的第1種化合物，
其中X＝1-3，Y＝1-3，W＝0或1，n＝0-18，其量能有效地幹擾細菌粘附於生物表面；還包括一種製藥上可接受的載體。
11.如權利要求10所述的組合物，其中所述的製藥上可接受的載體選自牙膏、粉劑、凝膠基質組合物、水溶液、適用於口腔衝洗或漱口的水-醇溶液、清潔牙縫所用的扁平的蠟漬線、人工唾液和口香糖。
12.如權利要求10所述的組合物，進一步包括一種或多種選自多酚類物質、棓醯取代的鞣酸和棓醯取代的縮合的多酚類化合物，它(們)以有效量加強所述的第1種化合物的抗粘附活性。
13.如權利要求8或10所述的組合物，其中所述的第1種化合物來源於烏飯樹屬的植物材料。
14.如權利要求11所述的組合物，其中所述的製藥上可接受的載體包括片劑和膠囊。
15.如權利要求10所述的組合物，其中所述的製藥上可接受的載體與生殖器和宮頸黏膜組織具有生理相容性。
16.一種幹擾細菌粘附於表面的方法，其特徵在於，包括提供一種具有選自結構式I、II、III的結構的化合物的組合物，
其中，X＝1-3，Y＝1-3，W＝0或1，n＝0-18，其量能有效地幹擾細菌粘附於所述的機體組織的表面。
17.一種使用具有選自結構式I、II、III的結構的化合物的方法，
其中，X＝1-3，Y＝1-3，W＝0或1，n＝0-18；該方法的特徵在於，口服所述的化合物，其劑量足以幹擾細菌粘附於泌尿道組織。
18.結晶性原花青素，其溶點大於280℃。
19.一種抗菌消毒劑，包括其量足以抑制細菌粘附於非生物表面的原花青素。
全文摘要
利用原花青素的單體、二聚體、聚合物,黃酮類化合物的衍生物以及有關的化合物幹擾細菌粘附於表面。還揭示了結晶性原花青素二聚體和富含這些化合物的植物提取物。
文檔編號A61K31/765GK1179104SQ96192723
公開日1998年4月15日 申請日期1996年3月25日 優先權日1995年3月24日
發明者E·B·沃克, R·A·小米切爾森, J·N·米切爾森 申請人:Jlb股份有限公司